聯(lián)合應(yīng)用量子點與稀土熒光材料的試紙卡的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種用于免疫檢測的試紙卡，具體涉及一種聯(lián)合應(yīng)用量子點與稀土熒光材料的試紙卡。
【背景技術(shù)】
[0002]在臨床診斷領(lǐng)域，目前常用的檢測目的標(biāo)志物的方法包括:酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、膠乳增強免疫比濁法、膠體金免疫層析法、熒光免疫層析法等。酶聯(lián)免疫法及化學(xué)發(fā)光法檢測靈敏度高，可實現(xiàn)準確定量，但其耗時過長，而且無法進行單份樣本的即時測定。膠乳增強免疫比濁法雖可實現(xiàn)高通量篩選，但由于方法學(xué)本身的限制，其檢測靈敏度較低，無法對低值樣品進行精確測定。膠體金免疫層析法操作簡單，無需特殊的儀器設(shè)備，但只能實現(xiàn)半定量。在熒光免疫層析法中，傳統(tǒng)應(yīng)用的有機熒光化合物如異硫氰基熒光素、羅丹明類熒光染料等雖在水溶液中具有很高的靈敏度，但其標(biāo)記抗體或抗原后用于復(fù)雜的血清、體液、細胞等生物樣品免疫分析測定時，一旦樣品中的待檢物濃度在低濃度水平時，共存雜質(zhì)的濃度將大大高于待檢物濃度。此時，高濃度的共存雜質(zhì)產(chǎn)生的背景熒光就會對免疫產(chǎn)物的熒光測定造成嚴重的干擾，進而顯著降低熒光免疫測定的靈敏度，這極大地限制了其在臨床診斷領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0003]相比較而言，量子點則具有傳統(tǒng)的有機熒光染料所不具備的一些獨特的光學(xué)性質(zhì)。量子點尺寸介于幾個nm至幾十nm之間。量子點的發(fā)光原理在于，當(dāng)量子點的尺寸小到一定值時，由于受到量子尺寸效應(yīng)的影響，原來連續(xù)的能級結(jié)構(gòu)變成類似原子的不連續(xù)結(jié)構(gòu)。當(dāng)光照射到量子點上時，量子點吸收光子，價帶上的電子吸收能量后受到激發(fā)，躍迀至導(dǎo)帶，而在價帶上則會產(chǎn)生與被激發(fā)電子對應(yīng)的空穴，躍迀到導(dǎo)帶上的電子可以再以輻射躍迀的方式重新回到價帶，與價帶上的空穴復(fù)合并發(fā)射出光子。
[0004]量子點獨特的光學(xué)性質(zhì)主要體現(xiàn)在以下幾個方面:1、通過改變量子點的尺寸和組成可以實現(xiàn)對量子點發(fā)射光譜的調(diào)控，從而得到多種不同發(fā)光顏色的量子點，并可以使量子點的熒光發(fā)射光譜覆蓋整個可見光區(qū)；2、寬的激發(fā)光譜:同一個激發(fā)波長的光可以激發(fā)不同大小的量子點，不同尺寸的量子點發(fā)射出的熒光不同，有利于在同步檢測中的應(yīng)用；3、大的Stokes位移(可達幾百nm)以及窄且對稱的發(fā)射光譜，這一特性使在使用量子點時可以有效地避免光譜重疊；和4、量子點具有良好的光穩(wěn)定性，其熒光可以保持很長時間而不會發(fā)生褪色。
