專利名稱：包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化學(xué)領(lǐng)域的乳鐵蛋白和磷脂類，具體地是包封乳鐵蛋白的脂質(zhì)體及其制備方法。
背景技術(shù)：
乳鐵蛋白是一種非血紅素鐵結(jié)合蛋白，屬于轉(zhuǎn)鐵蛋白家族的一部分。近年來有不少報道指出乳鐵蛋白不僅可以作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑，補(bǔ)充人體所需要的鐵和氨基酸，同時具有抗菌、抗病毒、抗癌、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)等生物學(xué)功能。乳鐵蛋白主要在腸道中運(yùn)送鐵，對哺乳動物發(fā)揮高效的補(bǔ)鐵作用，為了減少其他組織器官內(nèi)的細(xì)菌等對乳鐵蛋白的消耗和破壞，可以將乳鐵蛋白使用脂質(zhì)體技術(shù)包埋起來，起到保護(hù)作用，從而具有緩釋和靶向作用， 提高了乳鐵蛋白在哺乳動物體內(nèi)的生物利用率。據(jù)報道目前制備乳鐵蛋白脂質(zhì)體的方法有復(fù)乳法，其制備的最佳條件是Lf與膜材的質(zhì)量比1 150，卵磷脂三油酸甘油酯膽固醇質(zhì)量比7 2 1，氯仿乙醚體積比1 1和初乳與葡萄糖溶液的體積比1 3。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法，采用該方法制備而得的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體能提高乳鐵蛋白的抑菌效果。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法，依次包括以下步驟
1)、將大豆卵磷脂和膽固醇按照10 1 1質(zhì)量比溶解于溶劑I中，得溶液I ；大豆卵磷脂與溶劑I的質(zhì)量/體積比為5 8毫克大豆卵磷脂/1毫升溶劑I ；
將乳鐵蛋白溶解于溶劑II中，得溶液II ；乳鐵蛋白與溶劑II的質(zhì)量/體積比為 8 18毫克乳鐵蛋白/1毫升溶劑II ；
將溶液I和溶液II放入容器中混合均質(zhì)，然后減壓蒸發(fā)直至形成脂質(zhì)薄膜層；乳鐵蛋白與大豆卵磷脂的質(zhì)量比為1 1.2 4;
2)、按照每IOOmg大豆卵磷脂配25 40ml的混合溶劑的用量比，向容器中加入由吐溫-80和溶劑II組成的混合溶劑，吐溫-80和溶劑II的質(zhì)量比為0. 005 0. 02 1 ；
3)、將步驟2、的所得物減壓至0. 07 0. IMPa蒸發(fā)，直至脂質(zhì)薄膜層溶解于混合溶劑中，得包封乳鐵蛋白的脂質(zhì)體。
作為本發(fā)明的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法的改進(jìn)溶劑I為三氯甲烷和/ 或乙醚；溶劑II為pH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液(即磷酸二氫鈉和的磷酸氫二鈉濃度均為 0. 2mol/L)。
作為本發(fā)明的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法的進(jìn)一步改進(jìn)步驟1)中的均質(zhì)為在均質(zhì)機(jī)上均質(zhì)2 5min，從而形成穩(wěn)定的體系。
作為本發(fā)明的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法的進(jìn)一步改進(jìn)步驟1)中的減壓蒸發(fā)的真空度為0. 07 0. IMPa0
作為本發(fā)明的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法的進(jìn)一步改進(jìn)步驟幻的真空壓為 0.09MPa。在本發(fā)明中，大豆卵磷脂、膽固醇和乳鐵蛋白均能通過市購的方式獲得，例如大豆卵磷脂可購自北京雙旋微生物培養(yǎng)基制品廠，膽固醇可購自中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，乳鐵蛋白可購自南京天淳有限公司。本發(fā)明將脂質(zhì)基質(zhì)(即大豆卵磷脂和膽固醇)溶于三氯甲烷等溶劑中，然后加入一定濃度的乳鐵蛋白磷酸鹽緩沖溶液，從而將水溶性乳鐵蛋白包封在脂質(zhì)體的內(nèi)水相中。本發(fā)明采用的分析方法和儀器如下1.乳鐵蛋白納米脂質(zhì)體平均粒徑用馬爾文 2000粒度分布儀。2.乳鐵蛋白納米脂質(zhì)體包封率用紫外分光光度法。3.細(xì)菌總數(shù)測定方法《食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢測菌落總數(shù)測定》GB4789. 2測定。