專利名稱：一種制備白楊素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明天然產(chǎn)物分離領(lǐng)域，尤其是涉及一種采用酶解方法制備白楊素的方法。
背景技術(shù)：
白楊素又稱白楊黃素，化學(xué)名稱5，7_ 二羥基黃酮，淡黃色棱柱形結(jié)晶(由甲醇中結(jié)晶)，熔點285°C。溶于氫氧化堿溶液，微溶于乙醚、乙醇和氯仿，不溶于水。研究表明白楊素具有抗氧化、抗病毒、抗高血壓、降血糖和抑制芳香酶活性的作用，特別受人關(guān)注的是其具有腫瘤預(yù)防和治療作用。白楊素的抗腫瘤作用主要包括(1)抗腫瘤細胞增殖；(2)誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡；(3)逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞多藥耐藥作用；(4)抗基因突變作用。現(xiàn)有提取白楊素多是從紫薇科植物木蝴蝶中提取，但是木蝴蝶藥材白楊素含量較低。而三葉海棠葉中白楊素苷含量較高，高達5%左右，可以經(jīng)過水解或酶解成白楊素，原料易得。從三葉海棠葉中提取白楊素，現(xiàn)有工藝是先提取白楊素苷再酸水解得到白楊素。 如文獻“HPLC法測定三葉海棠葉中白楊素苷含量”，該文獻公開的方法是取三葉海棠葉，加 12倍量的丙酮超聲提取3次，每次lh，合并提取液，回收丙酮，其提取物混合聚酰胺后，干法上聚酰胺柱，依次用水，10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、70 %、95 %乙醇洗脫，以TLC跟蹤檢測，合并相同的餾分，濃縮部分溶劑，析出結(jié)晶，結(jié)晶再以丙酮進行重結(jié)晶，得針狀淺黃色結(jié)晶，即為白楊索苷。取該結(jié)晶適量用6%硫酸加熱水解，析晶，丙酮重結(jié)晶即得白楊素。酸水解產(chǎn)生較多廢酸水，污染較嚴重。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決技術(shù)問題是提供一種用生物酶解制備白楊素的方法，該方法反應(yīng)條件溫和，對環(huán)境污染小。為解決上述問題，本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的一種制備白楊素的方法，其特征在于包含以下步驟1)取三葉海棠葉粉碎，加酸性水溶液拌濕，加入2_5%。生物酶酶解，制得酶解原料；2)把上述酶解原料加入5-10倍量80-90%乙醇溶液回流提取2_3次，提取液減壓回收濃縮至醇濃度20-40%，放置結(jié)晶；3)濾出上述結(jié)晶物，乙醇溶解聚酰胺拌樣，揮干乙醇裝柱，乙醇溶液梯度洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，減壓濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物90-99%乙醇回流溶解結(jié)晶，結(jié)晶物干燥即得高含量白楊素產(chǎn)品。所述步驟1)中酸性水為pH3-5的鹽酸或硫酸水溶液，生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和β -葡聚糖苷酶中的一種或幾種，添加量為原料的1-2%。，酶解時間24-48小時，酶解溫度 35-50°C。
所述步驟3)中乙醇梯度洗脫為4-6BV40-50%乙醇一70%乙醇。本發(fā)明優(yōu)勢在于采用三葉海棠葉，白楊素苷含量高，原料便宜易得；生物酶解反應(yīng)溫和，而且酶解后原料更易提取，不產(chǎn)生更多廢液酸水，提取過的原料更易降解；整個工藝未使用毒性有機試劑，所得產(chǎn)品符合藥品生產(chǎn)要求。下面將結(jié)合具體實施方式
進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1 取干燥的三葉海棠葉粉碎，稱量1kg，加適量pH3鹽酸水溶液拌濕，再加入2g β -葡聚糖苷酶拌勻，保溫酶解原料35小時，溫度控制35-50°C。酶解原料加入10kg90%乙醇溶液回流提取2次，每次1小時，合并提取液減壓濃縮至醇濃度40%，放置結(jié)晶，過濾得粗結(jié)晶物95g。把粗結(jié)晶物用90%乙醇回流溶解，取20g聚酰胺拌樣，揮干乙醇，與200g聚酰胺裝柱，取1L50 %乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，再取70%乙醇溶液洗脫有效成分，薄層檢測，收集白楊素高濃度流分，減壓濃縮至醇濃度30%，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用99%乙醇回流溶解，濃縮至1/2體積放置結(jié)晶，結(jié)晶物濾出干燥，得白楊素產(chǎn)品18. 2g，含量95. 6% (HPLC檢測)。實施例2:取干燥的三葉海棠葉粉碎，稱量1kg，加適量pH5鹽酸水溶液拌濕，再加入5g纖維素酶拌勻，保溫酶解原料40小時，溫度控制35-50°C。酶解原料加入^igSOW乙醇溶液回流提取3次，每次1小時，合并提取液減壓濃縮至醇濃度30%，放置結(jié)晶，過濾得粗結(jié)晶物 102g。把粗結(jié)晶物用90%乙醇回流溶解，取30g聚酰胺拌樣，揮干乙醇，與200g聚酰胺裝柱，取1. 2L40%乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，再取70%乙醇溶液洗脫有效成分，薄層檢測，收集白楊素高濃度流分，減壓濃縮至醇濃度30%，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用90 %乙醇回流溶解，濃縮至1/2體積放置結(jié)晶，結(jié)晶物濾出干燥，得白楊素產(chǎn)品16. 