專(zhuān)利名稱(chēng)：一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明所屬領(lǐng)域?yàn)樯锎蠓肿訖z測(cè)領(lǐng)域，特別是涉及聚丙烯酰胺凝膠大分子檢測(cè)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在研究和診斷領(lǐng)域，聚丙烯酰胺凝膠是一種廣泛運(yùn)用的用于分離生物大分子(如脫氧核糖核酸(DNA)、核糖 核酸(RNA)、多肽、蛋白質(zhì)以及它們的復(fù)合物等)的分離介質(zhì)。運(yùn)用此項(xiàng)技術(shù)的基本裝置為一個(gè)兩端開(kāi)口的細(xì)管或一個(gè)三明治型的兩塊平板。細(xì)管和平板用具有一定的支持強(qiáng)度的材質(zhì)制作，如玻璃和塑料等。首先將尚未凝固的聚丙烯酰胺溶液加入到上述形狀的模具中，待聚丙烯酰胺凝固成膠后，可將生物樣品加到凝膠的一端，凝膠的兩端分別加上正負(fù)極電極，使生物樣品分子在凝膠介質(zhì)中移動(dòng)。由于生物樣品分子的移動(dòng)速度不同，因而在一段時(shí)間后，不同移動(dòng)速度的生物分子就能被有效分開(kāi)。一般生物樣品分子或經(jīng)處理以后的生物樣品分子帶有負(fù)電荷，電泳過(guò)程中，它們從負(fù)極向正極移動(dòng)。在一定電場(chǎng)下，生物分子在介質(zhì)上的移動(dòng)速率(泳動(dòng)速率)取決于生物分子本身的電荷/質(zhì)量比、生物分子的形狀和大小以及介質(zhì)的孔徑。針對(duì)確定的樣品，前兩者是生物分子本身的特征，一般不會(huì)改變。操作者可以改變電泳介質(zhì)的孔徑來(lái)影響生物分子的泳動(dòng)速率。聚丙烯酰胺凝膠的孔徑首先取決于凝膠體系中丙烯酰胺單體及交聯(lián)劑單體的總質(zhì)量-體積濃度，即所謂的丙烯酰胺單體溶液的總質(zhì)量-體積濃度，用％T表示，即％τ=(丙烯酰胺單體質(zhì)量+交聯(lián)劑單體質(zhì)量)(克)+溶液總體積(毫升)X 100%。越高的％τ濃度，使形成的凝膠孔徑越小，適合用于分離小分子量的生物分子。越低的％τ濃度，使形成的凝膠孔徑越大，適合用于分離大分子量的生物分子。常用的分離生物分子的聚丙烯酰胺凝膠濃度為4%-30%不等。影響聚丙烯酰胺凝膠的另一個(gè)因素是交聯(lián)劑單體質(zhì)量占所有單體的質(zhì)量百分t匕,用％c表示，即％C=交聯(lián)劑單體質(zhì)量+ (丙烯酰胺單體質(zhì)量+交聯(lián)劑單體質(zhì)量)X 100%。在總的單體濃度(％τ)確定的情況下，使用越少的交聯(lián)劑(％c越小)獲得的凝膠孔徑越大，反之亦然。常用的用于核酸分子分離的凝膠的％c為5% ;用于蛋白分子分離的凝膠的％C為
3.3%或2. 6%。此外還有其他一些原因可能會(huì)帶來(lái)孔徑大小的變化，如不完全的凝結(jié)和凝膠的水解等。凝膠介質(zhì)中還含有用于調(diào)節(jié)pH值、離子強(qiáng)度等的緩沖液體系。一般用于核酸電泳,凝膠的緩沖液常為T(mén)AE(40mMTris-乙酸，IOmM EDTA)和TBE(90mM的Tris堿，90mM的硼酸和2mM的EDTA)。在非變性核酸電泳時(shí)，電泳過(guò)程保持在較低的溫度，以維持核酸的結(jié)構(gòu)，特別是用于分離核酸和蛋白質(zhì)復(fù)合物的時(shí)候。如要使得分離的核酸分子變性(雙鏈DNA解鏈；單鏈DNA和RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)解體)，常在緩沖體系中加入足量的變性劑，如尿素和甲酰胺等，并維持較高的電泳溫度。其它用于核酸電泳的緩沖液體系還有Tris/磷酸和Tris/雙甘氨肽等。電泳緩沖液也使用同樣成分的緩沖液，然而在核酸的變性電泳時(shí)，電泳緩沖液中常無(wú)需添加變性劑。