本發(fā)明涉及具有抗氧化效果的發(fā)酵植物性油脂組合物，更詳細(xì)地涉及抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物包含發(fā)酵的橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅果油及榛果油的抗氧化功能性化妝品組合物。
背景技術(shù)：
：人類在地球上生活的期間絕對需要氧氣，但是，活性氧作為在體內(nèi)中引起強烈的氧化作用的有害氧氣，在生物體中攻擊細(xì)胞膜，使喪失細(xì)胞功能，并攻擊細(xì)胞內(nèi)遺傳基因，還阻止細(xì)胞再生。產(chǎn)生活性氧的原因有環(huán)境污染和化學(xué)物質(zhì)、紫外線、血液循環(huán)障礙、精神壓力等。因此對這種可抑制引起各種疾病及老化的活性氧的反應(yīng)性的抗氧化物質(zhì)的關(guān)心逐漸增加。包含植物性油脂的脂肪為給人類制造能量的重要3大營養(yǎng)素中之一。但是，若脂肪在人體內(nèi)不能順利的消化吸收及排出，則帶來健康及身體功能障礙，并成為引起生活習(xí)慣病的重要原因。當(dāng)脂肪在體內(nèi)進(jìn)行代謝時，其用于氧燃燒脂肪而分解脂肪，由于通過這種過程形成能量，但也形成活性氧。因此需要增進(jìn)植物性油脂脂本身的抗氧化功能，來最小化植物性油脂脂進(jìn)行代謝時的活性氧的產(chǎn)生或影響。為了獲取現(xiàn)有通常的植物性油脂，選別植物性油脂的原料后，進(jìn)行清洗及干燥，并通過在高溫下進(jìn)行烤炙、著油、過濾、集油及充填的過程來形成植物性油脂的生產(chǎn)。一般所謂發(fā)酵油，是指發(fā)酵人參等中藥材，并萃取脂溶性成分來添加于油中或在油中添加人參等中藥材來進(jìn)行發(fā)酵。并且，將發(fā)酵魚類或椰子等，來萃取脂溶性成分的油、油脂種子(大豆、葵花籽、葡萄籽、芝麻等)經(jīng)過浸漬、發(fā)芽或蒸熟過程后萃取的油稱為發(fā)酵油。在韓國公開特許2012-0076170中公開在培養(yǎng)基中培養(yǎng)乳化劑來制備的化妝品組合物，但目前可以說，在大量的油中培養(yǎng)微生物，并進(jìn)行發(fā)酵來改善結(jié)構(gòu)及功能、香味的技術(shù)微弱，開發(fā)通過改變油的組成，來可誘導(dǎo)功能的變化及 提高的各種技術(shù)，對不辜負(fù)開發(fā)各種產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)要求非常重要。由此，本發(fā)明人員們?yōu)榱丝朔鲜霈F(xiàn)有技術(shù)問題，精心進(jìn)行研究的結(jié)果確認(rèn)這些事項后完成的。上述結(jié)果為，在包含發(fā)酵的橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅果油及榛果油的組合物的情況下，具有突出的抗氧化能、優(yōu)秀的乳化活性及乳化穩(wěn)定度，游離脂肪酸的含量顯著增加、使用感及保濕力非常優(yōu)秀?，F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)專利文獻(xiàn)1：韓國KR10-2012-0076170A技術(shù)實現(xiàn)要素：由此，本發(fā)明的主要目的在于，提供抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物包含發(fā)酵的橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅果油及榛果油，上述發(fā)酵的橄欖油具有抗氧化能突出、乳化活性及乳化穩(wěn)定度優(yōu)秀、游離脂肪酸的含量顯著增加且使用感及保濕力非常優(yōu)秀的效果。本發(fā)明的另一目的在于，提供皮膚外用劑組合物，上述皮膚外用劑包含上述油作為有效成分，上述油利用具有上述抗氧化效果的發(fā)酵植物性油脂組合物。根據(jù)本發(fā)明一實施方式，本發(fā)明提供抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物包含發(fā)酵的橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅果油及榛果油的榛果油。