一種牛樟菌的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種牛樟菌的培養(yǎng)基。所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分：牛樟木萃取的營(yíng)養(yǎng)液5%-10%，碳源10-30%，氮源5-10%，葡萄糖10-15%，酵母粉2-5%，水余量。采用所述的培養(yǎng)基進(jìn)行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟：先用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的菌絲體接種到PDA平板培養(yǎng)基上，進(jìn)行菌株活化，在將活化的菌株接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，得樟芝菌菌絲體原基。采用本發(fā)明進(jìn)行牛樟菌培養(yǎng)，培養(yǎng)得到的樟菌菌絲體可產(chǎn)生種類最多的物質(zhì)，且產(chǎn)生的物質(zhì)明顯優(yōu)于黑暗條件下培養(yǎng)的菌絲體。
【專利說明】一種牛樟菌的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種牛樟菌的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 牛樟芝（Taiwanofungus camphorates)屬樟科樟屬植物，又名黑樟，牛樟燕或樟 芝，原產(chǎn)于我國(guó)臺(tái)灣。牛樟木樹干通直，樹體高聳，具有良好的觀賞價(jià)值，其具有特殊的香 味，也不易腐朽，且紋理交錯(cuò)、材質(zhì)細(xì)致，為高價(jià)值家具最佳素材。樟滎為一種木材腐朽真 菌，味道較苦，具有安神、行氣活血、消積解毒、消腫等功效，可謂一種上等的食或藥用類真 菌。臺(tái)灣研究人員進(jìn)行了多項(xiàng)樟芝毒理試驗(yàn)，結(jié)果顯示，LDS (下標(biāo)50)為2000mg/kg，顯示 為無毒性物質(zhì)，且原子光譜分析顯示，其中不含有汞、砷及鉻等重金屬。臺(tái)北榮民總醫(yī)院研 究顯示，樟芝菌粉無毒副作用，樟芝無致突變及致畸作用。目前由于牛樟天然林過度開發(fā)及 人為盜伐，使得牛樟芝僅分布在高海撥地區(qū)，且多為高齡老樹，結(jié)實(shí)量少，母樹甚為分散，給 授粉帶來較大困難，給種子的采集也帶來較大困難，而且因樹體高大不易攀爬，即使能采摘 種子，發(fā)芽或發(fā)芽率較低，導(dǎo)致牛樟芝資源嚴(yán)重短缺，價(jià)格昂貴，因此，極有必要進(jìn)行牛樟芝 的人工栽培。
[0003] 野生與人工培育的牛樟芝功效神奇，目前已實(shí)現(xiàn)牛樟芝人工培養(yǎng)規(guī)?；?。樟芝子 實(shí)體可加工成各種飲口，便利人們?nèi)粘ｏ嬘?，而其液體培養(yǎng)物只能加工成膠囊，而在無牛樟 樹條件下，不可能培養(yǎng)出樟芝子實(shí)體，而通過液體靜置培養(yǎng)術(shù)，可生長(zhǎng)出厚實(shí)的菌絲體原 基，而這種菌絲體原基在品質(zhì)及實(shí)用上均優(yōu)于液體發(fā)酵菌絲體。為此，本發(fā)明提供一種能獲 得樟芝菌絲體原基的培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種能獲得樟芝菌絲體原基的培養(yǎng)基及培 養(yǎng)方法。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 一種牛樟菌的培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分： 牛樟木萃取的營(yíng)養(yǎng)液 5%-10%， 碳源 10-30% 氮源 5-10% 葡萄糖 10-15% 酵母粉 2-5% 水 優(yōu)選的，所述的碳源選自玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或地瓜淀粉中的一種或多種。
[0006] 優(yōu)選的，所述的氮源為麩皮浸出液。
[0007] 優(yōu)選的，所述的培養(yǎng)基為在121°C、0. 10-0. 15Kpa下滅菌15-30min的培養(yǎng)基。 [0008] 優(yōu)選的，所述的水為二次蒸餾水。
[0009] 優(yōu)選的，所述的玉米淀粉：水的體積比為（3-4) : (5-7)。
[0010] 采用如上所述的培養(yǎng)基進(jìn)行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟： (1) 菌株活化：用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的菌絲體接種到PDA平板 培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得活化的樟菌菌株； (2) 取l-2cm2步驟（1)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，得 樟芝菌菌絲體原基。
[0011] 所述的樟芝菌株為本實(shí)驗(yàn)室分離自臺(tái)灣野生樟芝子實(shí)體。
[0012] 步驟（1)中所述的培養(yǎng)溫度為25-28°C，所述的培養(yǎng)時(shí)間為20-25d。
[0013] 步驟（2)中所述的培養(yǎng)溫度為26-30°C，培養(yǎng)時(shí)間為55-56d。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有益效果體現(xiàn)在以下幾點(diǎn)： 1. HPLC結(jié)果顯示，培養(yǎng)55d或以上，培養(yǎng)55天或以上菌絲體產(chǎn)生的物質(zhì)種類最多。在 菌絲體生長(zhǎng)初期，菌絲體只合成本身生長(zhǎng)所需要的初級(jí)代謝產(chǎn)物，在后期才合成具有生物 活性的次級(jí)代謝產(chǎn)物，但是在培養(yǎng)60天時(shí)，菌絲體的物質(zhì)種類少于培養(yǎng)55天的樟芝菌絲 體，說明在培養(yǎng)60天后，菌絲體的物質(zhì)可能被菌絲體利用。因此，本發(fā)明中將樟菌的培養(yǎng)時(shí) 間限定為55-56d， 2. 研究顯示，HPLC結(jié)果顯示，樟菌絲體在有光的條件下產(chǎn)生的物質(zhì)明顯優(yōu)于黑暗條件 下培養(yǎng)的菌絲體。因此，本發(fā)明對(duì)樟菌在光照下培養(yǎng)。
[0015] 3.牛樟菌可利用玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或地瓜淀粉作為碳源，不能利用大米粉作 為碳源，能利用麩皮作為氮源，不能利用豆餅粉作為氮源，本發(fā)明中將玉米淀粉、馬鈴薯淀 粉、地瓜粉及麩皮作為培養(yǎng)基中成分，以利于牛樟菌的生長(zhǎng)。

【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。
