本發(fā)明涉及農產品深加工
技術領域：
，特指利用大蒜皮為原料，采用蒸汽爆破處理后，聯(lián)合酶解制備蒜皮可溶性膳食纖維。
背景技術：
：：我國大蒜種植面積廣，產量巨大，大蒜年產量高達1100萬噸，同時也是大蒜消費大國，因此在大蒜加工過程產生大量廢棄物蒜皮，造成大量資源浪費，甚至污染環(huán)境。因此隨著大蒜深加工領域的飛速發(fā)展,其廢棄物產量愈來愈多，對于蒜皮的升值利用需求愈來愈迫切。膳食纖維作為一種新型營養(yǎng)素，其諸多的生理功能如減肥、降血壓、預防便秘、清除外源有害物質正受到消費者和食品企業(yè)加工者越來越多的重視。膳食纖維按其溶解性可分為可溶性膳食纖維(solubledietaryfiber，SDF)和不溶性膳食纖維(insolubledietaryfiber，IDF)。由于可溶性膳食纖維發(fā)揮主要的生理功效及其優(yōu)良的加工品質,富含可溶性膳食纖維的功能性食品市場需求日益增加。CN105146356A公開了一種膳食纖維薏仁片及制備方法，CN105146311A公開了一種青稞膳食纖維速溶粉及其制作方法，CN105146664A公開了一種膳食纖維飲料及其制備方法，CN105167093A公開了一種大豆膳食纖維飲料及其制備方法，CN105104655A公開了一種含可溶性膳食纖維的梔子花茶及其制備方法，CN105166684A公開了一種低血糖生成指數(shù)空心宮面及其制備方法。蒜皮中含有豐富的纖維素、半纖維素和木質素，是一種優(yōu)質的膳食纖維來源。然而，蒜皮中的膳食纖維絕大部分都是不溶性膳食纖維。CN102154400A公開了一種以豆渣為原料蒸汽爆破結合酶解制取膳食纖維的方法，快速提高了可溶性膳食纖維的含量。CN104905278A公開了一種甘薯渣膳食纖維的提取方法，采用堿法-蒸汽爆破-發(fā)酵法結合方法提取甘薯渣膳食纖維,使甘薯渣膳食纖維中可溶性膳食纖維比例顯著提升。本發(fā)明采用蒸汽爆破處理來源廣，成本低的蒜皮，聯(lián)合酶法制備蒜皮可溶性膳食纖維，不僅解決了蒜皮廢料被浪費問題，變廢為寶，還擴充了可溶性膳食纖維的原料來源，制備出優(yōu)質的可溶性膳食纖維。技術實現(xiàn)要素：：本發(fā)明的目的是采用蒸汽爆破處理蒜皮，聯(lián)合酶法制備可溶性膳食纖維，旨在提高蒜皮可溶性膳食纖維含量，提升蒜皮膳食纖維品質，提高大蒜的附加值和綜合利用率。蒜皮膳食纖維，其基本成分如下：上述蒜皮膳食纖維的蒸汽爆破進行改性的方法，按照以下步驟完成：(1)除雜：去除枯黃葉及其他雜物；(2)干燥：將蒜皮放置在60～80℃烘箱中18～24h，烘至恒重后，粉碎，過60目篩；(3)蒸汽爆破處理：將蒜皮粉末調節(jié)水分含量為10％～50％，控制維壓時間10～50s，保持蒸汽壓力0.5～2.5MPa，在此條件下進行爆破處理后，自然冷卻，冷凍干燥24～36h，凍干后粉碎，過60目篩，制得改性蒜皮膳食纖維。上述蒜皮膳食纖維的蒸汽爆破和聯(lián)合酶解技術進行改性的方法，按照以下步驟完成：(1)除雜：去除枯黃葉及其他雜物；(2)干燥：將蒜皮放置在60～80℃烘箱中18～24h，烘至恒重后，粉碎，過60目篩；(3)蒸汽爆破處理：將蒜皮粉末調節(jié)水分含量為10％～50％，控制維壓時間10～50s，保持蒸汽壓力0.5～2.5MPa，在此條件下進行爆破處理后，自然冷卻，冷凍干燥24～36h，凍干后粉碎，過60目篩，制得改性蒜皮膳食纖維a；(4)聯(lián)合酶解處理：將步驟(3)得到的改性蒜皮膳食纖維a置于高腳燒杯中，按照料液比1：40g/mL添加MES-TRIS緩沖溶液，按照底物與酶料液比為1:50g/μL添加耐高溫α淀粉酶，蓋上錫箔紙，在溫度為95℃的水浴鍋中水浴35min