一種甲醛脫氫酶基因CcFALDH及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物基因工程領(lǐng)域，特別是涉及一種吊蘭甲醛脫氫酶基因及植物表達(dá)載體在甲醛凈化植物培育方面的應(yīng)用。本發(fā)明通過對(duì)吊蘭FADLH基因的分離和功能鑒定，確定了CcFALDH基因在植物吸收代謝甲醛方面的應(yīng)用。本發(fā)明公開了甲醛脫氫酶基因核苷酸序列及編碼的蛋白質(zhì)氨基酸序列，CcFALDH基因全長1140bp，編碼379個(gè)氨基酸殘基的蛋白。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該基因能夠提高大巖桐吸收甲醛的速率。該基因?yàn)榛蚬こ谈牧加^賞植物的凈化室內(nèi)甲醛能力具有廣泛的應(yīng)用前景和極大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
【專利說明】-種甲醛脫氫酶基因 CcFALDH及應(yīng)用 【技術(shù)領(lǐng)域】
[〇〇〇1] 本發(fā)明屬于分子生物學(xué)、植物基因工程【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種在吊蘭中表達(dá)的， 能夠提高植物吸收甲醛能力的甲醛脫氫酶基因一CcFALDH基因、含有該基因的重組植物表 達(dá)載體、含有上述重組植物表達(dá)載體的轉(zhuǎn)基因植物轉(zhuǎn)化體以及CcFALDH基因在改良植物吸 收和凈化甲醛能力上的應(yīng)用。 【背景技術(shù)】
[0002] 甲醛是工業(yè)制造中必不可少的化學(xué)原材料。甲醛制品所排放出的甲醛氣體成為 常見的裝修型室內(nèi)空氣污染物，作為常見的室內(nèi)環(huán)境污染物，甲醛對(duì)人體的危害主要體現(xiàn) 在刺激毒性、神經(jīng)系統(tǒng)毒性、免疫和內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)以及遺傳毒性和致癌作用，其中 遺傳毒性和致癌作用是甲醛對(duì)人體健康最主要的危害之一。Holmstrom等研究表明，神經(jīng) 和呼吸系統(tǒng)癥狀是甲醛刺激毒性的主要表現(xiàn)，長期慢性吸入甲醛可導(dǎo)致慢性呼吸道等疾病 的增加。試驗(yàn)還表明甲醛能夠引起神經(jīng)系統(tǒng)的病變壞死，使組織內(nèi)DNA和RNA的合成量減 少。對(duì)成熟雄性小鼠采取腹腔注射甲醛以及氣態(tài)甲醛接觸，甲醛表現(xiàn)出對(duì)小鼠強(qiáng)烈的生殖 毒性。Taskinen等調(diào)查了 1049名從事木材加工的婦女，結(jié)果發(fā)現(xiàn)接觸甲醛者受孕時(shí)間明顯 推遲，并且接觸甲醛會(huì)增加自發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生率。
[0003] 在現(xiàn)代生活中甲醛制品被廣泛應(yīng)用于室內(nèi)裝修，居室內(nèi)的窗簾、地毯、紙制品、膠 合板、粘合劑、香煙等常見的物品向室內(nèi)環(huán)境中釋放了大量的甲醛污染。在諸多的室內(nèi)污染 物中，甲醛以其毒性大、來源廣、污染水平高、污染時(shí)間長等特點(diǎn)，己成為我國最重要的室內(nèi) 空氣污染物之一。目前通過物理、化學(xué)以及生物等技術(shù)凈化室內(nèi)空氣中甲醛的效果還不夠 理想。在生物體內(nèi)存在多種不同的應(yīng)對(duì)體內(nèi)環(huán)境與外界環(huán)境中甲醛的方式，甲醛可以被氧 化成為無毒的C02排入大氣；也可以在生物體內(nèi)通過各種酶促代謝反應(yīng)，被重新利用參與 生物的關(guān)鍵代謝循環(huán)，構(gòu)成生物體自身必須的含碳化合物。在Candida boidinii中，甲醒 直接與木酮糖-5-磷酸反應(yīng)，在磷酸二羥丙酮合成酶（DAS)催化下產(chǎn)生二羥基丙酮和甘油 醛-3-磷酸。在甲基營養(yǎng)細(xì)菌中存在核酮糖單磷酸途徑（RuMP)、絲氨酸途徑和核酮糖二磷 酸途徑（RuBP)等三種不同的甲醛同化途徑。在甲醛的代謝途徑中，甲醛的脫氫氧化解毒在 生物中是普遍存在的過程。在微生物，高等植物以及動(dòng)物中，甲醛可以與谷胱甘肽等受體結(jié) 合，通過酶促作用最終使甲醛分解成無毒的C0 2。依賴谷胱甘肽的甲醛脫氫酶（FALDH)、S-甲 酰谷胱甘肽水解酶（FGH)和依賴NAD+的甲酸脫氫酶（FDH)共同完成上述甲醛氧化途徑。這 個(gè)甲醛氧化途徑在完成甲醛解毒的同時(shí)還能夠通過生成NADH產(chǎn)生能量。
