專利名稱：一種培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及實(shí)驗(yàn)海洋生物學(xué)領(lǐng)域，特別是一種培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法， 可實(shí)現(xiàn)海洋尖尾藻的長(zhǎng)期培養(yǎng)。
背景技術(shù)：
海洋尖尾藻是赤潮微藻中的一種，是一種異養(yǎng)型海洋甲藻，用于實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)研究 。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于海洋尖尾藻的研究并不多見。國(guó)內(nèi)只有中國(guó)海洋大學(xué)以細(xì)菌為餌料培養(yǎng)了采自青島太平角潮池的海洋尖尾藻，該藻野生種的耐鹽范圍為4-60，且耐鹽性和種內(nèi)遺傳多樣性之間顯著正相關(guān)。國(guó)外研究表明，海洋尖尾藻能夠攝食硅藻、綠藻、隱藻、金藻、 細(xì)菌以及柱形寬水蚤(Temora styIifera)無節(jié)幼體等，且塔瑪亞歷\hXBUlexandriuin tamarense, ,.9XlQ'個(gè)ml—1)通過釋放化感物質(zhì)影響海洋尖尾藻的運(yùn)動(dòng)能力，甚至導(dǎo)致海洋尖尾藻細(xì)胞裂解、死亡以及種群數(shù)量下降。對(duì)海洋尖尾藻研究較少的一個(gè)重要原因即為培養(yǎng)方法難以掌握，究竟選用何種餌料藻以及培養(yǎng)條件是突破該瓶頸的關(guān)鍵所在。鑒于過去海洋尖尾藻培養(yǎng)中遇到的問題細(xì)菌培養(yǎng)易污染且保種條件要求高、餌料藻種類、餌料藻和海洋尖尾藻之間濃度比例、培養(yǎng)溫度和光強(qiáng)范圍等問題，考慮到經(jīng)濟(jì)性、高效性和環(huán)境友好，需要研制開發(fā)一種高效、適用于以海洋微藻為餌料培養(yǎng)高濃度海洋尖尾藻的方法，其核心問題是具有較強(qiáng)適口性餌料藻種類的選擇以及培養(yǎng)條件的探索。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在解決現(xiàn)有技術(shù)的問題，而提供一種培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法。該方法以海洋微藻為餌料藻培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻，成本低，易維護(hù)，所需培養(yǎng)條件在一般實(shí)驗(yàn)室容易獲得，可實(shí)現(xiàn)海洋尖尾藻的長(zhǎng)期培養(yǎng)。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案公開了一種培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法。其特征在于以海洋微藻為餌料藻培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻；所述赤潮微藻海洋尖尾藻的培養(yǎng)條件是溫度18-25°C，光強(qiáng)2000-40001x，光暗比L D=12 h 12h 14h IOh, 鹽度4-60，餌料藻和赤潮微藻海洋尖尾藻的濃度配比范圍為22:廣820:1。所述餌料微藻為亞心形扁藻(/iZaiJTBOftas1^/力cori/i/biTBis)、米氏凱倫藻(Jarenia mikimotoi)^ 蛋白核小球 M (.Chlorellapyrenoidosa )或湛江等鞭金餐(Jsochrysis zhangjiangensis )中的一禾中。本發(fā)明具有以下有益效果
1)亞心形扁藻、米氏凱倫藻、蛋白核小球藻和湛江等鞭金藻等餌料藻國(guó)內(nèi)容易獲得，且成本低，培養(yǎng)后可獲得較大濃度，完全能夠滿足需要；
2)所需培養(yǎng)條件在一般實(shí)驗(yàn)室均可滿足，且運(yùn)行成本低，易維護(hù)；