，反應結束立即將燒杯置于60℃的水浴鍋中，待溶液冷卻至60℃后，按照底物與酶料液比為1:100g/uL添加堿性蛋白酶繼續(xù)反應30min，該酶解過程完成后，向燒杯中加入5mL3mol/L乙酸溶液，用10mol/LNaOH溶液在酶解液溫度為60℃條件下調節(jié)溶液pH值至4.5，最后按照底物與酶料液比為1:50g/μL添加糖化酶，60℃水浴反應30min，至此酶解過程結束，得到酶解液；(5)離心：將步驟(4)得到的酶解液在5000×g的離心機中離心20min，取上清液；(6)醇沉：將步驟(5)得到的上清液按照上清液和乙醇體積比1:4(v/v)添加預熱至60℃的無水乙醇，室溫靜置1h后，在5000×g的離心機中離心5min除去上清，得到沉淀物；(7)干燥：將步驟(6)得到的沉淀物凍干36h，得改性蒜皮膳食纖維b。其中步驟(4)中的MES-TRIS緩沖溶液配制方法如下：稱取19.52g2-(N-嗎啉代)乙烷磺酸和12.2g三羥甲基氨基甲烷，用1.7L蒸餾水溶解，用6mol/L氫氧化鈉調pH至8.2，加水稀釋至2L。上述蒜皮膳食纖維的應用，能抑制食物中鉛離子的吸收。本發(fā)明所具有的優(yōu)點是：本發(fā)明采用蒸汽爆破技術處理蒜皮，對爆破處理后的蒜皮可溶性膳食纖維含量進行研究，其含量達到17.55％，而未經蒸汽爆破處理的蒜皮，可溶性膳食纖維含量僅僅5.31％，且得到的蒜皮可溶性膳食纖維表面疏松多孔，吸水性好，抗氧化性強，是一種高品質膳食纖維。下面結合實施例對本發(fā)明的技術方案做進一步的詳細描述，但發(fā)明的實施方式不限于此。具體實施方式對照例：未進行蒸汽爆破處理。稱取蒜皮粉末1g置于100mL高腳燒杯中，加入40mLpH為8.2的MES-TRIS緩沖液和50μL耐高溫α-淀粉酶進行第一次酶解，反應條件為：酶解溫度95℃，酶解時間35min，反應結束后將燒杯立即置于60℃的水浴鍋中，待溶液冷卻至60℃后添加100μL堿性蛋白酶繼續(xù)60℃水浴反應30min進行第二次酶解，待第二次酶解結束，向燒杯中加入3mol/L乙酸溶液5mL，用10mol/LNaOH溶液在酶解液溫度為60℃條件下調節(jié)溶液pH值至4.5，最后加50μL的糖苷酶繼續(xù)60℃水浴30min進行第三次酶解，將三次酶解反應結束后的酶解液于5000×g的離心機中離心20min，取上清液，按照上清液和乙醇體積比1:4(v/v)添加預熱至60℃的無水乙醇，室溫靜置1h后以5000×g離心5min除去上清，將沉淀物冷凍干燥36h得到蒜皮可溶性膳食纖維成品。經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為5.31％。實施例1：蒸汽爆破處理蒜皮后，進行酶解制備蒜皮可溶性膳食纖維。調節(jié)蒜皮水分含量10％，固定維壓時間20s，保持汽爆壓力0.5MPa，在此條件下汽爆處理蒜皮粉，冷凍干燥汽爆后的蒜皮粉36h，制得汽爆蒜皮粉，粉碎該樣品后，過60目篩，制得改性蒜皮膳食纖維a，接著進行聯(lián)合酶解實驗，酶解過程及后續(xù)步驟同對照例，得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為11.37％。實施例2：試驗過程同實施例1，其不同為調節(jié)蒜皮水分含量20％。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為14.87％。實施例3：試驗過程同實施例1，其不同為調節(jié)蒜皮水分含量30％。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為13.6％。