用于心型脂肪酸結(jié)合蛋白檢測的試紙條的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及臨床免疫檢測裝置領(lǐng)域，具體涉及一種用于心型脂肪酸結(jié)合蛋白檢測的試紙條。
【背景技術(shù)】
[0002]心型脂肪酸結(jié)合蛋白是一種對心肌損傷的早期診斷極其有用的生物標(biāo)志物。心肌細(xì)胞損傷后I小時之內(nèi)就能夠快速釋放至血液中。心型脂肪酸結(jié)合蛋白的檢測對于急性冠脈綜合癥等疾病的診斷具有重要的臨床價值。
[0003]量子點尺寸介于幾個nm至幾十nm之間。它通常是由無機(jī)核以及包覆在核表面的有機(jī)分子所構(gòu)成。對于量子點來說，當(dāng)其尺寸達(dá)到一定的臨界值時，材料的行為將呈現(xiàn)出量子特性，材料的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)也將會發(fā)生從宏觀到微觀的改變。量子點的發(fā)光原理在于，當(dāng)量子點的尺寸小到一定值時，由于受到量子尺寸效應(yīng)的影響，原來連續(xù)的能級結(jié)構(gòu)變成類似原子的不連續(xù)結(jié)構(gòu)。當(dāng)光照射到量子點上時，量子點吸收光子，價帶上的電子吸收能量后受到激發(fā)，躍迀至導(dǎo)帶，而在價帶上則會產(chǎn)生與被激發(fā)電子對應(yīng)的空穴，躍迀到導(dǎo)帶上的電子可以再以輻射躍迀的方式重新回到價帶，與價帶上的空穴復(fù)合并發(fā)射出光子。
[0004]量子點檢測表現(xiàn)出很高的檢測靈敏度，特別是適用于低濃度水平(如pg/ml-ng/ml)待檢物含量的準(zhǔn)確測定，但是其檢測的線性范圍不夠?qū)?，在相同的一套檢測體系范圍內(nèi)，無法實現(xiàn)高值樣品的準(zhǔn)確定量。因此，單獨使用量子點時，無法兼顧到低端的檢測靈敏度以及寬線性范圍。
[0005]通過聯(lián)合應(yīng)用其他與量子點具有相似的激發(fā)波長和發(fā)射波長的熒光元素或者熒光材料，將有望獲得更寬的線性范圍，并且可以實現(xiàn)在同一套熒光檢測系統(tǒng)中進(jìn)行熒光信號結(jié)果的讀取，也更有利于在臨床的推廣及應(yīng)用。
【實用新型內(nèi)容】
[0006]摶術(shù)問題
[0007]心型脂肪酸結(jié)合蛋白的臨床檢測需要滿足高靈敏度和便捷快速的要求。因此，需要開發(fā)一種結(jié)構(gòu)簡單且能夠快速精確測定心型脂肪酸結(jié)合蛋白的試紙條。
[0008]技術(shù)方案
[0009]一方面，本實用新型提供了一種用于心型脂肪酸結(jié)合蛋白檢測的試紙條，其特征在于，所述試紙條包括:
[0010]i)底板，和
[0011]ii)在所述底板上依次搭接粘貼以下組件:
[0012]i1-Ι)用于接收樣品并同時包被有由量子點和稀土熒光材料分別單獨標(biāo)記的抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體的樣品結(jié)合層，其中所述量子點為微球形式且具有2nm-30nm的粒徑，
[0013]i1-2)具有相互間隔的檢測帶和質(zhì)控帶的檢測層，其中所述檢測帶上固定有抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白第二抗體，所述質(zhì)控帶固定有抗鼠IgG的抗體，和
[0014]i1-3)吸水層。
[0015]在一個實施方式中，所述抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體和第二抗體識別心型脂肪酸結(jié)合蛋白的不同表位。
[0016]在一個實施方式中，所述樣品結(jié)合層上進(jìn)一步包被有微球，其中所述微球負(fù)載有所述稀土熒光材料和所述第一抗體。
[0017]在一個實施方式中，所述微球的粒徑大小為50nm_400nm。
