一種脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白及其單克隆抗體的制備和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明涉及一種重組人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白及其單克隆抗體的制備與應(yīng)用，以及分泌該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株2E4，于2013年10月28日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號為CGMCC?NO：8412。雜交瘤細(xì)胞株分泌的單克隆抗體具有能夠與重組人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白特異性結(jié)合的特點(diǎn)。所述的單克隆抗體可在純化或檢測人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白中應(yīng)用，可用于動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病等代謝類疾病的早期檢測，具有重大應(yīng)用前景。
【專利說明】一種脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白及其單克隆抗體的制備和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。具體的說，本發(fā)明涉及一種重組蛋白、編碼該重組蛋白的核苷酸序列、含有上述核苷酸序列的質(zhì)粒載體，以及轉(zhuǎn)化有上述質(zhì)粒載體的菌株，還涉及使用上述重組蛋白制備脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白制備雜交瘤細(xì)胞株，及其生產(chǎn)的單克隆抗體和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]脂肪酸結(jié)合蛋白(fatty acid binding protein,FABP)是一類同源低分子質(zhì)量的胞漿蛋白，自1972年脂肪酸結(jié)合蛋白被發(fā)現(xiàn)以來，發(fā)現(xiàn)至少存在9種不同類型的FABPs。不同的FABPs具有一定的組織表達(dá)特異性，根據(jù)其來源的不同可分為:肝型(live，L-)，腸型(intestinal, 1_),心臟型(heart, H-),脂肪細(xì)胞型(adipocyte, A-),表皮型(epidermal,E-),回腸型(ileum, IL-),腦型(brain, B-),髓磷脂型(myelin, M-),睪丸型(testis, T-)FABP。不同類型的FABP分子量大約在14_15kDa之間，含有126-137個(gè)氨基酸，不同類型的FABP的氨基酸序列15% -70%的同源序列。FABP作為一種脂質(zhì)伴侶，其最基本的功能是與脂肪酸特異性結(jié)合，并將脂肪酸從細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)到脂肪酸在細(xì)胞內(nèi)被利用的位置，參與脂肪酸的攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)、酯化和β_氧化等一系列過程，調(diào)節(jié)脂肪酸的氧化以及磷脂、甘油三酯的代謝。此外，F(xiàn)ABP家族成員還與細(xì)胞生長和增殖的調(diào)節(jié)有關(guān)。脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白是細(xì)胞內(nèi)脂肪酸結(jié)合蛋白超家族成員之一，編碼132個(gè)氨基酸，相對分子質(zhì)量為14588Da。其最早是在脂肪組織中被發(fā)現(xiàn)，廣泛存在于體內(nèi)多種組織和細(xì)胞內(nèi)，但主要表達(dá)于脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中，參與脂肪酸的攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)、酯化和β_氧化等過程，調(diào)節(jié)脂肪酸的氧化以及磷脂、甘油三酯的代謝。研究表明其與代謝綜合征及動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生密切相關(guān)，因此，特異性檢測識別人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白顯得尤為重要。目前，以免疫學(xué)為基礎(chǔ)的血清學(xué)檢測，由于其操作簡便，結(jié)果易于判定，已成為主流方向，該方法主要是通過制備得到的人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體實(shí)現(xiàn)對人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的特異性檢測。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]設(shè)計(jì)目的:通過設(shè)計(jì)一種重組蛋白并制備其單克隆抗體，從而實(shí)現(xiàn)人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的特異性檢測識別。