[0004] 居室內(nèi)擺放綠色植物不僅可以美化環(huán)境，還可以凈化空氣中的甲醛。吊蘭是目前 公認(rèn)的吸收甲醛能力較強(qiáng)的植物。Xu等采用動(dòng)態(tài)箱模擬法研究表明吊蘭盆栽體系對(duì)甲醛具 有長期的凈化作用，且凈化速率白天大于晚上，但是光照的變化對(duì)凈化速率無顯著影響。依 賴谷胱甘肽的甲醛脫氫酶在植物甲醛代謝中起著重要作用，雖然擬南芥，豌豆、玉米，水稻 以及綠蘿都有報(bào)道，但是吊蘭中甲醛脫氫酶基因及相關(guān)應(yīng)用至今尚未見報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種吊蘭甲醛脫氫酶基因。
[0006] 同時(shí)，本發(fā)明的目的還在于提供一種吊蘭甲醛脫氫酶基因在培育高效凈化甲醛植 物新品種方面的應(yīng)用。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明從吊蘭中克隆甲醛脫氫酶基因，其全長基因序列包括 1140個(gè)核苷酸，核苷酸序列的堿基組成為285 A 287 T 331 G 237 C，其序列如SEQ ID NO. 1所 示，其編碼的蛋白的氨基酸序列具有379個(gè)氨基酸殘基，其序列如SEQ ID NO. 2所示，估計(jì)分 子量為40. 6 kDa，理論等電點(diǎn)（PI)為6. 51。將吊蘭的甲醛脫氫酶蛋白質(zhì)序列用ClustalW2 分析其同源性，結(jié)果顯示CcFALDH基因和AtFALDH (擬南芥，NM_123761.3)相比，氨基酸同 源性為92%。所述基因序列是一種參與甲醛氧化代謝的甲醛脫氫酶基因。
[0008] 同時(shí)，本發(fā)明的技術(shù)方案還采用了一種吊蘭甲醛脫氫酶基因在培育高效凈化甲醛 植物新品種方面的應(yīng)用。
[0009] 所述的吊蘭甲醛脫氫酶CcFALDH基因連接到植物表達(dá)載體，獲得植物表達(dá)載體 PBI-35S-FALDH，所述載體含有CcFALDH基因及卡那霉素篩選標(biāo)記基因 NPTII和組成型啟動(dòng) 子35S，如圖1所示。所述表達(dá)載體導(dǎo)入農(nóng)桿菌菌株EHA105,獲得重組農(nóng)桿菌，最后通過農(nóng) 桿菌介導(dǎo)法導(dǎo)入大巖桐中，使CcFALDH基因穩(wěn)定遺傳，獲得相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因植物。在卡那霉素 篩選培養(yǎng)基上獲得抗性植株，通過基因組PCR擴(kuò)增檢測CcFALDH是否插入植物基因組，通過 Northern Blot檢測基因在轉(zhuǎn)基因植物中的表達(dá)水平（圖4)。通過Real-time PCR方法對(duì) CcFALDH在轉(zhuǎn)基因大巖桐中的表達(dá)量進(jìn)行了定量分析。結(jié)果顯示，所獲得的轉(zhuǎn)基因植株中 CcFALDH的表達(dá)量顯著提高（圖5)。對(duì)獲得的轉(zhuǎn)基因大巖桐進(jìn)行FALDH酶活性測定，結(jié)果表 明轉(zhuǎn)基因植物酶活性比野生型植物提高約6倍左右（圖6)。
[0010] 針對(duì)轉(zhuǎn)CcFALDH基因大巖桐甲醛吸收能力的檢測，所述馴化后的轉(zhuǎn)基因大巖桐植 株放入50cmX50cmX50cm的密封艙中通入甲醛處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因植物吸收氣體 甲醛的速度明顯優(yōu)于野生型。
