一種寡聚核酸分子及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，所述寡聚核酸分子一方面可由兩個核酸片段連接而成，其中第一核酸片段為一發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，該序列的5’末端被磷酸化，3’末端的部分序列與第二核酸片段的3’末端的部分序列互補，第一核酸片段與一種可篩選標記物連接；第二核酸片段包括兩個核酸序列區(qū)域，其5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列完全或部分互補，3’端區(qū)域與第一片段的3’端部分序列完全或部分互補；另一方面，所述寡聚核酸分子為一條包含以上序列特征的直接合成的核酸片段。進一步的，本發(fā)明提供了使用上述寡聚核酸分子分離小分子RNA的方法、以及使用上述寡聚核酸分子和方法純化小分子RNA的試劑盒。
【專利說明】—種寡聚核酸分子及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】。更具體地說，本發(fā)明涉及一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子、利用該寡聚核酸分子分離小分子RNA的方法及用于該方法的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，小分子RNA-100個核苷酸或更小的RNA分子是極為引人關(guān)注的領(lǐng)域，并且在分子治療領(lǐng)域很有前途。這些小分子RNA主要包括微小RNA分子(microRNA，簡寫做miRNA)和小干擾RNA分子(small interfering RNA,簡寫做siRNA),由于這兩種RNA分子都能夠與靶mRNA雜交，所以能夠調(diào)芐基因表達。在不同的組織、器官和不同的發(fā)育時期，miRNA和/或siRNA的表達是不同的，它們可能在各種生物發(fā)育、生理活動、疾病發(fā)生過程中起重要的調(diào)節(jié)作用。這些小分子RNA的錯誤表達會導(dǎo)致腫瘤、自身免疫性疾病等的發(fā)生。因此，對這些小分子RN A的研究，尤其是對它們的定量研究將對它們的生物功能的研究起到重要推動作用。
[0003]但是，以目前廣泛進行的miRNA的研究為例,無論是Northern blot、miRNA克隆還是實時定量PCR方法，都是使用總RNA作為樣品。由于成熟的miRNA分子產(chǎn)生于miRNA前體，與其前體具有共同的序列，因此使用總RNA進行研究必然導(dǎo)致不準確的結(jié)果。中國專利申請200480025190.7采用固相支持物如硅膜等吸附的方式分離小分子RNA。中國專利申請200810036769.3公開了一種通過分子篩方法分離小分子核酸的方法，該方法使得具有相同或相近似分子量的核酸分子一起被分離。上述方法雖然可以分離到小分子RNA，但是通常得到的產(chǎn)物中還混雜有其他非靶RNA。
[0004]對于miRNA研究來說，一個關(guān)鍵問題就是特異性分離得到這些小分子RNA。因此，本領(lǐng)域仍需提供一種高效特異的分離小分子RNA的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，通過與特異性的小分子RNA互補配對,實現(xiàn)對目標RNA分子的分尚。
[0006]本發(fā)明涉及以下按順序編號的段落中定義的主題:
[0007]1、一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由連續(xù)的兩段核酸序列構(gòu)成，其中第一核酸序列為一發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，其3’端區(qū)域與第二核酸序列的3’端區(qū)域完全或部分互補；第二核酸序列由5’端區(qū)域和3’端區(qū)域組成，其5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列完全或部分互補，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補。
[0008]2、一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由連續(xù)的兩段核酸序列構(gòu)成，其中第一核酸序列為一發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，其3’端區(qū)域與第二核酸序列的3’端區(qū)域完全或部分互補，第一核酸序列與一種可篩選標記物連接，可篩選標記物可標記在寡聚核酸分子的中間位置或末端位置；第二核酸序列由5’端區(qū)域和3’端區(qū)域組成，其5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列完全或部分互補，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補。
[0009] 3、段落1-2任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子為包含至少一個核糖核苷酸(RNA)分子的雜合分子。
[0010]4、段落1-3任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端區(qū)域和3’端區(qū)域之間無間隔序列。
[0011]5、段落1-3任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端區(qū)域和3’端區(qū)域之間包含至少一個堿基的間隔序列。
