專利名稱：針對人核仁素的人單克隆抗體的制作方法
針對人核仁素的人單克隆抗體奪叉參考本申請要求2009年11月17日提交的美國臨時專利申請序列號61/261，909的優(yōu)先權(quán)，該申請通過引用全部納入本文用于所有目的。有關(guān)聯(lián)邦資助的研究的聲明本申請在國立衛(wèi)生研究院國立癌癥研究所授予的美國政府基金號NCICA109254-04S1的資助下完成。美國政府可享有本發(fā)明的權(quán)利。發(fā)明背景
本發(fā)明一般涉及細(xì)胞生物學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及人核仁素(NCL)的單克隆抗體的生產(chǎn)和使用相關(guān)的方法和組合物?？贵w是一類稱為“生物制品”的試劑?？贵w來源可以是多克隆供給，例如人或馬血清，或衍生自單克隆來源(單細(xì)胞克隆)。伴以控制和選擇特異性抗原結(jié)合的技術(shù)能力，單克隆抗體已產(chǎn)生顯著的治療效果。但是，對某些靶標(biāo)產(chǎn)生特異性抗體的難度限制了成功，且治療與診斷試劑的潛力仍遠(yuǎn)未開發(fā)。開發(fā)用于人體治療的單克隆抗體的障礙之一是需要“人源化”這類通常產(chǎn)生于小鼠、大鼠和兔的抗體。若未經(jīng)人源化恒定區(qū)就將這類抗體給予人類患者，這些患者可能受“血清病”的折磨，意味著所述受體產(chǎn)生針對非人抗體序列的內(nèi)源性免疫應(yīng)答?？蒲袆游镏挟a(chǎn)生的人源化單克隆抗體可克服這一問題。但是，用于人源化抗體的時間和經(jīng)濟(jì)成本會相當(dāng)可觀。核仁素在人慢性淋巴細(xì)胞性白血病(CLL)細(xì)胞、急性骨髓性白血病(AML)細(xì)胞、一些形式的乳腺癌以及其他腫瘤的細(xì)胞表面表達(dá)。因此，核仁素構(gòu)成有希望的腫瘤抗原，用作包括抗體在內(nèi)的治療劑革巴標(biāo)。發(fā)明概述本發(fā)明的一方面提供能分泌結(jié)合人核仁素的抗體的永生化人B細(xì)胞的產(chǎn)生方法，其包括獲取IgM-陽性人B細(xì)胞群體；將所述群體接觸愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)以使所述人B細(xì)胞永生化，接觸細(xì)胞因子/生長因子/信號傳導(dǎo)試劑混合物以誘導(dǎo)IgM向IgG的免疫球蛋白同種型類型轉(zhuǎn)換；并在支持所述永生化和免疫球蛋白同種型類型轉(zhuǎn)換的條件下培養(yǎng)細(xì)胞。在一種實施方式中，所述方法還包括選擇表達(dá)針對人核仁素的抗體的永生化人B細(xì)胞。在另一實施方式中，進(jìn)行的選擇包括對永生化B細(xì)胞培養(yǎng)基上清液進(jìn)行免疫測定。在另一實施方式中，細(xì)胞因子混合物含有遞送輔助刺激信號給人B細(xì)胞的試劑。在另一實施方式中，細(xì)胞因子混合物含有抗-IgM F(ab，)2白介素(IL)-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、INFa、BAFF、可溶性⑶40L。在另一實施方式中，IgM-陽性人B細(xì)胞群體從外周血、扁桃體骨髓、脾臟、淋巴結(jié)、臍帶血、肝、單采血液成分操作或暗黃層獲得。在另一實施方式中，所述方法還包括從步驟(d)的永生化人B細(xì)胞分離完整重鏈和/或輕鏈的編碼核酸。在另一實施方式中，所述方法還包括從步驟(d)的永生化人B細(xì)胞分離重鏈和/或輕鏈抗原結(jié)合區(qū)的編碼核酸。在另一實施方式中，所述方法還包括將所述核酸克隆入重鏈和/或輕鏈框架區(qū)的編碼核酸中。在另一實施方式中，所述群體的接觸還包括EBV濃縮步驟、感染中的離心步驟，或兩者都有。在另一實施方式中，所述方法還包括在步驟(C)后冷凍所述人B細(xì)胞群體。在另一實施方式中，所述群體與細(xì)胞因子/生長因子/信號傳導(dǎo)試劑混合物的接觸在步驟(b) (ii)后約0-96小時進(jìn)行。在另一實施方式中，所述群體與細(xì)胞因子/生長因子/信號傳導(dǎo)試劑混合物的接觸在步驟(b) (ii)后16-20小時進(jìn)行。在另一實施方式中，所述群體有約50% -99%通過EBV感染而永生化。在另一實施方式中，所述群體有約95% -99%通過EBV感染而永生化。在另一實施方式中，表達(dá)人核仁素的抗體的永生化人B細(xì)胞的選擇在感染后1-4周進(jìn)行。在另一實施方式中，表達(dá)人核仁素的抗體的永生化人B細(xì)胞的選擇在感染后2-3周進(jìn)行。在另一實施方式中，表達(dá)人核仁素的抗體的永生化人B細(xì)胞的選擇在解凍所保存的冷凍永生化B細(xì)胞后和/或在解凍所保存的由所述永生化B細(xì)胞所得冷凍培養(yǎng)基上清液后進(jìn)行。在另一實施方式中，所述B細(xì)胞為抗原靜息型(antigen nai\e )。在另一實施方式中，所述B細(xì)胞為抗原遭遇型(antigen experienced)。本發(fā)明的另一方面提供表達(dá)能結(jié)合人核仁素的IgG抗體的永生化人B細(xì)胞。在一種實施方式中，所述永生化人B細(xì)胞命名為T-OT1、V-3H11(3G5)、T-2D3、T-7G7 (1H9)、T-2H3、T-9F9、T-8G4 或 T-PIC6。 本發(fā)明的另一方面提供表達(dá)能結(jié)合SEQ ID No. 2所示蛋白的IgG抗體或其片段的永生化人B細(xì)胞。在一種實施方式中，所述IgG抗體是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗體。在另一實施方式中，所述IgG抗體是IgGl抗體。在另一實施方式中,所述IgG抗體含有K輕鏈。在另一實施方式中，所述IgG抗體含有\(zhòng)輕鏈。在另一實施方式中，所述B細(xì)胞經(jīng)EBV永生化。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少30%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少40%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少50%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少60%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少70%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少80%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少90%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少100%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少10%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少30%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少40%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少50%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少60%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少70%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少80%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少90%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少100%。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。在另一實施方式中，所述抗體或其片段使人核仁素的RNA結(jié)合域失活。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的非補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段在接觸時誘發(fā)癌細(xì)胞中的凋亡。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段抑制或殺死AML癌細(xì)胞，CLL癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述分離的單克隆抗體或其片段降低癌細(xì)胞中的BCL-2水平。
本發(fā)明的另一方面提供表達(dá)能結(jié)合SEQ ID No. I所編碼蛋白的IgG抗體或其片段的永生化人B細(xì)胞。在一種實施方式中，所述IgG抗體是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗體。在另一實施方式中，所述IgG抗體是IgGl抗體。在另一實施方式中,所述IgG抗體含有K輕鏈。在另一實施方式中，所述IgG抗體含有\(zhòng)輕鏈。在另一實施方式中，所述B細(xì)胞經(jīng)EBV永生化。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。權(quán)利要求33所述的分離抗體或其片段，其中，所述抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少30%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少40%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少50%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少60%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少70%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少80%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少90%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少100%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少10%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少30%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少40%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少50%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少60%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少70%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少80%。 在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少90%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少100%。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。在另一實施方式中，所述抗體或其片段使人核仁素的RNA結(jié)合域失活。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的非補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段在接觸時誘發(fā)癌細(xì)胞中的凋亡。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段抑制或殺死AML癌細(xì)胞，CLL癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述分離的單克隆抗體或其片段降低癌細(xì)胞中的BCL-2水平。本發(fā)明的另一方面提供表達(dá)能結(jié)合含SEQ ID No. 4序列的蛋白的IgG抗體或其片段的永生化人B細(xì)胞。在一種實施方式中，所述IgG抗體是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗體。在另一實施方式中，所述IgG抗體是IgGl抗體。在另一實施方式中,所述IgG抗體含有K輕鏈。在另一實施方式中，所述IgG抗體含有\(zhòng)輕鏈。在另一實施方式中，所述B細(xì)胞經(jīng)EBV永生化。在另一實施方式中，權(quán)利要求33所述的分離抗體或其片段，其中，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少30%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少40%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少50%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少60%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少70%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少80%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少90%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少100%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少10%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少30%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少40%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少50%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少60%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少70%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少80%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少90%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少100%。