發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法，其步驟如下：1）將面包酵母斜面菌種接種到糖蜜液體培養(yǎng)基中，得種子液；2）將種子液接種到糖蜜培養(yǎng)基中，溫度28℃，間歇搖蕩培養(yǎng)；3）將步驟2）的種子液接入發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)4～6h，之后按工藝要求平均流加稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽，流加培養(yǎng)24～25h；4）將步驟3）的發(fā)酵醪液經(jīng)離心機(jī)加水離心洗滌，獲得固形物含量60%～70%的酵母抽提物生產(chǎn)乳膏，再將該乳膏加水稀釋至使用濃度10～20%的乳液即可。本發(fā)明采用甘蔗糖蜜為培養(yǎng)基碳源培養(yǎng)酵母抽提物乳液的生產(chǎn)方法，縮短了生產(chǎn)時間，提高了酵母抽提物乳液的生產(chǎn)水平，獲得酵母細(xì)胞乳液濃度為250～300g/L，蛋白質(zhì)含量高達(dá)55%。
【專利說明】發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于酵母抽提物及生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提 物乳液的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 酵母抽提物采用以蛋白質(zhì)含量豐富的食用酵母為原料，采用自溶、酶解、分離、濃 縮等現(xiàn)代生物高新技術(shù)，將酵母細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸等進(jìn)行降解后精制而成，是一種棕黃 色可溶性膏狀或淺黃色粉狀純天然制品。主要成分為多肽、氨基酸、呈味核苷酸、B族維生素 及微量元素，是非常適合微生物生長的天然營養(yǎng)源，由于酵母抽提物營養(yǎng)豐富、加工性能良 好，在一些食品加工中往往能起到有效增強(qiáng)產(chǎn)品鮮美味、醇厚感，同時緩和產(chǎn)品咸味、酸味， 掩蓋異味等作用，是一種優(yōu)良的天然調(diào)味料，在食品行業(yè)中具有廣泛的用途。
[0003]目前生產(chǎn)酵母抽提物的原料主要來自啤酒酵母和面包酵母，國外生產(chǎn)酵母抽提物 大多使用啤酒廢酵母，我國則主要以面包酵母生產(chǎn)酵母抽提物。以廢啤酒酵母生產(chǎn)的酵母 抽提物主要是廢酵母的再利用，價格低廉，但無法開發(fā)出高端的酵母抽提物產(chǎn)品，如高蛋 白、高核酸、高谷氨酸等。以糖蜜發(fā)酵的面包酵母生產(chǎn)的酵母抽提物質(zhì)量比較穩(wěn)定，蛋白質(zhì) 和核酸含量高，營養(yǎng)物質(zhì)的組成全面。一般高端的酵母抽提物產(chǎn)品采用專業(yè)的面包酵母來 生產(chǎn)，酵母抽提物正在向以面包酵母為主的原料轉(zhuǎn)變。
[0004] 最新數(shù)據(jù)表明，近年來，中國的酵母提取物年均需求增長率高于10%以上，而在美 國和歐洲市場的增長速度大約在5%。目前全球酵母提取物的年生產(chǎn)規(guī)模在20萬噸左右。
[0005] 我國生產(chǎn)酵母抽提物面臨原料不足，生產(chǎn)技術(shù)相對落后，生產(chǎn)成本普遍較高，產(chǎn)品 質(zhì)量檔次相對較低與歐美等發(fā)達(dá)國家差距很大。
[0006] 檢索到目前生產(chǎn)酵母抽提物的原料相關(guān)專利及文獻(xiàn)報道如下： 1、中國專利，一種高谷氨酸酵母抽提物及其制備方法申請?zhí)枺篊N200810189433.0公 開（公告）號：CN101756151A申請（專利權(quán)）人：安琪酵母股份有限公司摘要：本發(fā) 明提供了一種酵母抽提物及其制備方法，該方法包括以一種蛋白質(zhì)含量超過60%的酵母培 養(yǎng)物為原料在富含氮源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)制得酵母乳，然后將一定量的蛋白酶以及谷胺酰胺 轉(zhuǎn)氨酶加入到所述酵母乳中，從而經(jīng)過一系列工藝制得一種酵母抽提物。該酵母抽提物中 的谷氨酸含量大于10 %，根據(jù)本發(fā)明提供的制備方法，可以大規(guī)模地制得谷氨酸含量大于 10 %的酵母抽提物。