[0012]6、段落1-5任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子為包含化學(xué)修飾的寡聚核酸分子，所述修飾為如下的修飾中的至少一種:
[0013](I)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的修飾；
[0014](I)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中連接核苷酸的磷酸二酯鍵的修飾；
[0015](3)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中堿基的修飾。
[0016]7、段落6所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修飾為對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’ -OH的修飾。
[0017]8、段落6-7任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修飾為所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’ -OH被甲氧基或氟取代。
[0018]9、段落1-8任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子中包含至少一個鎖核酸(LNA)分子。
[0019]10、段落2所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述可篩選標記物選自生物素、地高辛或特異性核酸序列。
[0020]11、段落10所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述特異性核酸序列選自oligodT、oligo dA、oligo dC、或 oligo dG。
[0021]12、段落1-2任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于第二核酸序列5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列充分互補，能夠形成有效的雜交。
[0022]13、段落1-2任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于第二核酸序列5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA的互補區(qū)域的長度為至少4個堿基。
[0023]14、段落1-2任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述小分子RNA選自microRNA、siRNA、pi RNA、snoRNA 或 snRNA。
[0024]15、段落1-14任一項所述的寡聚核酸分子的制備方法，其特征在于分別獲得所述第一核酸序列片段和第二核酸序列片段，其中第一核酸序列片段為5’末端磷酸化的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，其3’端區(qū)域與第二核酸序列的3’端區(qū)域完全或部分互補，第一核酸序列與一種可篩選標記物連接；第二核酸序列由5’端區(qū)域和3’端區(qū)域組成，其5’端區(qū)域與待分離小分子RNA序列完全或部分互補，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補；進一步使第一核酸序列片段與第二核酸序列片段連接，成為一個寡聚核酸分子。
[0025]16、段落1-14任一項所述的寡聚核酸分子的制備方法，其特征在于直接合成包含所述第一核酸序列和第二核酸序列的寡聚核酸分子。
[0026]17、一種小分子RNA的分離方法，包括以下步驟:1)獲得段落1_14任一項所述的至少一種特異于待分離小分子RNA的寡聚核酸分子；2)將至少一種寡聚核酸分子與含有待分離小分子RNA的樣品混合，使寡聚核酸分子與待分離的小分子RNA雜交形成寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物；3)利用與寡聚核酸分子連接的可篩選標記物進行寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物的分離；4)獲得分離的小分子RNA。
[0027]18、一種microRNA的分離方法，包括以下步驟:I)獲得段落1_14任一項所述的特異于待分離miCToRNA的寡聚核酸分子；2)將至少一種寡聚核酸分子與含有待分離microRNA的樣品混合，使寡聚核酸分子與待分離的microRNA雜交形成寡聚核酸分子-microRNA復(fù)合物；3)利用與寡聚核酸分子連接的可篩選標記物進行寡聚核酸分子-microRNA復(fù)合物的分離；4)獲得分離的microRNA。
[0028]19、段落17或18任一項所述的分離方法，其特征在于所述可篩選標記物為生物素，分離與生物素連接的寡聚核酸分子-小分子RNA/microRNA復(fù)合物的方法包括:利用生物素與親和素或鏈親和素之間特異性的相互作用，將與可分離載體偶連的親和素或鏈親和素以及與生物素連接寡聚核酸分子-小分子RNA/microRNA復(fù)合物共同孵育，利用可分離載體進行寡聚核酸分子-小分子RNA/microRNA復(fù)合物的分離。
[0029]20、段落17或18任一項所述的分離方法，其特征在于所述可篩選標記物為地高辛，分離與地高辛連接的寡聚核酸分子-小分子RNA/microRNA復(fù)合物的方法包括:利用地高辛與抗地高辛抗體之間特異性的相互作用，將與可分離載體偶連的抗地高辛抗體和與地高辛連接的寡聚核酸分子-小分子RNA/microRNA復(fù)合物共同孵育，利用可分離載體進行寡聚核酸分子-小分子RNA/microRNA復(fù)合物的分離。