[0004]設(shè)計(jì)方案:為了實(shí)現(xiàn)上述設(shè)計(jì)目的。本申請:(1)以人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白為靶抗原，采用大腸桿菌偏愛密碼子，將其氨基酸序列轉(zhuǎn)換為對應(yīng)的核苷酸序列，以利于重組蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)。(2)化學(xué)合成上一步驟得到的核苷酸序列，并通過酶切連接，將合成得到的核苷酸片段插入表達(dá)載體pET-28a(+)中，構(gòu)建重組蛋白表達(dá)載體。(3)將重組蛋白表達(dá)載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5ci感受態(tài)細(xì)胞，篩選得到重組蛋白表達(dá)菌株。(4)重組蛋白表達(dá)菌株大規(guī)模培養(yǎng)后，收集菌體，超聲破菌并低溫離心后，取溶液上清通過鎳瓊脂糖親和層析柱進(jìn)行親和層析，洗脫得到純化的重組蛋白。(5)用純化后的重組蛋白多次免疫Balb/c小鼠后,取其脾細(xì)胞與sp2/0骨髓瘤細(xì)胞融合,經(jīng)過多輪篩選得到雜交瘤細(xì)胞株。(6)將雜交瘤細(xì)胞株制備小鼠腹水，使用辛酸-硫酸銨法純化單克隆抗體。(7)純化得到的單克隆抗體在檢測或純化人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白中的應(yīng)用。(8)純化得到的單克隆抗體在制備人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白檢測試劑中的應(yīng)用。(9)所述的人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白檢測試劑優(yōu)選檢測人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的Western Blot試劑、ELISA檢測試劑。
[0005]本發(fā)明的有益效果:
[0006]本發(fā)明構(gòu)建了人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白表達(dá)載體，將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，制備人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白表達(dá)菌株，并發(fā)酵表達(dá)、純化得到人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白。以其作為免疫原，經(jīng)過皮下免疫、常規(guī)細(xì)胞融合、篩選及亞克隆，獲得了能夠穩(wěn)定分泌抗人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。經(jīng)ELISA、WesternBlot等方法鑒定，該雜交瘤細(xì)胞所分泌的單克隆抗體能夠特異性識別人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白，效價(jià)高、特異性強(qiáng)。
[0007]本發(fā)明人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體的應(yīng)用如下:
[0008](I)應(yīng)用該抗體可通過Western Blot檢測脂肪組織中的人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白表達(dá)。
[0009](2)應(yīng)用該抗體可建立ELISA檢測試劑盒定量檢測各種體液如血液、血清、尿的人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白水平。
[0010](3)應(yīng)用該抗體制備免疫親和層析柱，來分離純化人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白。
[0011](4)應(yīng)用該抗體進(jìn)行免疫組化檢測脂肪組織中人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白表達(dá)量。
[0012]綜上所述，本發(fā)明成功構(gòu)建了人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白表達(dá)載體，并純化得到了人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合重組蛋白。此外，成功制備了抗人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體，該抗體具有效價(jià)高、特異性強(qiáng)的特性，為快速檢測人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白提供了關(guān)鍵技術(shù)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0013]圖1是不同濃度咪唑從鎳瓊脂糖親和層析柱洗脫目的蛋白的SDS-PAGE電泳圖。