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。在另一實施方式中，所述抗體或其片段使人核仁素的RNA結(jié)合域失活。 在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的非補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段在接觸時誘發(fā)癌細(xì)胞中的凋亡。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段抑制或殺死AML癌細(xì)胞，CLL癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述分離的單克隆抗體或其片段降低癌細(xì)胞中的BCL-2水平。本發(fā)明的另一方面提供表達(dá)能結(jié)合SEQ ID No. 3所編碼蛋白的IgG抗體或其片段的永生化人B細(xì)胞。在一種實施方式中，所述IgG抗體是IgGl、IgG2、IgG3或IgG4抗體。在另一實施方式中，所述IgG抗體是IgGl抗體。在另一實施方式中,所述IgG抗體含有K輕鏈。在另一實施方式中，所述IgG抗體含有\(zhòng)輕鏈。在另一實施方式中，所述B細(xì)胞經(jīng)EBV永生化。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MV4-11細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MV4-11細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。在另一實施方式中，所述抗體或其片段使人核仁素的RNA結(jié)合域失活。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的非補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段在接觸時誘發(fā)癌細(xì)胞中的凋亡。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段抑制或殺死AML癌細(xì)胞，CLL癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述分離的單克隆抗體或其片段降低癌細(xì)胞中的BCL-2水平。本發(fā)明的另一方面提供表達(dá)能特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白的分離的人單克隆抗體或其片段。在一種實施方式中，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少30%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少40%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少50%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少60%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少70%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少80%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少90%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞群體和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少100%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死 MV4-11細(xì)胞群體的至少10%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少30%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少40%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少50%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少60%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少70%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少80%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少90%。在另一實施方式中，當(dāng)所述抗體或其片段與所述MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少100%。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。在另一實施方式中，所述抗體或其片段使人核仁素的RNA結(jié)合域失活。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段誘發(fā)針對癌細(xì)胞的非補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段在接觸時誘發(fā)癌細(xì)胞中的凋亡。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段抑制或殺死AML癌細(xì)胞，CLL癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述分離的單克隆抗體或其片段降低癌細(xì)胞中的BCL-2水平。在本發(fā)明的另一方面提供特異性結(jié)合人核仁素蛋白的分離抗體或其片段，其中當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。在一種實施方式中，所述人核仁素的氨基酸序列包含SEQ ID No. 2。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合由SEQ ID No. 2的氨基酸殘基1-283組成的氨基酸序列。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。在另一實施方式中，所述抗體或其片段使人核仁素的RNA結(jié)合域失活。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段連接診斷劑或治療劑。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段顯示針對癌細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段顯示針對癌細(xì)胞的非補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段在接觸時誘發(fā)癌細(xì)胞中的凋亡。在另一實施方式中，所述抗體或其片段抑制或殺死AML癌細(xì)胞，CLL癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段降低癌細(xì)胞中的BCL-2水平。在另一實施方式中，所述抗體或其片段連接診斷劑。在另一實施方式中，所述診斷劑是放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光化合物、熒光化合物或酶。在另一實施方式中，所述抗體或其片段連接治療劑。在另一實施方式中，所述治療劑是放射性核素、毒素或化學(xué)治療部分。本發(fā)明的另一方面提供特異性結(jié)合人核仁素蛋白的分離抗體或其片段，其中當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死MV4-11細(xì)胞群體的至少 10-100%(例如，MV4-11 細(xì)胞群體的 10、20、30、40、50、60、70、80、90 或 100%)。在另一實施方式中，所述人核仁素的氨基酸序列包含SEQ ID No. 2。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合由SEQ ID No. 2的氨基酸殘基1-283組成的氨基酸序列。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。在另一實施方式中，所述抗體或其片段使人核仁素的RNA結(jié)合域失活。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段連接診斷劑或治療劑。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段顯示針對癌細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段顯示針對癌細(xì)胞的非補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段在接觸時誘發(fā)癌細(xì)胞中的凋亡。在另一實施方式中，所述抗體或其片段抑制或殺死AML癌細(xì)胞，CLL癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述分離的抗體或其片段降低癌細(xì)胞中的BCL-2水平。在另一實施方式中，所述抗體或其片段連接診斷劑。在另一實施方式中，所述診斷劑是放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光化合物、熒光化合物或酶。在另一實施方式中，所述抗體或其片段連接治療劑。在另一實施方式中，所述治療劑是放射性核素、毒素或化學(xué)治療部分。本發(fā)明的另一方面提供抗核仁素的組合物，所述組合物包含特異性結(jié)合人核仁素蛋白的一種或多種分離的抗體或其片段，其中當(dāng)所述一種或多種抗體與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48-96小時(例如，48、72或96小時)，其殺死MCF-7細(xì)胞群體的至少10-100%(例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一種實施方式中，所述一種或多種分離的抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述一種或多種分離的抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述一種或多種分離的抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述一種或多種分離的抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。在另一實施方式中，所述一種或多種分離的抗體或其片段滅活人核仁素的RNA結(jié)合域。在另一實施方式中，所述人核仁素的氨基酸序列包含SEQ ID No. 2。在另一實施方式中，所述一種或多種分離的抗體或其片段結(jié)合SEQ ID No. 4。在另一實施方式中，所述抗核仁素組合物還包含放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光化合物、熒光化合物、酶、毒素或化療齊U。在另一實施方式中，所述放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光化合物、熒光化合物、酶、毒素或化療劑偶聯(lián)所述一種或多種抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素組合物包含兩種或更多種分離的抗體或其片段特異性結(jié)合所述人核仁素蛋白，其中當(dāng)所述一種或多種抗體與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，所述抗核仁素組合物包含3種或更多種分離的抗體或其片段特異性結(jié)合所述人核仁素蛋白，其中當(dāng)所述一種或多種抗體與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。本發(fā)明的另一方面提供抑制或殺死在細(xì)胞表面表達(dá)核仁素的細(xì)胞的方法，所述方法包括使述細(xì)胞接觸能結(jié)合人核仁素蛋白的抗體或其片段，其中當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。在一種實施方式中，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合SEQ ID No. 2。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合SEQ ID No. I所編碼的氨基酸序列。在另一實施方式中，所述 抗體或其片段結(jié)合SEQ ID No. 4。在另一實施方式中，所述抗體或其片段結(jié)合SEQ ID No. 3所編碼的氨基酸序列。