專利名稱：Ttk基因的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種TTK基因的用途。
背景技術(shù)：
TTK基因(NM_003318)，位于染色體6ql3-q21，編碼TTK蛋白激酶，能夠?qū)野彼?、絲氨酸、蘇氨酸磷酸化。TTK基因與細(xì)胞增殖相關(guān)，對有絲分裂過程中的染色體排列起重要作用，主要是負(fù)責(zé)著絲粒的復(fù)制。已有研究發(fā)現(xiàn)TTK蛋白是一個有絲分裂過程中監(jiān)控染色體精確分離的關(guān)鍵的檢查點蛋白。當(dāng)TTK蛋白不能降解時，會產(chǎn)生過多的著絲粒，導(dǎo)致有絲分裂紡錘體異常，進(jìn)而可能造成腫瘤的發(fā)生。目前尚沒有關(guān)于TTK基因作為肝癌診斷標(biāo)志物的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種TTK基因的用途，TTK基因可作為診斷肝癌的分子標(biāo)志物。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實現(xiàn):在本發(fā)明的一個方面，提供了一種TTK基因的用途，用于制備診斷肝癌的產(chǎn)品。優(yōu)選的，所述診斷肝癌的產(chǎn)品包括:用半定量RT-PCR、基因芯片檢測、或免疫檢測診斷肝癌的產(chǎn)品。所述用半定量RT-PCR診斷肝癌的產(chǎn)品至少包括一對特異擴增TTK基因的引物。

所述用基因芯片檢測診斷肝癌的產(chǎn)品包括:與TTK基因的核酸序列雜交的探針。所述用免疫檢測診斷肝癌的產(chǎn)品包括 與TTK蛋白特異性結(jié)合的抗體。在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種用于診斷肝癌的試劑盒，所述試劑盒包含特異性針對TTK基因的引物或探針，或包含特異性結(jié)合TTK蛋白的抗體。利用本發(fā)明的試劑盒，可以檢測病人TTK基因的表達(dá)情況，從而診斷病人是否患有肝癌。在本發(fā)明中，術(shù)語“引物”是指一種寡核苷酸，可以是天然的也可以是合成的，它可以作為在一定條件下誘發(fā)DNA合成的起始點，在合適條件下誘發(fā)合成與核酸鏈互補的引物擴增產(chǎn)物，即在四種不同的三磷酸脫氧核糖核苷及一種聚合試劑(即DNA聚合酶或逆轉(zhuǎn)錄酶)存在下，在一種合適的緩沖液中并在合適的溫度下進(jìn)行擴增反應(yīng)。優(yōu)選的引物是單股寡脫氧核糖核苷酸。引物的合適長度取決于該引物的設(shè)計用途，但一般在15 25個核苷酸之間。在本發(fā)明中，所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結(jié)合，任何長度都可以。在本發(fā)明中，可以使用一系列本領(lǐng)域已知的方法來制備針對TTK蛋白特異的抗體。例如，將提純的人TTK基因產(chǎn)物或它的抗原片段或人工合成的含有與TTK蛋白有連續(xù)5個相同的氨基酸的多肽片段注射入動物體內(nèi)以產(chǎn)生多抗體。同樣，表達(dá)人TTK蛋白或它的抗原片段的細(xì)胞也可以用來對動物致免疫而產(chǎn)生抗體。根據(jù)本發(fā)明制備的抗體也可以是單克隆抗體，這些單克隆抗體可用雜交瘤技術(shù)制備。經(jīng)實驗證明，本發(fā)明TTK基因在肝癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，因此TTK基因可作為診斷肝癌的特異標(biāo)志基因，使肝癌診斷更加準(zhǔn)確、快速。


下面結(jié)合附圖和具體實施方式
對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。圖1是本發(fā)明實施例1的TTK基因在人肝癌組織和癌旁組織中差異表達(dá)的半定量RT-PCR結(jié)果圖。
具體實施方式
下列實施例中，未注明具體條件的實驗方法，通常按常規(guī)條件，如《精編分子生物學(xué)實驗指南》(F.M.奧斯伯，R.E.金斯頓，J.G.塞德曼等主編，馬學(xué)軍，舒躍龍的譯.北京:科學(xué)出版社，2004)中所述的方法進(jìn)行。實施例1用半定量RT-PCR方法檢測肝癌樣本中TTK基因的表達(dá)變化