植物性油脂的抗氧化力分類為第一抗氧化物質(zhì)(Primaryantioxidant)、活性氧去除物質(zhì)(Oxygenscavenger)、第二抗氧化物質(zhì)(Secondaryantioxidant)、抗氧化酵素(Enzymicantioxidant)和螯合劑(Chelatingagent)等5種類別，眾所周知，其中包含較多第一抗氧化物質(zhì)的豆油、棕櫚油及花生油等較為穩(wěn)定，但隨著油化抗氧化力減少。但是，本發(fā)明確認(rèn)下述事項并完成的。與隨著油化植物性油脂抗氧化力減少的情況相反，根據(jù)本發(fā)明的微生物發(fā)酵及植物性油脂組合所制備的油脂的抗氧化力反而更增加。上述植物性油脂意味著可用于制備植物性油脂的任意植物種子或堅果類， 上述植物性油脂可以是辣椒、香瓜、鱷梨、龜、玉米、貂、蘇子、蓖麻、紅花、梧桐樹、可可等，為了降低植物性油脂脂的酸價，滿足上述范圍，為了減少植物性油脂的酸價并滿足上述范圍，優(yōu)選地，利用混合由橄欖、荷荷巴、葵花籽、玫瑰果、山茶、葡萄籽、綠茶、澳洲堅果及榛果來源的油的物性油脂。橄欖油易被皮膚吸收，給皮膚深處供給營養(yǎng)成分和水分，因而皮膚親和力及吸收力強。因包含天然維生素和抗氧化物質(zhì)，從而可維持彈力和健康的皮膚。綠茶油作為由綠茶籽萃取的油，包含大量維生素A、維生素B、維生素C，可減少斑點，雀斑等黑色素的沉著使皮膚清透。并且，包含具有殺菌作用、皮脂調(diào)節(jié)作用的兒茶酚成分，從而緩沖和皮膚煩惱。荷荷巴油作為由荷荷巴果實以冷壓形式得到的油，其包含營養(yǎng)成分多的非精制油和精制油，且化學(xué)結(jié)構(gòu)與皮脂成分相似，因而易浸透于皮膚，進(jìn)而不粘性，并具有皮膚保濕效果、皮膚抗皺/減少效果、遺傳性過敏癥、皮膚干裂預(yù)防效果、痤瘡鎮(zhèn)定效果等效果?？ㄗ延妥鳛閺目ǚN子采取的油，包含很多維生素A和維生素E，保濕效果好并預(yù)防皮膚老化效果好。作為皮膚鎮(zhèn)定效果突出，不引起痤瘡的油，也適用于油性皮膚，對角質(zhì)皮膚也有效果。玫瑰果油作為從智利的安第斯山脈的玫瑰樹種子萃取的油，對改善及組織再生燙傷、臉上皺紋等的效果突出，益于手術(shù)后的疤痕治療。山茶油作為從山茶樹的果實萃取的油，包含豐富的維生素A、維生素B、維生素E等營養(yǎng)成分，并抗氧化作用突出而不易變質(zhì)。山茶油無粘性，并包含很多油酸，因而具有抗氧化作用。并且，山茶油具有乳化劑、保濕劑、收斂功能、鎮(zhèn)定功能。葡萄籽油是通過壓榨葡萄籽而得，其富含抗氧化劑的維生素E，包含高濃度的亞油酸。其保濕效果突出，滲透于皮膚深處，因而除去毛孔中的排泄物的清洗效果突出。澳洲堅果油是從澳洲堅果中萃取的油，易滲透于皮膚，無油光。使皮膚絲 滑并易被皮膚吸收。也被稱為“消失(vanishing)”油(因被皮膚吸收后馬上消失)。澳洲堅果油中所富含的棕櫚油酸單位(C16:1)，在其他所知的其他何種植物中也找不到。棕櫚油酸從人體，尤其從兒童的皮脂中發(fā)現(xiàn)。隨著年齡增長，其濃度降低，因而澳洲堅果油有益于年紀(jì)大的人的皮膚。具有營養(yǎng)成分多，易被皮膚吸收，促進(jìn)血液循環(huán)的作用，從而利用于全身按摩。榛果油作為從榛樹萃取而得的油，油酸和亞油酸等不飽和脂肪酸的分布相當(dāng)高，易被皮膚吸收。即，根據(jù)本發(fā)明以上述油的組合進(jìn)行發(fā)酵來制備的發(fā)酵植物性油脂，尤其，可得到優(yōu)選地效果。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述發(fā)酵油的含量比分別為60～70:5～10:5～10:5～10:5～10:5～10:5～10:5～10:5～10。對于上述油組合物的各油的組成比范圍是指，為了使用感、味道、功效而適用于化妝品的最佳的油的組成比，因而在上述范圍內(nèi)表示最佳的效果。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，以上述含量比混合而成的油是用微生物進(jìn)行發(fā)酵。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述微生物為擔(dān)子菌綱屬(Pseudozymasp.)，更優(yōu)選地，上述微生物為擔(dān)子菌綱屬SY16(KCTC8950P)。根據(jù)本發(fā)明的實驗例，可以確認(rèn)在用微生物進(jìn)行發(fā)酵前的植物性油脂比用微生物發(fā)酵后的植物性油脂的情況下，進(jìn)而，以規(guī)定比率混合橄欖油、荷荷巴油、葵花籽油、玫瑰果油、山茶油、葡萄籽油、綠茶油、澳洲堅果油及榛果油，來用微生物進(jìn)行發(fā)酵的發(fā)酵植物性油脂的情況下，抗氧化能、乳化活性及乳化穩(wěn)定度高，游離脂肪酸的含量顯著增加，并使用感及保濕力非常優(yōu)秀。