在另一實施方式中，所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述癌細(xì)胞是肺癌細(xì)胞，乳腺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、腎細(xì)胞癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞、神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞或胃癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述細(xì)胞是免疫細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是淋巴細(xì)胞、樹突細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化免疫細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化B細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是記憶B細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化T細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化CD4+T細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化CD8+T細(xì)胞。在另一實施方式中，所述細(xì)胞是血管平滑肌細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。在另一實施方式中，所述抗體或其片段連接治療劑。在另一實施方式中，所述治療劑是放射性核素、毒素或化療劑。在另一實施方式中，所述抑制或殺死包括所述細(xì)胞中的凋亡。在另一實施方式中，所述細(xì)胞位于人類對象中，且所述接觸包括將所述抗體或其片段給予所述對象。在另一實施方式中，所述方法還包括使所述細(xì)胞接觸至少一種補(bǔ)充抑制劑或療法。在另一實施方式中，所述補(bǔ)充療法包括一種或多種手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療、毒素治療、免疫治療、激素治療、抗血管生成治療或基因治療或其它生物學(xué)療法。在另一實施方式中，所述補(bǔ)充抑制劑包括一種或多種放射性核素、化療劑、毒素免疫治療劑、激素、核酸或多肽。在另一實施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A鏈、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、a八疊球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸(Phytolaca americana)蛋白、美洲商陸抗病毒蛋白、苦瓜(Momordica charantia)抑制劑、灣果素、巴豆毒素、肥阜草(Sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹毒素、邁托毒素(mitogellin)、局限曲菌素、酹霉素、伊諾霉素、卡奇霉素或單端孢霉烯族毒素(tricothecenes)。在另一實施方式中,所述化療劑是烷基化劑、蒽環(huán)類抗生素、細(xì)胞骨架擾亂劑、大環(huán)內(nèi)酯、拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑、核苷或核苷酸類似物、前體類似物、肽抗生素、鉬基試劑、類視黃醇、長春花生物堿，或其衍生物。在另一實施方式中，所述化療劑是放線菌素D、全反式視黃酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博來霉素、喜樹堿、卡鉬、卡培他濱、順鉬、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、道諾紅菌素、多西他賽、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大環(huán)內(nèi)酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱、羥基脲、過氧化氫、伊達(dá)比星、伊馬替尼、雙氯乙基甲胺、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、鹽酸米托蒽醌、奧沙利鉬、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鳥嘌呤、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春堿酰胺或長春瑞賓。本發(fā)明的另一方面提供檢測在其表面表達(dá)核仁素的細(xì)胞的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞接觸免疫結(jié)合所述核仁素的人抗體或其片段。在一種實施方式中，所述細(xì)胞是癌細(xì)胞，免疫細(xì)胞或在其表面表達(dá)核仁素的血管平滑肌細(xì)胞，在其表面表達(dá)核仁素的內(nèi)皮細(xì)胞，或病毒感染細(xì)胞。在另一實施方式中，所述細(xì)胞是在其表面表達(dá)核仁素的癌前期細(xì)胞。在另一實施方式中，所述癌細(xì)胞選自下組肺癌細(xì)胞，乳腺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、腎細(xì)胞癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞、神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞和胃癌細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是淋巴細(xì)胞、樹突細(xì)胞、外周血單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。在另一實施方式中，所述細(xì)胞是免疫細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化免疫細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化B細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是記憶B細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化T細(xì)胞。在另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化CD4+T細(xì)胞。在 另一實施方式中，所述免疫細(xì)胞是活化CD8+T細(xì)胞。在另一實施方式中，所述細(xì)胞是血管平滑肌細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。在另一實施方式中，所述抗體或其片段連接診斷劑。在另一實施方式中，所述診斷劑是放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光化合物、熒光化合物、量子點、納米顆?；蛎浮Ｔ诹硪粚嵤┓绞街?，所述細(xì)胞位于人類對象中，且所述接觸包括將所述抗體或其片段給予所述對象。在另一實施方式中，所述細(xì)胞位于分離的組織樣品或細(xì)胞懸液中。本發(fā)明的另一方面提供哺乳動物中癌癥的治療或預(yù)防方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素試劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素試劑包括抗核仁素抗體或其片段，且當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時(例如，48、72或96小時)，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10-100%(例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一種實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括治療腫瘤缺氧。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括抑制腫瘤血管發(fā)生。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A鏈、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、a八疊球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸(Phytolaca americana)蛋白、美洲商陸抗病毒蛋白、苦瓜(Momordica charantia)抑制劑、灣果素、巴豆毒素、肥阜草(Sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹毒素、邁托毒素(mitogellin)、局限曲菌素、酌 霉素、伊諾霉素、卡奇霉素或單端孢霉烯族毒素(tricothecenes)。在另一實施方式中,所述化療劑是烷基化劑、蒽環(huán)類抗生素、細(xì)胞骨架擾舌L劑、大環(huán)內(nèi)酯、拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑、核苷或核苷酸類似物、前體類似物、肽抗生素、鉬基試劑、類視黃醇、長春花生物堿，或其衍生物。在另一實施方式中，所述化療劑是放線菌素D、全反式視黃酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博來霉素、喜樹堿、卡鉬、卡培他濱、順鉬、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、道諾紅菌素、多西他賽、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大環(huán)內(nèi)酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱、羥基脲、過氧化氫、伊達(dá)比星、伊馬替尼、雙氯乙基甲胺、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、鹽酸米托蒽醌、奧沙利鉬、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鳥嘌呤、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春堿酰胺或長春瑞賓。本發(fā)明的另一方面提供哺乳動物中癌癥的治療或預(yù)防方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素抗體或其片段，毒素或化療劑，以及藥學(xué)上可接受的載體；且當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時(例如，48、72或96小時)，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10-100% (例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一種實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括治療腫瘤缺氧。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括抑制腫瘤血管發(fā)生。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A鏈、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、a八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸蛋白、美洲商陸抗病毒蛋白、苦瓜抑制劑、瀉果素、巴豆毒素、肥皂草抑制劑、白樹毒素、邁托毒素、局限曲菌素、酹霉素、伊諾霉素、卡奇霉素或單端孢霉烯族毒素。在另一 實施方式中，所述化療劑是烷基化劑、蒽環(huán)類抗生素、細(xì)胞骨架擾亂劑、大環(huán)內(nèi)酯、拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑、核苷或核苷酸類似物、前體類似物、肽抗生素、鉬基試劑、類視黃醇、長春花生物堿，或其衍生物。在另一實施方式中，所述化療劑是放線菌素D、全反式視黃酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博來霉素、喜樹堿、卡鉬、卡培他濱、順鉬、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、道諾紅菌素、多西他賽、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大環(huán)內(nèi)酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱、羥基脲、過氧化氫、伊達(dá)比星、伊馬替尼、雙氯乙基甲胺、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、鹽酸米托蒽醌、奧沙利鉬、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鳥嘌呤、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春堿酰胺或長春瑞賓。本發(fā)明的另一方面提供哺乳動物中癌癥的治療或預(yù)防方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素抗體或其片段以及藥學(xué)上可接受的載體，并用放射治療進(jìn)一步治療處理所述哺乳動物，其中當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時(例如，48、72或96小時)，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10_100%(例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一種實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括治療腫瘤缺氧。