[0007] 2、中國專利，酵母抽提物的提取殘渣的利用方法申請?zhí)枺篊N201280006932. 6,公開 (公告）號：CN103338659A申請（專利權(quán)）人：興人生命科學(xué)株式會社摘要：獲得一種適 用于功能性食品或藥品等、品質(zhì)穩(wěn)定、除去了留醇配糖體等雜質(zhì)的葡萄糖神經(jīng)酰胺組合物。 作為其原料，使用有食用經(jīng)驗、安全且容易收購的原料，以低成本來生產(chǎn)葡萄糖神經(jīng)酰胺組 合物。將從圓酵母等提取酵母抽提物后的酵母殘渣作為原料，利用醇類等有機(jī)溶劑對其進(jìn) 行提取，從而得到含有葡萄糖神經(jīng)酰胺的組合物。
[0008] 3、中國專利，一種同時制備酵母抽提物和β-1,3-葡聚糖的方法，申請?zhí)枺?CN201010214448. 5公開（公告）號：CN101897431A申請（專利權(quán)）人：中國農(nóng)業(yè)大 學(xué)摘要：一種屬于酵母抽提物及β_1，3-葡聚糖的制備領(lǐng)域的同時制備酵母抽提物和 β -1，3-葡聚糖的方法。該方法包括啤酒廢酵母脫苦除雜，啤酒廢酵母的酶解與滅活，酵母 抽提物的分離與干燥，β_1，3-葡聚糖的酸堿處理、洗滌及干燥等步驟。該方法具有原料利 用率高、品質(zhì)好、成本低、易于產(chǎn)業(yè)化等特點，實現(xiàn)了啤酒廢酵母再利用，并同時生產(chǎn)出酵母 抽提物和β _1, 3-匍聚糖兩種廣品的目的。
[0009] 4、中國專利，由脫脂大豆柏制備非肉源的羊肉粉的方法申請?zhí)枺?CN200810140581. 3公開（公告）號：CN101322545A申請（專利權(quán)）人：河南京華食品科 技開發(fā)有限公司摘要：由脫脂大豆柏制備非肉源的羊肉粉的方法，有效解決非肉源羊肉粉 的生產(chǎn)，以滿足多方面需求問題，其實現(xiàn)的技術(shù)方案是，首先將脫脂大豆柏、酵母抽提物和 玉米淀粉非肉源純天然原料在雙螺桿擠壓膨化機(jī)內(nèi)進(jìn)行濃縮、降解、重排和熱分解反應(yīng)，獲 取微孔狀膨化固體，再將微孔狀膨化固體以浸淋方式配以其它的調(diào)味液、復(fù)合氨基酸成分， 用連續(xù)方式進(jìn)入帶式烘干機(jī)進(jìn)行烘干，然后制成非肉源肉香粉，再進(jìn)一步與其它組分，從而 可制成各種風(fēng)味的羊肉粉等調(diào)味料，本發(fā)明是肉源肉香粉的替代品，產(chǎn)能高、成本低、蛋白 含量高、香氣香味濃郁逼真，能形成從燉煮到燒烤寬闊和諧的肉類風(fēng)味，有良好的經(jīng)濟(jì)和社 會效益。
[0010] 5、中國專利，用啤酒廢酵母制備酵母多糖、海藻糖及酵母抽提物的方法，申請?zhí)枺?CN2〇〇910〇3682〇. 5,公開（公告）號：CN10148m9A，申請（專利權(quán)）人：華南理工大學(xué)； 廣州珠江啤酒股份有限公司摘要：一種利用啤酒廢酵母同時制備酵母多糖、海藻糖及酵母 抽提物的方法。該方法包括啤酒廢酵母脫苦去雜質(zhì)，啤酒廢酵母的自溶以及酶解與滅活，酵 母多糖的分離和干燥，海藻糖的膜分離、濃縮、結(jié)晶及干燥，酵母抽提物的濃縮及干燥等步 驟。該方法具有原料利用率高、品質(zhì)好、成本低、易于產(chǎn)業(yè)化的特點，實現(xiàn)了從同一種工業(yè)廢 棄物一啤酒廢酵母同時生產(chǎn)出酵母多糖、海藻糖和酵母抽提物三種產(chǎn)品，提高了工業(yè)廢 棄物的利用率，達(dá)到了廢棄物最大資源化的目的。
[0011] 6、中國專利，一種從啤酒廢酵母中提取多肽和氨基酸的方法申請?zhí)枺? CN201110426167. 0公開（公告）號：CN102550802A申請（專利權(quán)）人：成都宏安生物科 技有限公司摘要：一種從啤酒廢酵母中提取多肽和氨基酸的方法，啤酒廢酵母粉經(jīng)預(yù)處 理、高壓均質(zhì)處理、第一次抽提、酶解、第二次抽提、滅酶和壓濾分離后，噴霧干燥得到酵母 多肽和氨基酸粉。本發(fā)明以啤酒廠生產(chǎn)啤酒后的副產(chǎn)物--啤酒廢酵母為原料，提取酵母 多肽和氨基酸粉，可以減輕污染和實現(xiàn)資源的二次轉(zhuǎn)化，也可產(chǎn)生大的經(jīng)濟(jì)效益；本發(fā)明采 用的是先高壓均質(zhì)，再兩次抽提，中間輔之以復(fù)合蛋白酶酶解，可以增加酵母細(xì)胞壁的通透 性和提1?酵母細(xì)胞內(nèi)蛋白和氣基酸的溶出率，進(jìn)而提1?酵母抽提物的獲得率，增加酵母蛋 白的含量；本發(fā)明可以作為功能性飼料添加劑和食品添加劑。
[0012] 7、中文期刊，L-苯丙氨酸工程菌株高密度發(fā)酵的研究翁雪清，福建麥丹生物集團(tuán) 有限公司福州研究中心，發(fā)酵科技通訊2012,摘要：高密度發(fā)酵是現(xiàn)代發(fā)酵工程的一項 新技術(shù)，能顯著提高大腸桿菌工程菌體和基因工程產(chǎn)品的產(chǎn)量。對于重組大腸桿菌的發(fā)酵 來講，實現(xiàn)高密度發(fā)酵，可相應(yīng)地縮小生物反應(yīng)器的體積和降低生物量的分離費用，從而降 低生產(chǎn)成本，達(dá)到提高生產(chǎn)效率的目的。本文通過均勻優(yōu)化實驗設(shè)計對L-苯丙氨酸大腸桿 菌工程菌種子培養(yǎng)基的主要成分進(jìn)行了優(yōu)化研究,并通過30L全自動發(fā)酵罐來表征優(yōu)化， 結(jié)果顯示：硫酸銨3. Og/L，硫酸鎂7. Og/L，酵母抽提物13g/L具有較好的工程菌生長的同步 性，種子0D61(I在稀釋100倍后達(dá)到0. 190,為進(jìn)一步實現(xiàn)高密度發(fā)酵生產(chǎn)打下基礎(chǔ)。
