專利名稱：一種運(yùn)載荷載細(xì)胞因子的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型cik細(xì)胞的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基因工程和腫瘤生物治療領(lǐng)域。具體的說，本發(fā)明涉及利用基因突變和重組技術(shù)，缺失病毒ElB55-kD蛋白、調(diào)控病毒ElA蛋白的表達(dá)、改造溶瘤腺病毒的纖毛蛋白，以提高溶瘤腺病毒靶向感染CIK細(xì)胞的能力和安全性。同時(shí)在溶瘤腺病毒中插入治療基因IL-2，通過CIK細(xì)胞將荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒運(yùn)載到腫瘤組織部位，發(fā)揮CIK 細(xì)胞、溶瘤腺病毒和細(xì)胞因子的協(xié)同殺傷腫瘤作用，在增強(qiáng)靶向抗腫瘤作用的同時(shí)，避免了全身應(yīng)用的副作用。
背景技術(shù)：
溶瘤腺病毒作為一種特殊的腫瘤治療藥物和基因治療載體近年來發(fā)展迅速，許多高效、靶向性病毒相繼進(jìn)入臨床試驗(yàn)，顯示出廣闊的應(yīng)用前景。目前，已進(jìn)入臨床試驗(yàn)的溶瘤病毒中，ElB-55kD蛋白缺失型腺病毒Onyx-015被認(rèn)為是療效最佳、最有前途的一種溶瘤腺病毒。Onyx-015是1996年由美國Onyx醫(yī)藥公司開發(fā)的腺病毒基因藥物，腺病毒缺失 ElB-55kD蛋白后，不能在正常細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，而在p53失活的腫瘤細(xì)胞中大量復(fù)制，并溶解腫瘤細(xì)胞。在I期臨床試驗(yàn)中，0riyX-015治療14例常規(guī)治療失敗的頭頸癌患者，有6例腫瘤明顯縮小，部分病例病情改善，未見明顯不良反應(yīng)。然而，在II期臨床試驗(yàn)中，Onyx-015治療胰腺癌43例、胃腸癌19例、卵巢癌16例、大腸癌肝轉(zhuǎn)移33例、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移癌9例，均無明顯的客觀療效[1-3]。為提高溶瘤病毒的療效，劉新垣院士把Onyx-015改造成能夠插入抗癌基因的載體pZD55，隨著病毒在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，抗癌基因表達(dá)量大大提高。雖然荷載抗癌基因的溶瘤腺病毒ZD55在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均顯示出更好的抗腫瘤療效W-5]，但仍無法完全消滅腫瘤。主要原因是溶瘤病毒進(jìn)入人體后會(huì)受到多種免疫機(jī)制的清除。目前病毒主要給藥方法是瘤內(nèi)注射或靜脈注射，由于各種免疫、生化或物理屏障的作用，導(dǎo)致病毒遞送效率很低 [6，7]。所以，病毒進(jìn)入體內(nèi)后很快被補(bǔ)體、抗病毒抗體及各種吞噬細(xì)胞等破壞，不能發(fā)揮有效的抗腫瘤作用。如何將病毒準(zhǔn)確而高效地運(yùn)輸?shù)侥[瘤有待解決。研究人員想到利用細(xì)胞作為病毒的運(yùn)載工具，即病毒感染并進(jìn)入具有腫瘤識別能力的細(xì)胞中，靜脈注射細(xì)胞，利用細(xì)胞對腫瘤組織的趨向性，幫助病毒越過復(fù)雜的血液環(huán)境將病毒運(yùn)抵腫瘤組織。目前常用的細(xì)胞載體主要有三類腫瘤細(xì)胞、干細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞，但這些細(xì)胞載體存在諸多問題，如獲取困難、安全性低、血管穿透性差、腫瘤識別能力單一及細(xì)胞大量擴(kuò)增困難等，無法滿足臨床要求[8-10]。因此，尋找一種能夠?qū)δ[瘤組織廣譜識別、保護(hù)病毒逃避免疫清除、有效穿透血管和腫瘤組織屏障的新型細(xì)胞載體，是確保溶瘤病毒發(fā)揮治療作用的關(guān)鍵。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced killer cells，CIK)具有向腫瘤組織局部趨化聚集的特性，大量臨床應(yīng)用證明CIK細(xì)胞大劑量回輸?shù)陌踩訹11，12]。因此，利用CIK細(xì)胞作為病毒的載體是個(gè)理想的選擇。2006年Thorne等[13]在《Science》報(bào)道了利用CIK細(xì)胞運(yùn)載牛痘病毒(vvDD)的研究。結(jié)果顯示，CIK細(xì)胞成功地將wDD準(zhǔn)確運(yùn)載到小鼠腫瘤組織部位，效果明顯優(yōu)于其他種類細(xì)胞載體。病毒必須對載體細(xì)胞具有較強(qiáng)的感染能力，才能順利進(jìn)入細(xì)胞，并達(dá)到抗腫瘤所需要的滴度。