從上述結(jié)果可知，在用微生物發(fā)酵植物性油脂的情況下，可得多樣并得到提高的效果(實驗例1至實驗例6)。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合 物的特征在于，上述發(fā)酵油具有抗氧化效果。根據(jù)本發(fā)明的實驗例，可以確認(rèn)在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，與不按上述組成制備的油相比，自由基消除活性及羥基自由基清除活性更高。從上述結(jié)果可知，本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂通過消除自由基及羥基自由基，表示突出的抗氧化效果，從而具有可抑制因活性氧的產(chǎn)生所引起的疾病及老化的抗氧化物質(zhì)的效果(實驗例1及實驗例2)。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述發(fā)酵油可提高乳化活性、乳化穩(wěn)定性、保濕效果及使用感。根據(jù)本發(fā)明的實驗例，可以確認(rèn)在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，與不按上述組成所制備的油相比，可提高乳化活性、乳化穩(wěn)定性、保濕效果及使用感。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述發(fā)酵油的游離脂肪酸含量與發(fā)酵前相比增加5～140倍。上述游離脂肪酸脂是指，作為脂肪酸甘油酯的未結(jié)合形態(tài)。若游離脂肪酸的含量變高，則粘性減少從而提高使用感，并有效改善使用后光亮亮的問題。根據(jù)本發(fā)明的實驗例，可以確認(rèn)在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，與不按上述組成所制備的油相比，具有更高的游離脂肪酸含量。從上述結(jié)果可知，本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂包含高的游離脂肪酸，從而影響對使用感，進(jìn)而可帶來好的使用感(實驗例5)。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，相對于總重量包含10～30重量百分比的上述發(fā)酵油。上述范圍是指，當(dāng)發(fā)酵的油添加于化妝品劑型時，使用感及功效最好的濃度，在小于10～30重量百分比的濃度中特征有可能不明顯，若大于10～30重量百分比的濃度，則制備時油的比率過分上升，從而難以進(jìn)行乳化過程。根據(jù)本發(fā)明的抗氧化功能性化妝品組合物，上述抗氧化功能性化妝品組合物的特征在于，上述組合物具有選自由潤膚液、柔膚水、爽膚水、收斂水、乳液、牛奶乳液、保濕乳液、營養(yǎng)乳液、按摩霜、營養(yǎng)霜、保濕乳霜、護(hù)手霜、 粉底、精華素、營養(yǎng)精華素、面膜、香皂、洗面奶、卸妝乳、潔面霜、潤膚露及沐浴露組成的組中的一種劑型。根據(jù)本發(fā)明另一實施方式，本發(fā)明提供包含上述發(fā)酵油作為有效成分的皮膚外用劑組合物。包含于本發(fā)明的皮膚外用劑或化妝品組合物的成分，除了上述發(fā)酵植物性油脂以外，還包含皮膚外用劑或通常利用于化妝品組合物成分，例如，包含抗氧化劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、維生素、顏料及香料之類的普通助劑和載體。本發(fā)明的皮膚外用劑或化妝品組合物可由本領(lǐng)域中通常制備的任何劑型制備，例如，可由溶液、懸浮液、乳濁液、糊劑、凝膠、乳霜、乳液、粉、香皂、界面活性劑-包含去污劑、油、粉末粉底、乳濁液粉底，蠟粉底及噴霧等劑型化，但不局限于此。包含于本發(fā)明的皮膚外用劑或化妝品組合物的載體，根據(jù)劑型可利用本領(lǐng)域中通常利用的載體。在本發(fā)明的劑型為軟膏、糊劑、乳霜或凝膠的情況下，作為載體成分可利用動物性油、植物性油脂、糊劑、石蠟、淀粉、胺黃樹膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅、膨潤土、二氧化硅、滑石或氧化鋅等。在本發(fā)明的劑型為粉或噴霧的情況下，作為載體成分可利用乳糖、滑石、二氧化硅、氫氧化鋁、硅酸鈣或聚酰胺粉，尤其，在劑型為噴霧的情況下，還可包含氯氟烴(chloro-fluoro-hydrocarbons)、丙烷(Propane)/丁烷(butane)或二甲醚(dimethylether)之類的推進(jìn)劑。