本發(fā)明涉及食品脫色技術(shù)領(lǐng)域，具體地說是涉及苜蓿葉蛋白抗氧化肽的脫色方法。

背景技術(shù)：

苜蓿（lucerne；alfalfa）為禾本科牧草，因其具有產(chǎn)量高、抗旱耐鹽堿、適應(yīng)性廣、品質(zhì)優(yōu)、營養(yǎng)豐富等特點，被譽為“牧草之王” ，在我國乃至世界范圍內(nèi)大面積種植。眾所周知，中國是苜蓿種植大國。在我國，由于缺乏深加工技術(shù)，近一半苜蓿作為優(yōu)良的能量飼料飼喂家畜，資源利用率和附加值低。苜蓿營養(yǎng)價值豐富，其葉子富含蛋白質(zhì)和各種維生素，合理開發(fā)利用苜蓿葉中的蛋白質(zhì)和其它營養(yǎng)成分成為引導(dǎo)我國苜蓿產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展的關(guān)鍵因素。雖然苜蓿葉蛋白質(zhì)含量高，其含有18種人體必需氨基酸，是一種較為理想的優(yōu)質(zhì)純天然全價蛋白質(zhì)，但由于大多提取后的葉蛋白溶解度低，很難以功能性成分在乳品、飲料、糖果等食品體系中加以利用。而且植物蛋白具有一定的抗原性，其消化率和生物效價遠不及牛奶、雞蛋等動物蛋白。所有這些都大大限制了葉蛋白利用領(lǐng)域和應(yīng)用效果。近年來，很多學(xué)者對肽的消化吸收機制進行了研究，認為肽較蛋白質(zhì)和游離氨基酸更易被腸道吸收，通過生物代謝實驗證實了肽的吸收率比游離氨基酸大，且比氨基酸更易更快通過小腸粘膜而被肌體吸收利用。大量的實驗證實了長期食用一些肽的食品有助于延緩衰老、增強免疫力，同時食用方便，適合于大眾人群。近年來，研究人員成功的利用動植物蛋白制得了降壓肽、抗氧化肽、免疫調(diào)節(jié)肽等。目前，抗氧化肽類作為一種安全、高效的天然抗氧化劑用于清除體內(nèi)過多自由基的研究正在興起。許多關(guān)于酶法水解植物蛋白制備抗氧化肽并應(yīng)用于飲料等食品領(lǐng)域的方法已公開在專利文獻中，例如公開的CN 102318864 A、CN102379435 A、CN102349579 A等。

從目前研究結(jié)果看，將苜蓿葉蛋白酶解后產(chǎn)物具有較好的溶解性、消化吸收性及抗氧化活性，可以作為抗氧化活性肽來源應(yīng)用到食品和醫(yī)藥行業(yè)。但是苜蓿葉蛋白酶解液為深綠色，如果作為食品添加劑直接應(yīng)用到食品中不易被消費者接受，因此需要對酶解液進行脫色處理。目前常用的脫色方法有有機溶劑脫色法、離子交換樹脂脫色法等，但這些方法常會導(dǎo)致成本高、二次污染、蛋白損失率高等問題。

本發(fā)明采用粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土三種吸附劑按一定比例復(fù)配對苜蓿葉蛋白抗氧化肽進行脫色處理，降低成本，避免有機溶劑導(dǎo)致的二次污染，同時降低了蛋白、多肽的損失率，因此解決了苜蓿葉蛋白抗氧化肽顏色很深的問題，對功能性食品的開發(fā)具有重要的理論意義和應(yīng)用價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決苜蓿葉蛋白抗氧化肽酶解液色澤過深的技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種苜蓿葉蛋白抗氧化肽的脫色方法，即利用粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土混合物為脫色劑，在保證較高脫色率、較低多肽損失率的同時，還有效保留了抗氧化活性，并可廣泛應(yīng)用于苜蓿葉蛋白多肽及其他活性肽生產(chǎn)過程中。

實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案為：

一種苜蓿葉蛋白抗氧化肽的脫色方法，將采用堿性蛋白酶制備好的苜蓿葉蛋白抗氧化肽溶液調(diào) pH 2~4 , 加入粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土重量比1：0.6~1.0：0.4~0.8混合物為脫色劑，復(fù)合脫色劑添加量為苜蓿葉蛋白抗氧化肽溶液的1.0~3.0 %（m/V）,在50 ~ 70 ℃下水浴振蕩脫色60 ~ 80 min后，在 4000~5000 r/min 的離心作用下持續(xù)處理20~ 30 min，所得上清液為脫色后的苜蓿葉蛋白抗氧化肽。