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括抑制腫瘤血管發(fā)生。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A鏈、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、a八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸蛋白、美洲商陸抗病毒蛋白、苦瓜抑制劑、瀉果素、巴豆毒素、肥皂草抑制劑、白樹毒素、邁托毒素、局限曲菌素、酚霉素、伊諾霉素、卡奇霉素或單端孢霉烯族毒素。在另一實施方式中，所述化療劑是烷基化劑、蒽環(huán)類抗生素、細(xì)胞骨架擾亂劑、大環(huán)內(nèi)酯、拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑、核苷或核苷酸類似物、前體類似物、肽抗生素、鉬基試劑、類視黃醇、長春花生物堿，或其衍生物。在另一實施方式中，所述化療劑是放線菌素D、全反式視黃酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博來霉素、喜樹堿、卡鉬、卡培他濱、順鉬、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、道諾紅菌素、多西他賽、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大環(huán)內(nèi)酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱、羥基脲、過氧化氫、伊達(dá)比星、伊馬替尼、雙氯乙基甲胺、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、鹽酸米托蒽醌、奧沙利鉬、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鳥嘌呤、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春堿酰胺或長春瑞賓。本發(fā)明的另一方面提供在哺乳動物中治療或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素劑包含特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗體或其片段。在一種實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括治療腫瘤缺氧。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括抑制腫瘤血管發(fā)生。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A鏈、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、a八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸蛋白、美洲商陸抗病毒蛋白、苦瓜抑制劑、瀉果素、巴豆毒素、肥皂草抑制劑、白樹毒素、邁托毒素、局限曲菌素、酚霉素、伊諾霉素、卡奇霉素或單端孢霉烯族毒素。在另一實施方式中，所述化療劑是烷基化劑、蒽環(huán)類抗生素、細(xì)胞骨架擾亂劑、大環(huán)內(nèi)酯、拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑、核苷或核苷酸類似物、前體類似物、肽抗生素、鉬基試劑、類視黃醇、長春花生物堿，或其衍生物。在另一實施方式中，所述化療劑是放線菌素D、全反式視黃酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博來霉素、喜樹堿、卡鉬、卡培他濱、順鉬、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、道諾紅菌素、多西他賽、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大環(huán)內(nèi)酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱、羥基脲、過氧化氫、伊達(dá)比星、伊馬替尼、雙氯乙基甲胺、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、鹽酸米托蒽醌、奧沙利鉬、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鳥嘌呤、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春堿酰胺或長春瑞賓。
本發(fā)明的另一方面提供了在哺乳動物中治療或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素抗體或其片段，毒素或化療劑，以及藥學(xué)上可接受的載體，其中所述抗體或其片段特異性結(jié)合SEQ IDNo.4所示蛋白。在一種實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括治療腫瘤缺氧。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括抑制腫瘤血管發(fā)生。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A鏈、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、a八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸蛋白、美洲商陸抗病毒蛋白、苦瓜抑制劑、瀉果素、巴豆毒素、肥皂草抑制劑、白樹毒素、邁托毒素、局限曲菌素、酚霉素、伊諾霉素、卡奇霉素或單端孢霉烯族毒素。在另一實施方式中，所述化療劑是烷基化劑、蒽環(huán)類抗生素、細(xì)胞骨架擾亂劑、大環(huán)內(nèi)酯、拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑、核苷或核苷酸類似物、前體類似物、肽抗生素、鉬基試劑、類視黃醇、長春花生物堿，或其衍生物。在另一實施方式中，所述化療劑是放線菌素D、全反式視黃酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博來霉素、喜樹堿、卡鉬、卡培他濱、順鉬、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、道諾紅菌素、多西他賽、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大環(huán)內(nèi)酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱、羥基脲、過氧化氫、伊達(dá)比星、伊馬替尼、雙氯乙基甲胺、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、鹽酸米托蒽醌、奧沙利鉬、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鳥嘌呤、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春堿酰胺或長春瑞賓。本發(fā)明的另一方面提供了在哺乳動物中治療或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素抗體或其片段和藥學(xué)上可接受的載體，其中所述抗體或其片段特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白。在一種實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括治療腫瘤缺氧。在另一實施方式中，所述哺乳動物中治療癌癥包括抑制腫瘤血管發(fā)生。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。在另一實施方式中，所述毒素是白喉毒素、外毒素A鏈、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、a八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸蛋白、美洲商陸抗病毒蛋白、苦瓜抑 制劑、瀉果素、巴豆毒素、肥皂草抑制齊U、白樹毒素、邁托毒素、局限曲菌素、酚霉素、伊諾霉素、卡奇霉素或單端孢霉烯族毒素。在另一實施方式中，所述化療劑是烷基化劑、蒽環(huán)類抗生素、細(xì)胞骨架擾亂劑、大環(huán)內(nèi)酯、拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑、核苷或核苷酸類似物、前體類似物、肽抗生素、鉬基試劑、類視黃醇、長春花生物堿，或其衍生物。在另一實施方式中，所述化療劑是放線菌素D、全反式視黃酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博來霉素、喜樹堿、卡鉬、卡培他濱、順鉬、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、道諾紅菌素、多西他賽、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大環(huán)內(nèi)酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱、羥基脲、過氧化氫、伊達(dá)比星、伊馬替尼、雙氯乙基甲胺、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、鹽酸米托蒽醌、奧沙利鉬、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、替尼泊苷、硫鳥嘌呤、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春堿酰胺或長春瑞賓。本發(fā)明的另一方面提供哺乳動物中治療自身免疫性疾病的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素試劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素試劑包括抗核仁素抗體或其片段，且當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時(例如，48、72或96小時)，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10-100% (例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90或100%)。在一種實施方式中，所述自身免疫性疾病是斑禿、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂綜合征(antiphospholipid syndrome)、自身免疫性艾迪森病、哮喘、腎上腺的自身免疫病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫肝炎、自身免疫性卵巢炎和睪丸炎、自身免疫性血小板減少、貝切特綜合征、大皰型類天皰瘡、心肌病、口炎性腹瀉-皮炎、慢性疲勞免疫功能障礙綜合征(CFIDS)、慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病、丘-施二氏綜合征、疤痕性類天皰瘡、CREST綜合征、冷凝集素病、克羅恩氏病、盤狀狼瘡、特發(fā)性混合型冷球蛋白血癥、糖尿病(例如I型)、嗜酸細(xì)胞性筋膜炎(eosinophilic fascites)、纖維肌痛-纖維肌炎、腎小球腎炎、格拉夫斯病、格-巴二氏綜合征、橋本甲狀腺炎、亨-舍二氏紫癜、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性/自身免疫血小板減少性紫癜(ITP)、IgA神經(jīng)病、青少年關(guān)節(jié)炎、扁平苔蘚、紅斑狼瘡、美尼爾綜合征、混合型結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化、I型或免疫介導(dǎo)的糖尿病、重癥肌無力、天皰瘡相關(guān)疾病(如尋常性天皰瘡)、骨髓增生異常綜合征、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多軟骨炎(POIychrondritis)、多腺體綜合征、風(fēng)濕性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原發(fā)性丙種球蛋白缺乏癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、牛皮癬、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、雷氏現(xiàn)象(Raynaud’ sphenomenon)、萊特爾綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)病、硬皮病、斯耶格倫綜合征、全身肌強(qiáng)直綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、斯維特綜合征、斯提耳病、紅斑狼瘡、高安動脈炎、暫時性動脈炎/巨細(xì)胞動脈炎、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、血管炎如皰疹樣皮炎血管炎、白癜風(fēng)和韋格納肉芽腫病。炎性疾病的例子包括但不限于哮喘、腦炎、炎性腸病、慢性阻塞性肺病(COPD)、變應(yīng)性疾病、感染性休克、肺纖維化、未分化脊椎關(guān)節(jié)病變、未分化關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)炎、骨溶解炎癥、移植物抗宿主病、蕁麻疫或VKH綜合征(Vogt-Koyanagi-Hareda syndrome)。