3)可實(shí)現(xiàn)海洋尖尾藻的長(zhǎng)期培養(yǎng)。4)可為海洋尖尾藻實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)及其赤潮的調(diào)控研究提供優(yōu)質(zhì)藻種。采用本發(fā)明，方法簡(jiǎn)單，易維護(hù)，可為海洋尖尾藻實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)及其赤潮的調(diào)控研究提供優(yōu)質(zhì)藻種。


圖1為深色(呈綠色)的餌料藻培養(yǎng)液黑白圖片；
圖2為淺色(淡粉紅色)的培養(yǎng)成功的海洋尖尾藻培養(yǎng)液黑白圖片；
具體實(shí)施例方式海洋尖尾藻是一種無毒赤潮微藻，是以硅藻、綠藻、隱藻、甲藻、細(xì)菌等作為其主要餌料進(jìn)行雜食生活的異養(yǎng)鞭毛藻。對(duì)于異養(yǎng)型赤潮微藻而言，首先培養(yǎng)其餌料生物，然后再將其培養(yǎng)在生物餌料內(nèi)，如海洋尖尾藻培養(yǎng)時(shí)可用亞心形扁藻 {Pla tymonassubcordiformis ) Λ 米氏凱倫 Wt (Karenia mikimo toi ) Λ 蛋白核小球藻 {Chlorellapyrenoiis zhangjiangensis)^^^1^14？ 餌料藻的培養(yǎng)采用自養(yǎng)型海洋微藻的培養(yǎng)方法，然后將培養(yǎng)好的餌料藻培養(yǎng)液調(diào)節(jié)至海洋尖尾藻所需濃度(配比范圍為22:廣820:1)，鹽度4-60，再往餌料藻培養(yǎng)液中接種海洋尖尾藻，最后將培養(yǎng)容器放置在光照培養(yǎng)箱內(nèi)，調(diào)節(jié)溫度18-25°C，光照時(shí)間光暗比L D=12 h 12h 14h 10h，光照強(qiáng)度 2000-40001x 即可。所述餌料藻和赤潮微藻海洋尖尾藻的濃度配比范圍中
所述亞心形扁藻和海洋尖尾藻的濃度配比范圍為110:廣820:1 ；其中比較好的濃度配比范圍為150:廣380:1。所述蛋白核小球藻和海洋尖尾藻的濃度配比范圍為22:廣47:1 ；其中比較好的濃度配比范圍為24:廣35:1。所述米氏凱倫藻和海洋尖尾藻的濃度配比范圍為124:廣741:1 ；其中比較好的濃度配比范圍為166:廣220:1。所述湛江等鞭金藻和海洋尖尾藻的濃度配比范圍為36:廣65:1 ；其中比較好的濃度配比范圍為38:廣41:1。餌料藻選擇粒徑為海洋尖尾藻粒徑1/4以下的海洋微藻。餌料藻的培養(yǎng)采用自養(yǎng)型海洋微藻的培養(yǎng)方法，海洋尖尾藻的培養(yǎng)采用異養(yǎng)型海洋微藻的培養(yǎng)方法。以亞心形扁藻為例介紹餌料藻的培養(yǎng)方法
將亞心形扁藻在恒溫光照培養(yǎng)箱內(nèi)逐級(jí)擴(kuò)繁，然后在250ml三角燒瓶中培養(yǎng)。培養(yǎng)基為f/2培養(yǎng)基，先將其中的N、P、微量元素和維生素配制成1000倍母液，然后在IOOOml海水中各加入上述母液Iml即可。接種時(shí)根據(jù)需要可在超凈工作臺(tái)內(nèi)接種或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)直接接種，藻種量與培養(yǎng)液量之比為1:2-1:5即可獲得良好效果。培養(yǎng)條件溫度18-25°C，光強(qiáng) 2000 4000 lx，光暗比L D=12h 12h 14 h:10 h，每日早晚定時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶2次。下面以具體實(shí)施例來闡述海洋尖尾藻的培養(yǎng)方法 實(shí)施例1
1)餌料藻選擇。選擇常見的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物餌料藻亞心形扁藻作為海洋尖尾藻的餌料
藻；
2)培養(yǎng)液配制。配制f/2培養(yǎng)液，滅菌；
3)培養(yǎng)餌料藻。以無菌操作方式在盛有500mlf/2培養(yǎng)液的1000ml三角瓶中接種亞心形扁藻，培養(yǎng)條件溫度18-25°C，光強(qiáng)2000 4000 lx，光暗比L D=12h 12h 14h:10h， 每日早晚定時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶2次，得到圖1 (圖3)所示的深色(綠色)的餌料藻培養(yǎng)液；