[0030]21、段落17或18任一項所述的分離方法，其特征在于所述可篩選標記物為特異性核酸序列，分離與特異性核酸序列連接的寡聚核酸分子-小分子RNA/microRNA復(fù)合物的方法包括:利用特異性核酸序列之間的相互作用 ，將與可分離載體偶連的且能夠與所述特異性核酸序列雜交的核酸序列和與特異性核酸序列連接的寡聚核酸分子-小分子RNA/microRNA復(fù)合物共同孵育，利用可分離載體進行寡聚核酸分子-小分子RNA/microRNA復(fù)合物的分離。
[0031]22、段落17-21任一項所述的分離方法，其特征在于所述可分離載體為瓊脂糖凝膠珠或磁珠。
[0032]23、段落17-22任一項所述的方法，其特征在于所述含有待分離小分子RNA的樣品為來源于組織或細胞的總RNA樣品。
[0033]24、段落17-22所述的方法，其特征在于所述含有待分離小分子RNA的樣品為來源于血清的RNA樣品。
[0034]25、段落17-22所述的方法，其特征在于所述含有待分離小分子RNA的樣品為血清樣品。
[0035]26、段落17-22所述的方法，其特征在于所述含有待分離小分子RNA的樣品為血清microRNA 樣品。
[0036]27、一種用于小分子RNA分離的試劑盒，包括至少一種段落1_14任一項所述寡聚核酸分子和可分離載體，所述可分離載體連接有與相應(yīng)可篩選標記物結(jié)合的適配體。
[0037]28、一種用于血清microRNA分離的試劑盒,包括至少一種段落1_14任一項所述寡聚核酸分子和可分離載體，所述可分離載體連接有與相應(yīng)可篩選標記物結(jié)合的適配體。
[0038]在本發(fā)明的第一方面，提供了一種用于分離小分子RNA的寡聚核酸分子，所述寡聚核酸分子由連續(xù)的兩段核酸序列構(gòu)成，其中第一核酸序列為一發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，其3’端區(qū)域與第二核酸序列的3’端區(qū)域完全或部分互補，第一核酸序列與一種可篩選標記物連接；第二核酸序列由5’端區(qū)域和3’端區(qū)域組成，其5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列完全或部分互補，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補。第一核酸序列的3’端區(qū)域與第二序列的3’端區(qū)域完全或部分互補的核苷酸數(shù)目沒有限制，只要能夠?qū)崿F(xiàn)雙鏈的充分配對即可。進一步的，所述第二核酸序列的5’端區(qū)域和3’端區(qū)域之間可以包含至少一個核苷酸的間隔序列。在一種優(yōu)選情況下，所述用于分離小分子RNA的寡聚核酸分子包含至少一個核糖核苷酸(RNA)分子；在另一種優(yōu)選情況下，所述用于分離小分子RNA的寡聚核酸分子包含至少一個鎖核酸(LNA)分子；在再一種優(yōu)選情況下，所述用于分離小分子RNA的寡聚核酸分子是化學(xué)修飾的寡聚核酸分子。所述化學(xué)修飾方式選自下列修飾中的至少一種: [0039]I)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的修飾；
[0040]2)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中連接核苷酸的磷酸二酯鍵的修飾；
[0041]3)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中堿基的修飾。
[0042]用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，所述的可篩選標記物選自生物素、地高辛或特異性核酸序列；進一步的，所述特異性核酸序列選自oligo dT、oligo dA、oligo dC、或oligo dG?？珊Y選標記物可標記在寡聚核酸分子的一端，也可標記在中間的任意位置。
[0043]上述任一項所述的用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，其第二核酸序列5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列部分互補為至少4個堿基互補，優(yōu)選為7、8、9、1、0、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22 或 23 個堿基互補。
[0044]上述任一項所述的用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，其中所述小分子RNA選自 microRNA、siRNA、piRNA 或 snRNA。
[0045]本發(fā)明另一方面提供了上述任一項所述的用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子的制備方法，可直接合成包含所述第一核酸序列和第二核酸序列的寡聚核酸分子；也可分別獲得兩段序列，然后再將兩段序列連接成為一個寡聚核酸分子。優(yōu)選情況下，分別獲得所述第一核酸序列片段和第二核酸序列片段，其中第一核酸序列片段為5’末端磷酸化的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，其3’端區(qū)域與第二核酸序列的3’端區(qū)域完全或部分互補，第一核酸序列與一種可篩選標記物連接；第二核酸序列由5’端區(qū)域和3’端區(qū)域組成，其5’端區(qū)域與待分離microRNA的成熟體序列完全或部分互補，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補；進一步使第一核酸序列片段與第二核酸序列片段連接，成為一個寡聚核酸分子。