本發(fā)明具備如下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明采用脂質(zhì)逆向蒸發(fā)法制備乳鐵蛋白脂質(zhì)體，并采用均質(zhì)機(jī)對脂質(zhì)雙分子層與含有乳鐵蛋白的磷酸鹽緩沖液混合體系均質(zhì)，直至為穩(wěn)定的體系，此技術(shù)大大提高了乳鐵蛋白的包埋率，同時也提高了乳鐵蛋白脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。2、本發(fā)明制備的乳鐵蛋白脂質(zhì)體通過對冷藏鴨肉抑菌保鮮的應(yīng)用后，發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體包埋技術(shù)有效的提高了乳鐵蛋白的抑菌能力，其機(jī)理應(yīng)與乳鐵蛋白脂質(zhì)體緩釋效果有關(guān)。3、本發(fā)明有效的采用乳鐵蛋白脂質(zhì)體對冷藏鴨肉進(jìn)行了抗菌保鮮應(yīng)用，探討了乳鐵蛋白脂質(zhì)體對提高抗菌保鮮效果的作用機(jī)理。本發(fā)明的乳鐵蛋白脂質(zhì)體為脂質(zhì)體載體的應(yīng)用拓寬了道路，運(yùn)用脂質(zhì)體作為載體包埋乳鐵蛋白，并首次應(yīng)用于食品保鮮領(lǐng)域，具有重大的研究意義。綜上所述，本發(fā)明采用納米脂質(zhì)體技術(shù)將乳鐵蛋白保護(hù)起來，制備乳鐵蛋白納米脂質(zhì)體，控釋乳鐵蛋白的釋放，提高生物利用度。本發(fā)明的乳鐵蛋白脂質(zhì)體的平均粒徑為 234nm，而現(xiàn)有方法制備而得的乳鐵蛋白脂質(zhì)體的粒徑大小未見報道，由于該發(fā)明制備的脂質(zhì)體屬于納米級別，所以具有更好的表面效應(yīng)。本發(fā)明使用逆向蒸發(fā)輔助均質(zhì)法制備所得乳鐵蛋白納米脂質(zhì)體，相較于復(fù)乳法制備的脂質(zhì)體而言，本發(fā)明使用的材料更為簡單且制備的脂質(zhì)體為納米級別，具有納米材料所具備的小尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，具有良好的緩釋效果。


下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作進(jìn)一步詳細(xì)說明。圖1是乳鐵蛋白脂質(zhì)體的平均粒徑分布圖。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、一種包封乳鐵蛋白的脂質(zhì)體的制備方法，依次進(jìn)行以下步驟1)、取IOOmg大豆卵磷脂和20mg膽固醇溶解于15ml氯仿和乙醚混合溶液中(氯仿和乙醚ν v = 2 3)，使其(即大豆卵磷脂和膽固醇)充分溶解，得溶液I。將26. 6mg乳鐵蛋白溶解于:3ml pH值為7. 4磷酸鹽緩沖溶液中，得溶液II。將溶液I和溶液II放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中混合后先磁力攪拌2h，再在均質(zhì)機(jī)中均質(zhì) 2 5分鐘(均質(zhì)機(jī)的功率200W)，從而使溶液I和溶液II形成穩(wěn)定的單相體系。在37°C的水浴中，真空壓于0. 09MI^下，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸發(fā)直至形成一層脂質(zhì)薄膜(即附著于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶上的脂質(zhì)薄膜層)。2)、向旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中加入30ml磷酸鹽緩沖溶液(pH值為7. 4)和282 μ 1的吐溫_80 組成的混合溶劑。3)、在37°C的水浴中，真空壓于0. 09MPa下，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸發(fā)；直至附著于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶上的脂質(zhì)薄膜層溶解于混合溶劑中，得包封乳鐵蛋白的脂質(zhì)體IOml。采用考馬斯亮藍(lán)法，測得該包封乳鐵蛋白的脂質(zhì)體中乳鐵蛋白濃度為2毫克/毫升。大豆卵磷脂膽固醇的質(zhì)量比為5 1。實(shí)驗1、將實(shí)施例1制備所得的乳鐵蛋白脂質(zhì)體添加入冷藏鴨肉中研究其對冷凍鴨肉的抗菌作用，從而探索制備的乳鐵蛋白脂質(zhì)體對提高乳鐵蛋白生物利用度的作用。實(shí)驗方法與步驟1、將冷藏鴨肉進(jìn)行去筋去膜處理，分為25g/份，待用。每組肉塊在保鮮液(實(shí)施例 1所得的包封乳鐵蛋白的脂質(zhì)體，該包封乳鐵蛋白的脂質(zhì)體中乳鐵蛋白的濃度為2mg/ml) 中浸泡2min，取出擺放于干凈的盤篩中浙水3 5min ；作為實(shí)驗組；分別設(shè)置如下對照組空白對照組以無菌蒸餾水替代上述保鮮液，其余處理方式同實(shí)驗組；對照組1、以乳鐵蛋白和pH7. 