4)培養(yǎng)海洋尖尾藻。亞心形扁藻培養(yǎng)5-10天后，在3)中的三角瓶中接種海洋尖尾藻， 亞心形扁藻和海洋尖尾藻的濃度配比為162:1，培養(yǎng)條件溫度18-25°C，光強(qiáng)200(Γ4000 lx，光暗比L D=12h 12tTl4h:10h。培養(yǎng)過程中逐日觀察培養(yǎng)液顏色變化并在顏色發(fā)生變化時(shí)拍照，并用顯微鏡檢查海洋尖尾藻生長(zhǎng)情況。培養(yǎng)13天后得到如圖2 (圖4)所示的淺色(淡粉紅色)培養(yǎng)液。顏色從綠色到粉色說明，在設(shè)置的培養(yǎng)條件下，海洋尖尾藻已經(jīng)培養(yǎng)成功。實(shí)施例2
與實(shí)施例1不同之處在于所選用于培養(yǎng)海洋尖尾藻的餌料藻為蛋白核小球藻，采用蛋白核小球藻和海洋尖尾藻的濃度配比為25:1，其余制作方法和步驟與實(shí)施例1相同。實(shí)施例3
與實(shí)施例1不同之處在于所選用于培養(yǎng)海洋尖尾藻的餌料藻為米氏凱倫藻，采用米氏凱倫藻和海洋尖尾藻的濃度配比為180:1，其余制作方法和步驟與實(shí)施例1相同。實(shí)施例4
與實(shí)施例1不同之處在于所選用于培養(yǎng)海洋尖尾藻的餌料藻為湛江等鞭金藻，采用湛江等鞭金藻和海洋尖尾藻的濃度配比為40:1，其余制作方法和步驟與實(shí)施例1相同。餌料藻選擇粒徑為海洋尖尾藻粒徑1/4以下的海洋微藻。餌料藻的培養(yǎng)采用自養(yǎng)型海洋微藻的培養(yǎng)方法，海洋尖尾藻的培養(yǎng)采用異養(yǎng)型海洋微藻的培養(yǎng)方法。以亞心形扁藻為例介紹餌料藻的培養(yǎng)方法
將亞心形扁藻在恒溫光照培養(yǎng)箱內(nèi)逐級(jí)擴(kuò)繁，然后在250ml三角燒瓶中培養(yǎng)。培養(yǎng)基為f/2培養(yǎng)基，先將其中的N、P、微量元素和維生素配制成1000倍母液，然后在IOOOml海水中各加入上述母液Iml即可。接種時(shí)根據(jù)需要可在超凈工作臺(tái)內(nèi)接種或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)直接接種，藻種量與培養(yǎng)液量之比為1:2-1:5即可獲得良好效果。培養(yǎng)條件溫度18-25°C，光強(qiáng) 2000 4000 lx，光暗比L D=12h 12h 14 h:10 h，每日早晚定時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶2次。下面以具體實(shí)施例來闡述海洋尖尾藻的培養(yǎng)方法 實(shí)施例1
1)餌料藻選擇。選擇常見的水產(chǎn)經(jīng)濟(jì)動(dòng)物餌料藻亞心形扁藻作為海洋尖尾藻的餌料
藻；
2)培養(yǎng)液配制。配制f/2培養(yǎng)液，滅菌；
3)培養(yǎng)餌料藻。以無菌操作方式在盛有500mlf/2培養(yǎng)液的1000ml三角瓶中接種亞心形扁藻，培養(yǎng)條件溫度18-25°C，光強(qiáng)2000 4000 lx，光暗比L D=12h 12h 14h:10h， 每日早晚定時(shí)搖動(dòng)培養(yǎng)瓶2次，得到圖1所示的深色(綠色)的餌料藻培養(yǎng)液；
4)培養(yǎng)海洋尖尾藻。亞心形扁藻培養(yǎng)5-10天后，在3)中的三角瓶中接種海洋尖尾藻， 亞心形扁藻和海洋尖尾藻的濃度配比為162:1，培養(yǎng)條件溫度18-25°C，光強(qiáng)200(Γ4000 lx，光暗比L D=12h 12tTl4h:10h。培養(yǎng)過程中逐日觀察培養(yǎng)液顏色變化并在顏色發(fā)生變化時(shí)拍照，并用顯微鏡檢查海洋尖尾藻生長(zhǎng)情況。培養(yǎng)13天后得到如圖2所示的淺色 (淡粉紅色)培養(yǎng)液。顏色從綠色到粉色說明，在設(shè)置的培養(yǎng)條件下，海洋尖尾藻已經(jīng)培養(yǎng)成功。
實(shí)施例2