[0013] 8、中文期刊，高濃度培養(yǎng)YE乳液的研究，鄧春明陳佳泉馬興周，廣西輕工業(yè) 2009,廣東丹寶利酵母有限公司，摘要：在酵母抽提物乳液的培養(yǎng)中，通過在甘蔗糖蜜 流加糖液中添加一定比例的果葡萄糖漿來降低發(fā)酵液的滲透壓，減輕高滲透壓對酵母細(xì)胞 生長的抑制作用，以達(dá)到高濃度培養(yǎng)酵母細(xì)胞的目的。通過正交試驗優(yōu)化發(fā)酵工藝條件，在 試驗中取得了酵母培養(yǎng)濃度高達(dá)320g/L的效果。
[0014] 由上述公開文獻(xiàn)所見，用于生產(chǎn)酵母抽提物的乳液多為啤酒廢酵母和少量面包酵 母。啤酒酵母乳液多具有苦味，生產(chǎn)酵母抽提物時難以完全去除。而高密度發(fā)酵生產(chǎn)面包 酵母用于生產(chǎn)酵母抽提物的報道不多。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0015] 本發(fā)明的目的是為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，提供一種利用面包酵母和以 糖廠糖蜜為培養(yǎng)基生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法。
[0016] 本發(fā)明所述的發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法，包括如下步驟： a).將面包酵母斜面菌種接種于100mL糖蜜液體種子培養(yǎng)基中，溫度28°C下，間歇搖 蕩培養(yǎng)24h或低轉(zhuǎn)速lOOrpm振蕩培養(yǎng)24h。
[0017] b).將步驟a)的種子液100mL按10%接種量接種至裝有糖蜜液體種子培養(yǎng)基的 3L三角瓶中，制備1000mL種子液。在溫度28°C下，間歇搖蕩培養(yǎng)24h或低轉(zhuǎn)速lOOrpm振 蕩培養(yǎng)24h。
[0018] c).將步驟b)的種子液按15%的接種量在火焰圈下無菌接種到裝有發(fā)酵培養(yǎng)基 的15L發(fā)酵罐中，使得初始培養(yǎng)液總體積約6200mL。調(diào)節(jié)溫度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0. 3vvm小量通風(fēng)培養(yǎng)4h?6h。之后開始按工藝要求流加補(bǔ)料稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽，流加培 養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度為28°C，pH3. 5?4. 5,通氣量1. 0?2. Ovvm下補(bǔ)料流加24h?25h。
[0019] d).將步驟c)獲得的發(fā)酵醪液經(jīng)離心機(jī)5000r/min，離心洗漆10min，加水離心洗 滌3?5次，獲得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鮮酵母乳膏，再將該鮮酵母乳膏用水 稀釋到10?15%的乳液即可。
[0020] 其中，步驟a)和步驟b)中的糖蜜液體種子培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜150mL/L，尿 素 2. 50g/L，磷酸一銨0· 60g/L，七水硫酸鎂0· 12g/L，七水硫酸鋅0· 05g/L，氯化鉀0· 10g/L， 氯化鈉 〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH到4. 2,121°C高溫滅菌20min。
[0021] 其中，步驟C)中的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一銨 9. 0g，七水硫酸鎂7. 5g，七水硫酸鋅1. 0g，氯化鉀5g，氯化鈉5g，微量元素母液10mL。121°C 高溫滅菌20min。
[0022] 其中，所述的稀釋糖蜜為原糖蜜用水稀釋至錘度45?50%°Bx，加熱煮沸l(wèi)min，冷 卻至50?80°C，用離心機(jī)4000r/min，離心分離10min，棄去沉淀物，即得稀釋糖蜜。