蛋白分子表面由于沒(méi)有大量的負(fù)電荷，大多數(shù)蛋白電泳都在變性條件下進(jìn)行，在此條件下，蛋白在上樣緩沖液中預(yù)先處理，使蛋白表面結(jié)合上大量帶負(fù)電荷的SDS (十二烷基硫酸鈉)分子基團(tuán)，能夠在電場(chǎng)力的驅(qū)動(dòng)下有效泳動(dòng)，即所謂的SDS-PAGE電泳。SDS-PAGE凝膠灌制的緩沖體系常用的是Laemmli體系(Laemmli, U. K. (1970) Nature,227，680-686.)。Laemmli體系包括分離膠和濃縮膠(也稱(chēng)為積層膠)兩部分分離膠的緩沖液為O. 375M的Tris (用HCl滴定到ρΗ8· 8)，濃縮膠的緩沖液為O. 125Μ的Tris (用HCl滴定到ρΗ6· 8)。正負(fù)極電泳緩沖液為O. 024Μ的Tris, O. 192Μ的甘氨酸和O. 1%的SDS0另一種常用的緩沖液體系(Schaegger 體系)(Schaegger, H. and van Jagow, G. , (1987) Anal.Biochem. 166，368-379)為濃縮膠緩沖液含O. 75MTris，HCl滴定到ρΗ8· 45 ;分離膠緩沖液含 O. 9MTris, HCl 滴定到 pH8. 45 ;負(fù)極緩沖液為 O.1MTris 和 O. lMTricine，含 O. 1%SDS。正極緩沖液為O. 2MTris。其它緩沖液包括磷酸鹽緩沖體系、Bis-Tris緩沖體系、Tris-乙酸體系、雙甘氨酸肽-NaOH體系、PIPES-磷酸鈉體系、HEPES/MOPS/MES/Bicine_NaOH體系、MOPS-KOH體系等。如要在非變性條件下分離蛋白質(zhì)分子，則需在凝膠和緩沖液中忽略SDS。
凝膠在灌制后需要凝固才能作為有效的分離介質(zhì)。丙烯酰胺單體在催化劑存在的情況下可以聚合成長(zhǎng)的線性聚丙烯酰胺，如果體系中存在甲叉雙丙烯酰胺、1，4-二丙烯?；哙骸，N’-雙(丙烯酰)胱胺、酒石酸雙丙烯酰胺或它們的混合物等交聯(lián)劑，則在這些線性聚丙烯酰胺之間，可以通過(guò)交聯(lián)劑形成橋連接體，由此構(gòu)成網(wǎng)狀聚丙烯酰胺。實(shí)驗(yàn)中一般使用過(guò)硫酸銨與N，N，N’，N’ -四甲基乙二胺(TEMED)組成的催化體系。由于上述兩種物質(zhì)均不穩(wěn)定，因此操作者可在凝膠配制前臨時(shí)加入新鮮上述試劑，即可使丙烯酰胺單體快速聚合。聚合后的聚丙烯酰胺即可用于電泳分離生物大分子等實(shí)驗(yàn)。凝膠分離介質(zhì)可分為連續(xù)和不連續(xù)兩種緩沖體系。連續(xù)緩沖體系是指整個(gè)凝膠使用一種緩沖體系配制，不連續(xù)緩沖體系是指凝膠的不同部位使用不同的緩沖體系。如Laemmli體系等。此外，聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以是均一濃度，也可以是梯度漸變的濃度。常常后者分離的分子量范圍更廣，而前者更容易配制。如上所述聚丙烯酰胺凝膠電泳一般在堿性條件下進(jìn)行。由于丙烯酰胺在堿性條件下會(huì)緩慢水解，所以灌制好的膠一般只能在4度存放一周左右。丙烯酰胺的緩慢水解會(huì)使得凝膠的分辨率和分離效果急劇下降。所以，聚丙烯酰胺凝膠一般現(xiàn)用現(xiàn)配。由于目前的生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中極為常用，實(shí)驗(yàn)室自制凝膠需要較多的時(shí)間，因此在此環(huán)節(jié)，廣大研究人員浪費(fèi)了大量的時(shí)間。盡管，市場(chǎng)上有商業(yè)化的預(yù)制膠，但進(jìn)口預(yù)制膠的價(jià)格極為昂貴。國(guó)產(chǎn)的替代品，由于質(zhì)量不穩(wěn)定，分離效果差而未得到廣泛認(rèn)可。