在本發(fā)明的劑型為溶液或乳濁液的情況下，作為載體成分利用溶劑、增溶劑或乳濁化劑，例如，水、乙醇(ethanol)、異丙醇(isopropanol)、碳酸乙酯(ethylcarbonate)、乙酸乙酯(ethylacetate)、苯甲醇(benzylalcohol)、苯甲酸苯甲酯(benzylbenzoate)、丙二醇(propyleneglycol)、1，3-丁基乙二醇(1,3-butylglycol)油、尤其具有棉籽油、花生油、玉米提胚油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油、甘油脂肪族酯、聚乙二醇(polyethyleneglycol)或山梨糖醇酐脂肪酸酯。在本發(fā)明的劑型為懸浮液的情況下，作為載體成分可利用水、乙醇或丙二醇之類的液相的稀釋劑、乙氧基化異硬脂醇(ethoxylatedisostearylalcohol)、聚氧乙烯山梨醇酯(polyoxyethylenesorbitolester)及聚氧乙烯山梨醇酯之類的懸浮劑、微晶纖維素、甲基氫氧化鋁(aluminummeta-hydroxide)、膨潤土，瓊脂或胺黃樹膠等。在本發(fā)明的劑型為含有界面-活性劑的潔面霜的情況下，作為載體成分可利用脂肪醇硫酸鹽(fattyalcoholsulfate)、脂肪醇醚硫酸鹽(fattyalcoholethersulfate)、磺基琥珀酸單酯(sulfosuccineicacidmonoester)、羥乙基磺酸鹽(isethionate)、咪唑啉(imidazole)衍生物、甲基?；撬猁}(methyltaurate)、肌氨酸鹽(sarcosinate)、脂肪酸酰胺醚硫酸鹽(fattyacidamideethersulfate)、烷基酰胺甜菜堿(alkylamidobetaine)、脂肪醇(脂肪醇)、脂肪酸甘油酯(fattyacidglycerides)、脂肪酸二乙醇酰胺(fattyaciddiethanolamide)、植物性油脂、羊毛脂衍生物或乙氧基化甘油脂肪酸酯(ethoxylatedglycerolfattyacidesters)等。在本發(fā)明的劑型為香皂的情況下，作為載體成分可利用脂肪酸的堿性金屬鹽、脂肪酸半酯鹽、脂肪酸蛋白質(zhì)水解物、羥乙基磺酸鹽、羊毛脂衍生物、脂肪醇、植物性油脂、甘油、糖等。進(jìn)而，本發(fā)明的化妝品組合物除了載體之外，還可包含其他助劑，例如，本發(fā)明的化妝品組合物可包含保鮮劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、增溶劑、維生素、顏料及香料等。以下，按步驟詳細(xì)說明本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂的制備方法。通過以下制備方法制備本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂。本發(fā)明提供發(fā)酵植物性油脂的制備方法，上述發(fā)酵植物性油脂的制備方法包括：第一次發(fā)酵步驟(a)，在好氣條件下，培養(yǎng)液中培養(yǎng)擔(dān)子菌綱屬微生物；第二次發(fā)酵步驟(b)，在上述植物性油脂中添加分別從橄欖、荷荷巴、葵花、玫瑰果、山茶、葡萄籽、綠茶、澳洲堅果及榛果來源的油形成油，并進(jìn)行培養(yǎng)；以及從完成上述第二次發(fā)酵過程的發(fā)酵液中榨油植物性油脂步驟(c)。首先，在好氣條件下，培養(yǎng)液中培養(yǎng)擔(dān)子菌綱屬微生物，來進(jìn)行第一次發(fā)酵(a)。本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂的特征在于，用微生物進(jìn)行發(fā)酵。其中，優(yōu)選地，上述微生物為擔(dān)子菌綱屬SY16(KCTC8950P)，上述擔(dān)子菌綱屬SY16(KCTC8950P)呈圓筒形狀，并以極性發(fā)芽形式進(jìn)行增殖，且形成與菌絲及子囊孢子區(qū)別的分生孢子。發(fā)酵/培養(yǎng)典型的可在(脂質(zhì)，一般為水性)包含培養(yǎng)基的適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵槽(或發(fā)酵容器)中進(jìn)行。主要發(fā)酵容器一般從小原料槽進(jìn)行無菌接種。典型的，利用液內(nèi)和/或好氧性發(fā)酵工序。其在深的發(fā)酵槽中進(jìn)行。發(fā)酵槽可具有監(jiān)視pH和/或用于進(jìn)行變換的裝置。