專利名稱：一種微生物轉(zhuǎn)化制備度洛西汀手性中間體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物轉(zhuǎn)化領(lǐng)域，具體涉及一種利用微生物轉(zhuǎn)化制備度洛西汀手性中間體(S) _3_輕基_3_ (2_噻吩基)丙臆的方法。
背景技術(shù)：
(S) -3-輕基-3-(2-噻吩基)丙臆((S)-3-hydroxy-3-(2-thienyl)propanenitrile)，CAS 登錄號591727-36_5，分子式 C7H7NOS,分子量 153。(S)-3-羥基-3-(2-噻吩基)丙腈是合成抗抑郁藥物度洛西汀的一個重要的中間體。度洛西汀是一 種新型抗抑郁藥，為5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取的雙重抑制劑。目前發(fā)現(xiàn)不僅可以治療抑郁癥，還可用于治療壓力性尿失禁與糖尿病周圍神經(jīng)病性疼痛，對于抑郁癥伴發(fā)慢性疼痛也有一定的療效。Ahmed Kamal, G. B.等人在Tetrahedron Letters 44 (2003) 4783 - 4787 公開了一條由(S)-3-輕基-3-(2-噻吩基)丙臆制備度洛西汀的路線
權(quán)利要求
1.一種微生物轉(zhuǎn)化制備度洛西汀手性中間體(S)-3-羥基-3-(2-噻吩基)丙腈的方法，其特征在于，所述方法以3-羰基-3-(2-噻吩基)丙腈為底物，以釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No. 2266發(fā)酵獲得的含酶菌體細(xì)胞為生物催化劑,進行轉(zhuǎn)化反應(yīng)制得所述(S)-3-輕基-3-(2-噻吩基)丙臆。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述方法為在pH5. (Γ8. O的磷酸鹽緩沖液中，以3-羰基-3-(2-噻吩基)丙腈為底物，以釀酒酵母CGMCC No. 2266發(fā)酵獲得的含酶菌體細(xì)胞為生物催化劑，于25 45°C下轉(zhuǎn)化反應(yīng)8 40小時，反應(yīng)結(jié)束后，轉(zhuǎn)化液經(jīng)分離純化得到所述(S)-3-輕基-3-(2-噻吩基)丙臆。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述3-羰基-3-(2-噻吩基)丙腈的初始濃度為 O. Γ1 mol/L。
4.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述含酶菌體細(xì)胞用量以細(xì)胞干重計為Γ50 g/g 底物。
5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液中還添加有終濃度為10 100 g/L的葡萄糖。
6.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述含酶菌體細(xì)胞按照以下方法制備將釀酒酵母CGMCC No. 2266接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，搖床轉(zhuǎn)速為150 200 r/min, 26^35 °C培養(yǎng)18^30 h，將發(fā)酵液離心，制得含酶菌體細(xì)胞。
7.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述分離純化的方法如下反應(yīng)結(jié)束后，將轉(zhuǎn)化液4000 r/min離心20分鐘，棄去菌體沉淀，將上清液用等體積乙酸乙酯連續(xù)萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，在乙酸乙酯萃取液中加入無水硫酸鈉除去水分，抽濾，濾液減壓蒸餾除去乙酸乙酯，即得所述(S)-3-羥基-3-(2-噻吩基)丙腈。
8.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述方法按照以下步驟進行 (1)斜面培養(yǎng)將釀酒酵母CGMCCNo. 2266接種到斜面培養(yǎng)基，26 35 °C培養(yǎng)4 6天得菌體斜面；所述的斜面培養(yǎng)基終濃度組成為麥芽汁5 15 g/L，酵母粉2 4 g/L，蛋白胨4 6 g/L，葡萄糖7 12 g/L，瓊脂15 25 g/L,自然pH值，溶劑為水； (2)種子培養(yǎng)從菌體斜面取一接種環(huán)菌體轉(zhuǎn)接到種子培養(yǎng)基，26 35°C，搖床轉(zhuǎn)速為150^200 r/min，培養(yǎng)18 26 h得種子液；所述的種子培養(yǎng)基終濃度組成為葡萄糖26 32g/L，酵母粉 2 4 g/L，硫酸銨 3 6 g/L，無水 MgSO4 O. 2 O. 4 g/L, K2HPO4 · 3H20 O. 5 I. 5g/L, KH2PO4 O. 6 I. 5 g/L,用NaOH或HCl溶液調(diào)整液體培養(yǎng)基的pH值為7. 0，溶劑為水； (3)發(fā)酵培養(yǎng)取種子液，以體積比1(Γ20%的接種量接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度為26 35 °C，搖床轉(zhuǎn)速為15(T200 r/min，培養(yǎng)18 30 h得到含有含酶菌體細(xì)胞的發(fā)酵液，離心分離得到所述含酶菌體細(xì)胞；所述發(fā)酵培養(yǎng)基終濃度組成為葡萄糖26 32 g/L，酵母粉2 4 g/L，硫酸銨 3 6 g/L，無水MgSO4 O. 2 O. 4 g/L，K2HPO4 ·3Η20 O. 5 I. 5 g/L, KH2PO4O. 6 I. 5 g/L,用NaOH或HCl溶液調(diào)整液體培養(yǎng)基的pH值為7. 0，溶劑為水； (4)生物轉(zhuǎn)化在pH5. (Γ8. O的磷酸鹽緩沖液中，加入O. Γ1 mol/L的3-羰基-3-(2-噻吩基)丙腈，再添加終濃度IiTlOO g/L的葡萄糖作為輔助底物，以及細(xì)胞干重為3-羰基-3-(2-噻吩基)丙腈f 50倍的含酶菌體細(xì)胞，于25 45 °C下轉(zhuǎn)化反應(yīng)8 40小時，反應(yīng)結(jié)束制得轉(zhuǎn)化液； (5)分離純化反應(yīng)結(jié)束后將轉(zhuǎn)化液4000r/min離心20分鐘，棄去菌體沉淀，將上清液用等體積乙酸乙酯連續(xù)萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液，在乙酸乙酯萃取液中加入無水硫酸鈉除去水分，抽濾，濾液減壓蒸餾除去乙酸乙酯，即得所述(S)-3-羥基-3-(2-噻吩基)丙腈。
全文摘要
本發(fā)明提供一種微生物轉(zhuǎn)化制備度洛西汀手性中間體(S)-3-羥基-3-(2-噻吩基)丙腈的方法。該方法為在由釀酒酵母CGMCC No.2266發(fā)酵獲得的含酶菌體細(xì)胞的催化下，將3-羰基-3-(2-噻吩基)丙腈轉(zhuǎn)化得到所述(S)-3-羥基-3-(2-噻吩基)丙腈。本發(fā)明反應(yīng)條件溫和，操作簡便，成本低廉，產(chǎn)物收率高、純度高，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C12R1/865GK102643879SQ20111004146
公開日2012年8月22日 申請日期2011年2月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月21日
發(fā)明者歐志敏, 沈文和, 車大慶 申請人:浙江九洲藥業(yè)股份有限公司