實施例4：試驗過程同實施例1，其不同為調節(jié)蒜皮水分含量40％。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為14.02％。實施例5：試驗過程同實施例1，其不同為調節(jié)蒜皮水分含量50％。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為13.65％。實施例6：蒸汽爆破處理蒜皮后，進行酶解制備蒜皮可溶性膳食纖維。調節(jié)蒜皮水分含量20％，固定維壓時間20s，保持汽爆壓力1MPa，在此條件下汽爆處理蒜皮粉，冷凍干燥汽爆后的蒜皮粉36h，制得汽爆蒜皮粉，粉碎該樣品后，過60目篩，制得改性蒜皮膳食纖維a，接著進行酶解實驗，酶解過程及后續(xù)步驟均同對照例，得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為17.55％。實施例7：試驗過程同實施例6，其不同為汽爆壓力1.5MPa。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為17.34％。實施例8：試驗過程同實施例6，其不同為汽爆壓力2.0MPa。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為16.47％。實施例9：試驗過程同實施例6，其不同為汽爆壓力2.5MPa。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為15.53％。實施例10：蒸汽爆破處理蒜皮后，進行酶解制備蒜皮可溶性膳食纖維。調節(jié)蒜皮水分含量20％，固定維壓時間10s，保持汽爆壓力1.0MPa，在此條件下汽爆處理蒜皮粉，然后冷凍干燥汽爆后的蒜皮粉36h，粉碎該凍干樣品，過60目篩，制得改性蒜皮膳食纖維a，接著進行酶解實驗，酶解過程及后續(xù)步驟均同對照例，得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為13.53％。實施例11：試驗過程同實施例10，其不同為維壓時間30s。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為13.6％。實施例12：試驗過程同實施例10，其不同為維壓時間40s。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為14.02％。實施例13：試驗過程同實施例10，其不同為維壓時間50s。得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮可溶性膳食纖維的含量為13.65％。實施例14：蒸汽爆破處理蒜皮后，進行酶解制備蒜皮可溶性膳食纖維。調節(jié)蒜皮水分含量30％，固定維壓時間20s，保持汽爆壓力1.0MPa，在此條件下汽爆處理蒜皮粉，然后冷凍干燥汽爆后的蒜皮粉36h，粉碎該凍干樣品，過60目篩，制得改性蒜皮膳食纖維a，接著進行酶解實驗，酶解過程及后續(xù)步驟均同對照例，得改性蒜皮膳食纖維b，經測定，蒜皮膳食纖維的各成分如下。表1.0基本成分表試驗例1：蒜皮膳食纖維對大鼠體內鉛離子吸收及其在組織中分布的影響研究1.1.1試驗材料5周齡雄性SD大鼠由江蘇大學動物實驗中心提供(合格證編號：NO.201601301)，隨機分配成10組，每組6只；飼料按照等熱量的原則，由開源動物飼料(常州)有限公司加工制作，分成10組，飼料成分表如表1.1所示；乙酸鉛，分析純，國藥化工制劑有限公司。表1.1飼料成分表(注：全營養(yǎng)組飼料成分表如表所示，其余各組不添加纖維素，按分組要求添加蒜皮膳食纖維或者乙酸鉛。