本發(fā)明屬于食品加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種富含GABA的桑葉蛋白粉的制備方法。

背景技術(shù)：

長期以來，桑葉被用作養(yǎng)蠶的主要飼料，然而隨著對桑葉研究的深入，桑葉的營養(yǎng)價值和藥用價值已越來越引起人物的關(guān)注。桑葉中不但含有大量人們所需的蛋白子、脂肪、碳水化合物、維生素及礦物質(zhì)成分等。而且還含有多糖、多酚、1一脫氧野民霉素(DNJ)、γ一氨基丁酸（GABA）。現(xiàn)代研究證明：桑葉具有降血糖、降血壓、降血脂, 提高體內(nèi)超氧化物歧化酶的活性, 具有類似人參的補益和抗衰老作用等。

桑葉中蛋白質(zhì)的含量為干基重量的15%-30%，是蛋白含量較高的植物。同時桑葉蛋白氨基酸組成同脫脂大豆粉大體一致，其中人體所必需的氨基酸較為齊全，占總氨基酸含量的34.7%，E/N值為0.531，接近FAO/WHO標準規(guī)定的必須氨基酸含量（40%）和E/N值（0.6）。桑葉中的γ一氨基丁酸是一種以自由態(tài)廣泛存在于原核生物和真核生物的四碳非蛋白質(zhì)氨基酸，又稱GABA。桑葉中含有豐富的γ-氨基丁酸（GABA），占到氨基酸總量的1.12%，而γ-氨基丁酸的前體物質(zhì)谷氨酸則占到氨基酸含量的13.7%。γ-氨基丁酸是具有極強的生理活性，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的主要抑制性遞質(zhì)，具有延長記憶，改善視覺功能，鎮(zhèn)定神經(jīng)，抗焦慮，降血壓，改善肝功能的作用。

目前對桑葉中GABA的研究主要集中在茶葉中，在蛋白質(zhì)的提取上還鮮有研究，而新鮮桑葉中的GABA含量雖然較其他的植物較高，但是含量仍然略低。目前提取桑葉蛋白的方法多為直接加熱法、酸法、堿法。這類方法易操作且成本低廉。然而當采用干桑葉進行蛋白質(zhì)提取時，這些方法的蛋白質(zhì)提取率并不高。除此之外，也有一些通過酶法，加熱法提取蛋白質(zhì)的研究，但這類方法應用在工業(yè)上時，生產(chǎn)成本過大，且對設(shè)備要求高，且目前生產(chǎn)的桑葉蛋白多有濃重的青草味和較深的顏色，嚴重影響口感。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點，提供一種提取率高、無異味的富含GABA的桑葉蛋白粉的制備方法。

本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：一種富含GABA的桑葉蛋白粉的制備方法，它包括以下步驟：

S1. 萎凋：將新鮮桑葉置于遮光處薄攤，萎凋至桑葉含水量為60～70%；所述萎凋的溫度為15～30℃，萎凋時間為8～15h；

S2. 富集GABA處理：將萎凋后的桑葉噴灑谷氨酸和谷氨酸鈉的混合溶液，噴灑后遮光處理3～5h后，常溫下充入二氧化碳密封處理1～3h，再在有氧環(huán)境下處理1～2h，最后再充入二氧化碳密封處理1～3h；

S3. 浸提：將富集GABA處理的桑葉干燥后粉碎成細粉，細粉中加入蒸餾水和氫氧化鈉，混合均勻后用組織搗碎機搗碎20～40min，并在50～60℃的溫度下浸提30～45min；

S4. 酸沉：將浸提液離心后取上清液，調(diào)上清液的pH值至3～5后靜置沉淀30～45min，離心收集沉淀；

S5.干燥：將沉淀在-50～-60℃、壓力為2～3.5Pa的條件下冷凍干燥，制得富含GABA的桑葉蛋白粉。

進一步地，步驟S1中所述薄攤的厚度為2～3cm。

進一步地，步驟S2中所述桑葉與混合溶液的重量比為1:5～13，所述混合溶液中谷氨酸和谷氨酸鈉的重量比為1～2:1，且混合溶液的質(zhì)量百分比濃度為1～2%。

進一步地，步驟S3中所述干燥的方法為將桑葉薄攤，厚度為2～4cm，用45～55℃的熱風干燥4～7h。

進一步地，步驟S3中所述桑葉粉、氫氧化鈉和蒸餾水的重量比為5～10:1:16～25。

進一步地，所述離心的溫度為8～13℃，轉(zhuǎn)速為3500～4500rmp，離心時間為10～20min。

進一步地，它還包括精制的步驟，具體為：將制得的富含GABA的桑葉蛋白粉中加入浸提劑無水乙醇，60～70℃的溫度下浸提5～6h，浸提液在5～15℃、3500～4500rmp的轉(zhuǎn)速下離心10～20min，收集沉淀，將沉淀在35～45℃的溫度下熱風干燥3～5h，即制得精制的桑葉蛋白粉。