[0005]基于量子點獨特光學(xué)性質(zhì)使得其適用于低濃度水平，如pg/ml-ng/ml待檢物含量的準確測定，但是其檢測的線性范圍不夠?qū)挘谙嗤囊惶讬z測體系范圍內(nèi)，無法實現(xiàn)高值樣品的準確定量。因此，單獨使用量子點時，無法兼顧到低端的檢測靈敏度以及寬線性范圍。而通過聯(lián)合應(yīng)用其他與量子點具有相似的激發(fā)波長和發(fā)射波長的熒光元素或者熒光材料，將有望獲得更寬的線性范圍，并且可以實現(xiàn)在同一套熒光檢測系統(tǒng)中進行熒光信號結(jié)果的讀取，也更有利于在臨床的推廣及應(yīng)用。【實用新型內(nèi)容】
[0006]摶術(shù)問題
[0007]基于目前缺少適用于臨床樣品快速、精確、定量檢測的方法，特別是目前存在的無法兼顧低端檢測靈敏度以及寬線性范圍的問題，本實用新型提供了一種聯(lián)合應(yīng)用量子點與稀土熒光材料的試紙卡。
[0008]技術(shù)方案
[0009]一方面，本實用新型提供了一種聯(lián)合應(yīng)用量子點與稀土熒光材料的試紙卡，其特征在于，所述試紙卡包括:
[0010]i)試紙條，其中所述試紙條包括:
[0011]1-Ι)加樣區(qū)，
[0012]1-2)同時包被有由量子點和稀土熒光材料分別單獨標(biāo)記的第一抗體以及由生物素標(biāo)記的第二抗體的抗體結(jié)合區(qū)，
[0013]1-3)具有包被有相間隔的檢測帶和質(zhì)控帶的檢測區(qū)，其中所述檢測帶固定有親和素，所述質(zhì)控帶固定有抗鼠IgG的抗體，
[0014]1-4)吸水區(qū)，和
[0015]1-5)底板，其中所述加樣區(qū)、抗體結(jié)合區(qū)、檢測區(qū)和吸水區(qū)在所述底板上順序排列并順次搭接；以及
[0016]ii)包覆所述試紙條的外殼，其中所述外殼包括:
[0017]i1-Ι)設(shè)置有加樣孔和檢測孔的卡蓋，其中所述加樣孔開口于所述加樣區(qū)的上側(cè)，以暴露出所述加樣區(qū)的部分區(qū)域，所述檢測孔開口于所述檢測區(qū)的上側(cè)，以暴露出所述檢測帶和所述質(zhì)控帶的全部區(qū)域，和
[0018]i1-2)與所述卡蓋彼此連接的底座。
[0019]在一個實施方式中，所述量子點為微球形式且具有2nm-30nm的粒徑范圍，且所述量子點選自以下組中:CdTe、CdSe, PbSe, InP和GaN。
[0020]在一個實施方式中，所述抗體結(jié)合區(qū)上進一步包被有微球，其中所述微球負載有所述稀土熒光材料和所述第一抗體。
[0021]在一個實施方式中，所述微球的粒徑大小為50nm-400nm。
[0022]在一個實施方式中，所述微球的粒徑大小為100nm-300nm。
[0023]在一個實施方式中，所述微球的粒徑大小為10nm或300nm。
[0024]在一個實施方式中，所述第一抗體和第二抗體識別同種待測蛋白的不同表位，所述蛋白選自以下組中:心肌肌鈣蛋白1、N末端腦鈉肽前體、心型脂肪酸結(jié)合蛋白、降鈣素原、C反應(yīng)蛋白和D- 二聚體。
[0025]在一個實施方式中，所述檢測帶和所述質(zhì)控帶之間的間隔在0.1-0.6cm之間。
[0026]在一個實施方式中，所述試紙條的寬度在0.2 cm-1 cm之間。
[0027]在一個實施方式中，所述卡蓋和所述底座由塑料制成。
[0028]有益效果
[0029]本實用新型的試紙卡的主要優(yōu)點包括:聯(lián)合應(yīng)用量子點與稀土熒光材料，極好的克服了單獨應(yīng)用量子點或者稀土熒光材料存在的低值靈敏度和檢測線性范圍無法兼顧的問題；通過引入生物素親和素級聯(lián)放大系統(tǒng)，進一步提高了檢測靈敏度；和試紙卡易于攜帶和保存，易于實現(xiàn)在相應(yīng)的熒光檢測儀中對試紙條檢測結(jié)果的分析。