膳食纖維和乙酸鉛不計算能量值。)1.1.2儀器設備ContrAA300連續(xù)光源原子吸收光譜儀，德國耶拿公司；XserieserⅡ電感耦合等離子體質譜儀，美國ThermalFisher；DK-98-Ⅱ電子調溫萬用電爐，天津泰斯特儀器有限公司；SP-100通風櫥，無錫普瑞達試驗裝備有限公司。1.2試驗方法1.2.1樣品制備按照實施例14的所示方法進行多種酶的酶解、分離后，分別制得SDF與IDF，然后按照SDF:IDF＝1:3比例復配后制得膳食纖維(DF)，用于后續(xù)試驗。1.2.2飼料配制以乙酸鉛為鉛離子(Pb)的暴露來源，添加到成分表1.1的飼料中，分為四大組：第一組為全營養(yǎng)組的飼料(Controldiet，如表1.1)，第二組為缺失膳食纖維的飼料(DF0％)，第三組為缺失膳食纖維且添加乙酸鉛的飼料(分別為DF0％+Pb20mg/kg、DF0％+Pb100mg/kg、DF0％+Pb200mg/kg)，第四組為添加乙酸鉛同時添加蒜皮蒸汽爆破膳食纖維的飼料(DF2.5％+Pb100mg/kg、DF5.0％+Pb100mg/kg、DF10.0％+Pb100mg/kg、DF5.0％+Pb20mg/kg、DF5.0％+Pb200mg/kg)。為保證大鼠年齡及重量在試驗過程中沒有顯著性變化，試驗周期為一周。試驗結束后，測定鉛的表觀吸收率及在各組織中分布情況，觀察各組之間鉛的吸收率的變化。1.2.3動物飼養(yǎng)方法動物每兩只一籠飼養(yǎng)，自由飲用雙蒸水，自由攝食，并記錄日進食量。飼養(yǎng)第1天和第7天稱重，收集第七天的糞便和尿液，凍存于-20℃冰箱。從第七日結束禁食12h后，以5mL/kg鼠重注射10％水合氯醛麻醉后，腹腔靜脈取血至肝素鈉采血管，放血處死動物后，取肝、腎、腦、脾和股骨稱重，凍存于-20℃冰箱。1.2.4鉛含量測定方法測定糞便、尿液、血液和組織鉛含量，在進行樣品鉛含量測定前，均先進行消化試驗。具體如下：參照國標GB5009.12-2010中濕法消解法，取適量樣品于100mL三角瓶中，放3至4粒玻璃珠，加混合酸(硝酸：高氯酸體積比9:1)10mL，加蓋靜置過夜，加一小漏斗在三角瓶上于電爐上消解，先微微加熱至不再冒稠密泡沫后，中火消化，并不時地補充混合酸至瓶內出現(xiàn)密集的白煙，再繼續(xù)中火消化一會至瓶內液體少量，冷卻，加少量雙蒸水，此時消化液呈無色透明，然后驅酸，最后試樣消化液洗入或過濾入10mL容量瓶中，用水少量多次洗滌三角瓶，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，混勻備用；同時作試劑空白。然后，用原子吸收光譜儀測定糞便、尿液和血液中鉛含量，用電感耦合等離子體質譜儀測定肝、脾、骨、腦、腎中鉛含量。料重比(R)、臟器指數(shù)(I)、日鉛吸收率(A)、日鉛進食量(F1)、日糞鉛排出量(E1)、日尿鉛排出量(E2)、組織鉛含量(C)計算公式分別如下：R＝(F/G)(1.1)式(1.1)中R為料重比，g/g，；F為日飼料進食量，g；G為日增重，g。I＝(M1/M1)*1000(1.2)式(1.2)中I為臟器指數(shù)，g/g，；M1為臟器重，g；M1為鼠重，g。A＝(F1-E1-E2)/F1(1.3)式(1.3)中A為日鉛吸收率，％，；F1為日鉛進食量，mg；E1為日糞鉛排出總量，mg；E2為日尿鉛排出總量，mg。F1＝F×C1÷1000(1.4)式(1.4)中F1為日鉛進食量，mg；F為日進食量，g；C1為飼料鉛含量，mg/kg。E1＝G1×C2(1.5)式(1.5)中E1為日糞鉛排出總量，mg；G1為日糞便排出總量，g；C2為糞便中鉛含量，mg/g。