專利名稱：一種il-23r基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分子生物學領(lǐng)域，涉及醫(yī)學和生物技術(shù)，具體的是涉及一種IL-23R基 因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片。
背景技術(shù)：
人白細胞介素-23 受體(human interleukin_23rec印tor，hIL_23R，IL-23R)是一 個由IL-23pl9和IL-12p40組成的異二聚體細胞因子，主要由活化的樹突細胞和巨噬細胞 分泌，屬IL-12炎癥因子家族成員，并通過Jak/Mat途徑傳遞活性信號。IL-23R的編碼基 因定位于1號染色體1ρ31. 2 32. 1的位置上，編碼區(qū)含有^lcb個堿基，由11個外顯子組 成。研究表明，IL-23R的基因多態(tài)性與多種肺部疾病的免疫應(yīng)答及疾病的形成有關(guān)， 如肺結(jié)核、肺炎克雷白桿菌性肺炎、百日咳等感染性疾病及肺部纖維化；此外還與多種自 身免疫性疾病及腫瘤的免疫有關(guān)。本發(fā)明目標檢測的IL-23R基因突變位點，如表所示
權(quán)利要求
1.一種IL-23R基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征在于，主要包括有A.針對IL-23R基因的不同多態(tài)性位點分別設(shè)計的野生型和突變型特異性ASPE引物， 每種ASPE引物由5’端的tag序列和3’端的針對目的基因多態(tài)性位點的特異性引物序列 組成，所述特異性引物序列選自針對C214T的SEQ ID NO. 9及SEQ ID NO. 10、針對C235T 的 SEQ ID NO. 11 及 SEQ ID NO. 12、針對 T82G 的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14、針對 C53T 的SEQ ID NO. 15及SEQ ID NO. 16中的一對以上；所述tag序列選自SEQ ID NO. 1 SEQ IDN0. 8中的序列；B.分別包被有特異的anti-tag序列的、具有不同顏色編碼微球，所述anti-tag序列 選自SEQ IDN0. 17 SEQ ID NO. 24中的序列，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與A中所選 tag序列互補配對，所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；C.用于擴增具有C214T、C235T、T82G和C53T中的一個以上多態(tài)性位點的目標序列的 引物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的IL-23R基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征在于，所述擴增引 物選自針對 C214T 的 SEQ ID NO. 25 和 SEQ ID NO. 26、針對 C235T 的 SEQ ID NO. 27 和 SEQ IDN0. 28、針對 T82G 的 SEQ ID NO.四和 SEQ ID NO. 30、針對 C53T 的 SEQ ID NO. 31 和 SEQID NO. 32中的一對以上。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的IL-23R基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征在于，所述特異 性ASPE引物選自針對C214T的由SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 9組成的序列及由SEQ ID NO. 2和SEQID NO. 10組成的序列、針對C2!35T的由SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 11組成的 序列及由SEQID NO. 4和和SEQ ID NO. 12組成的序列、針對T82G的由SEQ ID NO. 5和SEQ ID NO. 13組成的序列及由SEQ ID NO. 6和SEQ ID NO. 14組成的序列、針對C53T的由SEQ ID NO. 7和SEQ ID NO. 15組成的序列及由SEQ ID NO. 8和SEQ ID NO. 16組成的序列中的 一對以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的IL-23R基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征在于，A.所述ASPE引物為針對C214T的由SEQID NO. 1和SEQ ID NO. 9組成的序列及由 SEQ IDN0. 2 和 SEQ ID NO. 10 組成的序列、針對 C235T 的由 SEQ ID N0. 3 和 SEQ ID NO. 11 組成的序列及由SEQ ID N0. 4和和SEQ ID N0. 12組成的序列、針對T82G的由SEQ ID N0. 5 和SEQ ID N0. 13組成的序列及由SEQ ID N0. 6和SEQ ID N0. 14組成的序列、和針對C53T 的由SEQ ID N0. 7和SEQ ID N0. 15組成的序列及由SEQ ID N0. 8和SEQ ID N0. 16組成的 序列。B.分別包被有特異的anti-tag序列的、具有不同顏色編碼微球，所述anti-tag序列 選自SEQ IDN0. 17 SEQ ID N0. 24中的序列，且所述anti-tag序列能相應(yīng)地與A中所選 tag序列互補配對，所述anti-tag序列與微球連接中間還設(shè)有間隔臂序列；C.所述擴增引物為針對C214T的SEQID N0. 25和SEQ ID N0.沈、針對C235T的SEQ ID N0. 27 和 SEQ ID N0.沘、針對 T82G 的 SEQ ID N0. 29 和 SEQ ID N0. 30、和針對 C53T 的 SEQ ID N0. 31 和 SEQ ID N0. 32。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項所述的IL-23R基因多態(tài)性檢測液相芯片，其特征在于，所 述間隔臂序列為5-10個T。
6.一種用于IL-23R基因多態(tài)性檢測的特異性引物序列，其特征在于，所述特異性引物序列選自針對 C214T 的 SEQ ID NO. 9 及 SEQ ID NO. 10、針對 C235T 的 SEQ ID NO. 11 及 SEQ ID NO. 12、針對 T82G 的 SEQ ID NO. 13 及 SEQ ID NO. 14、針對 C53T 的 SEQ ID NO. 15 及 SEQ ID NO. 16中的一對以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種IL-23R基因多態(tài)性檢測特異性引物和液相芯片，該液相芯片主要包括有由5’端的tag序列和3’端的特異性引物組成的ASPE引物，所述特異性引物序列選自針對C214T的SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10、針對C235T的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12、針對T82G的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14、針對C53T的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16中的一對以上；微球；擴增引物。所述的IL-23R基因多態(tài)性檢測液相芯片具有非常好的信號-噪聲比，并且所設(shè)計的探針以及anti-tag序列之間基本上不存在交叉反應(yīng)，tag標簽序列、anti-tag標簽序列的選取以及tag標簽序列與具體ASPE引物的結(jié)合，能夠避免交叉反應(yīng)，實現(xiàn)多個多態(tài)性位點的并行檢測。
文檔編號C12Q1/68GK102146482SQ20111011125
公開日2011年8月10日 申請日期2011年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月29日
發(fā)明者劉志明, 許嘉森, 郭婧 申請人:廣州益善生物技術(shù)有限公司