4的磷酸鹽緩沖液的混合物(在2mg乳鐵蛋白中用磷酸鹽緩沖液定容至Iml所得)替代上述保鮮液，其余處理方式同實(shí)驗組；對照組2、以乳鐵蛋白、大豆卵磷脂、膽固醇和pH7. 4的磷酸鹽緩沖液的混合物(在 2mg乳鐵蛋白、IOmg大豆卵磷脂和2mg膽固醇中用磷酸鹽緩沖液定容至Iml所得)替代上述保鮮液，其余處理方式同實(shí)驗組；對照組3、按照背景技術(shù)制備而得復(fù)乳法脂質(zhì)體懸液，乳鐵蛋白濃度為2毫克/毫升。包裝方式為保鮮膜托盤包裝，貯藏保鮮溫度為4 士 1°C。2、細(xì)菌總數(shù)測定方法(1)在無菌條件下，稱取樣肉樣25g，無菌剪刀剪碎后，放入裝有225ml的無菌生理鹽水的三角瓶中。(2)搖床中振搖30min制成1 10 (體積比)的稀釋液。(3)用Iml滅菌吸管吸取稀釋液1ml，沿管壁緩緩注入裝有9ml滅菌生理鹽水的試管中，做成1 100的稀釋液。(4)另取一支Iml滅菌吸管，按上面方法做一個1 1000的稀釋度，在做遞增稀釋的同時，以吸取該樣品稀釋液的吸管吸取Iml稀釋液于滅菌平皿內(nèi)，每個樣品稀釋度做兩個平皿。(5)樣品稀釋液傾入平皿后，及時將冷卻至46°C的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基注入平皿約 15ml，并轉(zhuǎn)動平皿使混合均勻。(6)待瓊脂凝固后，翻轉(zhuǎn)平板，置37°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)對-4他。(7)計算平皿內(nèi)細(xì)菌菌落數(shù)目，乘以稀釋倍數(shù)，即得每毫升樣品所含菌落總數(shù)。不同的保鮮天數(shù)后所對應(yīng)的實(shí)驗結(jié)果如表1所示表1、乳鐵蛋白脂質(zhì)體對冷藏鴨肉抗菌效果的影響
權(quán)利要求
1.包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法，其特征是依次包括以下步驟1)、將大豆卵磷脂和膽固醇按照10 1 1質(zhì)量比溶解于溶劑I中，得溶液I ；所述大豆卵磷脂與溶劑I的質(zhì)量/體積比為5 8毫克大豆卵磷脂/1毫升溶劑I ；將乳鐵蛋白溶解于溶劑II中，得溶液II ；所述乳鐵蛋白與溶劑II的質(zhì)量/體積比為 8 18毫克乳鐵蛋白/1毫升溶劑II ；將所述溶液I和溶液II放入容器中混合均質(zhì)，然后減壓蒸發(fā)直至形成脂質(zhì)薄膜層；所述乳鐵蛋白與大豆卵磷脂的質(zhì)量比為1 1.2 4;2)、按照每IOOmg大豆卵磷脂配25 40ml的混合溶劑的用量比，向容器中加入由吐溫-80和溶劑II組成的混合溶劑，所述吐溫-80和溶劑II的體積比為0. 005 0. 02 1 ；3)、將步驟2、的所得物減壓至0.07 0. IMPa蒸發(fā)，直至脂質(zhì)薄膜層溶解于混合溶劑中，得包封乳鐵蛋白的脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法，其特征是所述溶劑I為三氯甲烷和/或乙醚。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法，其特征是所述溶劑II為PH7. 4的磷酸鹽緩沖溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法，其特征是所述步驟1)中的均質(zhì)為在均質(zhì)機(jī)上均質(zhì)2 5min，從而形成穩(wěn)定的體系。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法，其特征是所述步驟1)中的減壓蒸發(fā)的真空度為0. 07 0. IMPa0
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法，其特征是所述步驟3)的真空壓為0. 09MPa。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體的制備方法，依次包括以下步驟1)將大豆卵磷脂和膽固醇按照10～1∶1質(zhì)量比溶解于溶劑I中，得溶液I；將乳鐵蛋白溶解于溶劑II中，得溶液II；將溶液I和溶液II放入容器中混合均質(zhì)，然后減壓蒸發(fā)直至形成脂質(zhì)薄膜層；2)向容器中加入由吐溫-80和溶劑II組成的混合溶劑；3)將步驟2)的所得物減壓至0.07～0.1MPa蒸發(fā)，直至脂質(zhì)薄膜層溶解于混合溶劑中，得包封乳鐵蛋白的脂質(zhì)體。采用該方法制備而得的包封乳鐵蛋白脂質(zhì)體能提高乳鐵蛋白的抑菌效果。
文檔編號A23B4/20GK102487990SQ20111035842
公開日2012年6月13日 申請日期2011年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月14日
發(fā)明者關(guān)榮發(fā), 劉光富, 劉 英, 芮昶, 金慧偉, 馬潔清, 黃斯 申請人:中國計量學(xué)院