一種酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法，利用酸性蛋白酶發(fā)酵液中含有的糖化酶活性，通過測定鹽析液中糖化酶的含量來確定酸性蛋白酶的鹽析效果，當(dāng)糖化酶的含量為0～3u/mL時，酸性蛋白酶析出率＞99.9%。通過檢測濾液中含有的糖化酶含量，確定酸性蛋白酶鹽析有沒有達(dá)到要求的效果，通過本發(fā)明公開的技術(shù)方案，使得鹽析效果能夠達(dá)到最佳，保證了酸性蛋白酶的高收率及穩(wěn)定性；同時，由于鹽析效果的檢測方法明確后，避免了鹽析時過量加入鹽析劑，從而節(jié)省了鹽析原料，降低了生產(chǎn)成本。
【專利說明】一種酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前國內(nèi)酶制劑產(chǎn)品有固體劑型和液體劑型，其中，固體劑型生產(chǎn)工藝用鹽析法把酶從液體中取出，鹽析用原料有硫酸鈉和硫酸銨，不同酶制劑品種添加的硫酸鈉比例也不一樣，為達(dá)到最佳效果，一般酶制劑都是通過檢測酶發(fā)酵液鹽析過濾后的濾液中該酶的含量確定鹽析效果，通過研究發(fā)現(xiàn)，由于酸性蛋白酶的特殊性，酸性蛋白酶鹽析后檢測效果時無法測出濾液中酸性蛋白酶的真實活力，這樣就會因酸性蛋白酶發(fā)酵液中的泡沫、鹽析劑的質(zhì)量等原因影響酸性蛋白酶的鹽析效果時無法檢測出來，從而導(dǎo)致生產(chǎn)中影響到酸性蛋白酶收率，造成收率低和不穩(wěn)定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是:提供一種能使酸性蛋白酶收率穩(wěn)定且收率高的酸性蛋白酶鹽析效果檢測方法。
[0004]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案為:一種酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法，利用酸性蛋白酶發(fā)酵液中含有的糖化酶活性，通過測定鹽析液中糖化酶的含量來確定酸性蛋白酶的鹽析效果，當(dāng)糖化酶的含量< 3u/mL(lg固體酶粉(或ImL液體酶),于40°C、pH=4.6條件，Ih分解可溶性淀粉產(chǎn)生Img葡萄糖，即為I個酶活力單位，以u/mL表示)時，酸性蛋白酶析出率> 99.9% (效果最佳)。
[0005]本發(fā)明所要解決的第二個技術(shù)問題是，提供一種酸性蛋白酶鹽析方法。
[0006]為解決第二個技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:酸性蛋白酶鹽析方法，其具體步驟為:
[0007]I)酸性蛋白酶發(fā)酵液中加入鹽析劑，攪拌溶解，沉淀8±0.5小時；
[0008]2 )將沉淀后的酸性蛋白酶鹽析液過濾；
[0009]3)檢測步驟2)所得濾液中的糖化酶的含量，當(dāng)糖化酶的含量< 3u/mL，酸性蛋白酶析出率> 99.9% (效果最佳)。
[0010]所述的濾液中糖化酶的含量， 采用QB/T1803-1993中糖化酶測定方法檢測。
[0011]所述的鹽析劑為硫酸鈉或硫酸銨。
[0012]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明通過檢測濾液中含有的糖化酶含量，確定酸性蛋白酶鹽析有沒有達(dá)到要求的效果，通過本發(fā)明公開的技術(shù)方案，使得鹽析效果能夠達(dá)到最佳，保證了酸性蛋白酶的高收率及穩(wěn)定性；同時，由于鹽析效果的檢測方法明確后，避免了鹽析時過量加入鹽析劑，從而節(jié)省了鹽析原料，降低了生產(chǎn)成本。
【具體實施方式】
[0013]下面結(jié)合具體實施例詳細(xì)描述一下本發(fā)明的具體內(nèi)容。[0014]實施例1
[0015]取發(fā)酵活力為7100u/mL的酸性蛋白酶發(fā)酵液，分別做鹽析比例(體積重量比)為30%、32%、33%、34%、35%鹽析試驗，其中35%為規(guī)定的最佳鹽析比例，分別加入鹽析劑充分溶解后沉淀8小時，用濾紙進(jìn)行過濾，濾液分別測酸性酸性蛋白酶活力和糖化酶活力，結(jié)果如下:
[0016]表一:(酶活力單位:u/mL)
[0017]
【權(quán)利要求】
1.一種酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法，該檢測方法通過測定鹽析液中糖化酶的含量來確定酸性蛋白酶的鹽析效果，當(dāng)糖化酶的含量< 3u/mL時，酸性蛋白酶析出率> 99.9%。
2.利用權(quán)利要求1所述的酸性蛋白酶鹽析效果的檢測方法的酸性蛋白酶鹽析方法，其具體步驟為: O酸性蛋白酶發(fā)酵液中加入鹽析劑，攪拌溶解，沉淀8±0.5小時； 2)將沉淀后的酸性蛋白酶鹽析液過濾； 3)檢測步驟2)所得濾液中的糖化酶的含量，當(dāng)糖化酶的含量<3u/mL，酸性蛋白酶析出率> 99.9%ο
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酸性蛋白酶鹽析方法，其特征在于:所述的濾液中糖化酶的含量，采用QB/T1803-1993中糖化酶測定方法檢測。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的 酸性蛋白酶鹽析方法，其特征在于:所述的鹽析劑為硫酸鈉或硫酸銨。
【文檔編號】C12N9/50GK103468780SQ201310421199
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年9月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月16日
【發(fā)明者】李永其 申請人:張家港市金源生物化工有限公司