專利名稱：藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及食品飲料加工技術(shù)行業(yè)。尤其是涉及添加藻藍(lán)多糖提取液的啤酒、其他酒類和飲料及其制備方法。
背景技術(shù)：
啤酒原料是大麥，在糖化過程中，多數(shù)轉(zhuǎn)化為葡萄糖及麥芽糖，只有3. 5度低度酒精，啤酒的共性是(I)有一定營養(yǎng)，(2)低度飲料酒，(3)風(fēng)味口感大同小異。第九屆世界營養(yǎng)食品會(huì)議推薦啤酒為營養(yǎng)食品，96年我國啤酒年產(chǎn)量已達(dá)1500萬噸，據(jù)世界第二位。我國今后啤酒工業(yè)發(fā)展方向是提高啤酒產(chǎn)品質(zhì)量，擠身世界啤酒先進(jìn)行列，啤酒要在競爭中生存，必須實(shí)施啤酒科學(xué)技術(shù)革新。 啤酒如何向優(yōu)質(zhì)啤酒發(fā)展，其開發(fā)途徑是提高其營養(yǎng)性和保健功能，而螺旋藻是一種含有豐富的蛋白質(zhì)、多糖礦物質(zhì)、維生素以及多種微量元素等的海洋綠色生物，多年來被應(yīng)用于藥品、保健品和飲料等。它不僅可以添加到啤酒中，還可以添加到白酒中及其它調(diào)制飲料酒、果酒及飲料中。但是，螺旋藻產(chǎn)品以螺旋藻干粉制成的片劑和膠囊居多，即，將螺旋藻干粉直接添加到食品中，導(dǎo)致口感不好，也不利用消化和吸收，尤其是在飲料中產(chǎn)生沉淀和懸浮物。而且，由螺旋藻提取的主要成分多為藻藍(lán)蛋白和多糖，而缺乏螺旋藻葉綠素成分。同時(shí)，螺旋藻葉綠素為堿性物質(zhì)，在酸性飲料中會(huì)析出而使?fàn)I養(yǎng)成分受到破壞，難以溶解在飲料中，所以為了保留該成分必須進(jìn)行特殊處理。目前，飲料用尤其啤酒專用螺旋藻提取液的制備是將螺旋藻葉綠素、螺旋藻藻藍(lán)蛋白和螺旋藻多糖等成分適當(dāng)組合得到專門用于飲料特別是啤酒生產(chǎn)的螺旋藻提取液產(chǎn)品。該螺旋藻提取液采用的提取方法主要包括提取葉綠素、藻藍(lán)蛋白的提取、組合酶解、熱水提取等過程，包括(I)螺旋藻葉綠素的提取及其鐵納鹽的制備；(2)藻藍(lán)蛋白的提取；
(3)游離氨基酸、寡膚、寡糖的提取(4)螺旋藻多糖的提取。上述螺旋藻制備方法提取充分，所得營養(yǎng)液包括螺旋藻葉綠素、螺旋藻藻藍(lán)蛋白、螺旋藻多糖等成分，其中螺旋藻葉綠素含量達(dá)到8%以上。上述的螺旋藻提取液及其制備方法，提取過程中保留了螺旋藻葉綠素成分，并可用于飲料尤其是啤酒添加，且不污染環(huán)境，操作方便，易用于工業(yè)化生產(chǎn)。但是，目前提取的螺旋藻多糖多為螺旋藻粗多糖，沒有作清除蛋白質(zhì)處理的流程工藝，使其產(chǎn)品防輻射功能減弱或無防輻射功能。其色素類(藻藍(lán)素、葉綠素)穩(wěn)定性差。存放時(shí)間長后會(huì)流失。上述制備的提取液，含有多糖類及蛋白質(zhì)高營養(yǎng)物質(zhì)，容易發(fā)生變質(zhì)，在儲(chǔ)運(yùn)過程和冷凍入庫中保存時(shí)間短，有變質(zhì)風(fēng)險(xiǎn)?，F(xiàn)有螺旋藻提取液的設(shè)備工藝還存在以下缺點(diǎn)(I)螺旋藻提取液得率低；(2)有少許藻腥味；(3)易發(fā)生沉淀；(4)啤酒中會(huì)產(chǎn)生肉眼不易看見的絲狀物，其產(chǎn)生原因是螺旋藻中的蛋白質(zhì)或藻藍(lán)蛋白與啤酒中乙酸乙脂發(fā)生反應(yīng)的產(chǎn)物；(5)降解酒精與麥芽度，使啤酒返生。
專利號(hào)為00108822. X《螺旋藻液保綠的方法》，其主要技術(shù)特征是在螺旋藻養(yǎng)殖池，特別是大面積露天開放螺旋藻養(yǎng)殖池中提取基本原理，添加鎂及鐵元素，從而提高葉綠素及藻藍(lán)素含量，并達(dá)到短時(shí)間使螺旋藻返綠。該工藝是露天開放養(yǎng)殖池，其采光受天氣變化“聽天由命”，光照時(shí)間及強(qiáng)度不可控，影響產(chǎn)品質(zhì)量，