容器可由以使還可執(zhí)行混合通氣和/或溶液的攪拌之類的細(xì)胞及脂質(zhì)的方式組成，或執(zhí)行。例如，可利用機械方法來解決。為了幫助促進(jìn)通氣，培養(yǎng)基在發(fā)酵期間進(jìn)行典型的攪拌。水溶液及細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)?shù)幕旌匣驍嚢?。例如，使空氣之類的氣體經(jīng)過通氣，從而急性通氣。其還可幫助向菌類細(xì)胞提供氧氣的目的。由此，本發(fā)明中的發(fā)酵在好氣條件下來完成。攪拌或混合的另一方法，例如，包括使用葉輪進(jìn)行攪拌。其可以為翼型軸流(hydrofoilaxial)流動設(shè)計或從水性培養(yǎng)基(如渦輪)以放射狀向外部的方式設(shè)計。優(yōu)選地，在不進(jìn)行攪拌的情況下，進(jìn)行發(fā)酵期間向微生物細(xì)胞提供氧氣，這種通氣(例如，通氣空氣，氧氣或含有其他氧氣的氣體)有利。通氣為0.1至2.0vvm，例如，通氣可為0.5至1.0vvm。接著，在完成第一次發(fā)酵的培養(yǎng)液中添加植物性油脂，來進(jìn)行第二次發(fā)酵。在本發(fā)明的化妝品組合物的特征在于，上述發(fā)酵植物性油脂利用包含酸價為0.1～1.0的植物性油脂的培養(yǎng)基，用上述微生物發(fā)酵來進(jìn)行發(fā)酵。幾乎不存在酸價小于0.1的植物性油脂，在上述酸價大于1.0的情況下，存在發(fā)酵效率降低的問題。其中，用于培養(yǎng)基，來進(jìn)行發(fā)酵的植物性油脂的酸價越低發(fā)酵效率越高，上述酸價優(yōu)選為0.1～0.7范圍。在步驟(b)中，相對于100重量百分比的培養(yǎng)液，可投入50～150重量百分比的植物性油脂。上述植物性油脂可根據(jù)發(fā)酵植物性油脂的目標(biāo)量可適當(dāng)調(diào)節(jié)，但是，若相對于100重量百分比的培養(yǎng)液投入大于150重量百分比的植物性油脂，則油有可能不充分地進(jìn)行發(fā)酵。在本發(fā)明中，上述第一次發(fā)酵可在30～40℃溫度條件下，進(jìn)行36～60小時的發(fā)酵。培養(yǎng)液使用普通的生產(chǎn)培養(yǎng)基，第一次發(fā)酵時間為24～72小時，優(yōu)選地，第一次發(fā)酵時間可以為30～60小時。在上述范圍內(nèi)，脂肪酶的活性最高。其中，第二次發(fā)酵可在30～40℃條件下，進(jìn)行48～96小時的發(fā)酵。由于隨著進(jìn)行第二次發(fā)酵，需要確保以使游離脂肪酸出現(xiàn)最大程度的時間。并且，上述時間根據(jù)植物性油脂的種類不同，因而測定游離脂肪酸的隨時間的增加量，進(jìn)而當(dāng)?shù)竭_(dá)游離脂肪酸不再增加的時間時，可結(jié)束第二次發(fā)酵。最后，(c)從完成上述第二次發(fā)酵的發(fā)酵液榨油植物性油脂，并回收。回收方法沒有特別的限制，可在高溫及高壓條件下進(jìn)行，優(yōu)選地，在不發(fā)生苯并芘(benzopyrene)或植物性脂肪的變形程度的低溫下進(jìn)行為優(yōu)選，可根據(jù)上述發(fā)酵的種子或堅果類的種類而不同。例如，上述榨油溫度可以為約70～150℃，優(yōu)選地，上述榨油溫度可以為90～105℃，更有選地，上述榨油溫度可以為約95～100℃?？赏ㄟ^進(jìn)行過濾及集油過程來回收上述榨油的油。被回收的植物性油脂作為已完成發(fā)酵的，可利用于皮膚外用劑或化妝品組合物的有效成分。根據(jù)本發(fā)明的發(fā)酵植物性油脂的抗氧化能突出，乳化活性及乳化穩(wěn)定度優(yōu)秀，游離脂肪酸的含量明顯增加，并使用感及保濕力非常優(yōu)秀。附圖說明圖1為表示本發(fā)明一實施例油的乳化穩(wěn)定度。圖2作為測定細(xì)胞增殖及毒性對人成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的影響的結(jié)果，表示發(fā)明一實施例的細(xì)胞存活率。具體實施方式以下，通過實施例更詳細(xì)地說明本發(fā)明。但以下實施例只用于例本發(fā)明，本發(fā)明的發(fā)明要求保護(hù)范圍不局限于這些實施例。