[0046]本發(fā)明第三方面提供了一種小分子RNA的分離方法，包括以下步驟:1)獲得上述任一項所述的特異于待分離小分子RNA的寡聚核酸分子；2)將至少一種寡聚核酸分子與含有待分離小分子RNA的樣品混合，使寡聚核酸分子與待分離的小分子RNA雜交形成寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物；3)利用與寡聚核酸分子連接的可篩選標記物進行寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物的分離；4)獲得分離的小分子RNA。在一種優(yōu)選的分離方法中，所述可篩選標記物為生物素，分離與生物素連接的寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物的方法包括:利用生物素與親和素或鏈親和素之間特異性的相互作用，將與可分離載體偶連的親和素或鏈親和素以及與生物素連接的寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物共同孵育，利用可分離載體使寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物得到分離。在另一種優(yōu)選的分離方法中，所述可篩選標記物為地高辛，分離與地高辛連接的寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物的方法包括:利用地高辛與抗地高辛抗體之間特異性的相互作用，將與可分離載體偶連的抗地高辛抗體和與地高辛連接的寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物共同孵育，利用可分離載體進行寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物的分離。在第三種優(yōu)選的分離方法中，所述可篩選標記物為特異性核酸序列，分離與特異性核酸序列連接的寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物的方法包括:利用特異性核酸序列之間的相互作用，將與可分離載體偶連的且能夠與所述特異性核酸序列雜交的核酸序列和與特異性核酸序列連接的寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物共同孵育，利用可分離載體進行寡聚核酸分子-小分子RNA復(fù)合物的分離。優(yōu)選情況下，所述小分子RNA為microRNA?！疤禺愑诖蛛x小分子RNA的寡聚核酸分子”，其中特異于是指寡聚核酸分子與待分離小分子RNA的序列部分或全部互補；當小分子RNA為microRNA時，是指寡聚核酸分子與待分離的成熟體microRNA的序列部分或全部互補。
[0047]在上述任一項所述的分離方法中，所述可分離載體選自:平板、微平板、微量板、載玻片、皿、微珠、顆粒、微粒、杯子、條狀物、芯片、微芯片、帶狀物、膜、微陣列和試管。所述可分離載體的制造材料選自:玻璃、娃、塑料、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯和聚碳酸酯。優(yōu)選情況下，所述可分離載體為瓊脂糖凝膠珠和/或磁珠。
[0048]可用于分離小分子RNA的樣品包括含有這種分子的任何樣品。該樣品可以是包含細胞、組織、器官或其他生物樣品的物質(zhì)，或者該樣品可以是反應(yīng)混合物，如通過酶學(xué)、合成和/或重組方法生產(chǎn)的小分子RNA的混合物。
[0049]在上述任一項所述的分離方法中，含有待分離小分子RNA的樣品為來源于組織或細胞的總RNA樣品。
[0050]在上述任一項所述的分離方法中，含有待分離小分子RNA的樣品為來源于血清的RNA樣品。
[0051]在上述任一項所述的分離方法中，含有待分離小分子RNA的樣品為血清樣品。
[0052]寡聚核酸分子與核酸樣品可以任意比例混合進行分離。為實現(xiàn)最佳分離效果，所述寡聚核酸分子應(yīng)過量于核酸樣品，優(yōu)選情況下寡聚核酸分子與核酸樣品的濃度比為
3: I或更高。
[0053]本發(fā)明第四方面提供了一種用于小分子RNA分離的試劑盒，包括至少一種上述任一項所述的寡聚核酸分子和分離載體，所述分離載體連接有與相應(yīng)可篩選標記物結(jié)合的適配體。其中，可篩選標記物選自生物素、地高辛或特異性核酸序列；進一步的，所述特異性核酸序列選自oligo dT、oligo dA、oligo dC、或oligo dG。所述適配體,對于生物素來講是親和素或鏈親和素，對于地高辛來講是抗地高辛抗體，對于特異性核酸序列來講是與特異性核酸序列互補的核酸序列。
[0054]本發(fā)明的有益效·果
[0055]由于小分子RNA在生物生長發(fā)育和疾病發(fā)生過程中具有重要作用，對小分子RNA的研究具有重要的應(yīng)用前景和臨床價值。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所提供的技術(shù)方案具有分離效率高、操作方便等優(yōu)點，具有顯著的進步。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0056]圖1.寡聚核酸分子的結(jié)構(gòu)示意圖。發(fā)夾結(jié)構(gòu)的第一核酸序列片段用細實線表示，其5’端被磷酸化，用于和第二核酸序列片段連接；在其單鏈區(qū)域內(nèi)含有生物素標記，用于與鏈親合素標記的可分離載體結(jié)合；其5’端區(qū)域與3’端部分區(qū)域互補配對，形成所述的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。第二核酸序列片段用粗實線表示，其5’端區(qū)域與目標小分子RNA完全或部分互補，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補。目標小RNA分子用間斷的虛線表示，其序列與第二核酸序列片段的5’端區(qū)域完全或部分互補。