3g，含量97. 2% (HPLC檢測)。實施例3 取干燥的三葉海棠葉粉碎，稱量1kg，加適量pH4硫酸水溶液拌濕，再加入4g淀粉酶拌勻，保溫酶解原料40小時，溫度控制35-50°C。酶解原料加入^gSO%乙醇溶液回流提取2次，每次1小時，合并提取液減壓濃縮至醇濃度30%，放置結(jié)晶，過濾得粗結(jié)晶物92g。 把粗結(jié)晶物用99 %乙醇回流溶解，取20g聚酰胺拌樣，揮干乙醇，與^Og聚酰胺裝柱，取 1L50%乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，再取70%乙醇溶液洗脫有效成分，薄層檢測，收集白楊素高濃度流分，減壓濃縮至醇濃度40%，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用90 %乙醇回流溶解，濃縮至3/4體積放置結(jié)晶，結(jié)晶物濾出干燥，得白楊素產(chǎn)品17. lg，含量95.4% (HPLC檢測)。實施例4 取干燥的三葉海棠葉粉碎，稱量^g，加適量pH4硫酸水溶液拌濕，再加入IOg纖維素酶和5gi3 -葡聚糖苷酶拌勻，保溫酶解原料40小時，溫度控制35-50°C。酶解原料加入乙醇溶液回流提取2次，每次1小時，合并提取液減壓濃縮至醇濃度40%，放置結(jié)晶，過濾得粗結(jié)晶物495g。把粗結(jié)晶物用99%乙醇回流溶解，取150g聚酰胺拌樣，揮干乙醇，與Ikg聚酰胺裝柱，取6L40%乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，再取70%乙醇溶液洗脫有效成分， 薄層檢測，收集白楊素高濃度流分，減壓濃縮至醇濃度30%，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用95%乙醇回流溶解，濃縮至3/4體積放置結(jié)晶，結(jié)晶物濾出干燥，得白楊素產(chǎn)品84g，含量94. 8% (HPLC 檢測)。實施例5 取干燥的三葉海棠葉粉碎，稱量10kg，加適量pH4硫酸水溶液拌濕，再加入30g淀粉酶和10gi3-葡聚糖苷酶拌勻，保溫酶解原料35小時，溫度控制35-50°C。酶解原料加入 10kg90%乙醇溶液回流提取3次，每次1小時，合并提取液減壓濃縮至醇濃度30%，放置結(jié)晶，過濾得粗結(jié)晶物1023g。把粗結(jié)晶物用99%乙醇回流溶解，取300g聚酰胺拌樣，揮干乙醇，與2kg聚酰胺裝柱，取10L40%乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，再取70%乙醇溶液洗脫有效成分，薄層檢測，收集白楊素高濃度流分，減壓濃縮至醇濃度20%，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用95 %乙醇回流溶解，濃縮至3/4體積放置結(jié)晶，結(jié)晶物濾出干燥，得白楊素產(chǎn)品172g，含量95. 1% (HPLC 檢測)。
權(quán)利要求
1.一種制備白楊素的方法，其特征在于包含以下步驟1)取三葉海棠葉粉碎，加酸性水溶液拌濕，加入2-5%。生物酶酶解，制得酶解原料；2)把上述酶解原料加入5-10倍量80-90%乙醇溶液回流提取2-3次，提取液減壓回收濃縮至醇濃度20-40%，放置結(jié)晶；3)濾出上述結(jié)晶物，乙醇溶解聚酰胺拌樣，揮干乙醇裝柱，乙醇溶液梯度洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，減壓濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物90-99%乙醇回流溶解結(jié)晶，結(jié)晶物干燥即得高含量白楊素產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述從制備白楊素的方法，其特征在于所述步驟1)中酸性水為PH3-5 的鹽酸或硫酸水溶液，生物酶可選纖維素酶、淀粉酶和β -葡聚糖苷酶中的一種或幾種，添加量為原料的1-2%。，酶解時間Μ-48小時，酶解溫度35-50°C。
3.如權(quán)利要求1所述從制備白楊素的方法，其特征在于所述步驟幻中乙醇梯度洗脫為 4-6BV40-50% 乙醇—70% 乙醇。
全文摘要
本發(fā)明涉及了一種制備白楊素的方法，本方法采用生物酶酶解，污染程度低，產(chǎn)品收率高，包括以下步驟取三葉海棠葉粉碎，加酸性水溶液拌濕，加入2-5‰生物酶酶解，酶解原料再加入5-10倍量80-90％乙醇溶液回流提取2-3次，提取液減壓回收乙醇至醇濃度20-40％，放置結(jié)晶，結(jié)晶物用乙醇溶解與聚酰胺拌樣，裝柱，乙醇溶液梯度洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，減壓濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶物用90-99％乙醇回流溶解結(jié)晶，結(jié)晶物干燥即得高含量白楊素產(chǎn)品。本方法操作簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C12P17/06GK102465158SQ20101054981
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月19日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶, 楊成東 申請人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司