半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(SqRT-PCR)是近年來常用的一種簡捷、特異的定量RNA測定方法，通過mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，再進(jìn)行PCR擴增，并測定PCR產(chǎn)物的數(shù)量，可以推測樣品中特異mRNA的相對數(shù)量。以半定量RT-PCR為基礎(chǔ)建立起來的mRNA含量測定技術(shù)，較含內(nèi)標(biāo)化的RT-PCR定量測定的mRNA的方法更為簡便可行。運用半定量RT-PCR方法，檢測20對肝癌樣本中TTK基因的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)其在肝癌組織中呈明顯的上調(diào)表達(dá)趨勢。具體實驗步驟如下:1.組織分離實驗用組織來源于HBV陽性并表達(dá)甲胎蛋白的原發(fā)性肝癌的手術(shù)病人(RT-PCR證實AFP在肝癌均為陽性而癌旁為陰性)。手術(shù)切除的肝臟一經(jīng)離體，迅速切取病灶及周圍5公分外癌旁組織，放入液氮中(-80°C)保存。癌和癌旁的診斷均以病理診斷為最終依據(jù)。2.RNA 抽提采用TAKARA公司的Trizol (D9108)對20對肝癌樣本(癌和癌旁)組織進(jìn)行抽提，并用安捷倫2100對產(chǎn)物的純度和濃度進(jìn)行檢測。具體操作是:將碾杵和勻漿器等器皿在200°C干烤4h，去除RNA酶，冷卻；加入液氮中預(yù)冷，將組織從液氮中迅速取出，碾成粉末；用刮匙將組織放入預(yù)先加入TRIzoI試劑的勻漿器中，勻漿數(shù)分鐘；將勻漿后的液體轉(zhuǎn)入無RNA酶的離心管中，加入氯仿后，4°C離心分層；將上層水相轉(zhuǎn)入一無RNA酶的離心管中，加入氯仿后，4°C離心分層；將上層水相轉(zhuǎn)入一無RNA酶的離心管中，加異丙醇，4°C離心沉淀RNA ;用75%乙醇洗滌沉淀2次；用無RNA酶的去離子水溶解沉淀。抽提的RNA進(jìn)行質(zhì)量鑒定(用安捷倫2100測定RNA濃度、純度和完整性)，結(jié)果見下表I。質(zhì)量鑒定好的RNA存放在_80°C冰箱待用。表120對肝癌樣本的RNA抽提質(zhì)量檢測結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種TTK基因的用途，其特征在于，用于制備診斷肝癌的產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述診斷肝癌的產(chǎn)品包括:用半定量RT-PCR、基因芯片檢測、或免疫檢測診斷肝癌的產(chǎn)品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述用半定量RT-PCR診斷肝癌的產(chǎn)品至少包括一對特異擴增TTK基因的引物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述用基因芯片檢測診斷肝癌的產(chǎn)品包括■ 與TTK基因的核酸序列雜交的探針。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述用免疫檢測診斷肝癌的產(chǎn)品包括 與TTK蛋白特異性結(jié)合的抗體。
6.一種用于診斷肝癌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含特異性針對TTK基因的引物對。
7.一種用于診斷肝癌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含特異性針對TTK基因的探針。
8.一種用于診斷肝癌的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含特異性結(jié)合TTK蛋白的抗體。
全文摘要
本發(fā)明公開一種TTK基因的用途，用于制備診斷肝癌的產(chǎn)品。本發(fā)明還公開了一種用于診斷肝癌的試劑盒，該試劑盒包含特異性針對TTK基因的引物或探針，或包含特異性結(jié)合TTK蛋白的抗體。本發(fā)明的TTK基因，可作為診斷肝癌的特異標(biāo)志基因，使肝癌診斷更加準(zhǔn)確、快速。
文檔編號C12Q1/68GK103194529SQ20121000227
公開日2013年7月10日 申請日期2012年1月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月5日
發(fā)明者黃健, 劉星 申請人:上海生物芯片有限公司