[0014]圖2是雜交瘤細(xì)胞染色體圖。
[0015]圖3是純化后的單克隆抗體電泳圖。
[0016]圖4是Western Blot檢測單克隆抗體與重組脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的特異性反應(yīng)圖。
[0017]生物材料保藏信息
[0018]雜交瘤細(xì)胞株2E4，于2013年10月28日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，簡稱=CGMCC ;保藏地址為中國科學(xué)院北京微生物研究所；保藏號為CGMCC NO:8412。
【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1:優(yōu)化編碼重組蛋白的核苷酸序列[0020]為了提高重組蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)量，在重組蛋白氨基酸序列不變的前提下，根據(jù)大腸桿菌偏愛密碼子將編碼重組蛋白的氨基酸序列轉(zhuǎn)化為對應(yīng)的核苷酸序列，具體序列如序列表SEQ ID No:2所示，并在其上下游分別添加酶切位點(diǎn)BamHI和Xhol對應(yīng)的核苷酸序列，由上海捷瑞生物工程有限公司合成。合成后的目的基因克隆于PGH載體(上海捷瑞生物工程有限公司)中。
[0021]實(shí)施例2:構(gòu)建重組蛋白表達(dá)載體
[0022]用限制性內(nèi)切酶BamHI 和 Xhol (Thermo scientific Fermentas)于 37°C分別對含目的基因的PGH載體和pET-28a (+)載體(德國Novagen公司)進(jìn)行雙酶切2小時(shí)，酶切產(chǎn)物分別進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，并分別切膠回收目的基因和pET-28a(+)載體(本發(fā)明所使用的膠回收試劑盒均來自于南京天為生物科技有限公司)。使用T4連接酶(Thermoscientific Fermentas)將回收的目的基因和pET_28a(+)載體按一定的比例于4°C連接12小時(shí)，然后轉(zhuǎn)化DH5 α感受態(tài)細(xì)胞，并涂布于含卡那霉素抗性(50 μ g/mL)的LB平板，于37°C恒溫培養(yǎng)12小時(shí)之后，于平板上提取單克隆菌落至含卡那霉素抗性(50 μ g/mL)的LB液體培養(yǎng)基中，37°C恒溫?fù)u床培養(yǎng)12小時(shí)之后，采用質(zhì)粒純化試劑盒(本發(fā)明所使用的質(zhì)粒純化試劑盒均來自南京天為生物科技有限公司)提取質(zhì)粒，經(jīng)BamHI和Xhol雙酶切鑒定后得到正確的重組表達(dá)載體。
[0023]實(shí)施例3:構(gòu)建重組蛋白表達(dá)菌株
[0024]將構(gòu)建好的重組 表達(dá)載體轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)細(xì)胞，并涂布于含卡那霉素抗性50 μ g/mL)的LB平板，于37°C恒溫培養(yǎng)12小時(shí)。挑取單克隆菌落至含卡那霉素抗性(50 μ g/mL)的LB液體培養(yǎng)基中，37°C恒溫?fù)u床培養(yǎng)3小時(shí)之后，加誘導(dǎo)劑異丙基-β _D_硫代吡喃半乳糖苷(終濃度1.0mmol/L)誘導(dǎo)表達(dá)8小時(shí)后制備蛋白電泳樣品。15%聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)果表明重組蛋白成功表達(dá)，得到重組蛋白表達(dá)菌株。
[0025]實(shí)施例4:純化重組蛋白
[0026]接種重組蛋白表達(dá)菌株至LB液體培養(yǎng)基進(jìn)行活化，加卡那霉素至終濃度為50 μ g/mL, 37°C恒溫?fù)u床培養(yǎng)過夜，按1:100比例將該菌轉(zhuǎn)接至含50 μ g/mL卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，置37°C恒溫?fù)u床培養(yǎng)至0D600 = 0.6，加誘導(dǎo)劑異丙基-β -D-硫代吡喃半乳糖苷至終濃度為1.0mmol/L,繼續(xù)誘導(dǎo)培養(yǎng)4小時(shí)。離心收集菌體，超聲破菌，低溫離心后去上清通過鎳瓊脂糖親和層析柱，經(jīng)洗滌、洗脫最終得到純化的重組蛋白(如圖1)。
[0027]實(shí)施例5:雜交瘤細(xì)胞株的獲得