[〇〇11] 本發(fā)明首次公開了吊蘭甲醛脫氫酶CcFALDH基因，并獲得了編碼該基因的蛋白氨 基酸序列，同時(shí)運(yùn)用分子生物學(xué)及基因工程技術(shù)證實(shí)了吊蘭甲醛脫氫酶CcFALDH基因參與 植物的甲醛代謝，含有甲醛脫氫酶基因的轉(zhuǎn)基因植物吸收甲醛的速率優(yōu)于野生型，F(xiàn)ALDH蛋 白在轉(zhuǎn)基因植物中的過量表達(dá)使其代謝氣體甲醛的能力大大提高。 【專利附圖】

【附圖說明】
[0012] 序列表SEQ ID NO. 1是本發(fā)明克隆的CcFALDH基因的核苷酸序列，序列長度為 1140bp。
[0013] 序列表SEQ ID NO. 2是CcFALDH基因編碼的氨基酸序列。序列長度為379個(gè)氨基 酸殘基。
[0014] 圖1是本發(fā)明CcFALDH基因克隆及表達(dá)載體構(gòu)建策略圖。
[0015] 圖2是本發(fā)明CcFALDH基因克隆及表達(dá)載體構(gòu)電泳圖。
[0016] a-b表示pBI121質(zhì)粒DNA進(jìn)行BamH I和Sac I雙酶切，回收大片段即pBI121載 體骨架；c-d表示將含有CcFALDH基因的克隆載體pMDCcFALDH質(zhì)粒進(jìn)行BamH I和Sac I雙 酶切，回收帶有粘性末端的CcFALDH目的片段；e-f表示陽性質(zhì)粒進(jìn)行BamH I和Sac I雙酶 切鑒定，獲得約1200bp的片段，證明CcFALDH基因插入到了質(zhì)粒載體pBI121中。
[0017] 圖3是本發(fā)明轉(zhuǎn)FALDH基因大巖桐抗性植株的PCR檢測結(jié)果。
[0018] 圖4是本發(fā)明FALDH在轉(zhuǎn)基因大巖桐中的Northern Blot檢測。
[0019] WT :野生大巖桐株系；TR :轉(zhuǎn)基因大巖桐株系。
[0020] 圖5是本發(fā)明FALDH在轉(zhuǎn)基因大巖桐中的實(shí)時(shí)熒光定量表達(dá)分析。
[0021] WT :野生大巖桐株系；TR :轉(zhuǎn)基因大巖桐株系。
[0022] 圖6是本發(fā)明FALDH在轉(zhuǎn)基因大巖桐中的酶活性測定分析。
[0023] WT :野生大巖桐株系；TR :轉(zhuǎn)基因大巖桐株系。
[0024] 圖7是本發(fā)明轉(zhuǎn)基因大巖桐在進(jìn)行氣體甲醛吸收效率檢測。
[0025] 圖8是本發(fā)明轉(zhuǎn)基因大巖桐中的甲醛吸收速率檢測。
[0026] WT :野生大巖桐株系；TR :轉(zhuǎn)基因大巖桐株系。 【具體實(shí)施方式】
[0027] 下述實(shí)施例中所使用的試驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0028] 下述實(shí)施例中所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0029] 實(shí)施例1、吊蘭甲醛脫氫酶基因的克隆 從NCBI數(shù)據(jù)庫中（（http://www. ncbi. nlm. nih. gov/)搜索高等植物的甲醒脫氫酶 序列并保存，用數(shù)據(jù)庫中已知的擬南芥，豌豆、玉米，水稻以及綠蘿（NM_123761.3、Y11029、 AK099733. UAB618795)甲醛脫氫酶序列進(jìn)行比對(duì)。根據(jù)氨基酸保守序列設(shè)計(jì)簡并引物，為 了便于重組植物表達(dá)載體構(gòu)建，在上、下游引物的5'端分別引入BamH I和Sac I限制性酶 切位點(diǎn)，引物序列如下： FALDH-F ： CGGAATTCATGGCKACHSAGGSHCAGG FALDH-R ： CGAGCTCTYASAYYTGCRTVKCMAG RNA的提?。豪肦NAprep pure Plant Kit試劑盒（TianGen)提取經(jīng)5mM甲醒處理1小 時(shí)的吊蘭（Chlorophytum comosum)葉片RNA，應(yīng)用Revertra Ace隨機(jī)引物（Toyobo)反轉(zhuǎn)錄 為 cDNA。
[0030] 以合成的吊蘭cDNA為模板進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增CcFALDH全長序列。