與實(shí)施例1不同之處在于所選用于培養(yǎng)海洋尖尾藻的餌料藻為蛋白核小球藻，采用蛋白核小球藻和海洋尖尾藻的濃度配比為25:1，其余制作方法和步驟與實(shí)施例1相同。實(shí)施例3
與實(shí)施例1不同之處在于所選用于培養(yǎng)海洋尖尾藻的餌料藻為米氏凱倫藻，采用米氏凱倫藻和海洋尖尾藻的濃度配比為180:1，其余制作方法和步驟與實(shí)施例1相同。實(shí)施例4
與實(shí)施例1不同之處在于所選用于培養(yǎng)海洋尖尾藻的餌料藻為湛江等鞭金藻，采用湛江等鞭金藻和海洋尖尾藻的濃度配比為40:1，其余制作方法和步驟與實(shí)施例1相同。
權(quán)利要求
1.一種培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法，其特征在于以海洋微藻為餌料藻培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻；所述赤潮微藻海洋尖尾藻的培養(yǎng)條件是溫度18-25 °C，光強(qiáng) 2000-40001x，光暗比L D=12 h 12h 14h 10h，鹽度4-60，餌料藻和赤潮微藻海洋尖尾藻的濃度配比范圍為22:廣820:1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法，其特征在于所述餌料藻為亞心形扁藻/7a tymonassubcordiformis、米氏凱倫藻mikimo toi、蛋白核小球藻 Chlorellapyrenoidosa 或堪江等鞭金藻/sc^Arj^is zhangjiangensis 中的一禾中。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法，其特征在于所述亞心形扁藻和海洋尖尾藻的濃度配比范圍為110 廣820 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法，其特征在于所述蛋白核小球藻和海洋尖尾藻的濃度配比范圍為22:廣47:1。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法，其特征在于所述米氏凱倫藻和海洋尖尾藻的濃度配比范圍為1 :廣741 1。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法，其特征在于所述湛江等鞭金藻和海洋尖尾藻的濃度配比范圍為36:廣65:1。
7.根據(jù)權(quán)利要求3-6所述的任一培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法，其特征在于所述餌料藻粒徑為赤潮微藻海洋尖尾藻粒徑1/4以下的海洋微藻。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法，其特征在于所述餌料藻的培養(yǎng)采用自養(yǎng)型海洋微藻的培養(yǎng)方法。
全文摘要
本發(fā)明是一種培養(yǎng)赤潮微藻海洋尖尾藻的方法。它利用亞心形扁藻(Platymonassubcordiformis)、米氏凱倫藻(Kareniamikimotoi)、蛋白核小球藻(Chlorellapyrenoidosa)或湛江等鞭金藻(Isochrysiszhangjiangensis)等海洋微藻作為餌料藻，在溫度18-25℃、光強(qiáng)2000-4000lx、光暗比L∶D=12h∶12h~14h∶10h、鹽度4-60、餌料藻和海洋尖尾藻的濃度配比范圍為22:1~820:1的培養(yǎng)條件下可實(shí)現(xiàn)海洋尖尾藻的長(zhǎng)期培養(yǎng)。該方法成本低，所需培養(yǎng)條件在一般實(shí)驗(yàn)室容易獲得。采用本發(fā)明，方法簡(jiǎn)單，易維護(hù)，可為海洋尖尾藻實(shí)驗(yàn)生態(tài)學(xué)及其赤潮的調(diào)控研究提供優(yōu)質(zhì)藻種。
文檔編號(hào)C12R1/89GK102344890SQ20111031430
公開日2012年2月8日 申請(qǐng)日期2011年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月17日
發(fā)明者安鑫龍, 宮春光, 李雪梅 申請(qǐng)人:河北農(nóng)業(yè)大學(xué)