專利名稱：一種利用產(chǎn)朊假絲酵母制備富硒酵母的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種新的制備富硒酵母的方法，特別涉及利用產(chǎn)朊假絲酵母制備富硒 酵母的的方法。
背景技術：
硒元素是公認的必需微量元素，其在過氧化物的分解和自由基的清除、機體免疫 力的調(diào)節(jié)、有毒元素的拮抗等方面均發(fā)揮著重要作用。目前的補硒添加劑包括無機硒和有 機硒，因有機硒的食用安全性強、生物利用率更高，其是更優(yōu)的補硒添加劑。通過生物富硒 的方法將無機硒轉化為有機硒是一種安全有效的方法，且富硒酵母的生產(chǎn)較為簡便。因此， 富硒酵母是最常用的補硒添加劑。關于富硒酵母的研究較多，開發(fā)成本更低、含硒量更高的富硒酵母是近來研究的
執(zhí)占·葛曉光等，“富硒產(chǎn)朊假絲酵母的制備條件研究”，糧食與飼料工業(yè)，2009年，第10 期公開了環(huán)境條件對產(chǎn)朊假絲酵母細胞生長和富硒能力的影響。發(fā)酵菌種為產(chǎn)朊假絲酵 母(Candida utilis SZU 07-01)，在培養(yǎng)基為葡萄糖30. Og/L、硫酸銨8. Og/L、磷酸二氫鉀 3. Og/L、硫酸鎂0. 25g/L，加硒量為10mg/L的條件下發(fā)酵，得到的富硒酵母的生物量為Ilg/ L，硒的有機轉化率為90. 2%，其細胞中含硒量為998 μ g/g，有機硒含量為90. 2%。該方法 使用的無機硒少，生產(chǎn)成本低，富硒酵母的生物量高，但是富硒酵母的含硒量低。范秀英等，“高生物量富硒酵母的選育及培養(yǎng)條件初步優(yōu)化”，生物工程學報，2003 年，第19卷第6期公開了一種高生物量富硒酵母菌株ZFF-觀及其優(yōu)化培養(yǎng)條件。發(fā)酵菌 種為篩選誘變得到的ZFF-28，在培養(yǎng)基為蔗糖糖蜜培養(yǎng)基，加硒量為60μ g/ml的條件下發(fā) 酵，得到的富硒酵母的生物量為8. 2g/L，細胞中硒含量為2025 μ g/g,有機硒含量為91 %。 該方法得到的富硒酵母的含硒量較高，但是富硒酵母的生物量低且使用的無機硒多，導致 工業(yè)生產(chǎn)成本較高?，F(xiàn)有文獻還沒有同時兼顧低生產(chǎn)成本、高生物量和高含硒量的富硒酵母制備方法 的相關報道。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種新的制備富硒酵母的技術方案。本發(fā)明提供了一種制備富硒酵母的方法，包括下列步驟a,取保藏號為CICC 1422的產(chǎn)朊假絲酵母復蘇并制備種子；b，將步驟a得到的種子接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，發(fā)酵時間為24-36小時；c，在發(fā)酵液中加入硒，硒的終濃度為10 20mg/L，繼續(xù)發(fā)酵，發(fā)酵時間為小 時，收集菌液；d，將步驟c得到的菌液離心，收集菌體，烘干，即得富硒酵母。步驟b所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為YPS培養(yǎng)基；步驟b所述的發(fā)酵時間為M小時；步驟b和步驟c的發(fā)酵pH為4 6. 5，優(yōu)選為5. 1 ；步驟b和步驟c的發(fā)酵溫度為觀 30°C ；步 驟c所述的硒的終濃度為15mg/L ；步驟c所述的硒為亞硒酸鈉；步驟c所述的發(fā)酵時間為 36小時。本發(fā)明還提供一種由前述方法制備得到的富硒酵母。本發(fā)明提供的制備富硒酵母的方法成本低，加硒量僅為15mg/L，得到的富硒酵 母的生物量高，可達到為9. 7g/L，富硒酵母的含硒量高，可達到1430 μ g/g，有機硒含量為 1300μ g/g。本發(fā)明提供的方法可以在生產(chǎn)成本較低的情況下，得到生物量和含硒量均較高 的富硒酵母，適于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi) 容所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范圍。


圖1不同pH對產(chǎn)朊假絲酵母生長的影響。圖上的7個點從左至右分別表示發(fā)酵 PH為4,4. 5、5、5· 5、6、6· 5、7得到的酵母菌的生物量。圖2酵母菌的重量隨pH變化的趨勢線。該曲線是根據(jù)圖1的曲線經(jīng)回歸分析得 出的曲線。圖3不同接種量的產(chǎn)朊假絲酵母生長曲線。圖上曲線2%表示接種量為2%時產(chǎn) 朊假絲酵母的生長情況；圖上曲線5%表示接種量為5%時產(chǎn)朊假絲酵母的生長情況；圖上 曲線10%表示接種量為10%時產(chǎn)朊假絲酵母的生長情況。
具體實施例方式1材料與試劑1. 1 菌種產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)，購于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，保藏 號為CICC 1422 ；啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，購于中國工業(yè)微生物菌種保藏 管理中心，保藏號為CICC 31362。1. 2 儀器HZS-HA水浴振蕩器、SHEN AN手扶式高壓滅菌鍋、101-3A電熱鼓風恒溫干燥箱、雷 磁PHS-3D PH計、90-1型恒溫磁力攪拌器、722光柵分光光度計、新苗QYC-2102大容量雙層 全溫搖床、Sff-CJ-IFD單人單面凈化工作臺、BI0FUGE冷凍離心機1. 3 試齊[J蔗糖(分析純)、酵母粉(生化試劑)、蛋白胨(生化試劑)、酒石酸(分析純)、亞 硒酸鈉(優(yōu)級純)、瓊脂(生化試劑)1. 4硒母液的配制1)標準硒貯備液準確稱取2. 190g干燥的亞硒酸鈉，溶于蒸餾水，添加80ml、48% 的HBr，然后用蒸餾水稀釋至1L，制備成含硒lg/L的標準硒貯備液。2)硒標準溶液取上述貯備液Iml加蒸餾水定容為1L，即含硒量為lmg/L，高壓滅 菌，備用。
