一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法
【專(zhuān)利摘要】一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，屬于貯藏保鮮【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明通過(guò)阿魏酸對(duì)溶菌酶進(jìn)行修飾，經(jīng)阿魏酸修飾的溶菌酶提高了溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力，拓寬了溶菌酶的抗菌譜。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，屬于貯藏保鮮【技術(shù)領(lǐng)域】。
技術(shù)背景
[0002]溶菌酶是一種由129個(gè)氨基酸組成的單體蛋白，是一種糖苷水解酶，分子量14400左右，等電點(diǎn)11左右?；瘜W(xué)性質(zhì)十分穩(wěn)定，PH值在1.2~11.3范圍內(nèi)劇烈變動(dòng)時(shí)，結(jié)構(gòu)幾乎不變，在酸性環(huán)境中對(duì)熱的穩(wěn)定性也很強(qiáng)。溶菌酶具有抗菌，抗病毒，清除壞死組織，加快創(chuàng)口修復(fù)再生等功能，在食品和醫(yī)藥工業(yè)具有廣泛應(yīng)用。但是天然的溶菌酶為非廣譜抗菌劑，主要作用于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌，其作用機(jī)理為能夠水解細(xì)胞壁的主要成分肽聚糖，而革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁中肽聚糖含量很少，且被一層較厚的脂多糖類(lèi)物質(zhì)所覆蓋，所以對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌幾乎沒(méi)有作用，極大的限制了溶菌酶作為天然防腐劑的推廣，為了改變這種局限性，一些學(xué)者通過(guò)改性研究以實(shí)現(xiàn)天然溶菌酶對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌的抑制作用。本發(fā)明使用阿魏酸對(duì)溶菌酶進(jìn)行修飾，提高了溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌的能力，拓寬了溶菌酶的抗菌
P曰。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的技術(shù)方案:本發(fā)明的目的在于提供一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，取40mg阿魏酸溶解于3mL5M的NaOH溶液中，用5MHCl調(diào)PH至7.5左右，然后加入去離子水至8mL ;再向該溶液中加入160mg的EDAC (碳二亞胺)，完全溶解后，于室溫下靜止Ih ;再加入40mg溶菌酶，混合物在30°C恒溫水浴中攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后，將所得的反應(yīng)液裝入截留分子量為3500-7000Da的透析袋中用去離子水透析，不溶的部分離心除去，可溶部分冷凍干燥得產(chǎn)品。下表為溶菌酶與阿魏酸修飾酶對(duì)2種革蘭氏陰性菌的最小抑菌濃度(mg/mL)。
樣品大腸桿菌銅綠假單胞菌
[0004]溶菌酶>1>1
阿魏酸修飾酶_05_0.5
[0005]本發(fā)明的有益效果:一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，拓寬了溶菌酶的抗菌譜，提高了對(duì)革蘭氏陰性菌的抑制能力。
【具體實(shí)施方式】
[0006]實(shí)施例1
[0007]取40mg阿魏酸溶解于3mL5M的NaOH溶液中，用5M HCl調(diào)PH至7.5左右，然后加入去離子水至8mL ;再向該溶液中加入160mg的EDAC(碳二亞胺),完全溶解后，于室溫下靜止Ih ;再加入40mg溶菌酶，混合物在30°C恒溫水浴中攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后，將所得的反應(yīng)液裝入截留分子量為3500-7000Da的透析袋中用去離子水透析，不溶的部分離心除去，可溶部分冷凍干燥得產(chǎn)品。`
【權(quán)利要求】
1.一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，其特征是取40mg阿魏酸溶解于3mL5M的NaOH溶液中，用5M HCl調(diào)PH至7.5左右，然后加入去離子水至8mL ;再向該溶液中加入160mg的EDAC(碳二亞胺),完全溶解后，于室溫下靜止Ih ;再加入40mg溶菌酶，混合物在30°C恒溫水浴中攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)結(jié)束后，將所得的反應(yīng)液裝入截留分子量為3500-7000Da的透析袋中用去離子水透析，不溶的部分離心除去，可溶部分冷凍干燥得產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，其特征是修飾溶菌酶的物質(zhì)為阿魏酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，其特征是阿魏酸與溶菌酶的質(zhì)量比為1:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種通過(guò)阿魏酸修飾的溶菌酶提高溶菌酶抑制革蘭氏陰性菌能力的方法，其特征溶菌酶·與碳二亞胺的質(zhì)量比為1:4。
【文檔編號(hào)】C12N9/96GK103589709SQ201310559919
【公開(kāi)日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月8日
【發(fā)明者】曹棟, 楊曼麗, 王強(qiáng) 申請(qǐng)人:江南大學(xué)