常用的5型腺病毒(Ad5)通過細(xì)胞表面柯薩奇-腺病毒受體(CAR)感染細(xì)胞。 但CIK細(xì)胞低表達(dá)CAR，因此利用Ad5感染CIK細(xì)胞效果可能不佳。研究表明，人35型腺病毒(Ad35)感染細(xì)胞不依賴CAR受體，能夠高效感染淋巴細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞[14，15]。利用 Ad35纖毛蛋白的knob和shaft替換Ad5纖毛蛋白的knob和shaft，構(gòu)建的具有嵌合型纖毛蛋白的重組病毒能夠高效地感染T淋巴細(xì)胞及NK細(xì)胞[16，17]。因此，用pBHG-fiber5/35 代替腺病毒右臂質(zhì)粒PBHGE3作為病毒重組包裝的骨架質(zhì)粒，使重組病毒具有嵌合型纖毛蛋白結(jié)構(gòu)，可以提高病毒感染CIK細(xì)胞的能力。溶瘤腺病毒感染并進(jìn)入CIK細(xì)胞后，如果病毒過早復(fù)制必然會(huì)導(dǎo)致CIK細(xì)胞的溶解破壞，削弱CIK細(xì)胞的抗腫瘤作用，也無法將病毒運(yùn)載到腫瘤組織。前已述及，ElB-55kD 蛋白缺失的溶瘤腺病毒ZD55可以選擇性地在腫瘤細(xì)胞內(nèi)繁殖，而對正常細(xì)胞幾乎無影響。 為進(jìn)一步控制其對CIK細(xì)胞及正常組織的毒副作用，利用在腫瘤細(xì)胞中高活性的人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)基因啟動(dòng)子替換ZD55的ElA基因啟動(dòng)子，希望通過雙重調(diào)控嚴(yán)格限制病毒在CIK細(xì)胞的增殖能力，而不影響其在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的增殖。前已述及，溶瘤腺病毒荷載抗癌基因?qū)⑦M(jìn)一步提高其抗腫瘤療效。大量研究發(fā)現(xiàn) IL-2可刺激細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等增殖，從而加強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，控制腫瘤生長， 減少復(fù)發(fā)[18]。但是，IL-2全身大劑量應(yīng)用時(shí)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用，甚至導(dǎo)致病人死亡。 將IL-2基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的局部分泌IL-2，不僅可以避免全身性副作用，而且可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗腫瘤免疫反應(yīng)[19]。同時(shí)，IL-2還是刺激誘導(dǎo)單個(gè)核細(xì)胞生成CIK 細(xì)胞不可缺少的細(xì)胞因子。因此，利用CIK細(xì)胞運(yùn)輸荷載IL-2的溶瘤腺病毒進(jìn)入體內(nèi)，能避免機(jī)體對溶瘤腺病毒的破壞；CIK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞后，釋放出的溶瘤腺病毒能發(fā)揮二次靶向殺傷腫瘤細(xì)胞作用；同時(shí)所分泌的細(xì)胞因子IL-2能增強(qiáng)CIK細(xì)胞的抗腫瘤能力，發(fā)揮“細(xì)胞-病毒-基因”的三重協(xié)同抗腫瘤作用。還能起到有效減少全身應(yīng)用細(xì)胞因子和溶瘤腺病毒所導(dǎo)致的副作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞。更具體地說，在本發(fā)明中CIK既是抗腫瘤的效應(yīng)細(xì)胞，又是溶瘤腺病毒的運(yùn)載工具。所運(yùn)載的溶瘤腺病毒經(jīng)基因重組改造后具有如下特點(diǎn)對CIK細(xì)胞具有較強(qiáng)的感染力；能保證病毒只在腫瘤細(xì)胞中增殖；荷載了治療基因。在實(shí)施例中，CIK運(yùn)載的溶瘤腺病毒是雙調(diào)控并荷載IL-2 作為治療基因的溶瘤腺病毒。本發(fā)明的技術(shù)方案是一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞， 用pBHG-fiber5/35作為病毒重組的骨架質(zhì)粒，以腫瘤特異性hTERT啟動(dòng)子替換ElB_55kD 蛋白缺失的溶瘤腺病毒穿梭質(zhì)粒PZD55的ElA啟動(dòng)子，并插入IL-2基因，重組為荷載IL-2 的雙調(diào)控溶瘤腺病毒。重組溶瘤腺病毒感染CIK細(xì)胞后，由CIK將其運(yùn)載到腫瘤部位，待CIK殺傷腫瘤細(xì)胞自身死亡后，釋放出溶瘤病毒，發(fā)揮溶瘤病毒和IL-2的抗腫瘤作用，避免了全身應(yīng)用的副作用。