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述缺點(diǎn)和不足，提出一種藻藍(lán)多糖提取液及其制備方法，該提取液加入啤酒及其他酒類和飲料中，制成藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料，可以起到預(yù)防電離輻射及放射性微粒的功效。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，一種藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料，所述藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料是由首先從螺旋藻中提取的純多糖、藻藍(lán)素和從竹葉中提取葉綠素，然后按比例添加，和食用酒精及蒸餾水混合攪拌，通過巴氏消毒殺菌制成藻藍(lán)多糖提取液，將此提取 液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和飲料中，成為功能型的綠啤和功能型的白酒、調(diào)制果酒系列酒品和飲料；其中，所述藻藍(lán)多糖提取液的成分按重量比分別為螺旋藻純多糖占2% -16%,螺旋藻藻藍(lán)素占O. 5% -10%，竹葉葉綠素占1-20%，食用酒精占5-15%，蒸餾水占39-91. 5%，其總量比例為100%。所述藻藍(lán)多糖提取液配制比例為螺旋藻純多糖占2 % -16 %，螺旋藻藻藍(lán)素占0.5% _5%，竹葉葉綠素占1_20%，食用酒精占10%，蒸餾水占49-86. 5%，獲取藍(lán)色液體提取液；1-5%的所述提取液和95-99%黃啤配置成通用型綠啤；3-7%的所述提取液和93-95%的黃啤配置成保健型綠??；4-10%的所述提取液和90-96%的黃啤配置成功能高保健型綠啤。所述藻藍(lán)多糖提取液配制比例為螺旋藻純多糖占3-16%，螺旋藻藻藍(lán)素占O. 1_1%，竹葉葉綠素占2-16%，食用酒精占10%，蒸餾水占57-85%，獲取綠色液體提取液；1-8 %的所述提取液和92-99 %白酒配置成保健型藻藍(lán)多糖綠色酒，3-16 %的所述提取液和84-97%白酒配置成通用型藻藍(lán)多糖綠色酒。所述藻藍(lán)多糖提取液配制比例為螺旋藻純多糖占3-12%，螺旋藻藻藍(lán)素占2-4%，竹葉葉綠素占2-4% ;所述提取液為藍(lán)綠色液體，1-5%的所述藻藍(lán)多糖藍(lán)綠提取液和95-99 %的飲料配置成果酒及飲料系列。本發(fā)明還提出一種藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料的制備方法，所述藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料的制備方法首先由將螺旋藻純多糖、螺旋藻藻藍(lán)素和竹葉葉綠素，按比例添加，和食用酒精及蒸餾水混合攪拌，通過巴氏消毒殺菌制成藻藍(lán)多糖提取液，然后，將此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和飲料中，成為功能型的綠啤和功能型的白酒、調(diào)制果酒系列酒品和飲料；其中，所述螺旋藻純多糖的提取是先提取螺旋藻粗多糖，并從粗多糖中分離蛋白質(zhì)，經(jīng)純化獲得螺旋藻多糖單一純品；其具體工藝為先將螺旋藻干粉進(jìn)行破壁處理，用低極性溶劑去親脂性成分，經(jīng)熱水抽提或堿液冷提取或采用微波輔助提取，取上清液濃縮，乙醇醇析后離心、干燥得螺旋藻粗多糖，螺旋藻中蛋白質(zhì)約占細(xì)胞干重的60-70% ；所述分離蛋白質(zhì)，包括Sevag法、泡沫分離技術(shù)、三氯乙酸(TCA)法、加熱濃縮法和酶法，最佳為利用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的雙酶法進(jìn)行多糖提取工藝，測得殘留的蛋白質(zhì)含量為3% ；所述純化是通過水提液抽提所得到的粗多糖可能含有的多個(gè)混合糖組分及小分子雜質(zhì)，進(jìn)一步分級(jí)純化得到螺旋藻多糖單一純品。