[0023] 所述的流加營養(yǎng)鹽為，尿素110g和磷酸一銨20g，兩種營養(yǎng)鹽一起配成500mL溶 液。121°C高溫滅菌20min。
[0024] 其中，所述的微量元素母液配方為：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ 0· 4 mg/L，泛酸4mg/ L，生物素0.1 mg/L，維生素& 0.4 g/L，維生素 C 4 mg/L。
[0025] 其中，步驟c)中所述的按工藝要求流加補(bǔ)料稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽：每罐流加稀釋糖 蜜約5. 0L，按流加發(fā)酵時間Oh?8h平均流加稀釋蜜總量的20%，8h?18h平均流加稀釋蜜 總量的56%，18h?24h平均流加稀釋蜜總量的24%。每罐補(bǔ)料需要營養(yǎng)鹽尿素110g和磷酸 一銨20g，兩種營養(yǎng)鹽一起配成500mL溶液，按流加發(fā)酵時間Oh?8h平均流加營養(yǎng)鹽總液 量的50%，8h?12h平均流加營養(yǎng)鹽總液量的50%。
[0026] 本發(fā)明生產(chǎn)的高密度酵母抽提物乳液，其蛋白質(zhì)含量高，能生產(chǎn)出高端的酵母抽 提物廣品，有效提商了生廣效益。
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)比較，本發(fā)明的突出的實質(zhì)性特點和顯著的進(jìn)步是： 1、本方面采用適宜的發(fā)酵方法，合理的培養(yǎng)基配方及發(fā)酵方式，獲得高含蛋白質(zhì)、高密 度的酵母抽提物專用生產(chǎn)乳液。
[0028] 2、原料來源豐富，可以選用面包酵母，也可以采用糖蜜酒精生產(chǎn)過程的酵母。
[0029] 3、反應(yīng)條件溫和， 4、得到的抽提物口感好，能提高酵母抽提物產(chǎn)品中的總氮含量和氨基態(tài)氮含量。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0030] 附圖1是本發(fā)明實施例的生產(chǎn)工藝的示意圖。
[0031] 圖中看到，本發(fā)明的發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法，其步驟如下：1)將面 包酵母斜面菌種接種到糖蜜液體培養(yǎng)基中，得種子液；2)將種子液接種到營養(yǎng)鹽和糖蜜培 養(yǎng)基中，溫度28°C，間歇搖蕩培養(yǎng)；3)將步驟2)的種子液接入15L氣升式發(fā)酵罐中，發(fā)酵培 養(yǎng)4?6h，之后按工藝要求平均流加稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽，流加培養(yǎng)24?25h ;4)將步驟3) 的發(fā)酵醪液經(jīng)離心機(jī)加水離心洗滌，獲得固形物含量60%?70%的酵母抽提物生產(chǎn)乳膏，再 將該乳膏加水稀釋至使用濃度10?20%的乳液即可。
[0032]

【具體實施方式】
[0033] 以下實施用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0034] 實例 1 發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法，由如下步驟組成： 步驟1 :將面包酵母斜面菌種接種于100mL糖蜜液體種子培養(yǎng)基中，溫度28°C下，間歇 搖蕩培養(yǎng)24h。
[0035] 步驟2 :將步驟1的種子液100mL按10%接種量接種至裝有糖蜜液體種子培養(yǎng)基 的3L三角瓶中，制備1000mL種子液。在溫度28°C下，間歇搖蕩培養(yǎng)24h。
[0036] 其中，步驟1和步驟2中的糖蜜液體種子培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜150mL/L，尿素 2. 50g/L，磷酸一銨0· 60g/L，七水硫酸鎂0· 12g/L，七水硫酸鋅0· 05g/L，氯化鉀0· 10g/L，氯 化鈉〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH到4. 2,121°C高溫滅菌20min。
[0037] 步驟3 :將步驟2的種子液按15%的接種量在火焰圈下無菌接種到裝有發(fā)酵培養(yǎng) 基的15L發(fā)酵罐中，使得初始培養(yǎng)液總體積約6200mL。調(diào)節(jié)溫度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0.3vvm小量通風(fēng)培養(yǎng)4h。之后開始流加補(bǔ)料稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽。流加培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度 為28°C，pH3. 5?4. 5,通氣量1. 0?2. Ovvm下補(bǔ)料流加24h。