[0018]在一個實施方式中，所述微球的粒徑大小為100nm-300nm。
[0019]在一個實施方式中，所述微球的粒徑大小為10nm或300nm。
[0020]在一個實施方式中，所述檢測帶和所述質(zhì)控帶之間的間隔在0.3cm-0.5cm之間。
[0021]在一個實施方式中，所述試紙條的長度在8cm至1cm之間。
[0022]在一個實施方式中，所述試紙條的寬度在0.2cm至0.5cm之間。
[0023]有益效果
[0024]在本實用新型的試紙條中，樣品層和結(jié)合層合二為一的設(shè)計使得試紙條結(jié)構(gòu)更加簡單。試劑條檢測更為方便和廉價，有利于臨床應(yīng)用。而且，聯(lián)合使用量子點和稀土熒光材料的設(shè)計能夠同時滿足檢測中對高靈敏度和寬檢測線性范圍的要求。
【附圖說明】
[0025]圖1本實用新型的試紙條的側(cè)視示意圖。
[0026]圖2本實用新型的試紙條的俯視示意圖。
[0027]附圖標(biāo)記:1_樣品結(jié)合層、2-檢測層、3-吸水層、4-底板、5-量子點標(biāo)記的抗體、6-稀土熒光材料標(biāo)記的抗體、7-檢測帶、和8-質(zhì)控帶。
【具體實施方式】
[0028]下文中將參照附圖來更詳細(xì)地描述示例性實施方式。所述附圖用于圖示說明本實用新型，而非對其進(jìn)行限制。
[0029]圖1是本實用新型的試紙條的側(cè)視示意圖。
[0030]如圖1所示，本實用新型的試紙條包括底板4和在底板4上依次搭接粘貼的樣品結(jié)合層1、檢測層2和吸水層3。
[0031]樣品結(jié)合層I可同時起到接收和結(jié)合樣品的作用。本實用新型的試紙條所適合檢測的樣品包括但不限于血清、血漿、尿液。本實用新型試紙條通過采用將樣品層和結(jié)合層一體化的設(shè)計，大大簡化了生產(chǎn)工藝及流程。在一個實施方式中，樣品結(jié)合層I由玻璃纖維素膜或者聚酯膜制備。
[0032]樣品結(jié)合層I上具有特異性結(jié)合樣品中心型脂肪酸結(jié)合蛋白的抗體，所述抗體分別被量子點和稀土熒光材料分別獨立標(biāo)記(圖1示為量子點標(biāo)記抗體5和稀土熒光材料標(biāo)記抗體6) ο
[0033]在本實用新型中，術(shù)語“標(biāo)記”包括采用化學(xué)或物理方法使抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體與量子點和稀土熒光材料直接連接。然而，標(biāo)記也可以通過其它方式完成，例如稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體可通過例如同時包埋或負(fù)載在微球上的方式達(dá)到“標(biāo)記”的目的。因此，在一個實施方式中，樣品結(jié)合層I上可進(jìn)一步具有微球(未示出)，所述微球上同時包埋或負(fù)載有稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體。在一個實施方式中，包埋或負(fù)載在所述微球上的稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體之間可以具有化學(xué)連接，例如以稀土熒光材料標(biāo)記的抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體的形式存在于所述微球上。在另一個實施方式中，包埋或負(fù)載在所述微球上的稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體之間可以不具有化學(xué)連接，即所述微球上包埋或負(fù)載有彼此間無化學(xué)連接的稀土熒光材料和抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體。
[0034]在一個實施方式中，所述微球可以為聚合物微球，例如聚苯乙稀微球。在一個實施方式中，微球的粒徑大小范圍在50nm-400nm之間，優(yōu)選在100nm-300nm之間，更優(yōu)選為10nm 或 300nm。