所述的制備方法采用的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶雙酶法進(jìn)行多糖提取工藝如下選用螺旋藻粉一配成12%的藻粉溶液一胰蛋白酶水解一木瓜蛋白酶水解一真空濃縮一酒精沉淀一丙酮洗滌一冷凍干燥一多糖粗制品一離子交換層析一透析一凝膠層析一冷凍干燥真空濃縮在70-80°C真空濃縮至含固形物20% ;酒精沉淀分離，在濃縮液中加入5倍體積的95%乙醇，使螺旋藻多糖呈絮狀沉淀析出，大部分蛋白質(zhì)和其它成分保留在溶液中，4000r/min離心15min得沉淀,得到2個(gè)多糖組分,其中，組分I的單糖組成為D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖和葡萄糖醛酸；組分2的單糖組成為D-葡萄糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸。 ，所述胰蛋白酶水解的胰蛋白酶作用溫度為55°C，胰蛋白酶作用PH值在6.2-7. 2胰蛋白酶保溫時(shí)間為2. 5h，酶用量為3. 0% ;所述木瓜蛋白酶進(jìn)行二次水解的加酶量3%，PH值6. 5，作用溫度為40°C，保溫20h。所述離子交換層析分離多糖采用20Xlcm的DEAE-Sep harose柱進(jìn)行多糖分離用O. 01mol/L、PH8. O的吡啶-鹽酸緩沖液平衡離子交換柱，粗多糖的上樣量為8ml，流速為25ml/h，用O. 01mol/L、PH8. O的吡啶-鹽酸緩沖液及0-2mol/L的NaCl進(jìn)行梯度洗脫，分別收集，冷凍干燥得組分I和組分2。所述純化為分級(jí)純化，其方法包括離子交換纖維素層析離子交換和纖維素層析結(jié)合起來制成一系列離子交換纖維素層析，溶出各種多糖，用于分離糖類；分離過程中采用NaCl溶液或磷酸緩沖溶液梯度洗脫，得到不同級(jí)分的單一組分；所述凝膠過濾法是將多糖制品經(jīng)DEAE纖維素分離后，進(jìn)一步用凝膠過濾法純化得到均一多糖純品，經(jīng)凝膠層析分離多糖，將多糖樣品經(jīng)酸解、紙層析得單糖組分I和組分2。所述藻藍(lán)多糖綠啤在配置時(shí)，將藻藍(lán)多糖提取液混合使用前先將它用巴氏消毒殺菌再和啤酒混和后發(fā)酵，以免產(chǎn)生沉淀，加入的程序可在啤酒發(fā)酵時(shí)，將煮沸后的麥芽汁冷卻前加入或在煮麥芽汁時(shí)一并加入，其流程為麥芽一粉碎一糖化一過濾一麥芽汁煮沸一酒花分離一麥芽汁沉淀及冷卻。所述藻藍(lán)多糖綠酒的配制時(shí)，藻藍(lán)多糖提取液添加到白酒中的流程為原料的蒸煮，使淀粉糊化一拌曲封閉發(fā)酵，經(jīng)糖化、發(fā)酵產(chǎn)酒精一甑桶或蒸餾斧蒸餾一基酒的貯存一勾兌一貯存。本發(fā)明的藻藍(lán)多糖提取液是從竹葉中提煉葉綠素，所獲得的藻藍(lán)多糖提取液配入啤酒中，經(jīng)大量試驗(yàn)檢測及中試，具有如下特點(diǎn)(I)啤酒呈淡綠色，清微透明悅目；(2)原啤酒風(fēng)味口感不變；(3)長時(shí)間內(nèi)不發(fā)生沉淀；(4)不改變原啤酒酒精度.不返生；(5)比原啤酒具有較高營養(yǎng)性，長時(shí)間飲用具有保健作用；(6)能使飲用者提高飲量及非食不可之感，無任何不良反應(yīng)和副作用。優(yōu)于目前用現(xiàn)有技術(shù)制得螺旋藻提取液；本發(fā)明采用的是消除蛋白質(zhì)的螺旋藻純多糖，藻藍(lán)素不含蛋白質(zhì)，應(yīng)用到藻藍(lán)多糖提取液綠啤及酒類和飲料中，用此具有防輻射功能?？馆椛浼胺垒椛渎菪宥嗵潜仨毷窍鞍踪|(zhì)后螺旋藻純多糖，它是一種白色的粉末或晶體，它由葡萄糖、鼠李糖、木糖、半乳糖、甘露糖等組成。