[0028]取6-8周齡雌性Balb/c小鼠，基礎(chǔ)免疫每只小鼠皮下多點(diǎn)注射弗氏完全佐劑乳化的100 μ g重組蛋白。14天后進(jìn)行第一次加強(qiáng)免疫，方法為取50 μ g重組蛋白用弗氏不完全佐劑乳化后，皮下多點(diǎn)注射。14天后進(jìn)行第二次加強(qiáng)免疫，方法為取50 μ g重組蛋白用弗氏不完全佐劑乳化后，皮下多點(diǎn)注射。14天后，取25 μ g重組蛋白尾靜脈沖擊免疫，并于尾靜脈沖擊免疫72小時(shí)后，眼眶取血作為對照，并處死小鼠，取其脾臟制備細(xì)胞懸液，細(xì)胞計(jì)數(shù)，按1:5于脾細(xì)胞的數(shù)量取生長狀態(tài)良好的sp2/0小鼠骨髓瘤細(xì)胞，混和離心后，置37°C水浴中，1分鐘內(nèi)緩慢加入聚乙二醇(PEG-1450，sigma) lmL。靜置1分鐘后，緩慢加入30mL無血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)，離心，棄上清，加含HAT (Η次黃嘌呤、Α氨基蝶呤、T胸腺嘧啶核苷)的20%胎牛血清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，再加入等體積的飼養(yǎng)細(xì)胞，混勻后分置于96孔細(xì)胞板(200yL/孔)，于5% 二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。5天后，半保留換液，10天后采用間接酶聯(lián)免疫吸附法檢測96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中的雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清。具體方法如下:
[0029]重組蛋白經(jīng)包被液稀釋后(終濃度為I U g/mL)，以100 ii L/孔加入酶標(biāo)板(南京天為生物科技有限公司)，4°C包被12小時(shí)后用洗滌液洗滌四次并拍干；加入封閉液，300 u L/孔，37°C封閉2小時(shí)，棄孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌四次并拍干；加待檢細(xì)胞培養(yǎng)上清及對照血清，100 u L/孔，37°C孵育1.5小時(shí)后，洗滌液洗滌四次并拍干；加HRP (辣根過氧化物酶)標(biāo)記的羊抗鼠IgG (武漢博士德生物工程有限公司)，100 y L/孔，37°C孵育I小時(shí)后，洗滌液洗滌四次并拍干；每孔加TMBlOOii L，37°C避光顯色10分鐘后，加終止液終止反應(yīng)，50 u L/孔，酶標(biāo)儀450nm波長空白孔校零后讀取OD值。以免疫小鼠的血清作為陽性對照，相關(guān)溶液配方如下:
[0030]包被液:Na2C03l.5g，NaHC032.9g，加雙蒸水定容至 1000mL (pH9.6)。
[0031]封閉液=Na2HPO4? 12H202.68g, NaH2PO4 ? 2H200.39g, NaC18.5g，20g 牛血清白蛋白，加雙蒸水定容至1000mL (pH7.4)。
[0032]洗滌液=Na2HPO4? 12H202.68g, NaH2PO4 ? 2H200.39g, NaC18.5g, Tween-200.5mL,加雙蒸水定容至1000mL (pH7.4)。
[0033]終止液:2mol/LH2SO4, 21.7mL 濃 H2SO4 加雙蒸水定容至 1000mL。
[0034]對于檢測陽性的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行克隆，再使用有限稀釋法進(jìn)行三次亞克隆，從而獲得了穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株2E4(CGMCC NO:8412)。
[0035]實(shí)施例6:單克隆抗體的大量制備及純化
[0036]取8周齡的健康BALB/c雌性小鼠，腹腔注射液體石蠟，每只500 U L，7天后腹腔注射雜交瘤細(xì)胞2E4(CGMCC NO:8412)(約IXlO6/只)，10天后，小鼠腹部鼓起，收集腹水,3000rpm離心10分鐘，收集上清，按1:4的比例加入60mmol/L pH4.0醋酸緩沖液，用IOOmmoI/L NaOH調(diào)pH至4.5。以每毫升腹水上清加入25 y L正辛酸的比例，在磁力攪拌條件下緩慢加入正辛酸，在室溫條件下繼續(xù)攪拌30min后，4°C、4000rpm離心30分鐘，棄沉淀。將上清液在4°C條件下預(yù)冷，以ImL上清液加入0.227g硫酸銨的比例，緩慢加入硫酸銨粉末，邊加邊攪拌，室溫條件下繼續(xù)攪拌30min之后,4000rpm離心15分鐘,沉淀溶于1/10體積的lOmmol/L PBS (pH7.4)緩沖液中，用lOmmol/L PBS透析至無硫酸銨，即得到純化后的單抗。
[0037]實(shí)施例1:細(xì)胞株及抗體的鑒定
[0038]a、細(xì)胞株穩(wěn)定性的測定
[0039]復(fù)蘇雜交瘤細(xì)胞，并進(jìn)行連續(xù)傳代，傳至10代，對傳代細(xì)胞上清進(jìn)行ELISA法(同實(shí)施例5中步驟)檢測其效價(jià)，結(jié)果顯示:第10代細(xì)胞的培養(yǎng)上清中的抗體滴度約為1:104，與第二代細(xì)胞相比無明顯差異，表明雜交瘤細(xì)胞株2E4(CGMCC NO:8412)穩(wěn)定性良好，不同傳代次數(shù)的細(xì)胞均能穩(wěn)定分泌單克隆抗體。
[0040]b、雜交瘤細(xì)胞染色體的鑒定
[0041]采用秋水仙素阻斷法，經(jīng)氯化鉀低滲處理、甲醇醋酸固定、吉姆薩染色。在油鏡下隨機(jī)選取50個(gè)完整的分裂中期細(xì)胞，計(jì)數(shù)其染色體條數(shù)。結(jié)果顯示(如圖2):雜交瘤細(xì)胞的染色體數(shù)目為85-105，均大于其親本細(xì)胞(脾細(xì)胞染色體為40，SP2/0細(xì)胞染色體為72)，表明細(xì)胞融合成功。