E2＝V1×C3(1.6)式(1.6)中E2為日尿鉛排出總量，mg；V1為日尿液排出總量，mL；C3為尿液中鉛含量，mg/mL。C＝(M3/M1)(1.7)式(1.7)中C器臟鉛含量，μg/g；M3為器臟鉛總質量，mg；M1為臟器重，g。1.3統(tǒng)計處理：用SPSS軟件做方差分析和檢驗各指標均數(shù)組間差異的顯著性分析。1.4結果和討論1.1.1飼料中鉛對鼠生長性能的影響料重比、臟器指數(shù)測試結果分別如表1.2和表1.3所示。表1.2始重、終重，日增重和料重比始重(g)終重(g)料重比(g/g)日增重(g/d)對照215.83±1.04261.83±1.663.01±0.146.57±1.16DF0％216.33±6.25260.50±7.213.69±0.856.31±2.20DF0％+Pb(20mg/kg)217.33±7.75258.67±11.723.57±0.115.90±1.48DF0％+Pb(100mg/kg)209.50±6.38256.83±8.333.34±0.446.76±1.82DF0％+Pb(200mg/kg)217.00±1.82257.83±10.133.55±0.405.83±1.31DF2.5％+Pb(100mg/kg)215.50±3.77261.50±11.463.65±1.136.00±2.25DF5.0％+Pb(100mg/kg)215.50±5.27251.50±29.323.30±0.215.57±2.54DF10.0％+Pb(100mg/kg)212.50±1.36258.00±6.563.04±0.166.50±2.92DF5.0％+Pb(20mg/kg)215.33±5.48265.17±8.172.93±0.367.12±1.38DF5.0％+Pb(200mg/kg)211.67±1.04266.17±1.043.30±0.727.36±1.01由表1.2及表1.3可知，各項生理指標均無顯著性差異。表明20mg/kg，100mg/kg，200mg/kg三種濃度的鉛添加量均對鼠生長性能不產生影響。通過文獻報道的短期鉛鹽飼喂動物實驗，最低致死劑量在為300～400mg/kg范圍內。所以本試驗的鉛離子暴露水平符合慢性中毒的過程。而實驗選用三個濃度，是因為在進行體外吸附試驗時，隨著基底濃度的增加，吸附效率增加，當基底濃度達到一定濃度時，吸附效率增長緩慢至不再增加(數(shù)據(jù)未給出)。表1.3器臟指數(shù)1.1.2膳食纖維對糞鉛、尿鉛排出量的影響日糞鉛和日尿鉛的試驗數(shù)據(jù)見表1.4。由表可知糞鉛排出量遠遠大于尿鉛，所以鉛主要以糞便形式排出。在本試驗濃度范圍內，鉛離子添加量為20mg/kg時，鉛離子吸收率為53.6％，當添加量增加到200mg/kg時，吸收率增加到91.63％。表明隨著鉛離子暴露濃度的增加，鉛離子吸收率逐步增加。Breton等人研究指出，腸道微生物對重金屬離子的吸收起到非常重要的屏障作用。因此，這可能是由于鉛離子濃度的增加，加大了對動物腸道微生物及腸道上皮細胞的毒性，破壞了動物腸道的微生物屏障等功能，致使吸收率增加。表1.4第七日糞鉛、尿鉛排出量分組日糞鉛排出量(mg)日尿鉛排出(μg)日鉛吸收(％)對照0.050a±0.0750.090a±0.001-DF0％0.034a±0.0040.095a±0.005-DF0％+Pb20mg/kg0.342ab±0.0590.465b±0.06553.6a±5.68DF0％+Pb100mg/kg1.610c±0.2830.467b±0.00767.1b±8.03DF0％+Pb200mg/kg1.590b±0.0900.778cd±0.06991.63c±1.10DF2.5％+Pb100mg/kg2.543d±0.2731