【具體實施方式】
[0057]下面結(jié)合具體實施例及附圖，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)當理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不能用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人,分子克隆:實驗室手冊(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press, 1989)中所述的條件,或按照制造廠商所建議的條件。本發(fā)明所使用的DNA寡聚核酸由Invitrogen北京分公司合成，所使用的RNA寡聚核酸由廣州市銳博生物科技有限公司合成。
[0058]盡管本發(fā)明描述了具體的例子，但是有一點對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是明顯的，即在不脫離本發(fā)明的精神和范圍的 前提下可對本發(fā)明作各種變化和改動。因此，所附權(quán)利要求覆蓋了所有這些在本發(fā)明范圍內(nèi)的變動。
[0059]O表一、第一核酸序列的類型及修飾

S標記及修飾類型:生物素標記，(Niita); 2’-氟代修飾，(Nf); 2’-甲氧基修飾，

硫代磷酸二酯鍵修飾，(NpsN); RNA核苷酸取代修飾，(Nrna); LNA核苷g
【權(quán)利要求】
1.一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由連續(xù)的兩段核酸序列構(gòu)成，其中第一核酸序列為一發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，其3’端區(qū)域與第二核酸序列的3’端區(qū)域完全或部分互補；第二核酸序列由5’端區(qū)域和3’端區(qū)域組成，其5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列完全或部分互補，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補。
2.一種用于小分子RNA分離的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子由連續(xù)的兩段核酸序列構(gòu)成，其中第一核酸序列為一發(fā)夾結(jié)構(gòu)的通用序列，其3’端區(qū)域與第二核酸序列的3’端區(qū)域完全或部分互補，第一核酸序列與一種可篩選標記物連接，可篩選標記物可標記在寡聚核酸分子的中間位置或末端位置；第二核酸序列由5’端區(qū)域和3’端區(qū)域組成，其5’端區(qū)域與待分離的小分子RNA序列完全或部分互補，其3’端區(qū)域與第一片段的3’端區(qū)域完全或部分互補。
3.權(quán)利要求1-2任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子為包含至少一個核糖核苷酸(RNA)分子的雜合分子。
4.權(quán)利要求1-3任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端區(qū)域和3’端區(qū)域之間無間隔序列。
5.權(quán)利要求1-3任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述第二核酸序列的5’端區(qū)域和3’端區(qū)域之間包含至少一個堿基的間隔序列。
6.權(quán)利要求1-5任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子為包含化學(xué)修飾的寡聚核酸分子，所述修飾為如下的修飾中的至少一種: (I)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的修飾； (I)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中連接核苷酸的磷酸二酯鍵的修飾； (3)對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中堿基的修飾。
7.權(quán)利要求6所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修飾為對所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’ -OH的修飾。
8.權(quán)利要求6-7任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述修飾為所述寡聚核酸分子的核苷酸序列中核糖的2’ -OH被甲氧基或氟取代。
9.權(quán)利要求1-8任一項所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子中包含至少一個鎖核酸(LNA)分子。
10.權(quán)利要求2所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述可篩選標記物選自生物素、地高辛或特異性核酸序列。
【文檔編號】C12N15/10GK103571827SQ201210249947
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2012年7月19日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月19日
【發(fā)明者】杜權(quán) 申請人:杜權(quán)