本發(fā)明中脫色劑的優(yōu)選配比為粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土重量比1：0.8：0.6，在此配比下脫色，復(fù)合脫色劑的活性高，脫色率高，多肽損失率較低，同時抗氧化活性保留率高。

本發(fā)明中復(fù)合脫色劑添加量為苜蓿葉蛋白抗氧化肽溶液的1.5~2.5%（m/V），調(diào)節(jié)苜蓿葉蛋白抗氧化肽溶液 pH 2.5~3.5時，得到的脫色處理后的苜蓿葉蛋白抗氧化肽的脫色效果好，脫色率可達80 %以上，多肽損失率較低，抗氧化活性也達到了優(yōu)值，原始苜蓿葉蛋白抗氧化肽液對DPPH·清除率為90 %以上，脫色后對DPPH·清除率為80 %以上，還原力保持率為80 %以上。

本發(fā)明苜蓿葉蛋白抗氧化肽的制備方法為苜蓿葉蛋白水溶液中加入堿性蛋白酶作為水解酶，堿性蛋白酶的加入量為苜蓿葉蛋白質(zhì)量的2.0~4.0%，控制在pH值為7.5-8.5的環(huán)境下酶解3 ~ 5h，滅酶后離心，收集上清液即可得到苜蓿葉蛋白抗氧化肽液。苜蓿葉蛋白溶液中苜蓿葉蛋白與水的質(zhì)量體積比為4.0~5.0%。

本發(fā)明的苜蓿葉蛋白抗氧化肽的脫色方法也可應(yīng)用到采用其他方法制備得到的抗氧化肽液的脫色過程中。

本發(fā)明采用粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土混合物為復(fù)合脫色劑。粉狀活性炭吸附可分為物理吸附和化學(xué)吸附兩種。無臭無味，具有表面積大、吸附力強、純度高、濾速快、質(zhì)量穩(wěn)定，具有絮凝效應(yīng)和助濾效應(yīng)等特點。廣泛適用于食品、醫(yī)藥、味精化工等產(chǎn)品的脫色、除雜精制，也可以用于水的凈化處理。粉末活性炭在脫色方面不能取代活性白土?；钚园淄劣址Q為酸性白土，是以膨潤土為原料處理加工成的活性較高的吸附劑，它不僅具有較強的吸附活性，而且具有以下幾個明顯特性：固體酸性質(zhì)；陽離子交換劑性質(zhì)；酸催化劑性質(zhì)；助濾劑性質(zhì)。因而，酸性白土對色素，尤其是葉綠素及其他膠性雜質(zhì)吸附力很強，對堿性原子團吸附力更強。堿性高嶺土吸附劑的最佳粒徑為10UM以內(nèi), pH值控制在7.5～8.5間，偏堿性,錳離子的去除率超過90%，達到GB8978-1996工業(yè)廢水排放的一級標準。其吸附原理主要是吸附作用和沉淀作用。高嶺土能有效吸附,是基于高嶺土中的高嶺石層面上帶的永久負電荷和在堿性條件下端面表現(xiàn)出的負電荷性質(zhì),易與蛋白酶解液中的陽離子發(fā)生交換吸附作用,可針對蛋白酶解液選擇性的吸附反應(yīng)體系中的部分有色物質(zhì)，而對蛋白質(zhì)影響、破壞較小，將使水的色度降低。將粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土混合使用，使苜蓿葉蛋白抗氧化肽的多肽損失率較低，有效保留了抗氧化活性，且脫色效果良好。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較具有以下優(yōu)點：

1）本發(fā)明的脫色方法簡單、操作易行，處理過程溫和，安全性高，經(jīng)濟實用。

2）本發(fā)明采用粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土混合物為復(fù)合脫色劑，較其它脫色方法如有機溶劑萃取法、氧化脫色法等，成本低，處理方法方便，無殘留物存在，無毒性，且能高效、快速地吸附蛋白質(zhì)酶解液中的色素。在物理吸附和化學(xué)吸附雙重作用下，苜蓿葉蛋白抗氧化肽的脫色率為80 %以上，多肽損失率10 %以下，DPPH·清除率為80 %以上，還原力保留率為80 %以上，可廣泛用于苜蓿葉蛋白多肽及其他活性肽生產(chǎn)的保健食品行業(yè)。