進一步地，所述桑葉蛋白粉與浸提劑的料液比為1:18～25。

由于GABA是一種重要的抑制性神經(jīng)傳遞物質(zhì)，具有極強的生理活性，具有抗焦慮、降血壓的保健功效，本發(fā)明方法采用添加外源谷氨酸、谷氨酸鈉和厭氧好氧交替來提高了桑葉中GABA的含量。干桑葉粉利于貯藏，但是由于桑葉細胞失水后，細胞壁縮小的同時，纖維化增強，使得蛋白質(zhì)的提取效率降低，一般在10～15%。因此在使用酸沉法提取蛋白質(zhì)的同時，通過使用組織搗碎機對浸提液進行組織搗碎，從而提高蛋白質(zhì)得率。目前制得的桑葉蛋白多有濃重的青草味和很深的綠色，桑葉中的色素主要為葉綠素類，不溶于水，溶于有機溶劑，本發(fā)明通過無水乙醇進行脫色脫腥，由于乙醇容易揮發(fā)，最后熱風干燥除去其中的乙醇，從而制得使人更易于接受的桑葉蛋白粉。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點：本發(fā)明對桑葉采用富集GABA處理，使得制得的蛋白粉中GABA的含量顯著提高，經(jīng)試驗證明富集處理后的桑葉中的GABA含量可達3.396mg/g，蛋白粉中的GABA含量為13.627mg/g；本發(fā)明方法不僅提高了蛋白質(zhì)的提取率，而且使蛋白質(zhì)的溶解性大大增高；在精制步驟通過無水乙醇進行脫色脫腥，提高了桑葉蛋白粉的色澤與口感；本發(fā)明方法操作簡單、制備方便、成本低、適用于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步的描述，本發(fā)明的保護范圍不局限于以下所述。

實施例1：一種富含GABA的桑葉蛋白粉的制備方法，它包括以下步驟：

S1. 萎凋：將新鮮桑葉置于遮光處薄攤，所述薄攤的厚度為2cm，萎凋至桑葉含水量為60%；所述萎凋的溫度為15℃，萎凋時間為8h；

S2. 富集GABA處理：將萎凋后的桑葉噴灑谷氨酸和谷氨酸鈉的混合溶液，噴灑后遮光處理3h后，常溫下充入二氧化碳密封處理1h，再在有氧環(huán)境下處理1h，最后再充入二氧化碳密封處理1h；所述桑葉與混合溶液的重量比為1:5，所述混合溶液中谷氨酸和谷氨酸鈉的重量比為1:1，且混合溶液的質(zhì)量百分比濃度為1%；

S3. 浸提：將富集GABA處理的桑葉干燥后粉碎成細粉，細粉中加入蒸餾水和氫氧化鈉，所述桑葉粉、氫氧化鈉和蒸餾水的重量比為5:1:16，混合均勻后用組織搗碎機搗碎20min，并在50℃的溫度下浸提30min；所述干燥的方法為將桑葉薄攤，厚度為2cm，用45℃的熱風干燥4h；

S4. 酸沉：將浸提液離心后取上清液，調(diào)上清液的pH值至3后靜置沉淀30min，離心收集沉淀；所述離心的溫度為8℃，轉(zhuǎn)速為3500rmp，離心時間為10min；

S5.干燥：將沉淀在-50℃、壓力為2Pa的條件下冷凍干燥，制得富含GABA的桑葉蛋白粉。

實施例2：一種富含GABA的桑葉蛋白粉的制備方法，它包括以下步驟：

S1. 萎凋：將新鮮桑葉置于遮光處薄攤，所述薄攤的厚度為3cm，萎凋至桑葉含水量為70%；所述萎凋的溫度為30℃，萎凋時間為15h；

S2. 富集GABA處理：將萎凋后的桑葉噴灑谷氨酸和谷氨酸鈉的混合溶液，噴灑后遮光處理5h后，常溫下充入二氧化碳密封處理3h，再在有氧環(huán)境下處理2h，最后再充入二氧化碳密封處理3h；所述桑葉與混合溶液的重量比為1:13，所述混合溶液中谷氨酸和谷氨酸鈉的重量比為2:1，且混合溶液的質(zhì)量百分比濃度為2%；

S3. 浸提：將富集GABA處理的桑葉干燥后粉碎成細粉，細粉中加入蒸餾水和氫氧化鈉，所述桑葉粉、氫氧化鈉和蒸餾水的重量比為10:1:25，混合均勻后用組織搗碎機搗碎40min，并在60℃的溫度下浸提45min；所述干燥的方法為將桑葉薄攤，厚度為4cm，用55℃的熱風干燥7h；

