亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

一種用于調(diào)節(jié)仔豬腸道屏障功能的配合飼料及應(yīng)用的制作方法

文檔序號(hào):12312771閱讀:300來源:國(guó)知局

本發(fā)明屬于畜牧業(yè)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)技術(shù)研究領(lǐng)域,涉及一種以丁酸梭菌為飼料添加劑的飼料配方,更具體的說是一種改善斷奶仔豬腸道屏障功能、調(diào)節(jié)細(xì)胞因子含量、D-乳酸(D-lactic)和二胺氧化酶(DAO)等方面的應(yīng)用。



背景技術(shù):

腸道是食物在體內(nèi)消化吸收的主要場(chǎng)所,同時(shí)也是重要的免疫器官。腸道處在機(jī)體與外界接觸的第一線,是病原微生物侵入體內(nèi)的主要通道,腸粘膜屏障是組織機(jī)體受病原微生物的感染,調(diào)節(jié)新陳代謝,維持內(nèi)外環(huán)境平衡的關(guān)鍵。機(jī)械屏障是一種重要的腸黏膜屏障,由腸道上皮細(xì)胞和細(xì)胞間緊密連接等構(gòu)成,而腸上皮細(xì)胞的機(jī)械屏障是黏膜屏障基礎(chǔ),緊密連接蛋白在加強(qiáng)細(xì)胞間連接,減小細(xì)胞間間隙,保護(hù)細(xì)胞和黏膜完整性中具有重要作用。腸黏膜屏障能夠阻止消化道內(nèi)有害大分子入侵,保證機(jī)體選擇性吸收小分子物質(zhì)。因此,腸黏膜屏障在維持腸道正常生理功能方面起著關(guān)鍵作用。

抗生素類生長(zhǎng)促進(jìn)劑在飼料工業(yè)中的大量使用導(dǎo)致諸多問題出現(xiàn),如病原菌產(chǎn)生耐藥性、動(dòng)物免疫機(jī)能下降、體內(nèi)菌群失調(diào)、畜禽產(chǎn)品中的藥物殘留等。近年來,畜牧業(yè)養(yǎng)殖在保障動(dòng)物健康、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高飼料利用率等方面越來越得到重視,飼料添加劑的研究正在向著無殘留、無耐藥性和對(duì)人類健康和環(huán)境無危害的方向發(fā)展。丁酸梭菌具有耐熱、耐酸和耐多種抗生素等生物學(xué)特性,可調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡、產(chǎn)生益生物質(zhì)、提高機(jī)體免疫力及促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng),同時(shí)具有無污染、無有害殘留等特點(diǎn),逐漸成為熱門的抗生素替代品之一。雖然我國(guó)農(nóng)業(yè)部已于2009年7月批準(zhǔn)了丁酸梭菌制劑作為微生物飼料添加劑的使用,但目前丁酸梭菌制劑還未被普遍的作為益生菌劑添加于動(dòng)物飼料,而在仔豬上應(yīng)用的相關(guān)報(bào)道還不多見。

仔豬斷奶是養(yǎng)豬生產(chǎn)中的一個(gè)重要階段,斷奶應(yīng)激是仔豬出生后經(jīng)受的最大應(yīng)激,由于生理、飼料和環(huán)境的改變常常造成仔豬腸消化系統(tǒng)損傷及菌群失衡等,因此仔豬腸道健康的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控這一領(lǐng)域的創(chuàng)新性有待于提高。通過在日糧中添加丁酸梭菌我們研究了一種調(diào)節(jié)改善仔豬腸道屏障功能的配合飼料,以此來改善仔豬腸道發(fā)育和健康的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控,會(huì)在一定程度上提高養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

本發(fā)明的一個(gè)目的是公開了一種調(diào)節(jié)仔豬腸道屏障功能的配合飼料。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是公開了所配制的飼料對(duì)斷奶仔豬腸道屏障功能調(diào)節(jié)的應(yīng)用效果。