圖1顯示藻藍(lán)素的結(jié)構(gòu)；圖2顯示藻藍(lán)素的UV-VIS譜；圖3顯示藻藍(lán)素IR譜。
具體實(shí)施例方式為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施例，對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。本發(fā)明的藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料是由從螺旋藻中提取的純多糖、藻藍(lán)素和從竹葉中提取葉綠素，然后按比例添加和食用酒精及蒸餾水混合攪拌均勻，通過巴氏消毒殺菌成藻藍(lán)多糖提取液。并將此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和飲料中，成為功能型的綠啤和功能型的白酒、調(diào)制果酒等系列酒品和飲料。一、藻藍(lán)多糖提取液的組成本發(fā)明的藻藍(lán)多糖提取液由螺旋藻純多糖、螺旋藻藻藍(lán)素和從竹葉中提取葉綠素配制而成，其中，其成分為螺旋藻純多糖占2% -16%，螺旋藻藻藍(lán)素占0.5% -5%，竹葉葉綠素占1_20%，食用酒精占10%，蒸餾水占49-86. 5%，其總量比例為100%。二、藻藍(lán)多糖提取液中各個(gè)成分的制備工藝1、螺旋藻純多糖的提取方法I)第一種制備螺旋藻純多糖的方法先提取螺旋藻粗多糖，并從粗多糖中分離蛋白質(zhì)，經(jīng)純化獲得螺旋藻多糖單一純品。A、粗提提取螺旋藻多糖(polysaccharide of Spirulina. PS)時(shí),先將螺旋藻干粉進(jìn)行破壁處理，用低極性溶劑去親脂性成分，經(jīng)熱水抽提或堿液冷提取(可采用微波輔助提取)，取上清液濃縮，乙醇醇析后離心、干燥得螺旋藻粗多糖。螺旋藻中蛋白質(zhì)約占細(xì)胞干重的60 70%，因此提取螺旋藻多糖的關(guān)鍵是有效地去除蛋白質(zhì)。B、分離蛋白質(zhì)，目前，去蛋白的方法主要有以下幾種Sevag法、泡沫分離技術(shù)、三氯乙酸(TCA)法、加熱濃縮法、酶法。Sevag法是去蛋白質(zhì)的經(jīng)典方法，通常只適用于除少量蛋白，而且必須重復(fù)多次。TCA法去蛋白能縮短流程，多糖損失率降低，有利于后繼純化。用酶法降解蛋白質(zhì)能提高多糖粗產(chǎn)品的得率，但所得成分中仍有30%以上的蛋白質(zhì)。采用雙酶法(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶)進(jìn)行多糖提取工藝，測得殘留的蛋白質(zhì)含量為3%。C、純化通過水提液抽提所得到的粗多糖可能含有多個(gè)混合糖組分及小分子雜質(zhì)，須進(jìn)一步分級(jí)純化才能得到螺旋藻多糖單一純品。一般以層析后觀察到單一狹窄的峰作為純度鑒定的標(biāo)準(zhǔn)。常用的純化方法有(I)離子交換纖維素層析離子交換和纖維素層析結(jié)合起來制成一系列離子交換纖維素層析是基于樹脂對不同的離子的親和力不同，溶出各種多糖，用于分離糖類。分離過程中常采用NaCl溶液或磷酸緩沖溶液梯度洗脫，可以得到不同級(jí)分的單一組分。常見的有DEAE 纖維素、以及 DEAE-Sepharose。(2)凝膠過濾法多糖制品經(jīng)DEAE纖維素分離后，需進(jìn)一步用凝膠過濾法純化才能得到均一多糖純品。凝膠過濾法是一種用具有一定孔徑大小的凝膠顆粒為支持物的層析方法，可分離大小和形狀不同的分子，用于分離不同聚合度的糖類特別有效。葡聚糖凝膠(Sephadex G)，瓊脂糖凝膠(Sepharose)，聚丙烯酰胺凝膠(Bio-gel P)均為親水性凝膠，都廣泛用于多糖的純化。螺旋藻多糖的純化過程一般采用Sephadex GlOO或SephadexG200、Sepharyl SlOO0但Sephadex G本身是糖類,難免在洗脫液中沾上凝膠上洗脫下來的糖分，可能會(huì)造成精制多糖的不純。