因此該應(yīng)用領(lǐng)域很需要一種可以大為縮減凝膠配制時(shí)間，而價(jià)格又相對(duì)低廉的介于自制凝膠和預(yù)制膠中間的產(chǎn)品。目前使用的凝膠均為無(wú)色透明。無(wú)色透明的凝膠其樣品加樣槽常常難以辨別，需要借助于光的折射來(lái)辨別，對(duì)于不熟練的實(shí)驗(yàn)人員具有一定的難度。由于難以辨別加樣槽的位置，為加樣操作也帶來(lái)不便，使加樣操作的效率降低。目前市場(chǎng)上雖有對(duì)應(yīng)于加樣槽的塑料框架銷(xiāo)售，由于是塑料制品，因此只有少量固定的規(guī)格，當(dāng)凝膠規(guī)格和塑料框架不匹配時(shí)，就不能提供任何幫助。此外，實(shí)驗(yàn)人員常常需要同時(shí)操作多塊凝膠，每塊凝膠含有不同的樣品或樣品組合，為標(biāo)記不同的凝膠，一般使用記號(hào)筆在凝膠外側(cè)的玻璃板上標(biāo)上記號(hào)，但由于電泳緩沖液中的浸泡，標(biāo)注的記號(hào)極易被洗刷掉，為后期不同凝膠的識(shí)別帶來(lái)不便。因此，一種帶有顏色的凝膠可有效解決以上的問(wèn)題，并且顏色為凝膠的內(nèi)在特征，因而不會(huì)因凝膠規(guī)格改變或電泳緩沖液的浸泡等原因使其失去其應(yīng)有的功能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問(wèn)題是提供一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，可以快速灌制聚丙烯酰胺凝膠，同時(shí)可長(zhǎng)時(shí)間保存。另外本發(fā)明還公開(kāi)了灌制堿性凝膠和酸性凝膠的試劑盒，包括含能產(chǎn)生顏色的物質(zhì)的試劑盒。本發(fā)明還公開(kāi)了試劑盒的應(yīng)用。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，包括丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液。進(jìn)一步，所述的丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液獨(dú)立包裝，所述丙烯酰胺單體溶液包括丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑單體，丙烯酰胺單體溶液的總質(zhì)量-體積濃度(％T)為 2%-50%，優(yōu)選為10%-40%。其中交聯(lián)劑單體質(zhì)量占總單體質(zhì)量的百分比(％C)為1%-10%，更 優(yōu)地為2-6%，丙烯酰胺單體溶液總質(zhì)量-體積濃度是目標(biāo)灌制凝膠濃度的1-10倍，優(yōu)選為1-3倍，更優(yōu)選為2倍，所述的緩沖液體系儲(chǔ)存液的濃度為目標(biāo)凝膠所使用的緩沖體系濃度的1-100倍，優(yōu)選為1-20倍，更優(yōu)選為1. 5-3倍，最優(yōu)選為2倍。進(jìn)一步，所述的丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液混合包裝，所述丙烯酰胺單體溶液包括丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑單體，丙烯酰胺單體溶液的總質(zhì)量-體積濃度(％T)為2%-50%，優(yōu)選為10%-40%。其中交聯(lián)劑單體質(zhì)量占總單體質(zhì)量的百分比(％C)為1%-10%，更優(yōu)地為2-6%，丙烯酰胺單體溶液總質(zhì)量-體積濃度是目標(biāo)灌制凝膠濃度的1-10倍，優(yōu)選為1-3倍，更優(yōu)選為I倍，所述的緩沖液體系儲(chǔ)存液的濃度為目標(biāo)凝膠所使用的緩沖體系濃度的1-10倍，優(yōu)選為1-3倍，最優(yōu)選為I倍。