實施例1：利用微生物制備發(fā)酵油1)第一次發(fā)酵1L的培養(yǎng)液(10g/L的葡萄糖、100g/L的橄欖油、3g/L的酵母抽提物(yeastextract)、3g/L的麥芽膏(maltextract)、3g/L的蛋白胨(peptone)、3g/L 的大豆粉(soyabeanmeal)、2g/L的(NH42SO4，1g/L的KH2PO4、0.5g/L的MgSO4、0.1g/L的CaCl2、0.1g/L的NaCl：上述組成4的培養(yǎng)基)中接種擔(dān)子菌綱屬SY16[KCTC8950P]，并在25℃溫度、300rpm、好氣條件進(jìn)行了培養(yǎng)。進(jìn)行培養(yǎng)后，分別在每個時間段(3、7、12、24、48、72、96h)取1ml的培養(yǎng)液，并利用分光光度計在660nm下測定了微生物的成長度及脂肪酶的活性。測定脂肪酶活性的結(jié)果，確認(rèn)脂肪酶活性最高的第一次發(fā)酵時間為48小時。2)第二次發(fā)酵及發(fā)酵油的生產(chǎn)在100L的如上所述的培養(yǎng)液中接種擔(dān)子菌綱屬SY16[KCTC8950P]來進(jìn)行48小時的第一次發(fā)酵，并在上述第一次發(fā)酵液中添加100L的植物性油脂(發(fā)酵植物性油脂)，并在25℃、500rpm、好氣條件下進(jìn)行第二次發(fā)酵，上述植物性油脂為分別從橄欖、荷荷巴、葵花、玫瑰果、山茶、葡萄籽、綠茶、澳洲堅果及榛果來源的油的含量比(v/v)為60:5:5:5:5:5:5:5:5的植物性油脂。進(jìn)行第二次發(fā)酵后，分別在各時間段(3、7、12、24、48、72、96、120h)取0.3～0.5L的發(fā)酵液，并只回收油部分。通過測定回收的油的游離脂肪酸，來確認(rèn)了油的發(fā)酵程度。測定游離脂肪酸增加量的結(jié)果，確認(rèn)添加油之后在培養(yǎng)72小時時中游離脂肪酸的量最大，之后不再增加。比較例1：未進(jìn)行發(fā)酵的植物性油脂的制備不進(jìn)行第一次發(fā)酵及第二次發(fā)酵，以分別從橄欖、荷荷巴、葵花、玫瑰果、山茶、葡萄籽、綠茶、澳洲堅果及榛果來源的油的含量比(v/v)為60:5:5:5:5:5:5:5:5的植物性油脂為比較例1。比較例2：發(fā)酵橄欖油的制備使用橄欖油成分為100％的植物性油脂，以與實施例1相同的方法制備了發(fā)酵橄欖油。比較例3：根據(jù)油的組成變化的發(fā)酵油制備使用橄欖油和綠茶油的含量比為60:40的植物性油脂，以與實施例1相同的方法制備了發(fā)酵油。比較例4：根據(jù)油組成變化的發(fā)酵油的制備使用以60:10:10:10:10的含量比混合橄欖油、綠茶油、荷荷巴油、山茶油、 葡萄籽油的油，以與實施例1相同的方法制備發(fā)酵油。實驗例1：抗氧化能的評價利用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH，1，1-diphenyl1-2-picry1hydrazy1)法與比較例1至比較例4的油一同試驗了實施例1的油的抗氧化能。抗氧化能評價為了測定自由基(freeradical)消除活性，利用了1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1，1-diphenyl1-2-picry1hydrazy1)。即，2.4mL的4.0×10-4M1，1-二苯基-2-三硝基苯肼溶液中，分別添加0.6mL的實施例1、參考例1至參考例4的油之后，利用漩渦混合器振蕩10秒鐘，并在常溫下放置30分鐘，接著，在517nm下測定吸光度，并以對于對比組的吸光度的減少比率來表示抗氧化活性度。此時，用于決定吸光度減少比率的對比組使用了抗氧化劑的抗壞血酸(ascorbicacid)，并添加與試料相同含量的抗壞血酸，以相同的方法進(jìn)行測定后，并表示在下列表一中。表1其結(jié)果，如上述表1所示，可以確認(rèn)，在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，與其他比較例的植物性油脂相比具有更突出的抗氧化能效果。實驗例2：羥基(hydroxylradical)消除能評價在本實驗例6中，為了測定上述實施例的抗氧化活性，而測定了羥基(hydroxylradical)消除能。在3mL的0.02M磷酸鹽緩沖液(Potassiumphosphatebuffer)(pH7.0)中，依次加入用于基質(zhì)的0.5mL的亞油酸(Linoleicacid)、各個稀釋的0.5mL的各稀釋的試料、0.5mL的0.1mMFeSO4·7H2O、0.5mL的100mMH2O2，來均勻地混合后，在37℃溫度下，反應(yīng)1小時。