.575e±0.26945.4a±1.91DF5.0％+Pb100mg/kg2.092d±0.0480.996d±0.02553.0a±5.07DF10.0％+Pb100mg/kg2.089d±0.3741.577e±0.00645.6a±6.50DF5.0％+Pb20mg/kg0.606b±0.0390.576bc±0.17817.7e±1.38DF5.0％+Pb200mg/kg1.931d±0.3201.551e±0.43070.10b±6.64(注：顯著性水平p<0.05)添加蒸汽爆破蒜皮膳食纖維組的鉛排出量相比較于未添加組，糞鉛及尿鉛排出量均有所增加。5％蒸汽爆破蒜皮膳食纖維添加組相比于未添加組，鉛離子添加量分別為20mg/kg，100mg/kg，200mg/kg時，鉛離子的吸收率分別從53.6％，67.1％，91.3％降到17.7％，53.0％，70.10％，下降幅度將近20％。但是，膳食纖維添加量不同并沒有引起糞鉛和尿鉛排出量的顯著性差異。這和張立實等人研究魔芋精粉對鉛離子吸收率結果一致?？傊鲜鼋Y果表明，蒜皮膳食纖維對鉛離子腸道吸收有一定的抑制作用，但是不存在劑量-反應關系。1.1.3膳食纖維對大鼠血鉛和組織鉛含量的影響各組織鉛含量數(shù)據(jù)結果見表1.5。由表可知，血液中鉛離子濃度在鉛離子添加量為100mg/kg時最大，和組織中鉛離子含量結果一致。在鉛離子添加量為100mg/kg時，分別添加2.5％、5.0％、10.0％的蒜皮蒸汽爆破膳食纖維均使得血鉛含量顯著降低，但三組之間沒有顯著性差異關系，和糞鉛、尿鉛排出量結果一致。在鉛離子添加量分別為20mg/kg、100mg/kg、200mg/kg時，添加5.0％的膳食纖維均能顯著降低血鉛濃度。表1.5組織鉛含量(注：顯著性水平p<0.05)在各個組織鉛含量中，試驗組各個組織中鉛暴露量均大于對照組，其中組織鉛含量按大到小依次是股骨>腎>肝>脾>腦。這與有關報道的進入體內鉛主要蓄積在骨骼中是一致地。鉛離子暴露量為20mg/kg時，添加5％的膳食纖維對脾鉛含量起減少作用，股骨、腎、肝和腦鉛含量沒有顯著性差異。鉛離子暴露量為100mg/kg時，飼料中添加膳食纖維能使腎、股骨中鉛含量顯著減少，但加大膳食纖維劑量不會增大降低的幅度，這和鉛吸收率結果一致。但是當鉛離子暴露量達到200mg/kg時，5％的膳食纖維添加量使腎、骨和肝中鉛含量顯著增加，且當膳食纖維添加量為5％時，鉛離子添加量越高，其腎、肝和股骨中鉛含量越高，脾和腦中鉛含量沒有顯著性差異。在本試驗范圍內，膳食纖維對一定濃度的鉛離子有抑制吸收的作用，但是鉛離子濃度過高反而有促進其累積的作用。這一現(xiàn)象出現(xiàn)的原因還有待進一步研究。臨床上采用排鉛藥物進行螯合治療來改善尿酸鹽的排泄，與血液、腎臟、肝臟和腦組織中等靶器官中的眾多金屬離子產生強大的絡合力，形成絡合物，隨尿、糞等排出體外。也有報道表明，二巰基丁二酸這種螯合劑，當血鉛達到一定水平時，再使用反而效果不明顯。在所有重金屬中，以鉛和鎘遷移性強，毒性大成為備受關注的對象。自然飼養(yǎng)過程中的報道更為少見。本試驗在自然進食狀態(tài)證明通過蒸汽爆破改性的蒜皮膳食纖維能抑制鉛離子的吸收。(1)飼料中鉛離子添加量為20mg/kg、100mg/kg、200mg/kg時，蒸汽爆破改性的蒜皮膳食纖維能顯著地提高糞鉛、尿鉛排出量，降低鉛吸收率。但是增大蒜皮膳纖維的添加量不能更大程度的降低吸收率。(2)蒸汽爆破改性的蒜皮膳食纖維會不同程度地改變鉛離子在組織中分布情況。5％的蒜皮膳食纖維添加量在鉛離子添加量為100mg/kg時，能夠降低其在腎、股骨中的蓄積量；但鉛離子添加量為200mg/kg時，反而會增加其在肝、腎和股骨中的蓄積量。當前第1頁1 2 3