[0031] RT-PCR反應(yīng)：用TaKaRa Ex Taq DNA聚合酶進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)，反應(yīng)程序：94°C預(yù)變 性 4min ;94°C變性 15sec ;56°C退火 30sec ;68°C延伸 60sec ;30 個(gè)循環(huán)；72°C延伸 10min。 PCR反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液進(jìn)行2%瓊脂糖凝膠電泳檢測反應(yīng)產(chǎn)物，得到約1200bp的片段，采 用 Takara 公司的 MiniBEST Agarose Gel DNA Extract Kit 回收目的片段。
[0032] 將回收的PCR產(chǎn)物片段連接到克隆載體pMD ? 18_T(Takara)中的EcoRV位點(diǎn)。重 組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌T0P10中，然后對(duì)插入的核苷酸序列進(jìn)行測序。
[0033] 連接反應(yīng)體系：在10 μ 1反應(yīng)體系中，Solution I 5 μ 1，PCR回收產(chǎn)物4 μ 1， pMD?18-Tl μ?。混勻后16°C反應(yīng)16h。重組載體的轉(zhuǎn)化：參考《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》 最終鑒定得到CcFALDH基因0RF的全長序列。CcFALDH基因 cDNA全長為1140bp，其編 碼的蛋白的氨基酸序列具有379個(gè)氨基酸殘基，蛋白分子量為40. 6 kDa，理論等電點(diǎn)（PI) 為6. 51。將其氨基酸序列在GeneBank中檢索，結(jié)果顯示CcFALDH基因和AtFALDH基因(擬 南芥，NM_123761. 3)相比，氨基酸同源性為92%。
[0034] 實(shí)施例2、植物表達(dá)載體pBI-35S-FALDH的構(gòu)建 在基因克隆時(shí)分別在引物上引入限制性酶切位點(diǎn)BamH I和Sac I。將含有CcFALDH基 因的克隆載體pMDCcFALDH質(zhì)粒進(jìn)行BamH I和Sac I雙酶切。酶切體系參考Takara公司限 制性內(nèi)切酶雙酶切反應(yīng)說明書，37°C反應(yīng)12小時(shí)?；厥諑в姓承阅┒说腃cFALDH目的片段。
[0035] 將雙元植物表達(dá)載體pBI121質(zhì)粒DNA進(jìn)行BamH I和Sac I雙酶切，37°C反應(yīng)12 小時(shí)，回收大片段即PBI121載體骨架。
[0036] 將目的片段與母載體連接。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化T0P10感受態(tài)細(xì)胞。挑取單菌落進(jìn)行PCR 鑒定。取菌落PCR陽性的菌落提取質(zhì)粒，進(jìn)行BamH I和Sac I雙酶切鑒定，獲得約1200bp 的片段，證明CcFALDH基因插入到了質(zhì)粒載體pBI121中。
[0037] 實(shí)施例3、CcFALDH基因轉(zhuǎn)化植物及轉(zhuǎn)基因植物的檢測 將構(gòu)建成功的植物表達(dá)載體PBI-35S-FALDH，用電擊法導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105中，進(jìn)行 菌落PCR鑒定，結(jié)果獲得大約1200bp的產(chǎn)物。提取PCR陽性菌落質(zhì)粒，進(jìn)行酶切，獲得約 1200bp的片段，證明轉(zhuǎn)化載體已經(jīng)轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌中（圖2-f)。