[0017] 實(shí)施例1 一種牛樟菌的培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分： 牛樟木萃取的營(yíng)養(yǎng)液 5%， 玉米淀粉 麩皮浸出液 5% 葡萄糖 10% 酵母粉 2% 二次蒸餾水 所述的培養(yǎng)基為在121°C、0. lOKpa下滅菌15min的培養(yǎng)基。
[0018] 所述的玉米淀粉：水的體積比為3 :5。
[0019] 采用如上所述的培養(yǎng)基進(jìn)行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟： (1) 菌株活化：用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的菌絲體接種到PDA平板 培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)時(shí)間為20d，得活化的樟菌菌株； (2) 取lcm2步驟（1)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，培養(yǎng) 溫度為26°C，培養(yǎng)時(shí)間為55d，得樟芝菌菌絲體原基。
[0020] 所述的樟芝菌株為本實(shí)驗(yàn)室分離自臺(tái)灣野生樟芝子實(shí)體。
[0021] 實(shí)施例2 一種牛樟菌的培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分： 牛樟木萃取的營(yíng)養(yǎng)液 1〇%， 馬鈴薯淀粉 30% 麩皮浸出液 10% 葡萄糖 15% 酵母粉 5% 二次蒸餾水 所述的培養(yǎng)基為在121°C、0. 15Kpa下滅菌30min的培養(yǎng)基。
[0022] 采用如上所述的培養(yǎng)基進(jìn)行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟： (1) 菌株活化：用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的菌絲體接種到PDA平板 培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為28°C，培養(yǎng)時(shí)間為25d，得活化的樟菌菌株； (2) 取2cm2步驟（1)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，培養(yǎng) 溫度為30°C，培養(yǎng)時(shí)間為56d，得樟芝菌菌絲體原基。
[0023] 所述的樟芝菌株為本實(shí)驗(yàn)室分離自臺(tái)灣野生樟芝子實(shí)體。
[0024] 實(shí)施例3 一種牛樟菌的培養(yǎng)基，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分： 牛樟木萃取的營(yíng)養(yǎng)液 8%， 地瓜淀粉 20% 麩皮浸出液 8% 葡萄糖 12% 酵母粉 3% 二次蒸餾水 所述的培養(yǎng)基為在121°C、0. 12Kpa下滅菌20min的培養(yǎng)基。
[0025] 采用如上所述的培養(yǎng)基進(jìn)行牛樟菌培養(yǎng)的方法，包括以下步驟： (1) 菌株活化：用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的菌絲體接種到PDA平板 培養(yǎng)基上，培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為26°C，培養(yǎng)時(shí)間為23d，得活化的樟菌菌株； (2) 取2cm2步驟（1)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，培養(yǎng) 溫度為28°C，培養(yǎng)時(shí)間為55d，得樟芝菌菌絲體原基。
[0026] 所述的樟芝菌株為本實(shí)驗(yàn)室分離自臺(tái)灣野生樟芝子實(shí)體。
[0027] 上述實(shí)施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，并不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限定，本領(lǐng)域 技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的揭示，不脫離本發(fā)明范疇所做出的改進(jìn)和修改都應(yīng)該在本發(fā)明的保 護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的培養(yǎng)基包含以下重量份的組分： 牛樟木萃取的營(yíng)養(yǎng)液 5%-10%， 碳源 10-30%， 氮源 5-10%， 匍萄糖 10-15%， 酵母粉 2-5%， 水 余量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的碳源選自玉米淀 粉、馬鈴薯淀粉或地瓜淀粉中的一種或多種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的氮源為麩皮浸出 液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的培養(yǎng)基為在 121°C、0. 10-0. 15Kpa 下滅菌 15-30min 的培養(yǎng)基。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的水為二次蒸餾水。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的玉米淀粉：水的體 積比為（3-4) : (5-7)。
7. 采用如權(quán)利要求1-6任一所述的培養(yǎng)基進(jìn)行牛樟菌培養(yǎng)的方法，其特征在于，包括 以下步驟： (1) 菌株活化：用接種針挑取少量在試管斜面培養(yǎng)基上保藏的菌絲體接種到PDA平板 培養(yǎng)基上，培養(yǎng)得活化的樟菌菌株； (2) 取l-2cm2步驟（1)中培養(yǎng)得到的活化樟菌菌落接種于培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)，得 樟芝菌菌絲體原基。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，所述的樟芝菌株為本實(shí) 驗(yàn)室分離自臺(tái)灣野生樟芝子實(shí)體。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，步驟（1)中所述的培養(yǎng)溫 度為25-28°C，所述的培養(yǎng)時(shí)間為20-25d。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牛樟菌的培養(yǎng)基，其特征在于，步驟（2)中所述的培養(yǎng) 溫度為26-30°C，培養(yǎng)時(shí)間為55-56d。
【文檔編號(hào)】C12N1/14GK104152359SQ201410405485
【公開日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月18日
【發(fā)明者】劉巴寧, 鄭安喬 申請(qǐng)人:中山安蕎生物科技有限公司