[0038] 其中，15L發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一銨 9. 0g，七水硫酸鎂7. 5g，七水硫酸鋅1. 0g，氯化鉀5g，氯化鈉5g，微量元素母液10mL。121°C 高溫滅菌20min。
[0039] 微量元素母液配方：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ (X4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0· 1 mg/L，維生素 & 0.4 g/L，維生素 C 4 mg/L。
[0040] 發(fā)酵補(bǔ)料配方及流加工藝控制：每罐流加稀釋糖蜜約5. 0L，按流加發(fā)酵時間Oh? 8h平均流加稀釋蜜總量的20%，8h?18h平均流加稀釋蜜總量的56%，18h?24h平均流加 稀釋蜜總量的24%。每罐補(bǔ)料需要營養(yǎng)鹽尿素110g和磷酸一銨20g，兩種營養(yǎng)鹽一起配成 500mL溶液，按流加發(fā)酵時間Oh?8h平均流加營養(yǎng)鹽總液量的50%，8h?12h平均流加營 養(yǎng)鹽總液量的50%。其中，流加的稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽均應(yīng)121°C高溫滅菌20min。
[0041] 步驟4 :將發(fā)酵醪液經(jīng)離心機(jī)5000r/min，離心洗漆10min，加水離心洗漆3?5次， 獲得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鮮酵母乳膏，再將該乳膏用水稀釋到10?15%的 乳液。
[0042] 結(jié)果：發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，發(fā)酵醪液中的酵母細(xì)胞濃度達(dá)到278. 36g/L，且菌體大小均 勻，芽孢率1. 0%以下，菌體蛋白質(zhì)含量54. 8%。
[0043] 實例 2 發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法，由如下步驟組成： 步驟1 :將面包酵母斜面菌種接種于100mL糖蜜液體種子培養(yǎng)基中，溫度28°C下，間歇 搖蕩培養(yǎng)24h。
[0044] 步驟2 :將步驟1的種子液100mL按10%接種量接種至裝有糖蜜液體種子培養(yǎng)基 的3L三角瓶中，制備1000mL種子液。在溫度28°C下，間歇搖蕩培養(yǎng)24h。
[0045] 其中，步驟1和步驟2中的糖蜜液體種子培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜150mL/L，尿素 2. 50g/L，磷酸一銨0· 60g/L，七水硫酸鎂0· 12g/L，七水硫酸鋅0· 05g/L，氯化鉀0· 10g/L，氯 化鈉 〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH到4. 2,121°C高溫滅菌20min。
[0046] 步驟3 :將步驟2的種子液按15%的接種量在火焰圈下無菌接種到裝有發(fā)酵培養(yǎng) 基的15L發(fā)酵罐中，使得初始培養(yǎng)液總體積約6200mL。調(diào)節(jié)溫度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0. 3vvm小量通風(fēng)培養(yǎng)4h。之后開始流加補(bǔ)料稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽。流加培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度 為28°C，pH3. 5?4. 5,通氣量1. 0?2. Ovvm下補(bǔ)料流加24h。
[0047] 其中，15L發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一銨 9. 0g，七水硫酸鎂7. 5g，七水硫酸鋅1. 0g，氯化鉀5g，氯化鈉5g，微量元素母液10mL。121°C 高溫滅菌20min。
[0048] 微量兀素母液配方：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ 0· 4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0· 1 mg/L，維生素 & 0.4 g/L，維生素 C 4 mg/L。