為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明公開了如下的技術(shù)內(nèi)容

一種調(diào)節(jié)仔豬腸道屏障功能的配合飼料,其特征在于在飼料原料中使用丁酸梭菌飼料添加劑,進(jìn)行合理配制日糧,由下述重量份數(shù)的原料組成:

玉米61—65 豆粕15—20 乳清粉3—6

魚粉5—10 葡萄糖1-3 酸化劑0.1-0.5

磷酸氫鈣0.5-1 石粉0.5-1 食鹽0.1-0.5

L-賴氨酸鹽酸鹽0.1-0.5 DL-蛋氨酸0.1-0.5 蘇氨酸0.1-0.5

仔豬預(yù)混料1-4 丁酸梭菌0.001-0.01(凍干粉中活菌含量為1×1010CFU/g)

其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有:14,600 mg鐵,630 mg銅,410 mg 錳,10,400 mg鋅,15,000μg碘,17,000μg硒,227,600 IU VA,22,800 IU VD3,1,100 mg VE,30 mg VK3,700 mg VB2,200 mg VB6,1,340 mg泛酸,2,300 mg煙酸,8 mg生物素。

本發(fā)明所述酸化劑指的是安徽華揚(yáng)農(nóng)牧科技有限公司產(chǎn)品,主要成分是乳酸、正磷酸、檸檬酸、富馬酸、甲酸。

本發(fā)明所述的斷奶仔豬配合飼料的制備方法:將玉米、豆粕兩種原料粉碎,其他原料均不需要粉碎,按照重量比例分別進(jìn)行稱量,在小型混合機(jī)中混勻即可。

本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的配方:

玉米63.2豆粕19乳清粉4.8

魚粉8.4葡萄糖1酸化劑0.3

磷酸氫鈣0.6 石粉0.7食鹽0.3

L-賴氨酸鹽酸鹽0.3 DL-蛋氨酸0.1蘇氨酸0.1

仔豬預(yù)混料1 丁酸梭菌0.005(凍干粉中活菌含量為1×1010CFU/g);

其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有:14,600 mg鐵,630 mg銅,410 mg 錳,10,400 mg鋅,15,000μg碘,17,000μg硒,227,600 IU VA,22,800 IU VD3,1,100 mg VE,30 mg VK3,700 mg VB2,200 mg VB6,1,340 mg泛酸,2,300 mg煙酸,8 mg生物素。

本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的配方:

玉米64.1豆粕18.5乳清粉4.9

魚粉7.2葡萄糖2 酸化劑0.3

磷酸氫鈣0.6石粉0.7 食鹽0.3

L-賴氨酸鹽酸鹽0.1 DL-蛋氨酸0.1蘇氨酸0.1

仔豬預(yù)混料1 丁酸梭菌0.006(凍干粉中活菌含量為1×1010CFU/g);

其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有:14,600 mg鐵,630 mg銅,410 mg 錳,10,400 mg鋅,15,000μg碘,17,000μg硒,227,600 IU VA,22,800 IU VD3,1,100 mg VE,30 mg VK3,700 mg VB2,200 mg VB6,1,340 mg泛酸,2,300 mg煙酸,8 mg生物素。

本發(fā)明進(jìn)一步公開了所配制的飼料對(duì)斷奶仔豬腸道微生物區(qū)系的應(yīng)用效果。特別是對(duì)改善斷奶仔豬腸道黏膜發(fā)育等方面的應(yīng)用。本發(fā)明的斷奶仔豬配合飼料實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:

日糧中添加丁酸梭菌后,顯著提高了緊密連接蛋白Claudin-1、Occludin和ZO-1的表達(dá),顯著提高了血清中TNF-α和IL-10的分泌量,顯著降低了血清中D-lactin的濃度,血清中DAO的濃度也有下降趨勢(shì),表明該飼料配方能有效提高仔豬腸道屏障功能。

為了更進(jìn)一步說明本發(fā)明的積極效果,提供如下的試驗(yàn)方法及結(jié)果:

1.試驗(yàn)動(dòng)物及分組:

采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì),選取體重6.95 ± 0.48 kg的健康杜×長(zhǎng)×大三元雜交斷奶仔豬12頭,隨機(jī)分為2個(gè)處理,每個(gè)處理分為6個(gè)重復(fù),每個(gè)重復(fù)1頭豬。每個(gè)處理組分別飼喂不同日糧:飼喂基礎(chǔ)日糧(NC)、飼喂基礎(chǔ)日糧+0.005%丁酸梭菌(凍干粉中活菌含量為1×1010CFU/g,試驗(yàn)組)。丁酸梭菌為市售產(chǎn)品。

2.基礎(chǔ)飼糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平:

根據(jù)NRC(1998)配制豬基礎(chǔ)日糧配方及營(yíng)養(yǎng)水平如表1所示。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(飼喂基礎(chǔ))

a 每千克預(yù)混料中含有:14,600 mg鐵,630 mg銅,410 mg 錳,10,400 mg鋅,15,000μg碘,17,000μg硒,227,600 IU VA,22,800 IU VD3,1,100 mg VE,30 mg VK3,700 mg VB2,200 mg VB6,1,340 mg泛酸,2,300 mg煙酸,8 mg生物素。

b 根據(jù)NRC(1998)飼料成分表計(jì)算。

3.試驗(yàn)規(guī)程:

試驗(yàn)在一個(gè)商品萬頭豬場(chǎng)進(jìn)行,試驗(yàn)期14天。飼喂、管理、免疫按豬場(chǎng)規(guī)定程序進(jìn)行。飼喂14天后,從每個(gè)處理的每個(gè)重復(fù)組中隨機(jī)選取1頭斷奶仔豬屠宰,屠宰前抽血,進(jìn)行血液指標(biāo)的分析,每個(gè)處理屠宰3頭仔豬,并取空腸腸段進(jìn)行緊密連接蛋白表達(dá)量的測(cè)定。整個(gè)試驗(yàn)過程中觀察仔豬的健康狀況,記錄死、淘仔豬以及腹瀉、用藥情況。

4.測(cè)定指標(biāo):

血液指標(biāo)的測(cè)定:每個(gè)處理隨機(jī)選3頭仔豬,屠宰前30min,前腔靜脈采血,4℃,4000g,15min離心,取上清,-20℃保存。采用生化法測(cè)定DAO,采用ELISA法測(cè)定TNF-α、IL-10和D-lactic。空腸中緊密連接蛋白表達(dá)的測(cè)定:采血后處死,立即在無菌條件下打開腹腔,從空腸中段取5cm左右腸管,用PBS沖洗腸腔后分裝于凍存管中,分別標(biāo)號(hào)后即置于液氮中保存,用qPCR檢測(cè)Claudin-1、Occludin和ZO-1的表達(dá)。

5.統(tǒng)計(jì)分析:

采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件下的Compare Means模塊中的One-Way ANOVA進(jìn)行方差分析,并采用Duncan’s多重比較進(jìn)行組間差異顯著性檢驗(yàn),P<0.05為差異顯著。

本發(fā)明公開的調(diào)節(jié)仔豬腸道黏膜的配合飼料在斷奶仔豬飼料中的應(yīng)用效果,主要包括:

(1)血清指標(biāo):

由表2可知,丁酸梭菌:試驗(yàn)組顯著提高了血液中TNF-α和IL-10的含量(P<0.05),分別比對(duì)照組提高了34.25%和27.23%,顯著降低了血液中D-lactic的濃度(P<0.05),比對(duì)照組降低了19.57%,DAO的濃度比對(duì)照組降低了13.07%。

表2 對(duì)仔豬血液指標(biāo)的影響

(2)腸粘膜屏障:

由表3可知,緊密連接蛋白mRNA水平表達(dá):試驗(yàn)組的Occludin、Claudin-1和ZO-1的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P<0.01),試驗(yàn)組中的Occludin、Claudin-1和ZO-1的表達(dá)量比對(duì)照組分別提高了59.00%、107.00%、59.00%。

表3 對(duì)腸道連接蛋白mRNA表達(dá)的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明:

日糧中添加丁酸梭菌后,顯著提高了顯著提高了Claudin-1、Occludin和ZO-1mRNA水平的表達(dá)量,表明該飼料配方能有效提高仔豬腸道屏障功能;

本發(fā)明對(duì)以丁酸梭菌為飼料添加劑的飼料配方進(jìn)行了安全性實(shí)驗(yàn),其方法如下:

(1)步驟:

材料和方法:選擇28日齡斷奶的杜×長(zhǎng)×大仔豬6頭,臨床健康、發(fā)育正常,試驗(yàn)期30天,試驗(yàn)期內(nèi)隨時(shí)觀察中毒表現(xiàn)及死亡情況。

(2)飼喂的仔豬飼料原料組成:

玉米63.55、豆粕19.5、乳清粉4、魚粉7.4、葡萄糖2、酸化劑0.3、磷酸氫鈣0.5、石粉0.6、食鹽0.35、L-賴氨酸鹽酸鹽0.2、DL-蛋氨酸0.25、蘇氨酸0.15、仔豬預(yù)混料1.1、丁酸梭菌0.01(凍干粉中活菌含量為1×1010CFU/g)。

結(jié)果:給斷奶仔豬飼喂上述試驗(yàn)日糧,連續(xù)飼喂30天,未見明顯中毒現(xiàn)象,觀察期內(nèi)無死亡,尸檢中各主要臟器未見明顯異常。

(3)結(jié)論:斷奶仔豬日糧中添加0.01%丁酸梭菌(凍干粉中活菌含量為1×1010CFU/g)飼喂仔豬,飼喂效果安全。

具體實(shí)施方式

通過以下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作一步說明,但不作為本發(fā)明的限制。本發(fā)明的實(shí)施例中所述的重量份數(shù)原料指的是克、公斤或噸,可根據(jù)生產(chǎn)實(shí)際的需要加以調(diào)整。本發(fā)明所用到的各種原料例如:磷酸氫鈣、石粉、食鹽、L-賴氨酸鹽酸鹽、DL-蛋氨酸、蘇氨酸、丁酸梭菌對(duì)外均有售;其中下面的產(chǎn)品均有市售:

酸化劑指的是安徽華揚(yáng)農(nóng)牧科技有限公司產(chǎn)品;

1%仔豬預(yù)混料購買于北京博農(nóng)利生物科技有限公司;

玉米指的是普通市售二級(jí)玉米;

豆粕指的是中糧集團(tuán)有限公司產(chǎn)品;

乳清粉指的是天津市升騰飼料有限公司產(chǎn)品;

魚粉指的是進(jìn)口秘魯魚粉;

豆奶寶指的是天津市新概念生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;

次粉指的是河北永生食品有限公司產(chǎn)品;

葡萄糖指的是天津市升騰飼料有限公司產(chǎn)品;

丁酸梭菌指的是洛陽瑞萊生物工程有限公司產(chǎn)品。

實(shí)施例1

斷奶仔豬的配合飼料原料組成:

玉米62.48、豆粕18.5、乳清粉5、魚粉8.5、葡萄糖1.5、酸化劑0.2、磷酸氫鈣0.7、石粉0.63、食鹽0.34、L-賴氨酸鹽酸鹽0.25、DL-蛋氨酸0.3、蘇氨酸0.3、仔豬預(yù)混料1.2、丁酸梭菌0.001(凍干粉中活菌含量為1×1010CFU/g)。

其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有:14,600 mg鐵,630 mg銅,410 mg 錳,10,400 mg鋅,15,000μg碘,17,000μg硒,227,600 IU VA,22,800 IU VD3,1,100 mg VE,30 mg VK3,700 mg VB2,200 mg VB6,1,340 mg泛酸,2,300 mg煙酸,8 mg生物素。