具體實施方式

下面通過具體實施例進一步說明本發(fā)明。需要說明的是，本發(fā)明的實施例僅僅是用于本發(fā)明，而不是對本發(fā)明的限制，在本發(fā)明的構(gòu)思前提下對本發(fā)明的制備和脫色方法的簡單改進都屬于本發(fā)明要求保護的范圍。

實施例1

一、苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的制備

將40g 苜蓿葉蛋白粉溶入1L 水中形成苜蓿葉蛋白水溶液，加入堿性蛋白酶作為水解酶，堿性蛋白酶的加入量為苜蓿葉蛋白質(zhì)量的2.0 %，控制在pH值為8.0的環(huán)境下酶解4 h，用NaOH溶液維持pH值恒定，滅酶后離心，收集上清液即可得到苜蓿葉蛋白抗氧化肽液。經(jīng)測定：DPPH·清除率為90.82 %，其中酶解液蛋白質(zhì)含量為10 mg/mL。

二、苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的脫色

將制備得到的苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的pH值調(diào)到3.0，脫色劑中粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土重量比1：0.8：0.6，該復(fù)合脫色劑添加量為苜蓿葉蛋白抗氧化肽溶液的2.0 %（m/V），在60 ℃下水浴振蕩脫色60 min后，在 5000 r/min 的離心作用下持續(xù)處理20 min，所得上清液為脫色后的苜蓿葉蛋白抗氧化肽。經(jīng)測定最終脫色率為85.32 %，多肽損失率為5.77 %，脫色后苜蓿葉蛋白抗氧化肽對DPPH·清除率為84.30 %，還原力保持率為85.31 %。

實施例2

一、苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的制備同實施例1

二、苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的脫色

將制備得到的苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的pH值調(diào)到2.5，脫色劑中粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土重量比1：0.9：0.7，該復(fù)合脫色劑添加量為苜蓿葉蛋白抗氧化肽溶液的1.5 %（m/V），在50 ℃下水浴振蕩脫色60 min后，在 5000 r/min 的離心作用下持續(xù)處理20 min，所得上清液為脫色后的苜蓿葉蛋白抗氧化肽。經(jīng)測定最終脫色率為82.40 %，多肽損失率為5.11 %，脫色后苜蓿葉蛋白抗氧化肽對DPPH·清除率為84.62 %，還原力保持率為83.50 %。

實施例3

一、苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的制備同實施例1

二、苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的脫色

將制備得到的苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的pH值調(diào)到3.5，脫色劑中粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土重量比1：1：0.8，該復(fù)合脫色劑添加量為苜蓿葉蛋白抗氧化肽溶液的2.5 %（m/V），在60 ℃下水浴振蕩脫色80 min后，在 5000 r/min 的離心作用下持續(xù)處理20 min，所得上清液為脫色后的苜蓿葉蛋白抗氧化肽。經(jīng)測定最終脫色率為86.20 %，多肽損失率為7.82 %，脫色后苜蓿葉蛋白抗氧化肽對DPPH·清除率為83.12 %，還原力保持率為85.34 %。

實施例4

一、苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的制備

將50g 苜蓿葉蛋白粉溶入1L 水中形成苜蓿葉蛋白水溶液，加入堿性蛋白酶作為水解酶，堿性蛋白酶的加入量為苜蓿葉蛋白質(zhì)量的3.0 %，控制在pH值為8.5的環(huán)境下酶解4 h，用NaOH溶液維持pH值恒定，滅酶后離心，收集上清液即可得到苜蓿葉蛋白抗氧化肽液。經(jīng)測定：DPPH·清除率為92.13 %，其中酶解液蛋白質(zhì)含量為10 mg/mL。

二、苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的脫色

將制備得到的苜蓿葉蛋白抗氧化肽液的pH值調(diào)到3.0，脫色劑中粉末活性炭、活性白土和堿性高嶺土重量比1：0.8：0.6，該復(fù)合脫色劑添加量為苜蓿葉蛋白抗氧化肽溶液的2.5 %（m/V），在60 ℃下水浴振蕩脫色60 min后，在 5000 r/min 的離心作用下持續(xù)處理20 min，所得上清液為脫色后的苜蓿葉蛋白抗氧化肽。經(jīng)測定最終脫色率為84.57 %，多肽損失率為3.45 %，脫色后苜蓿葉蛋白抗氧化肽對DPPH·清除率為84.96%，還原力保持率為84.12 %。