[0038] 將經(jīng)過菌落PCR鑒定的農(nóng)桿菌單菌落分別接種于含有100 μ g/ml KM的5ml YEB 液體培養(yǎng)基中，于28°C，200 rpm振蕩培養(yǎng)過夜，次日，將其轉(zhuǎn)入50ml YEB液體培養(yǎng)基中，于 28°C，200 rpm振蕩培養(yǎng)至0D60,值在0. 4-0. 6時(shí)，收集菌體，用MS液體培養(yǎng)基懸浮，待用。
[0039] 將上述得到的重組過表達(dá)載體PBI-35S-FALDH經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)入大巖 桐中，具體操作步驟：在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將加入1〇〇 μ M AS重懸后的農(nóng)桿菌菌液倒入無菌培 養(yǎng)皿中，將預(yù)培養(yǎng)48h的大巖桐外植體置于菌液中浸泡6 min中，期間不斷震蕩。取出外植 體置于無菌濾紙上吸去附著菌液，接種于誘導(dǎo)不定芽的培養(yǎng)基MS1，在25±2°C條件下暗培 養(yǎng)48 h。然后接種到MS2培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選培養(yǎng)，每20天更換一次誘導(dǎo)培養(yǎng)基。經(jīng)過侵染 的葉片長出不定芽時(shí)，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基MS3中。使用培養(yǎng)基如下： MSI ： MS + 1. 0 mg/L 6-BA+O. 2mg/L NAA MS2 ： MS + 1. 0 mg/L 6-BA + 0. 2 mg/L NAA + 25 mg/L KM + 500 mg/L Cef MS3 ： MS + 0. 5 mg/L NAA + 25 mg/L KM + 500 mg/L Cef 根系發(fā)育好后，移入盛有無菌土的花盆中，溫室常規(guī)管理。
[0040] 為了確認(rèn)產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因植株確實(shí)含有CcFALDH基因，用PCR方法對(duì)篩選的轉(zhuǎn)基因 植株進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定。
[0041] 首先采用CTAB法提取植物基因組：稱取植物葉片100 mg左右置于1. 5 ml離心 管中，加入液氮用特制研棒研磨至粉末狀；加入700 μ 1預(yù)熱的2XCTAB緩沖液（100 mM Tris-Hcl pH 8. 0,20 mM EDTA pH 8. 0,1. 4M Nacl，2% CTAB)，65°C水浴加熱 45 分鐘后取出冷 卻；離心取上清加入等體積的酚和氯仿，顛倒混勻，4?離心10 min (12000 rpm)后轉(zhuǎn)移上清 至1. 5 ml離心管中；再次加入等體積的氯仿-異戊醇混合液（24 :1)顛倒混勻，4°C離心10 min (12000 rpm)后轉(zhuǎn)移上清至新的L 5 ml離心管中，加入1/10體積3 M pH 5. 2醋酸鈉和 等體積異丙醇，混勻后至于-2(TC冰箱中20 min ;4-C離心10 min (12000 rpm)后棄上清，力口 入70%乙醇500μ 1，4°C離心lOmin (12000rpm)后，干燥，用純水溶解。
[0042] 以植物基因組DNA為模板，用CcFALDH基因上下游特異引物作PCR檢測，成功轉(zhuǎn)入 CcFALDH基因的植株均能擴(kuò)增出1200bp的條帶，經(jīng)PCR確認(rèn)的轉(zhuǎn)基因植株用于分子印跡分 析。分子印跡分析參考《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》。