同時(shí)，局部釋放的IL-2又能進(jìn)一步刺激CIK細(xì)胞的增殖和激活，增強(qiáng)CIK的抗腫瘤作用。上述說明以及下面的實(shí)例僅是用作舉例說明，并不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。也就是說，凡通過對溶瘤腺病毒改造，并以CIK作為溶瘤病毒載體均在本發(fā)明的范圍。本發(fā)明的有益效果是利用基因突變和重組技術(shù)，缺失病毒ElB55_kD蛋白、調(diào)控病毒ElA蛋白的表達(dá)、改造溶瘤腺病毒的纖毛蛋白，提高了溶瘤腺病毒靶向感染CIK細(xì)胞的能力和安全性。同時(shí)在溶瘤腺病毒中插入治療基因IL-2，通過CIK細(xì)胞將荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒運(yùn)載到腫瘤組織部位，發(fā)揮CIK細(xì)胞、溶瘤腺病毒和細(xì)胞因子的協(xié)同殺傷腫瘤作用，在增強(qiáng)靶向抗腫瘤作用的同時(shí)，避免了全身應(yīng)用的副作用。


圖1-1 MTT檢測不同CIK細(xì)胞體外抑制肺癌細(xì)胞A549的增殖； 圖1-2 MTT檢測不同CIK細(xì)胞體外抑制肝癌細(xì)胞HepG2的增殖；
圖1-3 MTT檢測不同CIK細(xì)胞體外抑制宮頸癌細(xì)胞HeLa的增殖； 圖1-4 MTT檢測不同CIK細(xì)胞體外抑制腎癌細(xì)胞ACHN的增殖； 圖2-1 Annexin V染色檢測不同CIK細(xì)胞誘導(dǎo)ACHN腫瘤細(xì)胞凋亡； 圖2-2 DAPI染色檢測不同CIK細(xì)胞誘導(dǎo)HeLa腫瘤細(xì)胞凋亡。上述圖中，圖1-1至圖1-4是MTT檢測不同CIK細(xì)胞體外抑制腫瘤細(xì)胞的增殖； 圖2-1至是圖2-2是Armexin V染色及DAPI染色分別檢測不同CIK細(xì)胞誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合優(yōu)選具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述，但并不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。也就是說，凡針對溶瘤腺病毒改造，并以CIK作為溶瘤病毒載體均在本專利的范圍。使用本發(fā)明治療各種腫瘤疾病等也均在本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1 一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞 (一)利用hTERT啟動(dòng)子替換溶瘤病毒ZD55的ElA基因啟動(dòng)子
(DhTERT啟動(dòng)子的克隆
設(shè)計(jì)引物:P1 5' -AT CTCGAG TGG CCC CTC CCT CGG GTT AC-3，
Xho I
P2 5' -GC TACGTA CGC GGG GGT GGC CGG GGC CA-3' SnaB I
以含pGL3-hTERT質(zhì)粒為模板，PCR擴(kuò)增條件為94°C lmin, 55°C lmin，72°C Imin0 PCR擴(kuò)增得到hTERT啟動(dòng)子基因片段，并引人Β ο I和SnaB I酶切位點(diǎn)。(2) hTERT啟動(dòng)子基因替換病毒的ElA基因啟動(dòng)子 ①缺失ElA基因啟動(dòng)子
設(shè)計(jì)引物
P3 5' - TCC TGT GGATCC GGG CCC CCA TTT C -3，BamH I
P4 :5’ - TTCAGTACGTAGTCGACCTCGAGATATTACGCGCTATGAGT AAC AC -3，
與P3互補(bǔ)
P5 :5， - TATCTCGAGGTCGACTACGTACTGAAAATGAGACATATTATC -3，
與P2互補(bǔ)
P6 5' - TACT ACT ATT GCA TTC TCTAGA CAC A -3，
Xba I
以pXCl質(zhì)粒為PCR反應(yīng)的模板，引物P3與P4進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)，電泳回收394 bp片段。以pXCl質(zhì)粒為PCR反應(yīng)的模板，引物P5與引物P6進(jìn)行第二次PCR反應(yīng)，電泳回收830 bp片段。兩次PCR反應(yīng)的產(chǎn)物有^bp互補(bǔ)序列，以兩次PCR產(chǎn)物混合作為模板，以引物P3與引物P6進(jìn)行第三次PCR反應(yīng)，電泳回收1198 bp片段。以BamH I + Xba I酶切 1198 bp的PCR產(chǎn)物，克隆進(jìn)BamH I + Xba I酶切過的pZD55質(zhì)粒。②hTERT啟動(dòng)子插入ElA啟動(dòng)子缺失的質(zhì)粒pZD55中