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供在哺乳動物中治療自身免疫性疾病的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受載體；其中所述抗核仁素劑包含特異性結(jié)合SEQ ID No. 2所示蛋白的人抗核仁素抗體或其片段。在一種實施方式中，所述自身免疫性疾病是斑禿、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂綜合征、自身免疫性艾迪森病、哮喘、腎上 腺的自身免疫病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫肝炎、自身免疫性卵巢炎和睪丸炎、自身免疫性血小板減少、貝切特綜合征、大皰型類天皰瘡、心肌病、口炎性腹瀉-皮炎、慢性疲勞免疫功能障礙綜合征、慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病、丘-施二氏綜合征、疤痕性類天皰瘡、CREST綜合征、冷凝集素病、克羅恩氏病、盤狀狼瘡、特發(fā)性混合型冷球蛋白血癥、糖尿病(例如I型)、嗜酸細(xì)胞性筋膜炎、纖維肌痛-纖維肌炎、腎小球腎炎、格拉夫斯病、格-巴二氏綜合征、橋本甲狀腺炎、亨-舍二氏紫癜、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性/自身免疫血小板減少性紫癜(ITP)、IgA神經(jīng)病、青少年關(guān)節(jié)炎、扁平苔蘚、紅斑狼瘡、美尼爾綜合征、混合型結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化、I型或免疫介導(dǎo)的糖尿病、重癥肌無力、天皰瘡相關(guān)疾病(如尋常性天皰瘡)、骨髓增生異常綜合征、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多軟骨炎、多腺體綜合征、風(fēng)濕性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原發(fā)性丙種球蛋白缺乏癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、牛皮癬、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、雷氏現(xiàn)象、萊特爾綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)病、硬皮病、斯耶格倫綜合征、全身肌強(qiáng)直綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、斯維特綜合征、斯提耳病、紅斑狼瘡、高安動脈炎、暫時性動脈炎/巨細(xì)胞動脈炎、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、血管炎如皰疹樣皮炎血管炎、白癜風(fēng)和韋格納肉芽腫病。炎性疾病的例子包括但不限于哮喘、腦炎、炎性腸病、慢性阻塞性肺病(COPD)、變應(yīng)性疾病、感染性休克、肺纖維化、未分化脊椎關(guān)節(jié)病變、未分化關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)炎、骨溶解炎癥、移植物抗宿主病、蕁麻疹或VKH綜合征。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。 本發(fā)明的另一方面提供在哺乳動物中治療自身免疫性疾病的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受載體；其中所述抗核仁素劑包含特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗體或其片段。在一種實施方式中，所述自身免疫性疾病是斑禿、強(qiáng)直性脊柱炎、抗磷脂綜合征、自身免疫性艾迪森病、哮喘、腎上腺的自身免疫病、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫肝炎、自身免疫性卵巢炎和睪丸炎、自身免疫性血小板減少、貝切特綜合征、大皰型類天皰瘡、心肌病、口炎性腹瀉-皮炎、慢性疲勞免疫功能障礙綜合征、慢性炎性脫髓鞘多神經(jīng)病、丘-施二氏綜合征、疤痕性類天皰瘡、CREST綜合征、冷凝集素病、克羅恩氏病、盤狀狼瘡、特發(fā)性混合型冷球蛋白血癥、糖尿病(例如I型)、嗜酸細(xì)胞性筋膜炎、纖維肌痛-纖維肌炎、腎小球腎炎、格拉夫斯病、格-巴二氏綜合征、橋本甲狀腺炎、亨-舍二氏紫癜、特發(fā)性肺纖維化、特發(fā)性/自身免疫血小板減少性紫癜(ITP)、IgA神經(jīng)病、青少年關(guān)節(jié)炎、扁平苔蘚、紅斑狼瘡、美尼爾綜合征、混合型結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化、I型或免疫介導(dǎo)的糖尿病、重癥肌無力、天皰瘡相關(guān)疾病(如尋常性天皰瘡)、骨髓增生異常綜合征、惡性貧血、結(jié)節(jié)性多動脈炎、多軟骨炎、多腺體綜合征、風(fēng)濕性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原發(fā)性丙種球蛋白缺乏癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、牛皮癬、牛皮癬關(guān)節(jié)炎、雷氏現(xiàn)象、萊特爾綜合征、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)病、硬皮病、斯耶格倫綜合征、全身肌強(qiáng)直綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、斯維特綜合征、斯提耳病、紅斑狼瘡、高安動脈炎、暫時性動脈炎/巨細(xì)胞動脈炎、潰瘍性結(jié)腸炎、葡萄膜炎、血管炎如皰疹樣皮炎血管炎、白癜風(fēng)和韋格納肉芽腫病。炎性疾病的例子包括但不限于哮喘、腦炎、炎性腸病、慢性阻塞性肺病、變應(yīng)性疾病、感染性休克、肺纖維化、未分化脊椎關(guān)節(jié)病變、未分化關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)炎、骨溶解炎癥、移植物抗宿主病、蕁麻疹或VKH綜合征。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實 施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供哺乳動物中治療氣道疾病的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素試劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素試劑包括抗核仁素抗體或其片段，且當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時(48,72或96小時)，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少10-100%(10、20、30、40、50、60、70、80、90、100%)。在另一實施方式中，所述氣道基本是哮喘、慢性阻塞性肺病、特發(fā)性肺纖維變性、或肺炎。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供在哺乳動物中治療氣道疾病的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素劑包含特異性結(jié)合SEQ ID No. 2所示蛋白的人抗核仁素抗體或其片段。在另一實施方式中，所述氣道基本是哮喘、慢性阻塞性肺病、特發(fā)性肺纖維變性、或肺炎。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供在哺乳動物中治療氣道疾病的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素劑包含特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗體或其片段。在另一實施方式中，所述氣道基本是哮喘、慢性阻塞性肺病、特發(fā)性肺纖維變性、或肺炎。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供哺乳動物中治療病毒感染細(xì)胞的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素試劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素試劑包括抗核仁素抗體或其片段，且當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。在另一實施方式中，所述病毒感染細(xì)胞感染了HIV病毒。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供在哺乳動物中治療病毒感染細(xì)胞的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素劑包 含特異性結(jié)合SEQ ID No. 2所示蛋白的人抗核仁素抗體或其片段。在另一實施方式中，所述病毒感染細(xì)胞感染了 HIV病毒。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供在哺乳動物中治療病毒感染細(xì)胞的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素劑包含特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗體或其片段。在另一實施方式中，所述病毒感染細(xì)胞感染了 HIV病毒。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供哺乳動物中治療或預(yù)防非癌病癥或疾病的方法，所述病癥或疾病的特征為核仁素的表面表達(dá)增加，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素試劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素試劑包含抗核仁素抗體或其片段，且當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時(48、72或96小時)，其殺死所述 MCF-7 細(xì)胞群體的至少 10-100%(例如，10、20、30、40、50、60、70、80、90 或 100%)。在一種實施方式中，以核仁素表面表達(dá)增加為特征的哺乳動物中所述病癥或疾病是黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病或炎性疾病。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供在哺乳動物中治療或預(yù)防非癌病癥或疾病的方法，所述病癥或疾病的特征為核仁素的表面表達(dá)增加，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素劑包含特異性結(jié)合SEQ ID No. 2所示蛋白的人抗核仁素抗體或其片段。在一種實施方式中，以核仁素表面表達(dá)增加為特征的哺乳動物中所述病癥或疾病是黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病或炎性疾病。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供在哺乳動物中治療或預(yù)防非癌病癥或疾病的方法，所述病癥或疾病的特征為核仁素的表面表達(dá)增加，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素劑包含特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白的抗核仁素抗體或其片段。在一種實施方式中，以核仁素表面表達(dá)增加為特征的哺乳動物中所述病癥或疾病是黃斑變性、糖尿病性視網(wǎng)膜病或炎性疾病。在另一實施方式中，所述哺乳動物是人。在另一實施方式中，所述抗核仁素單克隆抗體或其片段對人基本無免疫原性。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。在另一實施方式中，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。本發(fā)明的另一方面提供當(dāng)與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，能殺死MCF-7細(xì)胞群體的至少50%的抗核仁素劑。在另一實施方式中，所述抗核仁素劑對人基本無免疫 原性。本發(fā)明的另一方面提供當(dāng)與MCF-7細(xì)胞和MCFlOA細(xì)胞及熱滅活血清孵育72或96小時，所殺死的MCF-7細(xì)胞超過所殺死的MCFlOA細(xì)胞的抗核仁素劑。在另一實施方式中，所述抗核仁素劑對人基本無免疫原性。本發(fā)明的另一方面提供當(dāng)與MCF-7細(xì)胞和MCFlOA細(xì)胞及人AB血清孵育96小時，所殺死的MCF-7細(xì)胞超過所殺死的MCFlOA細(xì)胞的抗核仁素劑。在另一實施方式中，所述抗核仁素劑對人基本無免疫原性。本發(fā)明的另一方面提供能特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白并抑制或殺死在其細(xì)胞表面表達(dá)核仁素的一種或多種癌細(xì)胞的抗核仁素劑。在另一實施方式中，所述抗核仁素劑對人基本無免疫原性。本發(fā)明的另一方面提供通過檢測一種或多種癌前細(xì)胞中細(xì)胞表面核仁素表達(dá)來確定對象患癌可能性的方法。本發(fā)明的另一方面提供前述權(quán)利要求中任一項所述的抗體，其中，所述抗體片段為Fab、Fab’、F(ab' )2 *Fv片段；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體；或由抗體片段形成的多特異性抗體。本發(fā)明的另一方面提供前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其中，所述方法包括使用抗體片段，其中所述抗體片段為Fab、Fab’、F(ab’)2 *Fv片段；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體；或由抗體片段形成的多特異性抗體。附圖簡要說明下列附圖構(gòu)成本說明書的一部分并納入其中以進(jìn)一步說明本發(fā)明的某些方面?？蓞⒄者@些附圖中的一幅或者多幅并結(jié)合本文提供的具體實施方式