[0035]制備稀土熒光微球的方法是現(xiàn)有技術(shù)已知的，包括但不限于:包埋法，即在聚合物微球的聚合反應(yīng)過程中加入稀土材料配合物；鍵合法，即使稀土元素離子與聚合物側(cè)鏈上的官能團(tuán)發(fā)生配位反應(yīng)得到稀土熒光微球；以及溶脹法和包覆法。后兩種方法均是在單分散的微球(如:聚苯乙烯微球)的基礎(chǔ)上，將稀土材料配合物滲透或包覆在微球的內(nèi)部或表面，通過控制反應(yīng)條件，可實現(xiàn)最終制備出單分散性好、熒光強度高、熒光穩(wěn)定性好的聚合物微球。
[0036]在一個實施方式中，所述量子點為I1-VI族量子點(如CdTe、CdSe等)、IV-VI族量子點(如PbSe等)、II1-V族量子點(如InP、GaN等)中的一種或者幾種。量子點有利于低值的檢測以達(dá)到靈敏度的要求。而且，量子點與傳統(tǒng)的熒光試劑相比具有發(fā)射波長可調(diào)、激發(fā)譜帶寬、發(fā)射譜帶窄、熒光量子產(chǎn)率高及光化學(xué)穩(wěn)定性好等優(yōu)良的光學(xué)特性。采用量子點來標(biāo)記抗體可以極大的提高檢測的精確度和靈敏度。在一個實施方式中，所述量子點具有2nm-30nm的粒徑。在一個優(yōu)選實施方式中，所述量子點具有2nm_20nm的粒徑。在一個優(yōu)選實施方式中，所述量子點具有5nm-20nm的粒徑。
[0037]在一個實施方式中，所述稀土焚光材料為含有銪(Eu)離子、鎮(zhèn)(Tb)離子、釤(Sm)離子、釹(Nd)離子、鏑(Dy)離子等各種鑭系元素的熒光材料中的一種或者幾種。稀土熒光材料使得檢測的線性范圍可覆蓋高值區(qū)域。在一個實施方式中，稀土熒光材料為含有銪(Eu)離子、鋱(Tb)離子、釤(Sm)離子、釹(Nd)離子、鏑(Dy)離子等各種鑭系元素的稀土熒光材料中的一種或者幾種負(fù)載到微球上形成的稀土熒光微球。將稀土熒光材料負(fù)載到微球上可進(jìn)一步提尚焚光的穩(wěn)定性。
[0038]單獨量子點標(biāo)記的抗體雖然靈敏度高，但其會出現(xiàn)線性范圍不佳，體現(xiàn)為高值檢測不準(zhǔn)確。單獨稀土熒光材料標(biāo)記的抗體雖然具備良好的線性范圍，但是靈敏度有待改進(jìn)，體現(xiàn)為低值檢測不準(zhǔn)確。在本實用新型的試紙條中，由于聯(lián)合應(yīng)用量子點與稀土熒光材料，使得本實用新型的試紙條可同時實現(xiàn)高靈敏度和寬檢測線性范圍的要求。
[0039]檢測層2位于樣品結(jié)合層I和吸水層3之間，并與二者彼此搭接。檢測層2上具有相互間隔的檢測帶7和質(zhì)控帶8。檢測帶7上固定有抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白第二抗體。在一個實施方式中，所述抗心型脂肪酸結(jié)合蛋白的第一抗體和第二抗體識別心型脂肪酸結(jié)合蛋白的不同表位。質(zhì)控帶8固定有抗鼠IgG的抗體。質(zhì)控帶8用于確定反應(yīng)體系是否成立，并通過計算檢測帶7與質(zhì)控帶8的熒光信號值以精確進(jìn)行定量。
[0040]檢測帶7和質(zhì)控帶8的寬度在0.4mm至2.0mm之間，以確保所需檢測能夠完成且最大程度的節(jié)約抗體。在一個實施方式中，檢測帶7和質(zhì)控帶8的寬度在0.6mm至1.8mm之間，優(yōu)選0.8mm至1.4mm之間。此外，檢測帶7和質(zhì)控帶8之間的間隔可以在0.05cm至0.8cm之間。在一個實施方式中，檢測帶7和質(zhì)控帶8之間的間隔在0.1cm至0.6cm之間，優(yōu)選在0.3cm至0.5cm之間。
[0041]試紙條的整體長度在8cm至1cm之間，整體寬度在0.2cm至0.5cm之間，優(yōu)選在0.2cm至0.3cm之間，最優(yōu)選為0.3cm。本實用新型的試紙條在提供靈敏度和檢測線性范圍的同時，通過降低試紙條的長度和/或?qū)挾瓤山档涂贵w的用量