此時，對比組使用蒸餾水來替代試料添加而進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，在上述反應(yīng)液中分別添加1mL的2.8％三氯乙酸鈉(TCA，Trichloroaceticacid)和1mL的1％硫代巴比妥酸(TBA，Thiobarbituricacid)，并在100℃溫度的開水中反應(yīng)10分鐘。上 述反應(yīng)液進(jìn)行冷卻后，在2000rpm中，離心分離10分鐘，接著，在532nm中測定了吸光度。各試料的羥基消除能，通過以下計算式算出了各試料的羥基消除能，羥基消除能抑制50％的濃度用IC50表示出。作為比較組使用阿爾法麥胚酚。其結(jié)果在表2中示出。公式1羥基消除能(％)＝100－{(試料吸光度－試料blank吸光度)}/(control吸光度)}×100表2其結(jié)果，如表2所示，可以確認(rèn)，在根據(jù)本發(fā)明的油組成制備的發(fā)酵油的情況下，表示與對比組相似水平的羥基消除能，并且，與其他外比較例的植物性油脂相比具有更加突出的羥基消除能效果。實驗例3：乳化活性及乳化穩(wěn)定度評價乳化穩(wěn)定度是指，形成乳化物后，或在混合、高溫、離心分離等條件下，穩(wěn)定化乳化物的乳化劑的能力(ability)。為了測定乳化活性，在10ml的根據(jù)pH的各個緩沖液(buffer)中溶解1ml的實施例1的油和比較例1至比較例4的油后，進(jìn)行完全攪拌2分鐘來乳化。之后，放置10分鐘后，在620nm中測定吸光度，從而測定了乳化活性，相對于初期吸光度，經(jīng)過24小時后的吸光度百分率來算出乳化穩(wěn)定度。在下列表3中表示了對于實施例1及比較例1至比較例4的油的pH的乳化活性。表3緩沖液pH實施例1比較例1比較例2比較例3比較例45.02.9720.5312.6332.6872.7027.03.0260.5272.8002.7532.7899.04.5011.6134.2154.2074.234其結(jié)果，如上述表3所示，可以確認(rèn)實施例1的油在pH5～pH9的范圍內(nèi)乳化活性最為優(yōu)秀，尤其，在pH5、pH7中與比較例1的油相比，高5倍以上，與比較例2至比較例4相比約高10％。在下列表4中表示了根據(jù)發(fā)酵前后的油的種類的乳化活性。表4緩沖液pH7.0發(fā)酵前(O.D)發(fā)酵后(O.D)比較例20.5172.800比較例30.6802.729實施例10.5143.026其結(jié)果，如上述表4所示，可以確認(rèn)，發(fā)酵后的植物性油脂的乳化活性與發(fā)酵前的乳化活性相比高約5倍，由此可知乳化力越好，實施例1的油與發(fā)酵橄欖油的比較例2和混合橄欖和綠茶油來進(jìn)行發(fā)酵的比較例3相比乳化力上升了10％以上。在圖1中表示了對于實施例1的油的乳化穩(wěn)定度的結(jié)果。實施例1的油在經(jīng)過24小時之后也表現(xiàn)優(yōu)秀的乳化穩(wěn)定度。實驗例4：官能評價對于上述實施例1及比較例1至比較例4的油進(jìn)行了皮膚觸感(保濕感、粘性、油光等)等各項目的官能評價。以男女各24名，總48名的經(jīng)過訓(xùn)練的檢查員為對象，對關(guān)于使用上述油的使用感的項目進(jìn)行了記號檢查并求出其平均(以5為標(biāo)準(zhǔn)？，1：非常不好、2：不好、3：普通、4：好、5：非常好)。在下列表5中表示了其結(jié)果。表5評價項目實施例1比較例1比較例2比較例3比較例4保濕感3.82.23.53.23.3粘性4.32.44.03.94.0油光3.81.43.33.53.5其結(jié)果，如上述表5所示，可以確認(rèn)，與發(fā)酵前相比，發(fā)酵后保濕感好、油光少、無粘性，尤其，實施例1的油在保濕感、粘性、油光的皮膚使用感的所有項目中優(yōu)秀于使用比較例的油的情況。實驗例5：游離脂肪酸的測定評價酸價是指作為脂肪酸的甘油酯，測定以未結(jié)合形態(tài)的存在的游離脂肪酸的量。利用萬通(metrohm)公司的自動電位滴定儀(Titrino)測定了用于確認(rèn)第一游離脂肪酸有無變化的酸價。以使滴定液(KOH0.05mol/L)的滴至預(yù)想消費量的1～10ml之間，并投入對應(yīng)于上述滴定液的試料。使試料的性狀均勻，并投入50ml的補助溶液(甲醇:蒸餾水＝3:1)。選擇設(shè)備的MET模式，并選擇測定值中U(電壓)，加載METU模式，電極和滴定管頭置于燒杯中后，開始進(jìn)行試驗。若確認(rèn)當(dāng)量點，則終止實驗。在未投入試料的狀態(tài)下，以同一方法進(jìn)行實施并算出了空試驗值。用于測定比較各個油的游離脂肪酸含量的酸價的第二測定利用了韓國食品標(biāo)準(zhǔn)法典中的酸價實驗法。