進(jìn)一步，所述的交聯(lián)劑為甲叉雙丙烯酰胺、1，4-二丙烯?；哙骸，N'-雙(丙烯酰)胱胺、酒石酸雙丙烯酰胺或它們的混合物。進(jìn)一步，所述的緩沖體系儲(chǔ)備液是TAE、TBE、Tris/磷酸、Tris/雙甘氨肽、Laemmli體系、Schaegger體系、磷酸鹽緩沖體系、Bis-Tris緩沖體系、Tris-乙酸體系、雙甘氨酸肽-NaOH 體系、PIPES-磷酸鈉體系、HEPES/MOPS/MES/Bicine_NaOH 體系或 MOPS-KOH 體系中的一種。進(jìn)一步，所述的獨(dú)立包裝的丙烯酰胺單體溶液和/或緩沖體系儲(chǔ)備液中包含能產(chǎn)生顏色物質(zhì)，能產(chǎn)生顏色物質(zhì)的濃度為O. 01 μ g/ml-lg/ml,優(yōu)選為O.1 μ g/ml-0. lg/ml,更優(yōu)選為I μ g/ml-10mg/ml，最優(yōu)為10 μ g/ml-lmg/ml。進(jìn)一步,所述的混合包裝的丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液中包含能產(chǎn)生顏色物質(zhì)，能產(chǎn)生顏色物質(zhì)的濃度為O. 01 μ g/ml-lg/ml,優(yōu)選為 O.1 μ g/ml-0. lg/ml,更優(yōu)選為 I μ g/ml-lOmg/ml,最優(yōu)為 10 μ g/ml-lmg/ml ο本發(fā)明所述試劑盒灌制的凝膠用于生物大分子的分離和分析，所述的生物大分子為脫氧核糖核酸(DNA )、核糖核酸(RNA )、多肽、蛋白質(zhì)以及它們的復(fù)合物。本發(fā)明涉及的第一個(gè)方面為一套預(yù)混的灌膠緩沖液體系。由于丙烯酰胺在堿性條件下會(huì)水解，而目前絕大多數(shù)的電泳均在堿性條件下進(jìn)行，因此如果將所有的灌膠試劑配制成單一的儲(chǔ)存液，其中的丙烯酰胺就會(huì)發(fā)生水解，所以此種儲(chǔ)存液的保存期十分短暫，一般不超過(guò)1-2周。因此必須犧牲一定的便利性，將堿性試劑和丙烯酰胺單體分放在不同的預(yù)制儲(chǔ)存液中。按照人所熟知的常識(shí)，可以在物體內(nèi)摻入可產(chǎn)生顏色的固體、液體、膠體、氣體等物質(zhì)使該物體著色，也可以在物體表面附上可產(chǎn)生顏色的固體、液體、膠體、氣體等物質(zhì)使該物體著色。本發(fā)明所述的凝膠灌制儲(chǔ)存液中可預(yù)先加入可產(chǎn)生顏色的物質(zhì)，使用可產(chǎn)生顏色的儲(chǔ)存液灌制的凝膠凝結(jié)成固體凝膠后也帶有相應(yīng)顏色。本發(fā)明所涉及的凝膠灌制的儲(chǔ)存液中可以預(yù)先摻入各種能使儲(chǔ)存液帶有顏色的物質(zhì)，這些物質(zhì)包括所有能使儲(chǔ)備液帶上顏色的固體，液體，膠體或氣體。產(chǎn)生的的顏色包括紅、黃、藍(lán)以及由此三原色配伍出來(lái)的任何顏色。灌制凝膠的兩個(gè)儲(chǔ)備液中，可以在其中任一種儲(chǔ)備液中加入可產(chǎn)生顏色的物質(zhì)，也可以在兩種儲(chǔ)存液中都加入可產(chǎn)生顏色的物質(zhì)。可產(chǎn)生顏色的物質(zhì)在儲(chǔ)存液中的質(zhì)量濃度范圍為O. 01 μ g/ml-lg/ml，各種有色物質(zhì)加入量因其色度不同需要個(gè)別優(yōu)化，合適的加入量應(yīng)能使得形成的凝膠顏色清晰可辨。本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是由于采用上述技術(shù)方案，儲(chǔ)備液長(zhǎng)期保存不降低質(zhì)量，而且可以快速的配置聚丙酰胺凝膠，即滿足快速配置的要求，又保證了配制凝膠的檢測(cè)效果。配制有顏色的凝膠使凝膠外形輪廓較傳統(tǒng)透明凝膠更易于分辨，保證了檢測(cè)過(guò) 程的操作方便性。