純化后多糖含量的測定用硫酸蒽酮法跟蹤檢測。2)第二種更高效的螺旋藻多糖提取新工藝。即采用雙酶法(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶)進(jìn)行多糖提取工藝，脫蛋白效果接近100%，粗多糖采用離子交換層析及凝膠層析進(jìn)一步純化，并通過紙層析測其組成。通過DEAE-Sepharose和Sep hadex_G50純化粗多糖,得到2個(gè)多糖組分。經(jīng)測定組分I的單糖組成為D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸；組分2的單糖組成為D-葡萄糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸。 具體工藝如下螺旋藻粉一配成12%的藻粉溶液一胰蛋白酶水解一木瓜蛋白酶水解一真空濃縮—酒精沉淀一丙酮洗滌一冷凍干燥一多糖粗制品一離子交換層析一透析一凝膠層析一冷凍干燥真空濃縮在70 80°C真空濃縮至含固形物20%。酒精沉淀分離在濃縮液中加入5倍體積的95%乙醇，使螺旋藻多糖呈絮狀沉淀析出，大部分蛋白質(zhì)和其它成分保留在溶液中，4000r/min離心15min得沉淀。胰蛋白酶水解胰蛋白酶最適作用溫度的確定，胰蛋白酶的最適作用溫度為55°C，此時(shí)酶解脫蛋白效果最好。胰蛋白酶最適作用PH值的確定，胰蛋白酶在6. 2 7. 2的范圍內(nèi)具有較高的酶活力。胰蛋白酶酶解時(shí)間的確定，胰蛋白酶作用2. 5h后多糖粗產(chǎn)品中蛋白質(zhì)含量不再明顯下降，因此蛋白酶作用2. 5h后可終止反應(yīng)。胰蛋白酶最適作用量的確定，酶用量達(dá)到
3.O %以后脫蛋白效果不再明顯增加，所以酶用量確定為3. 0%。利用木瓜蛋白酶進(jìn)行二次水解加酶量3%，在PH6. 5的緩沖液中，40°C，保溫20h，經(jīng)常振搖。酶解液經(jīng)真空濃縮、酒精沉淀后，測得殘留蛋白質(zhì)含量為3%。離子交換層析分離多糖米用DEAE-Sep harose 柱(20Xlcm)進(jìn)行多糖分離用 O. 01mol/L、PH8. O 的批啶-鹽酸緩沖液平衡離子交換柱，粗多糖的上樣量為8ml，流速為25ml/h，用O. Olmol/L、PH8. O的吡啶-鹽酸緩沖液及O 2mol/L的NaCl進(jìn)行梯度洗脫，得圖1所示曲線。將該曲線的兩個(gè)峰分別收集，冷凍干燥得粗分組I和粗分組2。凝膠層析分離多糖多糖樣品經(jīng)酸解、紙層析得單糖組成為組分I為D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸；組分2的單糖組成為D-葡萄糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸。原料對比2 《一種螺旋藻提取液及其制備工藝》螺旋藻多糖的提取是從酶解后的藻渣中離心留下上清液，再將殘?jiān)鼉纱翁崛。瑑纱坞x心，合并加中性蛋白酶，經(jīng)透析后得到螺旋藻活性多糖溶液。由于采用藻渣提取，所獲得的螺旋藻多糖得率很少，不具有抗輻射功倉泛。本發(fā)明的螺旋藻多糖(PSP)是以新鮮藻泥和藻粉為基礎(chǔ)原料，用改良的三氯乙酸法進(jìn)行提取，所得產(chǎn)品多糖質(zhì)量含量達(dá)92%以上，優(yōu)于傳統(tǒng)的SEVDG法。優(yōu)于上述殘?jiān)鼉纱坞x心提取法。2、螺旋藻中藻藍(lán)素的提取方法藻藍(lán)素是從藍(lán)藻中提取的色素，它是自然界為數(shù)很少的鮮艷的天然藍(lán)色素。它是開鏈的四吡咯化合物(見圖1)，多與蛋白質(zhì)通過硫醚鍵結(jié)合在一起。藻藍(lán)素溶液不發(fā)熒光，但與鋅離子結(jié)合形成熒光鹽絡(luò)合物。一般不作為藍(lán)色色素單獨(dú)使用，多與其他天然色素混合使用在果汁、飲料中等。同時(shí)，藻藍(lán)素是吸收光能和傳遞激發(fā)能的重要光合素，在光合作用原初過程的研究中有重要的意義。