1. 5培養(yǎng)基的制備1)斜面培養(yǎng)基取去皮土豆200g，切成小塊，加蒸餾水1L。小火煮沸45 60min，用紗布過濾，然 后補足失水至1L，并同時加入蔗糖20g ；瓊脂粉20g ；酵母粉2g ；蛋白胨2g。趁熱分裝于 試管中，裝入量為試管長度的1/3，加塞后經(jīng)121°C滅菌20min。在培養(yǎng)基未凝固前呈15° 斜面放置，凝固并經(jīng)恒溫37°C培養(yǎng)24h鑒定無菌后，置于4°C冰箱貯存?zhèn)溆谩?)天然培養(yǎng)基(PS4)，種子培養(yǎng)基取去皮土豆200g，切成小塊，加蒸餾水1L。小火煮沸45 60min，用紗布過濾，然 后補足失水至1L，并同時加入蔗糖40g，121C滅菌20min后，置于4°C冰箱貯存?zhèn)溆谩?)YPG取酵母粉10g，蛋白胨10g，葡萄糖20g，加蒸餾水至1L，121°C滅菌20min后，置于 4°C冰箱貯存?zhèn)溆谩?) YPS取酵母粉10g，蛋白胨10g，蔗糖50g，加蒸餾水至1L，121V滅菌20min后，置于4°C
冰箱貯存?zhèn)溆?。本發(fā)明試驗數(shù)據(jù)采用SAS 8. OGLM程序進行統(tǒng)計分析，REG程序建立線性回歸方 程，并進行顯著性檢驗。實施例1菌種及培養(yǎng)基的確定1、菌種復蘇分別將啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和產(chǎn)朊假絲酵母 (Candidautilis)在無菌條件下，用接種環(huán)接種于斜面培養(yǎng)基上，于觀 30°C下培養(yǎng)Mh， 復蘇菌種，復蘇兩代。2、酵母種子培養(yǎng)在250ml三角瓶中(裝液量為50ml)裝入種子培養(yǎng)基，取復蘇后的菌種分別接種 于種子培養(yǎng)基中，150r/min、28 30°C下培養(yǎng)Mh，作為種子。3、發(fā)酵培養(yǎng)在250ml三角瓶中分別裝入50ml PS4、YPG和YPS液體培養(yǎng)基，以10%的接種量 將兩種酵母種子分別接入不同的培養(yǎng)基中，150r/min、28 30°C下培養(yǎng)72h。收獲菌液，離 心(5000r/min，IOmin)后棄上清液收獲菌體，將菌體在65 70°C烘干，以菌體重量達到恒 重為準，即得酵母，稱重。4、結果結果見表1 表1兩種酵母在不同培養(yǎng)基中的生長情況(g/L)
權利要求
1.一種制備富硒酵母的方法，其特征在于包括下列步驟 a，取保藏號為CICC 1422的產(chǎn)朊假絲酵母復蘇并制備種子；b，將步驟a得到的種子接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，發(fā)酵時間為M 36小時； c，在發(fā)酵液中加入硒，硒的終濃度為10 20mg/L，繼續(xù)發(fā)酵，發(fā)酵時間為24-48小時， 收集菌液；d，將步驟c得到的菌液離心，收集菌體，烘干，即得富硒酵母。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于步驟b所述的發(fā)酵培養(yǎng)基為YPS培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于步驟b所述的發(fā)酵時間為M小時。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于步驟b和步驟c的發(fā)酵溫度為^ 30°C。
5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于所述的發(fā)酵pH為4 6.5。
6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于所述的發(fā)酵pH為5.1。
7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于步驟c所述的硒的終濃度為15mg/L。
8.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于步驟c所述的硒為亞硒酸鈉。
9.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于步驟c所述的發(fā)酵時間為36小時。
10.權利要求1 9任意一項所述的方法制備得到的富硒酵母。
全文摘要
一種利用產(chǎn)朊假絲酵母制備富硒酵母的方法，涉及一種新的制備富硒酵母的方法。一種制備富硒酵母的方法，包括下列步驟a，取保藏號為CICC 1422的產(chǎn)朊假絲酵母復蘇并制備種子；b，將步驟a得到的種子接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，發(fā)酵時間為24-36小時；c，在發(fā)酵液中加入硒，硒的終濃度為5～20mg/L，繼續(xù)發(fā)酵，發(fā)酵時間為24-48小時，收集菌液；d，將步驟c得到的菌液離心，收集菌體，烘干，即得富硒酵母。本發(fā)明的方法可以較好的兼顧生產(chǎn)成本、富硒酵母的生物量以及富硒酵母的含硒量，在消耗少量無機硒的情況下，得到生物量和含硒量均較高的富硒酵母，適于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C12R1/72GK102146355SQ20111000359
公開日2011年8月10日 申請日期2011年1月10日 優(yōu)先權日2011年1月10日
發(fā)明者何軍, 余冰, 陳代文 申請人:四川農(nóng)業(yè)大學