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1兩個(gè)分離的儲(chǔ)存液用于灌制核酸的凝膠。其中一個(gè)儲(chǔ)存液為丙烯酰胺單體溶液體系。丙烯酰胺體系的PH〈7，即為酸性條件。在酸性條件下，丙烯酰胺不會(huì)發(fā)生水解，因而產(chǎn)品的保質(zhì)期在4攝氏度條件下至少達(dá)12個(gè)月。丙烯酰胺的單體總濃度(％T)為40%，丙烯酰胺單體的濃度為目標(biāo)凝膠的使用2倍。其中甲叉雙丙烯酰胺所占的比例(％C)為5%，用于核酸的分離檢測(cè)，另一個(gè)儲(chǔ)存液為凝膠的緩沖體系，緩沖體系的濃度目標(biāo)凝膠所使用的緩沖體系濃度的2倍，所述緩沖體系儲(chǔ)備液的pH8. 8，用于核酸分子分離緩沖體系包括但不限于TAE、TBE、Tris/磷酸和Tris/雙甘氨肽等可用于核酸分子分離分析的緩沖液。實(shí)施例2兩個(gè)分離的儲(chǔ)存液用于灌制蛋白分離凝膠的分離膠部分。丙烯酰胺的單體總濃度(%T)為30%，丙烯酰胺單體的濃度為目標(biāo)凝膠的使用濃度(％Τ)的2倍。其中甲叉雙丙烯酰胺所占的比例(％C)為3. 3%，用于蛋白質(zhì)的檢測(cè)。該獨(dú)立儲(chǔ)存液中還含有凝膠的緩沖體系，緩沖體系的濃度目標(biāo)凝膠所使用的緩沖體系濃度的2倍。在Iaemmli體系中，分離膠的緩沖液為O. 375M的Tris，用HCl滴定到pH8. 8。用于蛋白質(zhì)分子的分離緩沖液體系包括但不限于Laemmli體系、Schaegger體系、磷酸鹽緩沖體系、Bis-Tris緩沖體系、Tris-乙酸體系、雙甘氨酸肽-NaOH 體系、PIPES-磷酸鈉體系、HEPES/MOPS/MES/Bicine-NaOH 體系、MOPS-KOH體系等。實(shí)施例3—個(gè)獨(dú)立的儲(chǔ)存液用于灌制蛋白分離凝膠濃縮膠部分。丙烯酰胺的單體總濃度(%T)為5%，丙烯酰胺單體的濃度為目標(biāo)凝膠的使用濃度(％Τ)的I倍。其中甲叉雙丙烯酰胺所占的比例(％C)為3. 3%，用于蛋白質(zhì)的檢測(cè)。該獨(dú)立儲(chǔ)存液中還含有凝膠的緩沖體系，緩沖體系的濃度目標(biāo)凝膠所使用的緩沖體系濃度的I倍。在Iaemmli體系中，濃縮膠的緩沖液為O. 125M的Tris，用HCl滴定到pH6. 8。用于蛋白質(zhì)分子的分離緩沖液體系包括但不限于Laemmli體系、Schaegger體系、磷酸鹽緩沖體系、Bis-Tris緩沖體系、Tris-乙酸體系、雙甘氨酸肽-NaOH 體系、PIPES-磷酸鈉體系、HEPES/MOPS/MES/Bicine-NaOH 體系、MOPS-KOH體系等。實(shí)施例4實(shí)施例1所述的儲(chǔ)存液制成試劑盒，用于進(jìn)行核酸電泳時(shí)快速制備凝膠。制備方法如下將2倍于目標(biāo)凝膠濃度的丙烯酰胺單體儲(chǔ)備液(如實(shí)施例1中為40%)與2倍于目標(biāo)凝膠緩沖體系的緩沖液儲(chǔ)備液(如2倍濃度的TBE緩沖液)等體積混合。加入1/100體積的新鮮配制的10%過(guò)硫酸銨溶液及1/1000體積的TEMED (N, N，N’，N’ -四甲基二乙胺)，混勻。再將混合液倒入制膠的模具中，模具的最上方插入加樣槽的齒形模具。待濃縮膠凝固后，拔出齒形模具，即可用于電泳分離核酸。終濃度20%的凝膠適合用于分析小分子核酸，如寡核苷酸等。 實(shí)施例5實(shí)施例2、3所述的儲(chǔ)存液制成試劑盒，用于進(jìn)行蛋白質(zhì)電泳時(shí)快速制備凝膠。制備方法如下第一步制備下層分離膠。將2倍于目標(biāo)凝膠濃度的丙烯酰胺單體儲(chǔ)備液(如實(shí)施例2中為30%)與2倍于目標(biāo)凝膠緩沖體系的緩沖液儲(chǔ)備液(如2倍濃度的Iaemmli體系分離膠緩沖液)等體積混合。加入1/100體積的新鮮配制的10%過(guò)硫酸銨溶液及1/1000體積的TEMED。將混合液倒入制膠模具中，用水封住混合液的表面，以使混合液與空氣隔絕。