S4. 酸沉：將浸提液離心后取上清液，調(diào)上清液的pH值至5后靜置沉淀45min，離心收集沉淀；所述離心的溫度為13℃，轉(zhuǎn)速為4500rmp，離心時間為20min；

S5.干燥：將沉淀在-60℃、壓力為3.5Pa的條件下冷凍干燥，制得富含GABA的桑葉蛋白粉；

S6. 精制：將制得的富含GABA的桑葉蛋白粉中加入浸提劑無水乙醇，所述桑葉蛋白粉與浸提劑的料液比為1:18，60℃的溫度下浸提5h，浸提液在5℃、3500rmp的轉(zhuǎn)速下離心10min，收集沉淀，將沉淀在35℃的溫度下熱風干燥3h，即制得精制的桑葉蛋白粉。

實施例3：一種富含GABA的桑葉蛋白粉的制備方法，它包括以下步驟：

S1. 萎凋：將新鮮桑葉置于遮光處薄攤，所述薄攤的厚度為2～3cm，萎凋至桑葉含水量為63%；所述萎凋的溫度為20℃，萎凋時間為10h；

S2. 富集GABA處理：將萎凋后的桑葉噴灑谷氨酸和谷氨酸鈉的混合溶液，噴灑后遮光處理3.5h后，常溫下充入二氧化碳密封處理1.5h，再在有氧環(huán)境下處理1.5h，最后再充入二氧化碳密封處理2.5h；所述桑葉與混合溶液的重量比為1:7，所述混合溶液中谷氨酸和谷氨酸鈉的重量比為1.3:1，且混合溶液的質(zhì)量百分比濃度為1.3%；

S3. 浸提：將富集GABA處理的桑葉干燥后粉碎成細粉，細粉中加入蒸餾水和氫氧化鈉，所述桑葉粉、氫氧化鈉和蒸餾水的重量比為6:1:18，混合均勻后用組織搗碎機搗碎25min，并在53℃的溫度下浸提35min；所述干燥的方法為將桑葉薄攤，厚度為2～4cm，用48℃的熱風干燥5h；

S4. 酸沉：將浸提液離心后取上清液，調(diào)上清液的pH值至4后靜置沉淀35min，離心收集沉淀；所述離心的溫度為10℃，轉(zhuǎn)速為3800rmp，離心時間為12min；

S5.干燥：將沉淀在-54℃、壓力為2.5Pa的條件下冷凍干燥，制得富含GABA的桑葉蛋白粉；

S6. 精制：將制得的富含GABA的桑葉蛋白粉中加入浸提劑無水乙醇，所述桑葉蛋白粉與浸提劑的料液比為1:25，70℃的溫度下浸提6h，浸提液在15℃、4500rmp的轉(zhuǎn)速下離心20min，收集沉淀，將沉淀在45℃的溫度下熱風干燥5h，即制得精制的桑葉蛋白粉。

實施例4：一種富含GABA的桑葉蛋白粉的制備方法，它包括以下步驟：

S1. 萎凋：將新鮮桑葉置于遮光處薄攤，所述薄攤的厚度為3cm，萎凋至桑葉含水量為65%；所述萎凋的溫度為20℃，萎凋時間為12h；

S2. 富集GABA處理：將萎凋后的桑葉噴灑谷氨酸和谷氨酸鈉的混合溶液，噴灑后遮光處理4h后，常溫下充入二氧化碳密封處理2h，再在有氧環(huán)境下處理1.5h，最后再充入二氧化碳密封處理2h；所述桑葉與混合溶液的重量比為1:10，所述混合溶液中谷氨酸和谷氨酸鈉的重量比為1.8:1，且混合溶液的質(zhì)量百分比濃度為1.8%；

S3. 浸提：將富集GABA處理的桑葉干燥后粉碎成細粉，細粉中加入蒸餾水和氫氧化鈉，所述桑葉粉、氫氧化鈉和蒸餾水的重量比為7:1:20，混合均勻后用組織搗碎機搗碎30min，并在56℃的溫度下浸提38min；所述干燥的方法為將桑葉薄攤，厚度為4cm，用50℃的熱風干燥6h；

S4. 酸沉：將浸提液離心后取上清液，調(diào)上清液的pH值至4后靜置沉淀38min，離心收集沉淀；所述離心的溫度為10℃，轉(zhuǎn)速為4000rmp，離心時間為15min；

S5.干燥：將沉淀在-55℃、壓力為3Pa的條件下冷凍干燥，制得富含GABA的桑葉蛋白粉；

S6. 精制：將制得的富含GABA的桑葉蛋白粉中加入浸提劑無水乙醇，所述桑葉蛋白粉與浸提劑的料液比為1:22，65℃的溫度下浸提5.5h，浸提液在10℃、4000rmp的轉(zhuǎn)速下離心15min，收集沉淀，將沉淀在40℃的溫度下熱風干燥3.5h，即制得精制的桑葉蛋白粉。