從螺旋藻中提取藻膽蛋白，用甲醇解離其硫醚鍵的藻藍(lán)素。其最佳解離條件是溫度為40°C，解離時(shí)間為24h，V(甲醇)m(藻膽蛋白)= 200 1.提取率可達(dá)1.5%，產(chǎn)物的UV、IR和文獻(xiàn)相符。藻藍(lán)素發(fā)色團(tuán)在酸性溶液中呈比較擴(kuò)展型，而在中性溶液中呈比較閉合的結(jié)構(gòu)。所使用材料與儀器UV用日立U-3400紫外可見光譜儀測定；IR用Pekin_Elmer983型紅外光譜儀測定；層析用硅膠為青島海洋化工廠產(chǎn)品；藻粉購自廣西北海市綠海生物保健食品有限責(zé)任公司；所用其它試劑為分析純。制備方法I)藻膽蛋白的提取按現(xiàn)有方法提取藻膽蛋白后，在0. lmol/L,pH = 7. 0磷酸緩沖溶液透析48h，低溫濃縮，95%乙醇沉淀，離心，依次用石油醚、丙酮、甲醇洗至無色。真空干燥得變性藻膽蛋白。2)藻膽蛋白甲醇解得藻藍(lán)素稱取5g變性藻膽蛋白，加入IOOOmli阿春，恒溫40°C，攪拌24h，抽濾，濾液濃縮至干、殘留物溶解在8 IOml含2. 5%甲醇的氯仿溶液中，離心，上清液在25°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，殘留物溶解在2ml含2. 5%甲醇的氯仿溶液中，7倍體積的石油醚沉淀藻藍(lán)素，石油醚洗滌。以氯仿/甲醇(4/1)為展開體系，用硅膠薄層層析進(jìn)行分離，將Rf值為0.96和0.88的兩條藍(lán)色色帶刮下來后，用甲醇溶解萃取，真空低溫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，然后再用同樣薄層層析方法提純一次。分別得到藻藍(lán)素的兩個(gè)構(gòu)型異構(gòu)體。產(chǎn)品分析產(chǎn)品為藍(lán)色粉末狀固體，難溶于水，易溶于氯仿、苯、甲醇等有機(jī)溶劑。對光、熱都不穩(wěn)定，特別是Rf值為0. 88的異構(gòu)體更不穩(wěn)定，易轉(zhuǎn)變?yōu)樽霞t色物質(zhì)(Rf = 0. 92)。Rf值為0. 96的異構(gòu)體紫外如圖2，￡>=643_ gnm (pH = 3，酸性氯仿)；IR (溴化鉀壓片法)如圖 3 :3308.601^(7^),2923.401-1(7.),2857. Ocm-1 (V_CH2_), 1706. OcmQcm-1 ( V—), 1597. Ocm-1 (V_CH_CH_)。解離溫度對提取率的影響
解離藻膽蛋白得藻藍(lán)素的關(guān)鍵是解離溫度。因藻藍(lán)素對光熱不穩(wěn)定，隨著解離溫度的升高，藻藍(lán)素的共軛鏈和構(gòu)型被轉(zhuǎn)化，逐漸變?yōu)樽霞t色物質(zhì)，因而藻藍(lán)素的提取率顯著降低。解離溫度與藻藍(lán)素提取率關(guān)系如表1.表I溫度與藻藍(lán)素提取率的關(guān)系
權(quán)利要求
1.一種藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料，其特征在于，所述藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料是由首先從螺旋藻中提取的純多糖、藻藍(lán)素和從竹葉中提取葉綠素，然后按比例添加，和食用酒精及蒸餾水混合攪拌，通過巴氏消毒殺菌制成藻藍(lán)多糖提取液，將此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和飲料中，成為功能型的綠啤和功能型的白酒、調(diào)制果酒系列酒品和飲料； 其中，所述藻藍(lán)多糖提取液的成分按重量比分別為螺旋藻純多糖占2% -16%，螺旋藻藻藍(lán)素占O. 5% _10%，竹葉葉綠素占1_20%，食用酒精占5-15%，蒸餾水占39-91. 