[0043] 為了考察目的基因在轉(zhuǎn)基因株系中的轉(zhuǎn)錄情況，從轉(zhuǎn)基因植物中提取總RNA，反轉(zhuǎn) 錄成cDNA后用于RT-PCR分析，檢測FALDH基因在轉(zhuǎn)基因植物中的轉(zhuǎn)錄水平。采用TianGen 公司試劑盒提取RNA。用DEPC處理水溶解RNA，所獲得的RNA樣品使用ReverTra Ace - α -進(jìn) 行cDNA的合成。以野生型大巖桐為對(duì)照進(jìn)行熒光定量qRT-PCR檢測。qRT-PCR體系：熒光 定量 qRT-PCR 利用 7300 Biosystem，根據(jù) SYBR Premix Ex Taq (TaKaRa)說明書進(jìn)行操作。 反應(yīng)體系：總體積2〇μ1包括SYBR Premix ExTaq II 1〇μ1 ;反轉(zhuǎn)錄cDNA 2μ1 ;1〇μΜ的引物各 0· 8μ1 ;水 6· Ομ? ;R0X Reference Dye (50χ) 0· 4μ1。利用 2- ΛΛ CT 方法計(jì)算表達(dá)量。結(jié) 果證明轉(zhuǎn)基因植株均有目的基因的轉(zhuǎn)錄物，而野生型植株則沒有。結(jié)果如圖5所示，篩選出 CcFALDH表達(dá)量較高的陽性植株3個(gè)株系分別是TR1，TR5, TR6。
[0044] 實(shí)施例4、轉(zhuǎn)基因大巖桐進(jìn)甲醛脫氫酶活性測定 從大巖桐葉片中提取可溶性總蛋白，取〇. 5g大巖桐葉片，加2ml蛋白提取液（100mM Tris-HCl (pH7. 5);10% (V/V)甘油；10mM巰基乙醇；ImMPMSF)。在研缽中研磨，轉(zhuǎn)移至EP 管中，13000rpm，4°C，離心25min，將上清移至新的EP管中，用Bradford方法測定上清液中 的植物可溶性蛋白質(zhì)濃度。
[0045] FALDH酶活性在30°C條件下，通過檢測NADH的產(chǎn)生量確定，每個(gè)酶活力單位對(duì)應(yīng) 每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ M NADH (Kato N. Methods in enzymology. 1990)。反應(yīng)體系為：Sodium phosphate buffer (ρΗ7· 5) 0· 1 M ;NAD+ 60mM ;谷胱甘肽 120mM ;甲醛 60 mM ;酶粗提液。結(jié) 果如圖6所示，轉(zhuǎn)FALDH大巖桐植株酶活性比野生型植株提高約六倍。
[0046] 實(shí)施例5、轉(zhuǎn)基因植物吸收甲醛的能力 實(shí)驗(yàn)裝置如圖7所示。在光照培養(yǎng)室內(nèi)放置50cmX50cmX50cm的密封艙，將馴化后的 轉(zhuǎn)基因大巖桐植株置于密封艙中，在密封艙內(nèi)通入5mM甲醛，利用甲醛分析儀（JSA9-CH20 型甲醛分析儀）測定密封艙內(nèi)甲醛含量變化。結(jié)果顯示在白天轉(zhuǎn)基因大巖桐吸收甲醛速率 比野生植株高3倍，夜間轉(zhuǎn)基因大巖桐吸收甲醛的速率比野生型高約5倍。
【權(quán)利要求】
1. 一種甲醛脫氫酶基因，其特征在于所述的基因核苷酸序列如SEQ ID No :1所示，其序列長度為1140bp，核苷酸序列的堿基組成為85 A 287 T 331 G 237 C。
2. -種由權(quán)利要求1所述的基因所編碼的蛋白，其特征在于所述蛋白質(zhì)的氨 基酸序列如SEQ ID No :2所示，序列長度為379個(gè)氨基酸殘基。
3. -種含有權(quán)利要求1所述的的重組植物表達(dá)載體，其特征在于所述的重組 植物表達(dá)載體為pBI-35S-/^ZM，所述載體含有卡那霉素篩選標(biāo)記基因和組成型啟 動(dòng)子35S。
4. 一種改良觀賞植物甲醛吸收能力的方法，是構(gòu)建含有權(quán)利要求3所述基因的植物表 達(dá)載體，再將構(gòu)建的植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化目的觀賞植物。
5. 權(quán)利要求1所述的基因在改良觀賞植物吸收甲醛能力中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N9/02GK104109679SQ201410224571
【公開日】2014年10月22日 申請(qǐng)日期:2014年5月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月27日
【發(fā)明者】郭長虹, 宋麗莉, 尹琳微 申請(qǐng)人:哈爾濱師范大學(xué)