待分離膠聚合凝固后，倒去水封。第二步制備上層濃縮膠。取適量獨(dú)立包裝的濃縮膠儲(chǔ)備液(如實(shí)施例3)，加入1/100體積的新鮮配制的10%過(guò)硫酸銨溶液及1/1000體積的TEMED，混勻后注入制膠模具中的分離膠上方，模具的最上方插入加樣槽的齒形模具。待濃縮膠凝固后，拔出齒形模具，即可用于電泳，分離膠終濃度為15%的凝膠適合分離小分子量蛋白質(zhì)(如分子量為IOKD的小蛋白質(zhì)等)。實(shí)施例6本發(fā)明所述試劑盒的穩(wěn)定性測(cè)試。用于灌制堿性膠的丙烯酰胺儲(chǔ)存液為20%(%T)的丙烯酰胺單體溶液，其中甲叉雙丙烯酰胺的比例(%C)為分別為5%、3. 3%、2. 6%三種。用于灌制堿性膠的緩沖體系儲(chǔ)存液為2倍濃度的Laemmli體系分離膠緩沖液，即O. 75M的Tris(pH8. 8)。另一用于灌制堿性核酸分離膠的緩沖液體系為2倍濃度TAE緩沖液。另一用于灌制堿性核酸分離膠的緩沖液體系為2倍濃度TBE緩沖液。所有上述溶液置一份于37攝氏度一個(gè)月時(shí)間，置一份于4攝氏度六個(gè)月時(shí)間。放置結(jié)束后，將上述緩沖液與丙烯酰胺單體溶液1:1混合，加入1/100體積的新鮮配制的10%過(guò)硫酸銨溶液及1/1000體積的TEMED(N，N，N’，N’ -四甲基二乙胺)，混勻，置于室溫。丙烯酰胺的聚合均可在30分鐘內(nèi)完成，見(jiàn)表I。聚合后的聚丙烯酰胺凝膠可正常用于電泳分離實(shí)驗(yàn)。表1.第一橫行中為丙烯酰胺儲(chǔ)存液，第一豎列中為緩沖體系儲(chǔ)存液。任兩行的交匯處為兩種溶液1:1混合后,加入TEMED和過(guò)硫酸銨后，30分鐘內(nèi)的聚合反應(yīng)結(jié)果。表I
權(quán)利要求
1.一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，包括丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，其特征在于，所述的丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液獨(dú)立包裝，所述丙烯酰胺單體溶液包括丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑單體，丙烯酰胺單體溶液的總質(zhì)量-體積濃度為2%-50%，優(yōu)選為10%-40% ;其中交聯(lián)劑單體質(zhì)量占總單體質(zhì)量的百分比為1%_10%，更優(yōu)地為2-6%，丙烯酰胺單體溶液總質(zhì)量-體積濃度是目標(biāo)灌制凝膠濃度的1-10倍，優(yōu)選為1-3倍，更優(yōu)選為2倍，所述的緩沖液體系儲(chǔ)存液的濃度為目標(biāo)凝膠所使用的緩沖體系濃度的1-100倍，優(yōu)選為1-20倍，更優(yōu)選為1. 5-3倍，最優(yōu)選為2倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，其特征在于，所述的丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液混合包裝，所述丙烯酰胺單體溶液包括丙烯酰胺單體和交聯(lián)劑單體，丙烯酰胺單體溶液的總質(zhì)量-體積濃度為2%-50%，優(yōu)選為10%-40% ;其中交聯(lián)劑單體質(zhì)量占總單體質(zhì)量的百分比為1%_10%，更優(yōu)地為2-6%，丙烯酰胺單體溶液總質(zhì)量-體積濃度是目標(biāo)灌制凝膠濃度的1-10倍，優(yōu)選為1-3倍，更優(yōu)選為I倍，所述的緩沖液體系儲(chǔ)存液的濃度為目標(biāo)凝膠所使用的緩沖體系濃度的1-10倍，優(yōu)選為1-3倍，最優(yōu)選為I倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3任一權(quán)利要求所述的一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，其特征在于，所述的交聯(lián)劑為甲叉雙丙烯酰胺、1，4- 二丙烯?