[0042]C、抗體類型和亞類的鑒定[0043]采用小鼠單克隆抗體Ig類和亞類檢測抗體，通過間接ELISA法(同實(shí)施例5中步驟)進(jìn)行Ig類和亞類鑒定，結(jié)果顯示:單克隆抗體重鏈為IgG2b型，輕鏈為κ型。
[0044]d、抗體效價(jià)測定
[0045]以純化后的重組人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白為檢測抗原，采用間接ELISA法(同實(shí)施例5中步驟)測定實(shí)施例6獲得的腹水中單克隆抗體的滴度。結(jié)果顯示:所得腹水中單克隆抗體的滴度在1:108以上。
[0046]e、抗體純度及分子量測定
[0047]通過SDS-PAGE電泳(5%的濃縮膠，15%的分離膠)，對實(shí)施例6純化后獲得的單抗進(jìn)行分析，電泳時(shí)樣品在濃縮膠中80V電泳約20min，當(dāng)樣品進(jìn)入分離膠后，電壓調(diào)整為120V，繼續(xù)電泳約120min至溴酚藍(lán)前沿至凝膠底部。電泳結(jié)束后，采用40rpm0.25%考馬斯亮藍(lán)R-250染色3h。回收染色液，40rpm脫色至膠背景透明，期間2h換一次脫色液。結(jié)果顯示(如圖3):純化后的抗體純度大于90%，其重鏈分子量約為50kDa，輕鏈分子量約為28kDa0
[0048]e、抗體特異性的鑒定
[0049]Western Blot免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測本發(fā)明單抗與所制備的重組蛋白結(jié)合的特異性。按常規(guī)方法將SDS-PAGE電泳分離后的蛋白帶轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用5%脫脂奶粉4°C封閉過夜，加入實(shí)施例6制備的單抗，室溫反應(yīng)2h，TBST洗滌三次。用辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG室溫反應(yīng)lh，TBST洗滌三次，采用DBA顯色。結(jié)果顯示(如圖4):本發(fā)明中由雜交瘤細(xì)胞株2E4(CGMCCN0:8412)分泌的單克隆抗體能夠特異性的與重組人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白發(fā)生特異性結(jié)合，可用于人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的檢測。
【權(quán)利要求】
1.一種重組蛋白，其特征在于該重組蛋白具有如序列表SEQ ID No:1所不的氣基酸序列。
2.一種核苷酸序列，其特征在于該核苷酸序列如序列表SEQ ID No:2所示，可編碼權(quán)利要求I所述的重組蛋白。
3.一種質(zhì)粒載體,其特征在于該質(zhì)粒載體含有權(quán)利要求2所述的核苷酸序列。
4.一種菌株，其特征在于該菌株包含權(quán)利要求3所述的質(zhì)粒載體。
5.一種抗人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的單克隆抗體，其制備方法包括:合成權(quán)利要求2所述的核苷酸序列，并連接到質(zhì)粒載體上，構(gòu)建重組蛋白表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，篩選得到重組蛋白表達(dá)菌株，大規(guī)模培養(yǎng)后，純化獲得重組蛋白，多次免疫Balb/c小鼠后，取其脾細(xì)胞與sp2/0骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選得到穩(wěn)定分泌針對人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的單克隆抗體細(xì)胞株，將雜交瘤細(xì)胞注射至小鼠腹腔，取腹水進(jìn)行純化，獲得抗人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的單克隆抗體。
6.權(quán)利5所述的單克隆抗體，其特征在于由保藏編號為CGMCCNO:8412的雜交瘤細(xì)胞分泌。
7.權(quán)利5所述的單克隆抗體，其特征在于其為免疫球蛋白IgG2bK型。
8.權(quán)利5所述單克隆抗體在純化及檢測人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白檢測試劑盒中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述的檢測試劑盒為檢測人脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白的Western Blot試劑、ELISA檢測試劑盒。
【文檔編號】C12N15/70GK103665139SQ201310618017
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月29日
【發(fā)明者】王瑩, 繆小亮, 李詩, 尹鴻萍, 王旻 申請人:中國藥科大學(xué)