5%,其總量比例為100%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料，其特征在于，所述藻藍(lán)多糖提取液配制比例為螺旋藻純多糖占2% -16%，螺旋藻藻藍(lán)素占O. 5% _5%，竹葉葉綠素占1-20%，食用酒精占10 %，蒸餾水占49-86. 5 %，獲取藍(lán)色液體提取液；1-5 %的所述提取液和95-99%黃啤配置成通用型綠??；3-7%的所述提取液和93-95%的黃啤配置成保健型綠?。?-10%的所述提取液和90-96%的黃啤配置成功能高保健型綠啤。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料，其特征在于，所述藻藍(lán)多糖提取液配制比例為螺旋藻純多糖占3-16%，螺旋藻藻藍(lán)素占O. 1_1%，竹葉葉綠素占2-16%，食用酒精占10%，蒸餾水占57-85%，獲取綠色液體提取液；1-8%的所述提取液和92-99%白酒配置成保健型藻藍(lán)多糖綠色酒，3-16%的所述提取液和84-97%白酒配置成通用型藻藍(lán)多糖綠色酒。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料，其特征在于，所述藻藍(lán)多糖提取液配制比例為螺旋藻純多糖占3-12%，螺旋藻藻藍(lán)素占2-4%，竹葉葉綠素占2-4%;所述提取液為藍(lán)綠色液體，1-5%的所述藻藍(lán)多糖藍(lán)綠提取液和95-99%的飲料配置成果酒及飲料系列。
5.一種藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料的制備方法，其特征在于，所述藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料的制備方法首先由將螺旋藻純多糖、螺旋藻藻藍(lán)素和竹葉葉綠素，按比例添加，和食用酒精及蒸餾水混合攪拌，通過巴氏消毒殺菌制成藻藍(lán)多糖提取液，然后，將此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和飲料中，成為功能型的綠啤和功能型的白酒、調(diào)制果酒系列酒品和飲料； 其中，所述螺旋藻純多糖的提取是先提取螺旋藻粗多糖，并從粗多糖中分離蛋白質(zhì)，經(jīng)純化獲得螺旋藻多糖單一純品；其具體工藝為先將螺旋藻干粉進(jìn)行破壁處理，用低極性溶劑去親脂性成分，經(jīng)熱水抽提或堿液冷提取或采用微波輔助提取，取上清液濃縮，乙醇醇析后離心、干燥得螺旋藻粗多糖，螺旋藻中蛋白質(zhì)約占細(xì)胞干重的60-70% ； 所述分離蛋白質(zhì)，包括Sevag法、泡沫分離技術(shù)、三氯乙酸(TCA)法、加熱濃縮法和酶法，最佳為利用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的雙酶法進(jìn)行多糖提取工藝，測得殘留的蛋白質(zhì)含量為3% ； 所述純化是通過水提液抽提所得到的粗多糖可能含有的多個(gè)混合糖組分及小分子雜質(zhì)，進(jìn)一步分級(jí)純化得到螺旋藻多糖單一純品。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料的制備方法，其特征在于，所述的制備方法采用的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶雙酶法進(jìn)行多糖提取工藝如下選用螺旋藻粉一配成12%的藻粉溶液一胰蛋白酶水解一木瓜蛋白酶水解一真空濃縮一酒精沉淀一丙酮洗滌一冷凍干燥一多糖粗制品一離子交換層析一透析一凝膠層析一冷凍干燥真空濃縮在70-80°C真空濃縮至含固形物20% ;酒精沉淀分離，在濃縮液中加入5倍體積的95%乙醇，使螺旋藻多糖呈絮狀沉淀析出，大部分蛋白質(zhì)和其它成分保留在溶液中，4000r/min離心15min得沉淀，得到2個(gè)多糖組分，其中，組分I的單糖組成為D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖和葡萄糖醛酸；組分2的單糖組成為D-葡萄糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料的制備方法，其特征在于，所述胰蛋白酶水解的胰蛋白酶作用溫度為55°C，胰蛋白酶作用PH值在6. 