；哙骸，N’ -雙(丙烯酰)胱胺、酒石酸雙丙烯酰胺中的一種或幾種的混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一權(quán)利要求所述的一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，其特征在于，所述的緩沖體系儲(chǔ)備液是TAE、TBE、Tris/磷酸、Tris/雙甘氨肽、Laemmli體系、Schaegger體系、磷酸鹽緩沖體系、Bis-Tris緩沖體系、Tris-乙酸體系、雙甘氨酸肽-NaOH體系、PIPES-磷酸鈉體系、HEPES/MOPS/MES/Bicine-NaOH體系或MOPS-KOH體系中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，其特征在于，所述的獨(dú)立包裝的丙烯酰胺單體溶液和/或緩沖體系儲(chǔ)備液中包含能產(chǎn)生顏色的物質(zhì)，能產(chǎn)生顏色的物質(zhì)的濃度為O. 01 μ g/ml-lg/ml,優(yōu)選為O.1 μ g/ml-O. lg/ml,更優(yōu)選為I μ g/ml-10mg/ml,最優(yōu)為 10 μ g/ml-lmg/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，其特征在于，所述的混合包裝的丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液中包含能產(chǎn)生顏色的物質(zhì)，能產(chǎn)生顏色的物質(zhì)的濃度為 O. 01 μ g/ml-lg/ml,優(yōu)選為 O.1 μ g/ml-0. lg/ml,更優(yōu)選為 I μ g/ml-10mg/ml,最優(yōu)為 10 μ g/ml-lmg/ml ο
8.權(quán)利要求2或6任一權(quán)利要求所述的試劑盒用于灌制堿性凝膠。
9.權(quán)利要求3或7任一權(quán)利要求所述的試劑盒用于灌制酸性凝膠。
10.上述任一項(xiàng)權(quán)利要求所述試劑盒灌制的凝膠用于生物大分子的分離和分析，所述的生物大分子為脫氧核糖核酸、核糖核酸、多肽、蛋白質(zhì)以及它們的復(fù)合物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種快速灌制聚丙烯酰胺凝膠的試劑盒，包括丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液。其中丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液獨(dú)立包裝，用于灌制堿性凝膠，也可以混合包裝用于灌制酸性凝膠。本發(fā)明的丙烯酰胺單體溶液和緩沖體系儲(chǔ)備液可以包括有色物質(zhì)。制備本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是由于采用上述技術(shù)方案，可以快速的配制聚丙酰胺凝膠，而且長(zhǎng)期保存不降低質(zhì)量，即滿足快速配制的要求，又保證了配制凝膠的檢測(cè)準(zhǔn)確性。配制有顏色的凝膠使凝膠外形輪廓較傳統(tǒng)透明凝膠更易于分辨，保證了檢測(cè)過(guò)程的操作方便性。
文檔編號(hào)C12N15/10GK103013982SQ20121058604
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月28日
發(fā)明者趙波濤, 蔡春海, 楊德華 申請(qǐng)人:上海啟動(dòng)元生物科技有限公司