精確測定5～10g的油放入帶蓋的錐形瓶中，并加入100mL的中性乙醇-醚混合液(1:2)來溶解后，以酚酞(phenolphthalein)試液作為指示液，用0.1N氫氧化鉀(potassiumhydroxide)溶液滴定至持續(xù)30秒淺紅色為止。通過以下公式2計算酸價。在實施例1的油的發(fā)酵過程中，為了比較游離脂肪酸含量而測定了酸價，并在下列表6中表示了其結(jié)果。公式2酸價＝5.611×a×f/SS：檢體的采取量(g)、a：0.1N氫氧化鉀溶液的消費量(mL)、f：0.1N氫氧化鉀溶液滴定量。表6發(fā)酵前(O.D)發(fā)酵后(O.D)比較例20.3539.54比較例30.4535.59實施例10.4444.01其結(jié)果，如上述表6所示，所有油與發(fā)酵前相比游離脂肪酸含量增加了約50～140倍以上，尤其，實施例1油的酸價最高。并從上述結(jié)果可知，實施例1的油通過發(fā)酵工序，游離脂肪酸的含量變高，因而粘性減少、使用感提高，并對使用后的改善油光有效。實驗例6：對人成纖維細(xì)胞(HumanDermalFibroblastNeonatal)的增殖產(chǎn)生影響的效果驗證在培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞中，處理不同濃度的實施例1的油后，比較細(xì)胞生存率，來驗證了發(fā)酵工序?qū)?xì)胞的增殖及毒性產(chǎn)生的影響。3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT，3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide)物質(zhì)吸收于細(xì)胞內(nèi)，在線粒體(mitochondria)內(nèi)通過琥珀酸脫氫酶(succinatedehydrogenase)形成甲簪(formazan)，但在細(xì)胞內(nèi)積累其物質(zhì)是指線粒體的活性，廣泛的是指細(xì)胞的活性，因而可進(jìn)行細(xì)胞的增殖及毒性評價。在96孔板(wellplate)中培養(yǎng)的細(xì)胞中，處理0.5％～0.0019％濃度的實施例1的油后，在5％CO2、37℃溫度的培養(yǎng)器中培養(yǎng)48小時。用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽溶液中反應(yīng)3～4小時，接著利用酶聯(lián)免疫吸附測定儀(ELISA，enzymelinkedimmunosorbentassay)在540nm中測定了O.D值。在以下公式中表示了算出細(xì)胞生存率的公式。公式3細(xì)胞生存率(％)＝(試料添加組的O.Dat540nm)/無試料添加組的O.Dat540nm)×100在圖2中表示了發(fā)酵前植物性油脂(比較例1)與添加發(fā)酵植物性油脂(實施例1)來進(jìn)行實驗的結(jié)果。試驗結(jié)果，當(dāng)比較發(fā)酵后的植物性油脂處理組與發(fā)酵前的植物性油脂的處理組的細(xì)胞生存率時，發(fā)酵后油處理組的生存率更高。從以上結(jié)果，可以確認(rèn)，即使油經(jīng)過發(fā)酵過程，也對細(xì)胞的增殖及毒性不產(chǎn)生影響。劑型例1：外用乳霜劑以下列表7的組成劑型化外用乳霜劑。首先，在純化水中加入保濕劑，加 熱調(diào)整至70℃溫度、并進(jìn)行調(diào)整來制備了水相。加熱溶解實施例1的油及其余的油成分后，加入乳化劑、防腐劑等，并調(diào)整至70℃溫度。將其加入上述水相中，并利用攪拌機均勻化乳化粒子，接著進(jìn)行了脫泡、過濾、冷卻。表7劑型例2：外用乳液劑的組成以下列表8的組成劑型化用乳液劑。首先，在純化水中加入保濕劑，加熱至70℃，并進(jìn)行調(diào)整來制備了水相。加熱溶解實施例1的油及其余的油成分后，加入乳化劑、防腐劑等，并調(diào)整為70℃溫度。將其加入上述水相中，并利用攪拌機進(jìn)行乳化攪后，添加透明質(zhì)酸1水溶液，并利用攪拌機混合均勻，接著進(jìn)行了脫泡、過濾、冷卻。表8以上對本發(fā)明的實施例進(jìn)行了說明，但本發(fā)明并不局限于上述實施例，能夠以各種相互不同的方式制備，本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能夠理解本發(fā)明在不變更技術(shù)思想或必要的特征的情況下，能夠以其他具體的形態(tài)實施。因此，應(yīng)理解為以上記載的實施例在所有方面僅是例示性的，而非限定。當(dāng)前第1頁1 2 3