2-7. 2胰蛋白酶保溫時(shí)間為2. 5h，酶用量為3. 0% ;所述木瓜蛋白酶進(jìn)行二次水解的加酶量3%，PH值6. 5，作用溫度為40°C，保溫20h。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料的制備方法，其特征在于，所述離子交換層析分離多糖采用20Xlcm的DEAE-Sep harose柱進(jìn)行多糖分離用O. Olmol/L、PH8. O的吡啶-鹽酸緩沖液平衡離子交換柱，粗多糖的上樣量為8ml，流速為25ml/h，用O.01mol/L、PH8. O的吡啶-鹽酸緩沖液及0-2mol/L的NaCl進(jìn)行梯度洗脫，分別收集，冷凍干燥得組分I和組分2。
9.根據(jù)權(quán)利要求6任一項(xiàng)所述的藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料的制備方法，其特征在于，所述純化為分級(jí)純化，其方法包括 離子交換纖維素層析離子交換和纖維素層析結(jié)合起來制成一系列離子交換纖維素層析，溶出各種多糖，用于分離糖類；分離過程中采用NaCl溶液或磷酸緩沖溶液梯度洗脫，得到不同級(jí)分的單一組分； 所述凝膠過濾法是將多糖制品經(jīng)DEAE纖維素分離后，進(jìn)一步用凝膠過濾法純化得到均一多糖純品，經(jīng)凝膠層析分離多糖，將多糖樣品經(jīng)酸解、紙層析得單糖組分I和組分2。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料的制備方法，其特征在于，所述藻藍(lán)多糖綠啤在配置時(shí)，將藻藍(lán)多糖提取液混合使用前先將它用巴氏消毒殺菌再和啤酒混和后發(fā)酵，以免產(chǎn)生沉淀，加入的程序可在啤酒發(fā)酵時(shí)，將煮沸后的麥芽汁冷卻前加入或在煮麥芽汁時(shí)一并加入，其流程為麥芽一粉碎一糖化一過濾一麥芽汁煮沸一酒花分離一麥芽汁沉淀及冷卻； 所述藻藍(lán)多糖綠酒的配制時(shí)，藻藍(lán)多糖提取液添加到白酒中的流程為原料的蒸煮，使淀粉糊化一拌曲封閉發(fā)酵，經(jīng)糖化、發(fā)酵產(chǎn)酒精一甑桶或蒸餾斧蒸餾一基酒的貯存一勾兌—貯存。
全文摘要
本發(fā)明是一種藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料及其制備方法，藻藍(lán)多糖綠啤及酒類和飲料是由首先從螺旋藻中提取的純多糖、藻藍(lán)素和從竹葉中提取葉綠素，然后按比例添加，和食用酒精及蒸餾水混合攪拌，通過巴氏消毒殺菌制成藻藍(lán)多糖提取液，將此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和飲料中，成為功能型的綠啤和功能型的白酒、調(diào)制果酒系列酒品和飲料；其中，所述藻藍(lán)多糖提取液的成分按重量比分別為螺旋藻純多糖占2％-16％，螺旋藻藻藍(lán)素占0.5％-10％，竹葉葉綠素占1-20％，食用酒精占5-15％，蒸餾水占39-91.5％，其總量比例為100％。本發(fā)明采用的是消除蛋白質(zhì)的螺旋藻純多糖，藻藍(lán)素不含蛋白質(zhì)，應(yīng)用到藻藍(lán)多糖提取液綠啤及酒類和飲料中，具有防輻射功能。
文檔編號(hào)C12G3/04GK103013726SQ20121053181
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月12日
發(fā)明者趙波 申請人:趙波