Stains-All在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及磷酸化蛋白質(zhì)檢測技術(shù)，具體地說就是Stains-All染料在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了應(yīng)用Stains-All在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測的方法，包括步驟：將蛋白質(zhì)樣品電泳后的凝膠在固定液中固定；漂洗；染色；顯影。本發(fā)明具有靈敏度高、選擇性強、操作簡單迅速、重現(xiàn)性好、線性范圍廣、使用安全、成本低廉等優(yōu)點。
【專利說明】Stains-AI I在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測 中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及磷酸化蛋白質(zhì)檢測技術(shù)，具體地說就是涉及磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測的 一種新方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 蛋白質(zhì)磷酸化和去磷酸化的可逆反應(yīng)，是機(jī)體內(nèi)最常見、最重要的翻譯后修飾之 一。它參與了包括細(xì)胞信號傳導(dǎo)，細(xì)胞分化和生長，細(xì)胞代謝凋亡等重要過程。此外，與很 多疾病的發(fā)生機(jī)制，比如癌癥，也密切相關(guān)。但由于存在反應(yīng)瞬時進(jìn)行以及磷酸化蛋白在細(xì) 胞內(nèi)含量較低等困難，使磷酸化蛋白的檢測受到了一定的限制。因此，對磷酸化蛋白的新型 檢測研究具有重要的意義。目前，聚丙烯酰胺凝膠電泳是高效分離和分析蛋白質(zhì)分子的一 種常用方法，使得凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)的檢測技術(shù)對磷酸化蛋白質(zhì)的相關(guān)研究起著至關(guān)重 要的作用。
[0003] 測定磷酸化蛋白質(zhì)含量的方法有多種，目前用于聚丙烯酰胺上磷酸化蛋白質(zhì)研究 和測定的方法有熒光染色法、染料染色法、染料染色結(jié)合銀染法等。磷酸化蛋白質(zhì)染料染色 檢測法因具有快速便捷、價格低廉、低毒等優(yōu)點而成為磷酸化蛋白質(zhì)檢測研究領(lǐng)域的熱點 之一。
[0004] Stains-All為紫色粉末狀結(jié)晶，屬于陽離子碳青花染料。此前曾有報道將 Stains-All用于磷酸化蛋白質(zhì)檢測，但靈敏度很低，大約只有考馬斯亮藍(lán)的十分之一。本發(fā) 明對Stains-All原方法進(jìn)行改進(jìn)，磷酸化蛋白檢測的選擇性和靈敏度與Pro-Q Diamond相 當(dāng)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供Stains-All在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測 中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明所涉及的Stains-All的結(jié)構(gòu)式為
[0007]

【權(quán)利要求】
1. Stains-All在聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測中的應(yīng)用。
2. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的Stains-All為Stains-All甲酰胺溶 液。
3. -種磷酸化蛋白質(zhì)染色檢測方法，其包括步驟： 1) 將經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后的蛋白質(zhì)樣品凝膠置于漂洗液中漂洗2次，每次20min， 其中所述漂洗液為含按體積比為20-50%甲酰胺的水溶液，棄漂洗液； 2) 加入染色液染色10_60min，其中所述染色液為含按重量體積比0.005-0. 02 %的 Stains-All、按體積比為20-40%甲酰胺及按摩爾濃度45mM Tris-HCl (pH9. 2)的水溶液， 棄染色液； 3) 加入顯影液顯影30s-15min，其中所述顯影液為含按重量體積比為0. 5-2%的依地 酸二鈉、按體積比為20-40%乙醇的水溶液，棄顯影液。 4) 檢測。
4. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟1)中所述漂洗液為含按體積比為30% 甲酰胺的水溶液。
5. 如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2)染色液中Stains-All的濃度按重量 體積比為0.01%。
6. 如權(quán)利要求3-5任一項所述的方法，其特征在于，步驟2)中甲酰胺濃度按體積比為 30%。
7. 如權(quán)利要求3-5任一項所述的方法，其特征在于，步驟2)中染色的時間為20min。
8. 如權(quán)利要求3-5任一項所述的方法，其特征在于，步驟3)中依地酸二鈉濃度按重量 體積比為1%。
9. 如權(quán)利要求3-5任一項所述的方法，其特征在于，步驟3)中乙醇濃度按體積比為 30%。
10. 如權(quán)利要求3-5任一項所述的方法，其特征在于，步驟3)中顯影的時間為lmin。
【文檔編號】G01N21/29GK104122131SQ201310170887
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2013年4月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月24日
【發(fā)明者】金利泰, 叢維濤, 朱忠欣, 洪國贏 申請人:溫州安得森生物科技有限公司