的詳述來更好地理解本發(fā)明。圖I. CLL細(xì)胞相對正常B細(xì)胞的核仁素和Bcl-2蛋白過量表達(dá)。通過密度梯度離心從CLL患者和健康志愿者分離得到外周血淋巴細(xì)胞，并用磁激活細(xì)胞分選(MACS)⑶19免疫磁珠通過正向選擇純化B細(xì)胞。通過蛋白印跡法測定細(xì)胞的SlO提取物中核仁素和Bcl-2蛋白水平。結(jié)果相對用已知量核仁素和Bcl-2蛋白外標(biāo)所得數(shù)值標(biāo)準(zhǔn)化。沿X軸的標(biāo)記N和C分別指明來自個體對象的正常B細(xì)胞和CLL細(xì)胞。N=來自健康志愿者的⑶19+B細(xì)胞；C=CD 19+CLL 細(xì)胞。圖2A-B. CLL相對正常B細(xì)胞和MCF-7相對MCF-10A細(xì)胞的核仁素亞細(xì)胞定位。核仁素的胞內(nèi)定位利用小鼠抗人核仁素mAb和FITC-偶聯(lián)抗小鼠IgG 二抗通過間接免疫熒光測定。核用碘化丙錠復(fù)染。圖2A顯示CLL和正常B細(xì)胞間的比較。圖2B顯示MCF-7和MCF-10A細(xì)胞間的比較。圖3. MCF-7和MCF-10A細(xì)胞內(nèi)核仁素的亞細(xì)胞定位。核仁素的胞內(nèi)定位利用針對人核仁素的單克隆抗體和FITC-偶聯(lián)抗小鼠IgG 二抗通過間接免疫熒光測定。核用碘化丙錠復(fù)染。細(xì)胞形態(tài)顯示為DIC圖像。結(jié)果為三次單獨(dú)實驗的代表性結(jié)果。圖4.用抗核仁素抗體對AML-Ml患者的骨髓活組織檢查(品紅染色)顯示強(qiáng)烈的核染色。散布的非白血病骨髓元素為陰性(暗藍(lán)色復(fù)染)或僅顯示核發(fā)紅。放大倍數(shù)為40X。 圖5A-B.人AML移入小鼠的脾切片和人乳腺癌細(xì)胞中的核仁素過量表達(dá)。(圖5A)小鼠脾中存在兩種明確的結(jié)節(jié)狀人白血病浸潤。所述白血病浸潤為核仁素陽性(品紅免疫染色)。周圍小鼠脾淋巴細(xì)胞為核仁素免疫染色陰性(藍(lán)色復(fù)染)。放大倍數(shù)為40X。(圖5B)含50例石蠟包埋福爾馬林固定的人乳腺腫瘤和相鄰正常組織的組織陣列(BiomaxBR1006)用抗核仁素MabMS3(圣克魯茲公司(Santa Cruz), 1:100)染色，采用Vectastain小鼠試劑盒、DAB底物，并以蘇木精復(fù)染。代表性情況在Olympus CKX41上以IOOx放大倍數(shù)成像。圖6. CLL和正常B細(xì)胞中bcl_2hnRNA和bcl_2mRNA的相對表達(dá)水平。用RT-PCR測定來自4名CLL患者的CLL細(xì)胞和來自4名健康志愿者的正常B細(xì)胞中的bcl2hnRNA和bcl2mRNA水平。結(jié)果表示為每組4個測定的均值SEM。*表示與正常B細(xì)胞相比P〈0. 001。圖7. CLL和正常B細(xì)胞的提取物中bcl-2mRNA的衰減。5’ -加帽且多腺苷酸化的[32P]bcl-2-CR RNA和[32P]bcl-2-CR-ARE RNA和由來自4名患者的CLL細(xì)胞或來自3名人志愿者的正常B細(xì)胞制備的SlOO提取物一起孵育。在標(biāo)明的時間取反應(yīng)化合物的等分試樣并通過PAGE和磷成像分析。結(jié)果表示為剩余全長RNA平均百分?jǐn)?shù)土SEM與時間的函數(shù)。符號_〇-CLL細(xì)胞提取物+[32P]bcl-2-CR RNA ；- -，CLL細(xì)胞提取物+[32P]bcl-2-CR-ARE RNA ；- □-，正常 B 細(xì)胞提取物 +[32P]bcl-2_CR RNA ；- ■-，正常 B 細(xì)胞提取物 +[32P]bcl-2-CR-ARE RNA ；- ▲-，正常細(xì)胞提取物 +[32P]bcl-2_CR-ARE RNA+280nM 純化重組核仁素。圖8.體外生產(chǎn)人mAb。分離出扁桃體B細(xì)胞并用EBV有效永生化，然后誘導(dǎo)分化成產(chǎn)抗體細(xì)胞。將永生化B細(xì)胞庫接種入多孔板，然后篩選含IgG細(xì)胞上清液與重組核仁素的結(jié)合。將反應(yīng)細(xì)胞通過有限稀釋克隆、擴(kuò)增，并從培養(yǎng)上清液純化IgG。將Ig基因亞克隆入生產(chǎn)細(xì)胞系用于重組IgG大型生產(chǎn)。參見PCT/US2008/072124。圖9A-B.扁桃體B細(xì)胞庫中的有效EBV感染和誘導(dǎo)分化。(圖9A)用GFP標(biāo)記EBV(EBfaV-GFP)感染24小時后的扁桃體B細(xì)胞的流式細(xì)胞分析，比較常規(guī)上清液感染后的對照(上圖)或用濃縮病毒離心感染后的細(xì)胞(下圖)。GFP熒光表示感染。(圖9B)四種B95-8EBV永生化扁桃體B細(xì)胞庫加或不加抗-IgM F(ab’ ) 2、重組可溶性CD40L和Baff培養(yǎng)。5天(上圖)或15天(下圖)后通過ELISA分析細(xì)胞上清液的IgM和IgG。

圖10A-B. 8種產(chǎn)核仁素特異性人抗體的永生化B細(xì)胞系的分離。(圖10A)通過ELISA篩選從6株產(chǎn)抗核仁素抗體的人B細(xì)胞系所得培養(yǎng)上清液與重組A l-283Nuc-(His)6核仁素(缺少1-283位N-末端氨基酸的核仁素)的結(jié)合，采用HRP標(biāo)記的羊抗人IgG和發(fā)色底物來檢測。通過450nm的分光光度法測定結(jié)合。將結(jié)果與用含人抗-HA IgG或小鼠抗核仁素MS3的培養(yǎng)上清液所得結(jié)果比較。(圖10B)通過有限稀釋克隆對8株產(chǎn)抗核仁素抗體的B細(xì)胞系的亞克隆。3周后，各96孔板的不足10%孔含有小的單克隆集落，然后通過ELISA檢測其與上述重組核仁素的結(jié)合。通過測定450nm的吸光度評估孔中的核仁素結(jié)
八
口 o圖11.人抗核仁素抗體的分離。通過ELISA(上圖)和蛋白印跡法(下圖)篩選來自永生化人B細(xì)胞庫的上清液與重組Al-283Nuc-(His)6核仁素和/或由MV411白血病 細(xì)胞分離所得內(nèi)源核仁素的IgG結(jié)合。圖12. HuMAb與細(xì)胞表面核仁素的結(jié)合與對MV4-11白血病細(xì)胞的細(xì)胞毒性。(圖12A)將抗核仁素HuMab或RituxanK(5 y g/ml)與MV4-11或正常扁桃體細(xì)胞一起冰上孵育30分鐘，清洗，然后與APC標(biāo)記的抗人IgG(美天旎公司(Miltenyi)) —起孵育。在FACSCaliber上進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)，顯示中位熒光強(qiáng)度(MFI)。圖13.補(bǔ)體介導(dǎo)殺死MV4-11。將從產(chǎn)抗體B細(xì)胞系所得上清液與MV411細(xì)胞一起(50%v/v)在人血清的存在下(25%v/v)孵育16小時。對照用星形孢菌素(25iiM)或培養(yǎng)基(未處理)處理。然后用碘化丙錠和膜聯(lián)蛋白V-FITC染色細(xì)胞，并用流式細(xì)胞術(shù)分析。圖14A-C. MCF-7和MV4-11AML細(xì)胞的核仁素特異性殺死通過補(bǔ)體依賴性和非依賴性機(jī)制發(fā)生。(圖14A)MCF-7細(xì)胞與抗核仁素HuMAb (2 u g/ml) 一起在人AB血清(+補(bǔ)體)或熱滅活血清(_補(bǔ)體)的存在下孵育。在48-96小時，通過MTS試驗測定活力。(圖14B)MCF-7 和MCFlOA細(xì)胞與抗核仁素HuMAb (2 ii g/ml，上圖；或 lmg/ml，下圖)或AS1411 (20 y M)一起在人AB血清(+補(bǔ)體)或熱滅活血清(_補(bǔ)體)的存在下孵育。通過MTS試驗在72小時(上圖)和96小時(下圖)測定活力。(圖1401^4-11細(xì)胞與抗核仁素1111祖13(211§/ml)或AS 1411 (20 PM) 一起在人AB血清(+補(bǔ)體)或熱滅活血清(_補(bǔ)體)的存在下孵育。在48-96小時，通過MTS試驗測定活力。
具體實施例方式本發(fā)明提供特異性結(jié)合人核仁素的人單克隆抗體及其使用方法。這些抗體針對在質(zhì)膜中表達(dá)人核仁素的細(xì)胞如參與癌癥、自身免疫性疾病、病毒性疾病的細(xì)胞顯示細(xì)胞毒性。因此，所述抗體具有對某些形式的癌癥和自身免疫性疾病的治療潛力，并可用作診斷劑。I.核仁素A.概述核仁素是能結(jié)合DNA、RNA和質(zhì)膜外表面的多功能蛋白。核仁素在胞內(nèi)進(jìn)行多種多樣功能的能力與所述蛋白質(zhì)內(nèi)的多個結(jié)構(gòu)域相關(guān)。其帶負(fù)電的N-末端結(jié)構(gòu)域通過誘導(dǎo)核仁染色質(zhì)解凝縮作用調(diào)節(jié)rDNA轉(zhuǎn)錄(Srivastava等，1989),而中央球形結(jié)構(gòu)域含有4個RNA結(jié)合域(RBD) (Serin等，1997)。已提出核仁素憑借其RBD及其富含RGG的C-末端結(jié)構(gòu)域與前核糖體RNA的結(jié)合通過將正確折疊的rRNA和rRNA成熟與核糖體裝配的其它必需組件匯集到一起而起到裝配因子的作用(Ginisty等，2001)。核仁素也可在細(xì)胞質(zhì)與核之間穿梭時參與核糖體向細(xì)胞質(zhì)的輸出(Srivastava和Pollard, 1999)。表I列出了所述核仁素的基因編碼和蛋白質(zhì)序列。表1 -核仁素序列
權(quán)利要求
1.能分泌結(jié)合人核仁素的抗體的永生化人B細(xì)胞的產(chǎn)生方法，所述方法包括 (a)獲取IgM陽性人B細(xì)胞群； (b)使所述細(xì)胞群接觸 (i)愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)以使所述人B細(xì)胞永生化，和 ( )細(xì)胞因子/生長因子/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)劑混合物以誘導(dǎo)IgM向IgG免疫球蛋白同種型類別轉(zhuǎn)換；以及 (c)將細(xì)胞在支持所述永生化和免疫球蛋白同種型類別轉(zhuǎn)換的條件下培養(yǎng)。
2.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述方法還包括 (d)選擇表達(dá)針對人核仁素的抗體的永生化人B細(xì)胞。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述選擇包括對永生化B細(xì)胞培養(yǎng)基上清液進(jìn)行免疫測定。
4.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞因子混合物包含遞送輔助刺激信號給人B細(xì)胞的試劑。
5.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞因子混合物含有抗-IgMF(ab’)2白介素(IL)-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13、INFa、BAFF、可溶性 CD40L。
6.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述IgM-陽性人B細(xì)胞群體從外周血、扁桃體骨髓、脾臟、淋巴結(jié)、臍帶血、肝、單采血液成分操作或暗黃層獲得。
7.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法還包括從步驟(d)的永生化人B細(xì)胞分離完整重鏈和/或輕鏈的編碼核酸。
8.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法還包括從步驟(d)的永生化人B細(xì)胞分離重鏈和/或輕鏈抗原結(jié)合區(qū)的編碼核酸。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法還包括將所述核酸克隆入重鏈和/或輕鏈框架區(qū)的編碼核酸中。
10.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述步驟(b)還包括EBV濃縮步驟、感染中的離心步驟，或兩者都有。
11.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述方法還包括在步驟(C)后冷凍所述人B細(xì)胞群體。
12.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，在步驟(b)(ii)后約0-96小時進(jìn)行步驟(b) (ii)。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，在步驟(b)(ii)后約16-20小時進(jìn)行步驟(b)(ii)。
14.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述群體有約50%-99%通過EBV感染而永生化。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述群體有約95%-99%通過EBV感染而永生化。
16.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(d)在感染后1-4周發(fā)生。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，步驟(d)在感染后2-3周發(fā)生。
18.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(d)發(fā)生于保存的冷凍永生化B細(xì)胞解凍后，和/或保存的來自所述永生化B細(xì)胞的冷凍培養(yǎng)基上清液解凍后。
19.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述B細(xì)胞為抗原靜息型。
20.如權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述B細(xì)胞為抗原遭遇型。