[0049] 發(fā)酵補(bǔ)料配方及流加工藝控制：每罐流加稀釋糖蜜約5. 0L，按流加發(fā)酵時間Oh? 8h平均流加稀釋蜜總量的20%，8h?18h平均流加稀釋蜜總量的56%，18h?25h平均流加 稀釋蜜總量的24%。每罐補(bǔ)料需要營養(yǎng)鹽尿素110g和磷酸一銨20g，兩種營養(yǎng)鹽一起配成 500mL溶液，按流加發(fā)酵時間Oh?8h平均流加營養(yǎng)鹽總液量的50%，8h?12h平均流加營 養(yǎng)鹽總液量的50%。其中，流加的稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽均應(yīng)121 °C高溫滅菌20min。
[0050] 步驟4 :將發(fā)酵醪液經(jīng)離心機(jī)5000r/min，離心洗漆10min，加水離心洗漆3?5次， 獲得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鮮酵母乳膏，再將該乳膏用水稀釋到10?15%的 乳液。
[0051] 結(jié)果：發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，發(fā)酵醪液中的酵母細(xì)胞濃度達(dá)到285. 61g/L，且菌體大小均 勻，芽孢率1. 0%以下，菌體蛋白質(zhì)含量55. 0%。
[0052] 實例 3 發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法，由如下步驟組成： 步驟1 :將面包酵母斜面菌種接種于100mL糖蜜液體種子培養(yǎng)基中，溫度28°C下，間歇 搖蕩培養(yǎng)24h。
[0053] 步驟2 :將步驟1的種子液100mL按10%接種量接種至裝有糖蜜液體種子培養(yǎng)基 的3L三角瓶中，制備1000mL種子液。在溫度28°C下，間歇搖蕩培養(yǎng)24h。
[0054] 其中，步驟1和步驟2中的糖蜜液體種子培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜150mL/L，尿素 2. 50g/L，磷酸一銨0· 60g/L，七水硫酸鎂0· 12g/L，七水硫酸鋅0· 05g/L，氯化鉀0· 10g/L，氯 化鈉〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH到4. 2,121°C高溫滅菌20min。
[0055] 步驟3 :將步驟2的種子液按15%的接種量在火焰圈下無菌接種到裝有發(fā)酵培養(yǎng) 基的15L發(fā)酵罐中，使得初始培養(yǎng)液總體積約6200mL。調(diào)節(jié)溫度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0. 3vvm小量通風(fēng)培養(yǎng)6h。之后開始流加補(bǔ)料稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽。流加培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度 為28°C，pH3. 5?4. 5,通氣量1. 0?2. Ovvm下補(bǔ)料流加24h。
[0056] 其中，15L發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一銨 9. 0g，七水硫酸鎂7. 5g，七水硫酸鋅1. 0g，氯化鉀5g，氯化鈉5g，微量元素母液10mL。121°C 高溫滅菌20min。
[0057] 微量兀素母液配方：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ 0· 4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0· 1 mg/L，維生素 & 0.4 g/L，維生素 C 4 mg/L。
[0058] 發(fā)酵補(bǔ)料配方及流加工藝控制：每罐流加稀釋糖蜜約5. 0L，按流加發(fā)酵時間Oh? 8h平均流加稀釋蜜總量的20%，8h?18h平均流加稀釋蜜總量的56%，18h?24h平均流加 稀釋蜜總量的24%。每罐補(bǔ)料需要營養(yǎng)鹽尿素110g和磷酸一銨20g，兩種營養(yǎng)鹽一起配成 500mL溶液，按流加發(fā)酵時間Oh?8h平均流加營養(yǎng)鹽總液量的50%，8h?12h平均流加營 養(yǎng)鹽總液量的50%。其中，流加的稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽均應(yīng)121 °C高溫滅菌20min。