以B10 I和SnaB I酶切PCR擴(kuò)增得到hTERT啟動(dòng)子基因片段，克隆進(jìn)經(jīng)相同酶切過的ElA啟動(dòng)子缺失的質(zhì)粒pZD55中，命名為pTERT-ZD55。(二)荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒穿梭質(zhì)粒PTERT-ZD55-IL-2的構(gòu)建 (1)克隆 IL-2 的 cDNA
設(shè)計(jì)引物P1 :5，- AT AGATCT ATG CAA CTC CTG TC -3，
Bgl II
P2 5' - TA AGATCT TTA TGT TGA GAT GAT GC-3' Bgl II
以pcDNA3-IL-2質(zhì)粒為模板，PCR擴(kuò)增得到IL-2的cDNA，并引人Kpn I和Bgl II 酶切位點(diǎn)。(2)構(gòu)建質(zhì)粒 pTERT-ZD55-IL-2
將IL-2的cDNA基因片段經(jīng)Bgl II酶切，克隆進(jìn)經(jīng)Bgl II酶切后的pTERT_ZD55 質(zhì)粒,命名為 pTERT-ZD55-IL-2。(三)骨架質(zhì)粒pBHG-fiber5/35與pTERT_ZD55-IL_2穿梭質(zhì)粒重組，包裝成完整病毒的鑒定
293細(xì)胞鋪于IOcm培養(yǎng)皿，將穿梭質(zhì)粒pTERT-ZD55_IL_2、pTERT_ZD55及 PTERT-ZD55-EGFP 分別與 Ad5/F;35 嵌合型腺病毒骨架質(zhì)粒 pBHG_fiber5/;35 通過 Effectene 共轉(zhuǎn)染至293細(xì)胞，9-14天出現(xiàn)病毒空斑，經(jīng)過病毒空斑純化，進(jìn)行擴(kuò)增，提取重組腺病毒的DNA。通過PCR分析，確定重組正確的病毒，得到TERT-ZD55/F35-IL-2、TERT-ZD55/F35和 TERT-ZD55/F35-EGFP0將鑒定正確的病毒分別感染HEK293細(xì)胞擴(kuò)增病毒，CsCl梯度離心純化病毒，50% 組織培養(yǎng)感染量(TCID50)法測滴度。(四)病毒感染CIK細(xì)胞 (I)CIK細(xì)胞的培養(yǎng)
抽取健康成人的外周血20ml，F(xiàn)icoll淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞，生理鹽水洗滌2次后，以RPMI1640 (含10%胎牛血清)調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)至1 2X106/ml，第0天加入IFN-y (1000U/ml)，放置于37°C 5% CO2培養(yǎng)箱箱中培養(yǎng)Mh，第1天加入IL-1 (100U/ ml)，CD3單抗(15μ g/ml)，重組人IL_2 (300U/ml)繼續(xù)培養(yǎng)，第4天補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)液，調(diào)節(jié)細(xì)胞數(shù)為1 X 106/ml，補(bǔ)加IL-2 (100U/ml )，第0天、第7天及第14天取細(xì)胞用臺盼藍(lán)拒染法記數(shù)，第15天收獲細(xì)胞用FCM測定⑶3+⑶56+雙陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。(2)病毒感染CIK細(xì)胞
將 TERT-ZD55/F35-IL-2, TERT-ZD55/F35 和 TERT-ZD55/F35-EGFP 重組病毒(滴度為IXlO11Pfu)分別加入培養(yǎng)成熟的CIK細(xì)胞中，使得病毒感染并進(jìn)入細(xì)胞中。(五)檢測包被病毒的CIK細(xì)胞體外殺傷腫瘤效應(yīng)
將裝載不同病毒的CIK細(xì)胞分別作用于腫瘤細(xì)胞，MTT法檢測細(xì)胞增殖活性，Annexin V染色及DAPI染色法檢測凋亡。結(jié)果顯示，荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的CIK對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用明顯優(yōu)于單純CIK和荷載溶瘤腺病毒的CIK。見圖1-1至1-4和圖2-1至 2-2。
權(quán)利要求
1.一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞，其特征在于以其作為病毒載體，所運(yùn)載的病毒是經(jīng)過改造的荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒。
