一種具有耐草甘膦功能的細(xì)菌及其應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明發(fā)現(xiàn)沙漠紅細(xì)菌Rhodobacter?shamoensis?W402具有耐草甘膦功能，可作為脅迫環(huán)境修復(fù)的功能菌株，并可構(gòu)建轉(zhuǎn)基因生物，培育抗逆境生物。
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種具有耐草甘膦功能的細(xì)菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本 發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種具有耐草甘膦功能的沙漠紅細(xì)菌。本發(fā)明還涉及該菌作為草甘膦污染環(huán)境修復(fù)的功能菌株方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]草甘膦是全世界使用量最大的除草劑品種之一，但它作為一種非選擇性除草劑，對(duì)農(nóng)作物同樣有滅生性作用，這大大限制了草甘膦在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用范圍。雖然目前國(guó)際國(guó)內(nèi)對(duì)耐草甘膦菌株的開(kāi)發(fā)和研究較多，大多集中在假單胞菌屬。Rhodobacter屬耐草甘膦微生物卻鮮有報(bào)道。
[0003]因此，篩選新的具有優(yōu)良草甘膦耐受性的菌株對(duì)于草甘膦土壤環(huán)境的修復(fù)及克隆新的抗草甘膦基因意義重大，可為轉(zhuǎn)基因抗草甘膦作物的培育提供新的資源。同時(shí)，通過(guò)對(duì)其抗草甘膦機(jī)理的研究，進(jìn)一步加深人們對(duì)于草甘膦耐受性產(chǎn)生機(jī)理的認(rèn)識(shí)，構(gòu)建新的轉(zhuǎn)基因生物，使其獲得其它優(yōu)良性狀。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是分離出具有耐草甘膦功能的新種微生物。
[0005]本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)并分離培養(yǎng)出一種新的菌種，經(jīng)鑒定確認(rèn)該菌種屬于紅細(xì)菌，被命名為沙漠紅細(xì)菌，Rhodobacter shamoensis【sha.m0.en’ sis.N.L.masc.adj.】。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)該菌具有耐草甘膦功能。
[0006]該菌種已在國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局指定的保藏單位中國(guó)普通微生物菌種保藏中心保藏。
[0007]本發(fā)明的耐草甘膦沙漠紅細(xì)菌具有下述特征:
[0008]1.形態(tài)特征
[0009]在電子顯微鏡下可見(jiàn)，為桿狀細(xì)菌(圖3)。
[0010]2.在各種培養(yǎng)基上的特征:
[0011]在LB瓊脂培養(yǎng)基上，菌落呈現(xiàn)檸檬黃色、凸起狀，表面濕潤(rùn)，邊緣整齊，無(wú)胞外分泌物(圖2)。
[0012]在TGY培養(yǎng)基上長(zhǎng)勢(shì)緩慢。
[0013]3.生理生化特征
[0014]該菌株為嚴(yán)格好氧生長(zhǎng)，革蘭氏陰性，無(wú)運(yùn)動(dòng)性，非自養(yǎng)菌株。白氨酸芳胺酶陽(yáng)性，酸性磷酸酶陽(yáng)性，萘酚-AS-B1-磷酸水解酶陽(yáng)性，α -葡萄糖甙酶陽(yáng)性。
[0015]4.碳源利用
[0016]能以葡萄糖、乳糖、半乳糖、果糖、L-鼠李糖、L-丙氨酸、D-甘露糖為碳源,但不能以L-海藻糖、蔗糖、D-纖維二糖、D-蜜二糖和α -環(huán)糊精等為碳源。
[0017]5.其它性質(zhì)
[0018]最適生長(zhǎng)溫度30 °C。細(xì)胞壁脂肪酸含有Summed Feature8 (C18:1 ω 7c and/or C18:1 ω 6c)，C18:0, ll_MethylC18:1 ω 7c, C17:0, C10:03_OH，C16:0 和 C12:03_OH，其中以 SummedFeature8 (C18:1 ω 7c and/or Cl8llCoGchCl81c^PIll-Methyl C18:1co7c 為主。
[0019]所述的耐草甘膦沙漠紅細(xì)菌的培養(yǎng)條件為:
[0020](1)培養(yǎng)基:采用LB瓊脂培養(yǎng)基。具體配方為:胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化鈉10g/L
[0021](2)pH7.0 ；
[0022](3)培養(yǎng)溫度:30°C。
[0023]本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的耐草甘膦沙漠紅細(xì)菌的16SrDNA與同屬的其它種的差異顯著(相似度〈96%):
[0024]與Rhodobacter capsulatus ATCCl 1166 的相似度為 ％.833% ；
[0025]與Rhodobacter sphaeroides2.4.1 的相似度為 95.681% ；
[0026]與Haematobacter missouriensis H1892 的相似度為 95.529% ；
[0027]與Rhodobacter megalophilus JA194 的相似度為 95.309% ；
[0028]與Rhodobacter veldkampii ATCC35703 的相似度為 95.202% ；
[0029]與Rhodobacter azotoformans KA25 的相似度為 94.337% ；
[0030]與Rhodobacter aestuarii JA296 的相似度為 93.486% 等等。
[0031]此外，與紅細(xì)菌屬標(biāo)準(zhǔn)菌株-Rhodobacter capsulatus ATCC11166的對(duì)比實(shí)驗(yàn)
顯示，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)的耐草甘膦沙漠紅細(xì)菌與標(biāo)準(zhǔn)菌株的微生物學(xué)特性有顯著差異(表1)。
[0032]表1耐草甘膦沙漠紅細(xì)菌與R.capsulatusATCC11166的微生物學(xué)特性比較
[0033]
【權(quán)利要求】
1.沙漠紅細(xì)菌(Rhodobactershamoensis),其保藏編號(hào)為:CGMCC8817。
2.權(quán)利要求1所述的沙漠紅細(xì)菌作為草甘膦污染環(huán)境修復(fù)的功能菌株的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1所述的沙漠紅細(xì)菌在構(gòu)建具有抗草甘膦功能的轉(zhuǎn)基因生物方面的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述的沙漠紅細(xì)菌在誘變育種和改良植物的抗草甘膦功能性狀方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK103911317SQ201410083783
【公開(kāi)日】2014年7月9日 申請(qǐng)日期:2014年3月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月7日
【發(fā)明者】張維, 吳港, 王琳, 林敏 , 陳明 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所