[0059] 步驟4 :將發(fā)酵醪液經(jīng)離心機(jī)5000r/min，離心洗漆10min，加水離心洗漆3?5次， 獲得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鮮酵母乳膏，再將該乳膏用水稀釋到10?15%的 乳液。
[0060] 結(jié)果：發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，發(fā)酵醪液中的酵母細(xì)胞濃度達(dá)到295. 54g/L，且菌體大小均 勻，芽孢率0. 06%，菌體蛋白質(zhì)含量55. 2%。
[0061] 實例 4 發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法，由如下步驟組成： 步驟1 :將面包酵母斜面菌種接種于100mL糖蜜液體種子培養(yǎng)基中，溫度28°C下，間歇 搖蕩培養(yǎng)24h。
[0062] 步驟2 :將步驟1的種子液100mL按10%接種量接種至裝有糖蜜液體種子培養(yǎng)基 的3L三角瓶中，制備1000mL種子液。在溫度28°C下，間歇搖蕩培養(yǎng)24h。
[0063] 其中，步驟1和步驟2中的糖蜜液體種子培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜150mL/L，尿素 2. 50g/L，磷酸一銨0· 60g/L，七水硫酸鎂0· 12g/L，七水硫酸鋅0· 05g/L，氯化鉀0· 10g/L，氯 化鈉 〇· l〇g/L，微量元素母液2mL。調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH到4. 2,121°C高溫滅菌20min。
[0064] 步驟3 :將步驟2的種子液按15%的接種量在火焰圈下無菌接種到裝有發(fā)酵培養(yǎng) 基的15L發(fā)酵罐中，使得初始培養(yǎng)液總體積約6200mL。調(diào)節(jié)溫度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1? 0. 3vvm小量通風(fēng)培養(yǎng)6h。之后開始流加補(bǔ)料稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽。流加培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度 為28°C，pH3. 5?4. 5,通氣量1. 0?2. Ovvm下補(bǔ)料流加24h。
[0065] 其中，15L發(fā)酵罐的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：稀釋糖蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一銨 9. 0g，七水硫酸鎂7. 5g，七水硫酸鋅1. 0g，氯化鉀5g，氯化鈉5g，微量元素母液10mL。121°C 高溫滅菌20min。
[0066] 微量兀素母液配方：MnCI2 · 2H20 4mg/L，ΚΙ 0· 4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0· 1 mg/L，維生素 & 0.4 g/L，維生素 C 4 mg/L。
[0067] 發(fā)酵補(bǔ)料配方及流加工藝控制：每罐流加稀釋糖蜜約5. 0L，按流加發(fā)酵時間Oh? 8h平均流加稀釋蜜總量的20%，8h?18h平均流加稀釋蜜總量的56%，18h?25h平均流加 稀釋蜜總量的24%。每罐補(bǔ)料需要營養(yǎng)鹽尿素110g和磷酸一銨20g，兩種營養(yǎng)鹽一起配成 500mL溶液，按流加發(fā)酵時間Oh?8h平均流加營養(yǎng)鹽總液量的50%，8h?12h平均流加營 養(yǎng)鹽總液量的50%。其中，流加的稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽均應(yīng)121 °C高溫滅菌20min。
[0068] 步驟4 :將發(fā)酵醪液經(jīng)離心機(jī)5000r/min，離心洗漆10min，加水離心洗漆3?5次， 獲得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鮮酵母乳膏，再將該乳膏用水稀釋到10?15%的 乳液。
[0069] 結(jié)果：發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束，發(fā)酵醪液中的酵母細(xì)胞濃度達(dá)到300. 08g/L，且菌體大小均 勻，芽孢率1. 1%，菌體蛋白質(zhì)含量55. 0%，做成調(diào)味品風(fēng)味好。