2.如權(quán)利要求1所述的一種能運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞，其特征在于新型CIK細(xì)胞來源于患者本人，具有腫瘤組織局部趨化聚集的特性，對患者腫瘤具有識別和殺傷能力，能安全、高效的運(yùn)載病毒。
3.如權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞，其特征在于CIK細(xì)胞殺傷腫瘤細(xì)胞死亡后，釋放出荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒，溶瘤病毒在直接殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)，分泌IL-2并刺激CIK細(xì)胞增殖；發(fā)揮“細(xì)胞-病毒-基因”的協(xié)同抗腫瘤作用。
4.如權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞，其特征在于所述的荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒穿梭質(zhì)粒在缺失ElB55-kD的同時(shí)，利用 hTERT啟動(dòng)子取代ElA啟動(dòng)子，實(shí)現(xiàn)病毒在腫瘤細(xì)胞中選擇性增殖的雙重調(diào)控。
5.如權(quán)利要求4所述的一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞，其特征在于所述的荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒用骨架質(zhì)粒pBHG-fiber5/35與雙調(diào)控溶瘤腺病毒穿梭質(zhì)粒重組，重組后完整的溶瘤病毒具有嵌合型纖毛蛋白結(jié)構(gòu)，能提高病毒感染 CIK細(xì)胞的能力。
6.如權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞，其特征在于荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒，其荷載的不僅指IL-2，也包括所有細(xì)胞因子和各種治療基因，如血管抑制基因、腫瘤壞死因子基因、腫瘤自殺基因、促細(xì)胞凋亡基因、抑癌基因、細(xì)胞因子基因、反義核苷酸、小干擾RNA ;IL-2在此僅作為一個(gè)具體實(shí)施例子。
7.如權(quán)利要求1所述的一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞，其特征在于荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒，該溶瘤腺病毒不僅指利用hTERT啟動(dòng)子替換ElA 啟動(dòng)子，也包括利用其它腫瘤特異性啟動(dòng)子或組織特異性啟動(dòng)子，如Suvivin、Ki-67、PSA、 AFP、CEA等啟動(dòng)子，實(shí)現(xiàn)病毒在腫瘤細(xì)胞中選擇性增殖的調(diào)控；hTERT啟動(dòng)子在此僅作為一個(gè)具體實(shí)施例子。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種運(yùn)載荷載IL-2的雙調(diào)控溶瘤腺病毒的新型CIK細(xì)胞，屬新型CIK細(xì)胞的制備方法。該CIK細(xì)胞能夠運(yùn)載荷載細(xì)胞因子如IL-2的溶瘤腺病毒。該溶瘤腺病毒經(jīng)過改造后，其穿梭質(zhì)粒在缺失E1B55-kD的同時(shí)，利用hTERT啟動(dòng)子取代E1A啟動(dòng)子，達(dá)到雙重調(diào)控病毒在腫瘤細(xì)胞中的選擇性增殖。然后將此穿梭質(zhì)粒與腺病毒骨架質(zhì)粒pBHG-fiber5/35重組，使完整的溶瘤病毒外殼具有嵌合型纖毛蛋白結(jié)構(gòu)，以提高病毒感染CIK細(xì)胞的能力。該CIK細(xì)胞進(jìn)入體內(nèi)殺傷腫瘤細(xì)胞后，釋放出的溶瘤腺病毒能發(fā)揮二次殺傷腫瘤細(xì)胞作用，同時(shí)所分泌的細(xì)胞因子IL-2能增強(qiáng)CIK細(xì)胞的抗腫瘤能力，發(fā)揮“細(xì)胞-病毒-基因”的三重協(xié)同抗腫瘤作用。該CIK細(xì)胞同時(shí)減少了全身應(yīng)用細(xì)胞因子和溶瘤腺病毒的副作用。
文檔編號C12N7/01GK102154213SQ201110020769
公開日2011年8月17日 申請日期2011年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月19日
發(fā)明者劉俊杰, 張寶福, 徐為, 李慧中, 李連濤, 裴冬生, 鄭駿年 申請人:鄭駿年