【附圖說明】
[0030]圖1本實用新型的試紙卡的俯視圖。
[0031]圖2本實用新型的試紙條的側(cè)視圖。
[0032]圖3本實用新型的試紙條的俯視圖。
[0033]附圖標(biāo)記:
[0034]I底座；2卡蓋；3加樣孔；4檢測孔；5檢測帶暴露位置；6質(zhì)控帶暴露位置；7加樣區(qū)；8抗體結(jié)合區(qū)；9檢測區(qū)；10檢測帶；11質(zhì)控帶；12吸水區(qū)；和13底板。
【具體實施方式】
[0035]下文中將參照附圖來更詳細地描述示例性實施方式。所述附圖用于圖示說明本實用新型，而非對其進行限制。在附圖中，為了清楚的說明，放大了試紙條部分區(qū)域的尺寸及其相對比例。
[0036]如圖1所示，本實用新型的試紙卡包括底座I和卡蓋2，卡蓋2上設(shè)置有加樣孔3和檢測孔4，其中檢測孔4對應(yīng)有檢測帶暴露位置5和質(zhì)控帶暴露位置6。試紙條(未示出)被底座I和卡蓋2彼此相互緊扣于試紙卡內(nèi)部。底座I和卡蓋2均可由諸如塑料等材料制成。加樣孔3和檢測孔4可以為正方形、長方形、橢圓形、圓形等形狀。加樣孔的長度可為0.1cm至0.5cm，寬度可為0.2cm至0.4cm。檢測孔4的長度可為1.0cm至2.3cm，寬度可為0.2cm至0.4cm。本實用新型的試紙卡可通過自動生化儀實現(xiàn)快速大批量的臨床樣品檢測。
[0037]圖2為本實用新型的試紙卡中試劑條的側(cè)視圖。
[0038]如圖2所示，本實用新型的試紙條包括加樣區(qū)7、抗體結(jié)合區(qū)8、檢測區(qū)9、吸水區(qū)12和底板13，其中所述加樣區(qū)7、抗體結(jié)合區(qū)8、檢測區(qū)9和吸水區(qū)12在底板13上順序排列并順次搭接。
[0039]加樣區(qū)7用于接收樣品，其可由選自玻璃纖維素膜或者聚酯膜、棉纖的材料制成，優(yōu)選由玻璃纖維素膜制成。加樣區(qū)7可以起到樣品過濾的作用。例如，當(dāng)待檢測樣品為血漿、血清時，加樣區(qū)7可以過濾樣品中的顆粒性不溶物。加樣區(qū)7在試劑條的結(jié)構(gòu)中與抗體結(jié)合區(qū)8搭接。加樣區(qū)7與抗體結(jié)合區(qū)8搭接的方式并不受圖1所示方式的限制。在一個實施方式中，加樣區(qū)7搭接在抗體結(jié)合區(qū)8之上。在一個實施方式中，抗體結(jié)合區(qū)8搭接在加樣區(qū)7之上。
[0040]抗體結(jié)合區(qū)8位于加樣區(qū)7和檢測區(qū)9之間，并與兩者彼此搭接?？贵w結(jié)合區(qū)8與加樣區(qū)7和檢測區(qū)9搭接的方式并不受圖1所示方式的限制?？贵w結(jié)合區(qū)8用于布置與待測樣品中特定蛋白反應(yīng)的抗體。在一個實施方式中，所述待測樣品中的特定蛋白選自以下蛋白組成的組中:心肌肌鈣蛋白1、心型脂肪酸結(jié)合蛋白、降鈣素原、N末端腦鈉肽前體、C反應(yīng)蛋白和D-二聚體。在一個優(yōu)選實施方式中，所述特定蛋白為心肌肌鈣蛋白I。
[0041]在本實用新型的試劑條的一個實施方式中，抗體結(jié)合區(qū)8上同時包被有由量子點和稀土熒光材料分別單獨標(biāo)記的第一抗體和以及由生物素標(biāo)記的第二抗體。在本實用新型