專利名稱：用β-半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制備懸鉤子苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于有機(jī)化合物的生物合成技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用β -半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制備懸鉤子苷的方法。
背景技術(shù)：
懸鉤子苷(又名甜茶甙或甜茶素，Rubusoside, Ru)為廣西甜茶、Rubus usavissmius. S Lee)的主要甜味成分，具有高甜度、低熱值、天然無毒等特點(diǎn)，對有糖尿病人或“三高”人群都有很好的保健作用。但甜茶的種植區(qū)域范圍小、產(chǎn)量低，目前只有屈指可數(shù)幾家廣西公司從事懸鉤子苷的生產(chǎn)，產(chǎn)品純度最高僅為70%左右，成分復(fù)雜，含有甜菊醇和甜菊單糖苷等物質(zhì)。甜菊糖苷(13- [ (2-0-,0 -D-Glucopyranosyl-^ -D-glucopyranosyl) oxy] kaur-16-en -18-oic acid β -D-glucopyranosyl ester, stevioside，以下簡禾爾 St)是從甜葉菊、Stevia rebaudiana Bertoni)中提取出的四環(huán)二萜類化合物，是一種具有后苦澀味的甜味劑，可以低成本大量生產(chǎn)。^水解后可以得到甜菊醇、異甜菊醇、甜菊雙糖苷、懸鉤子苷或者其混合物；各組分含量取決于水解的選擇性。化學(xué)水解時，完全水解St可以得到甜菊醇或異甜菊醇，部分水解則得到上述多種化合物。通過酶催化方法水解^有希望利用酶的高區(qū)域選擇性，只水解M分子中β -1，2糖苷鍵，專一性的得到懸鉤子苷。St被各種催化劑水解的方程式如下
權(quán)利要求
1.一種用半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制備懸鉤子苷的方法，其特征是以甜菊糖苷或者含有甜菊糖苷的甜葉菊提取物為底物，將其用水或緩沖液配制成10-200mg/mL的反應(yīng)液，50-65°C下恒溫0. 3-0. 7h后加入β -半乳糖苷酶，反應(yīng)至甜菊糖苷轉(zhuǎn)化率不再升高； 煮沸反應(yīng)液IOmin使酶失活或離心回收固定化酶，經(jīng)濃縮、重結(jié)晶后可得到純度大于97%的懸鉤子苷；進(jìn)一步通過柱層析純化可以得到純度大于99%的懸鉤子苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制備懸鉤子苷的方法， 其特征是所說的緩沖液為PH 4. 0-5. 4的醋酸緩沖液或者pH 6. 0的磷酸緩沖液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制備懸鉤子苷的方法， 其特征是所說的半乳糖苷酶來源于M/^rgiBM oiT^e，其形態(tài)是酶液或固定化酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制備懸鉤子苷的方法， 其特征是所述的半乳糖苷酶的添加量為為2000-14000 U/g St。
全文摘要
一種用β-半乳糖苷酶催化水解甜菊糖苷制備懸鉤子苷的方法，屬于有機(jī)化合物的生物合成技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明以β-半乳糖苷酶選擇性催化水解從甜葉菊提取物中獲得的甜菊糖苷，用以制備懸鉤子苷，具有轉(zhuǎn)化率高、速度快、選擇性高、分離純化簡單等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明提供了一種高效、環(huán)境友好的新方法以制備懸鉤子苷。
文檔編號C12P19/56GK102250990SQ20111014435
公開日2011年11月23日 申請日期2011年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月31日
發(fā)明者萬會達(dá), 夏詠梅, 方云 申請人:江南大學(xué)