21.一種永生化人B細(xì)胞，所述細(xì)胞表達(dá)能結(jié)合人核仁素的IgG抗體。
22.—種永生化人B細(xì)胞，所述細(xì)胞表達(dá)能結(jié)合SEQ ID No. 2所示蛋白的IgG抗體。
23.—種永生化人B細(xì)胞，所述細(xì)胞表達(dá)能結(jié)合SEQ ID No. I所編碼蛋白的IgG抗體。
24.一種永生化人B細(xì)胞，所述細(xì)胞表達(dá)能結(jié)合含SEQ ID No. 4的蛋白的IgG抗體。
25.—種永生化人B細(xì)胞，所述細(xì)胞表達(dá)能結(jié)合SEQ ID No. 3所編碼蛋白的IgG抗體。
26.如權(quán)利要求21-25中任一項所述的永生化人B細(xì)胞，其特征在于，所述IgG抗體是IgGU IgG2、IgG3 或 IgG4 抗體。
27.如權(quán)利要求21-25中任一項所述的永生化人B細(xì)胞，其特征在于，所述IgG抗體是IgGl抗體。
28.如權(quán)利要求21-25中任一項所述的永生化人B細(xì)胞，其特征在于，所述IgG抗體包含K輕鏈。
29.如權(quán)利要求21-25中任一項所述的永生化人B細(xì)胞，其特征在于，所述IgG抗體包含λ輕鏈。
30.如權(quán)利要求21-25中任一項所述的永生化人B細(xì)胞，其中所述B細(xì)胞經(jīng)EBV永生化。
31.如權(quán)利要求21所述的永生化人B細(xì)胞，其命名為T-OT1、V-3H11(3G5)、T-2D3、T-7G7 (1H9)、T-2H3、T-9F9、T-8G4 或 T-P1C6。
32.—種永生化人B細(xì)胞，保藏為以下保藏號__，分別命名為克隆 I、3H11 (3G5)、2D3、7G7 (1H9)、2H3、9F9、8G4或P1C6，且于2010年11月17日保藏到美國典型培養(yǎng)物保藏中心。
33.一種分離的抗體或其片段，其由權(quán)利要求21-25中所述的細(xì)胞產(chǎn)生。
34.如權(quán)利要求33所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。
35.如權(quán)利要求33所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段對人基本無免疫原性。
36.如權(quán)利要求33所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。
37.一種分離的人單克隆抗體或其片段，其能特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白。
38.如權(quán)利要求33-37所述的分離抗體或其片段，其特征在于，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。
39.如權(quán)利要求33-37所述的分離抗體或其片段，其特征在于，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清孵育48小時，其殺死所述MV4-11細(xì)胞群體的至少20%。
40.如權(quán)利要求33-37所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。
41.如權(quán)利要求33-37所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段滅活人核仁素的RNA結(jié)合域。
42.如權(quán)利要求33-37所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述分離抗體或其片段誘導(dǎo)針對癌細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。
43.如權(quán)利要求33-37所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述分離抗體或其片段誘導(dǎo)針對癌細(xì)胞的非補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。
44.如權(quán)利要求33-37所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述分離抗體或其片段在接觸時誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡。
45.如權(quán)利要求33-37所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述分離抗體或其片段抑制或殺死AML癌細(xì)胞、CLL癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞。
46.如權(quán)利要求33-37所述的分離抗體或其片段，其特征在于，所述分離的單克隆抗體或其片段降低癌細(xì)胞中的BCL-2水平。
47.一種特異性結(jié)合人核仁素蛋白的分離抗體或其片段，其特征在于，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。
48.一種特異性結(jié)合人核仁素蛋白的分離抗體或其片段，其特征在于，當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，其殺死所述MV4-11細(xì)胞群體的至少20%。
49.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述人核仁素的氨基酸序列包含 SEQ ID No. 2。
50.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段結(jié)合由SEQ ID No. 2的氨基酸殘基1-283組成的氨基酸序列。
51.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。
52.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段對人基本無免疫原性。
53.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。
54.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。
55.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段滅活人核仁素的RNA結(jié)合域。
56.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述分離抗體或其片段連接有診斷劑或治療劑。
57.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述分離抗體或其片段顯示針對癌細(xì)胞的補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。
58.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述分離抗體或其片段顯示針對癌細(xì)胞的非補(bǔ)體依賴性細(xì)胞毒性。
59.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述分離抗體或其片段在接觸時誘導(dǎo)癌細(xì)胞的凋亡。
60.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段抑制或殺死AML癌細(xì)胞、CLL癌細(xì)胞或乳腺癌細(xì)胞。
61.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述分離抗體或其片段降低癌細(xì)胞中的BCL-2水平。
62.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段連接有診斷劑。
63.如權(quán)利要求62所述的抗體或其片段，其特征在于，所述診斷劑是放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光化合物、熒光化合物或酶。
64.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述抗體或其片段連接有治療劑。
65.如權(quán)利要求64所述的抗體或其片段，其特征在于，所述治療劑是放射性核素、毒素或化療部分。
66.一種抗核仁素組合物，所述抗核仁素組合物包含能特異性結(jié)合所述人核仁素蛋白的一種或多種分離的抗體或其片段，其中當(dāng)所述一種或多種抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。
67.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，所述一種或多種分離抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。
68.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，所述一種或多種分離抗體或其片段對人基本無免疫原性。
69.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，所述一種或多種分離抗體或其片段是人抗體或其片段。
70.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，所述一種或多種分離抗體或其片段結(jié)合人核仁素的RNA結(jié)合域。
71.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，所述一種或多種分離抗體或其片段滅活人核仁素的RNA結(jié)合域。
72.如權(quán)利要求47或48所述的抗體或其片段，其特征在于，所述人核仁素的氨基酸序列包含 SEQ ID No. 2。
73.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，所述一種或多種分離抗體或其片段結(jié)合SEQ ID No. 4。
74.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，還包含放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光化合物、熒光化合物、酶、毒素或化療劑。
75.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，所述放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光化合物、熒光化合物、酶、毒素或化療劑偶聯(lián)所述一種或多種分離抗體或其片段。
76.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，所述抗核仁素組合物包含兩種或更多種特異性結(jié)合所述人核仁素蛋白的分離抗體或其片段，其中當(dāng)所述一種或多種抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少 20%ο
77.如權(quán)利要求66所述的抗核仁素組合物，其特征在于，所述抗核仁素組合物包含3種或更多種特異性結(jié)合所述人核仁素蛋白的分離抗體或其片段，其中當(dāng)所述一種或多種抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。
78.—種抑制或殺滅在細(xì)胞表面表達(dá)核仁素的細(xì)胞的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞接觸能結(jié)合人核仁素蛋白的抗體或其片段，其中當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。
79.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗體或其片段是人抗體或其片段。
80.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。
81.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗體或其片段結(jié)合SEQIDNo. 2。
82.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗體或其片段結(jié)合SEQIDNo. I編碼的氨基酸序列。
83.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗體或其片段結(jié)合SEQIDNo. 4。
84.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗體或其片段結(jié)合SEQIDNo. 3編碼的氨基酸序列。
85.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞是癌細(xì)胞。
86.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述癌細(xì)胞是肺癌細(xì)胞，乳腺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、腎細(xì)胞癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞、神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞或胃癌細(xì)胞。
87.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞是免疫細(xì)胞。
88.如權(quán)利要求87所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞是淋巴細(xì)胞、樹突細(xì)胞、夕卜周血單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
89.如權(quán)利要求78-88所述的方法，其特征在于，所述抗體或其片段連接有治療劑。