【權(quán)利要求】
1. 一種發(fā)酵生產(chǎn)高密度酵母抽提物乳液的方法，其特征在于，包括如下步驟： a) .將面包酵母斜面菌種接種于lOOmL糖蜜液體種子培養(yǎng)基中，溫度28°C下，間歇搖 蕩培養(yǎng)24h或低轉(zhuǎn)速lOOrpm振蕩培養(yǎng)24h ; b) .將步驟a)的種子液100mL按10%接種量接種至裝有糖蜜液體種子培養(yǎng)基的3L三 角瓶中，制備l〇〇〇mL種子液。
2. 在溫度28°C下，間歇搖蕩培養(yǎng)24h或低轉(zhuǎn)速lOOrpm振蕩培養(yǎng)24h ; c) .將步驟b)的種子液按15%的接種量在火焰圈下無菌接種到裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的15L 發(fā)酵罐中，使得初始培養(yǎng)液總體積約6200mL ;調(diào)節(jié)溫度28°C，pH3. 5?4. 5，0. 1?0. 3vvm 小量通風(fēng)培養(yǎng)4h?6h ;之后開始按工藝要求流加補(bǔ)料稀釋糖蜜和營養(yǎng)鹽，流加培養(yǎng)條件： 培養(yǎng)溫度為28°C，pH3. 5?4. 5,通氣量1. 0?2. Ovvm下補(bǔ)料流加24h?25h ; d) .將步驟c)獲得的發(fā)酵醪液經(jīng)離心機(jī)5000r/min，離心洗漆lOmin，加水離心洗漆 3?5次，獲得固形物含量60%?70%的酵母抽提物鮮酵母乳膏，再將該鮮酵母乳膏用水稀 釋到10?15%的乳液即可； 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a)和步驟b)中的糖蜜液體種子培養(yǎng)基 配方為：稀釋糖蜜150mL/L，尿素2. 50g/L，磷酸一銨0. 60g/L，七水硫酸鎂0. 12g/L，七水硫 酸鋅0. 05g/L，氯化鉀0. 10g/L，氯化鈉0. 10g/L，微量元素母液2mL，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH到4. 2， 121°C高溫滅菌20min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)中的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：稀釋糖 蜜200mL，尿素10. 0g，磷酸一銨9. 0g，七水硫酸鎂7. 5g，七水硫酸鋅1. 0g，氯化鉀5g，氯化 鈉5g，微量元素母液lOmL，121°C高溫滅菌20min。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1?3任一項所述的方法，其特征在于，所述的稀釋糖蜜為原糖蜜用水 稀釋至錘度45?50%°Bx，加熱煮沸l(wèi)min，冷卻至50?80°C，用離心機(jī)4000r/min，離心分 離10min，棄去沉淀物，即得稀釋糖蜜。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)中的流加營養(yǎng)鹽為，尿素110g和 磷酸一銨20g，兩種營養(yǎng)鹽一起配成500mL溶液，121°C高溫滅菌20min。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)中的流加稀釋糖蜜是經(jīng)121°C高 溫滅菌20min。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2?3任一項所述的方法，其特征在于，所述的微量元素母液配方為： MnCI2*2H20 4mg/L，KI 0.4 mg/L，泛酸 4mg/L，生物素 0.1 mg/L，維生素 & 0.4 g/L，維生 素 C 4 mg/L。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)中所述的按工藝要求流加補(bǔ)料稀 釋糖蜜和營養(yǎng)鹽：每罐流加稀釋糖蜜約5. 0L，按流加發(fā)酵時間Oh?8h平均流加稀釋蜜總 量的20%，8h?18h平均流加稀釋蜜總量的56%，18h?24h平均流加稀釋蜜總量的24% ;每 罐補(bǔ)料需要營養(yǎng)鹽尿素1 l〇g和磷酸一銨20g，兩種營養(yǎng)鹽一起配成500mL溶液，按流加發(fā)酵 時間Oh?8h平均流加營養(yǎng)鹽總液量的50%，8h?12h平均流加營養(yǎng)鹽總液量的50%。
【文檔編號】A23L1/221GK104195180SQ201410388212
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月8日
【發(fā)明者】廖福真, 汪子雄, 莫小駒, 陳書勤, 刁曉, 周茂浪 申請人:廣西湘桂酵母科技有限公司