制備方法:將玉米、豆粕兩種原料粉碎,其他原料均不需要粉碎,按照重量比例分別進(jìn)行稱量,在小型混合機(jī)中混勻即可。

實(shí)施例2

斷奶仔豬的配合飼料原料組成:

玉米64.9、豆粕16、乳清粉5、魚粉8.6、葡萄糖1.5、酸化劑0.4、磷酸氫鈣0.65、石粉0.7、食鹽0.35、L-賴氨酸鹽酸鹽0.3、DL-蛋氨酸0.25、蘇氨酸0.25、仔豬預(yù)混料1、丁酸梭菌0.01(凍干粉中活菌含量為1×1010CFU/g)。

其中所述的仔豬預(yù)混料是指每千克預(yù)混料中含有:14,600 mg鐵,630 mg銅,410 mg 錳,10,400 mg鋅,15,000μg碘,17,000μg硒,227,600 IU VA,22,800 IU VD3,1,100 mg VE,30 mg VK3,700 mg VB2,200 mg VB6,1,340 mg泛酸,2,300 mg煙酸,8 mg生物素。

制備方法:將玉米、豆粕兩種原料粉碎,其他原料均不需要粉碎,按照重量比例分別進(jìn)行稱量,在小型混合機(jī)中混勻即可。

實(shí)施例3

采用斷奶仔豬的配合飼料飼喂斷奶仔豬的方法:

此系列配方適用28日齡斷奶仔豬,適用期為斷奶后30~45天,根據(jù)情況讓仔豬自由采食即可,必須提供充足的飲水,其他按正常的飼養(yǎng)管理進(jìn)行。

實(shí)施例4

比較試驗(yàn)

常規(guī)的斷奶仔豬飼料:

方法:配制玉米-豆粕型斷奶仔豬日糧,不添加丁酸梭菌。選擇28日齡6頭仔豬,試驗(yàn)期14天。試驗(yàn)結(jié)束后對(duì)3頭仔豬進(jìn)行屠宰,采血、取空腸腸段。

步驟:采用生化法和ELISA試劑盒測(cè)定血液指標(biāo),qPCR測(cè)定Occludin、Claudin-1和ZO-1的表達(dá)。

結(jié)果:血清中D-lactin和DAO的濃度分別為2.15 mmol/L、3.75 mmol/L,TNF-α和IL-10的含量分別為41.42ng/L和58.91ng/L。Occludin、Claudin-1和ZO-1的mRNA水平表達(dá)量分別為0.96、0.99、0.97。

日糧中添加含丁酸梭菌后飼料:

方法:配制玉米-豆粕型斷奶仔豬日糧,添加0.005%丁酸梭菌(凍干粉中活菌含量為1×1010CFU/g)。選擇6頭28日齡仔豬,試驗(yàn)期14天。試驗(yàn)結(jié)束后隨機(jī)選3頭仔豬進(jìn)行采血、取空腸腸段。

步驟:采用生化法測(cè)定DAO,采用ELISA試劑盒測(cè)定TNF-α、IL-10和D-lactic。采用qPCR測(cè)定Occludin、Claudin-1和ZO-1的表達(dá)。

結(jié)果:血清中D-lactin和DAO的濃度分別為1.67mmol/L、3.26mmol/L,TNF-α和IL-10的含量分別為77.16 ng/L和64.59 ng/L。Occludin、Claudin-1和ZO-1的表達(dá)分別為1.55、2.03、1.41。

結(jié)論:日糧中添加丁酸梭菌能提高仔豬腸道屏障功能。通過比較試驗(yàn)說明:日糧中添加丁酸梭菌能調(diào)節(jié)斷奶仔豬腸道屏障功能,改善腸道健康和提高仔豬整體健康狀況。

當(dāng)前第1頁1 2 3 
網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
  • 還沒有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1