90.如權(quán)利要求89所述的方法，其特征在于，所述治療劑是放射性核素、毒素或化療劑。
91.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述抑制或殺死包括誘導(dǎo)所述細(xì)胞中的凋亡。
92.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞位于人類對象中，且所述接觸包括將所述抗體或其片段給予所述對象。
93.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述方法還包括使所述細(xì)胞接觸至少一種補(bǔ)充抑制劑或療法。
94.如權(quán)利要求93所述的方法，其特征在于，所述補(bǔ)充療法包括一種或多種手術(shù)、放射治療、化學(xué)治療、毒素治療、免疫治療、激素治療、抗血管生成治療或基因治療或其它生物學(xué)療法。
95.如權(quán)利要求93所述的方法，其特征在于，所述補(bǔ)充抑制劑包括一種或多種放射性核素、化療劑、毒素免疫治療劑、激素、核酸或多肽。
96.如權(quán)利要求95所述的方法，其特征在于，所述毒素是白喉毒素、外毒素A鏈、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、α八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸蛋白、美洲商陸抗病毒蛋白、苦瓜抑制劑、瀉果素、巴豆毒素、肥皂草抑制劑、白樹毒素、邁托毒素、局限曲菌素、酹霉素、伊諾霉素、卡奇霉素或單端孢霉烯族毒素。
97.如權(quán)利要求95所述的方法，其特征在于，所述化療劑是烷基化劑、蒽環(huán)類抗生素、細(xì)胞骨架擾亂劑、大環(huán)內(nèi)酯、拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑、核苷或核苷酸類似物、前體類似物、肽抗生素、鉬基試劑、類視黃醇、長春花生物堿，或其衍生物。
98.如權(quán)利要求95所述的方法，其特征在于，所述化療劑是放線菌素D、全反式視黃酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博來霉素、喜樹堿、卡鉬、卡培他濱、順鉬、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、道諾紅菌素、多西他賽、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大環(huán)內(nèi)酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱、羥基脲、過氧化氫、伊達(dá)比星、伊馬替尼、雙氯乙基甲胺、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、鹽酸米托蒽醌、奧沙利鉬、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、硫鳥嘌呤、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春堿酰胺或長春瑞賓。
99.一種檢測在其表面表達(dá)核仁素的細(xì)胞的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞接觸免疫結(jié)合所述核仁素的人抗體或其片段。
100.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞是癌細(xì)胞，免疫細(xì)胞或在其表面表達(dá)核仁素的血管平滑肌細(xì)胞，在其表面表達(dá)核仁素的內(nèi)皮細(xì)胞，或病毒感染細(xì)胞。
101.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞是在其表面表達(dá)核仁素的癌前細(xì)胞。
102.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述癌細(xì)胞選自下組肺癌細(xì)胞，乳腺癌細(xì)胞、前列腺癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、腎細(xì)胞癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞、神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞和胃癌細(xì)胞。
103.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞是淋巴細(xì)胞、樹突細(xì)胞、夕卜周血單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。
104.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞是免疫細(xì)胞。
105.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞是活化的免疫細(xì)胞。
106.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞是活化的B細(xì)胞。
107.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞是記憶B細(xì)胞。
108.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞是活化的T細(xì)胞。
109.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞是活化的CD4+T細(xì)胞。
110.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述免疫細(xì)胞是活化的CD8+T細(xì)胞。
111.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞是血管平滑肌細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞。
112.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述抗體或其片段連接有診斷劑。
113.如權(quán)利要求112所述的方法，其特征在于，所述診斷劑是放射性核素、熒光團(tuán)、化學(xué)發(fā)光化合物、熒光化合物、量子點、納米顆?；蛎浮?br> 114.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞位于人類對象中，且所述接觸包括將所述抗體或其片段給予所述對象。
115.如權(quán)利要求99所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞位于分離的組織樣品或細(xì)胞懸液中。
116.一種治療或預(yù)防哺乳動物中癌癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素試劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素試劑包括抗核仁素抗體或其片段，且當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。
117.一種治療或預(yù)防哺乳動物中癌癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素抗體或其片段，毒素或化療劑以及藥學(xué)上可接受的載體；其中當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。
118.一種治療或預(yù)防哺乳動物中癌癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素抗體或其片段和藥學(xué)上可接受的載體，并用放療進(jìn)一步治療所述哺乳動物，其中當(dāng)所述抗體或其片段與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，其殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少20%。
119.一種在哺乳動物中治療或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素劑和藥學(xué)上可接受的載體；其中所述抗核仁素劑包含特異性結(jié)合SEQ IDNo. 4所示蛋白的抗核仁素抗體或其片段。
120.一種在哺乳動物中治療或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素抗體或其片段，毒素或化療劑以及藥學(xué)上可接受的載體，其中所述抗體或其片段特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白。
121.—種在哺乳動物中治療或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括給予所述哺乳動物治療有效量的抗核仁素抗體或其片段和藥學(xué)上可接受的載體，其中所述抗體或其片段特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白。
122.如權(quán)利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述哺乳動物是人。
123.權(quán)利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述抗核仁素抗體或其片段對人基本無免疫原性。
124.如權(quán)利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述抗核仁素抗體或其片段是人抗體或其片段。
125.如權(quán)利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述抗核仁素抗體或其片段是單克隆抗體或其片段。
126.如權(quán)利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述毒素是白喉毒素、外毒素A鏈、蓖麻毒素A鏈、相思豆毒素A鏈、蒴蓮根毒素A鏈、α八疊球菌、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陸蛋白、美洲商陸抗病毒蛋白、苦瓜抑制劑、瀉果素、巴豆毒素、肥皂草抑制劑、白樹毒素、邁托毒素、局限曲菌素、酹霉素、伊諾霉素、卡奇霉素或單端孢霉烯族毒素。
127.如權(quán)利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述化療劑是烷基化劑、蒽環(huán)類抗生素、細(xì)胞骨架擾亂劑、大環(huán)內(nèi)酯、拓?fù)洚悩?gòu)酶I的抑制劑、拓?fù)洚悩?gòu)酶II的抑制劑、核苷或核苷酸類似物、前體類似物、肽抗生素、鉬基試劑、類視黃醇、長春花生物堿，或其衍生物。
128.如權(quán)利要求116-121所述的方法，其特征在于，所述化療劑是放線菌素D、全反式視黃酸阿扎胞苷、阿霉素硫唑嘌呤、博來霉素、喜樹堿、卡鉬、卡培他濱、順鉬、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、道諾紅菌素、多西他賽、多西氟尿啶、多柔比星、表阿霉素、大環(huán)內(nèi)酯、依托泊苷、氟尿嘧啶、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱、羥基脲、過氧化氫、伊達(dá)比星、伊馬替尼、雙氯乙基甲胺、巰基嘌呤、甲氨蝶呤、絲裂霉素C、鹽酸米托蒽醌、奧沙利鉬、紫杉醇、培美曲塞、替尼泊苷、硫鳥嘌呤、戊柔比星、長春堿、長春新堿、長春堿酰胺或長春瑞賓。
129.—種抗核仁素劑，當(dāng)所述抗核仁素劑與MCF-7細(xì)胞和人AB血清一起孵育48小時，能殺死所述MCF-7細(xì)胞群體的至少50%。
130.一種抗核仁素劑，當(dāng)所述抗核仁素劑與單獨(dú)的MCF-7細(xì)胞和MCFlOA細(xì)胞群體及熱滅活血清一起孵育72或96小時，所殺死的MCF-7細(xì)胞超過所殺死的MCFlOA細(xì)胞。
131.ー種抗核仁素劑，當(dāng)所述抗核仁素劑與單獨(dú)的MCF-7細(xì)胞和MCFlOA細(xì)胞群體及人AB血清一起孵育72或96小時，所殺死的MCF-7細(xì)胞超過所殺死的MCFlOA細(xì)胞。
132.—種抗核仁素劑，其能特異性結(jié)合SEQ ID No. 4所示蛋白并抑制或殺死在其表面表達(dá)核仁素的ー種或多種癌細(xì)胞。
133.如權(quán)利要求129-132所述的抗核仁素劑，其特征在于，所述抗核仁素劑對人基本無免疫原性。
134.ー種通過檢測ー種或多種癌前細(xì)胞中細(xì)胞表面核仁素表達(dá)來確定對象患癌可能性的方法。
135.如前述權(quán)利要求中任一項所述的抗體，其特征在于，所述抗體片段為Fab、Fab’、F(ab’)2或Fv片段；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體；或由抗體片段形成的多特異性抗體。
136.如前述權(quán)利要求中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法包括使用抗體片段，其中所述抗體片段為Fab、Fab’、F(ab' )2或Fv片段；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體；或由抗體片段形成的多特異性抗體。
全文摘要
本發(fā)明提供產(chǎn)生針對人核仁素的人單克隆抗體的方法，生產(chǎn)此類抗體的細(xì)胞，以及所述抗體本身。還提供用所述方法診斷和治療惡性和非惡性疾病的方法，所述疾病在細(xì)胞表面表達(dá)核仁素影響疾病的病理生理學(xué)。
文檔編號C12N5/00GK102770529SQ201080051890
公開日2012年11月7日 申請日期2010年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月17日
發(fā)明者B·赫爾, D·弗納德斯, N·蘇特科維斯基, S·魯賓奇克 申請人:Musc研究發(fā)展基金會