專利名稱：抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體可變區(qū)的基因序列的制作方法
技術(shù)領域：
本發(fā)明涉及一種抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體可變區(qū)的基因序列。
背景技術(shù)：
溶藻弧菌(Vibrio, alginolyticus)是引起牙鲆、鰻鱺等許多名貴經(jīng)濟魚類致病 的病菌之一，嚴重威脅著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展?？山o漁業(yè)和養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟損失。 傳統(tǒng)防治溶藻弧菌感染的方法主要采用抗生素和減毒、滅活疫苗?？股氐拈L期使用可使 魚類產(chǎn)生耐藥性，而且殘留的抗生素可通過食物鏈對人類造成危害。減毒疫苗的安全性難 以掌握；而用物理、化學方法制備的滅活疫苗，抗原活性可能遭到破壞，且殘存的雜質(zhì)還可 能引起魚的炎癥反應而死亡。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的 基因序列，其可作為抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體(mAb)抗原，為HlAb基因工程疫苗的構(gòu)建
奠定基礎。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的針對溶藻弧菌保護性抗原表位制備的抗獨特 型HiAb具有良好的免疫原性和安全性，為此，我們應用RT-PCR技術(shù)，從分泌抗溶藻弧菌獨 特型mAb的雜交瘤細胞株2F4中，擴增了該mAb的重鏈可變區(qū)基因Vh和輕鏈可變區(qū)基因\ 的基因片段，并進行了克隆和序列測定。其中，Vh基因全長為369bp，編碼123個氨基酸；八 基因全長為339bp，編碼113個氨基酸，通過國際聯(lián)機檢索及Kabat庫分析，二者均符合小鼠 IgG V區(qū)基因的特征，含有4個框架區(qū)(FR)，3個抗原互補決定區(qū)(CDR)及兩個抗體特征性 的半胱氨酸殘基。所測抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體重鏈可變區(qū)基因Vh的核苷酸序列為
權(quán)利要求
一種抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體重鏈可變區(qū)基因VH的基因序列，其特征在于從分泌抗溶藻弧菌獨特型mAb的雜交瘤細胞株(2F4)中提取總RNA，利用RT PCR技術(shù)，克隆抗溶藻弧菌獨特型mAbVH基因，并將其重組入PMD18 T vector中進行測序分析，該基因全長為369bp，編碼123個氨基酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體重鏈可變區(qū)基因Vh的基 因序列，其特征在于VH的核苷酸序列為
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體重鏈可變區(qū)基因Vh的基 因序列，其特征在于Λ的氨基酸序列為
4.一種抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體輕鏈可變區(qū)基因VL的基因序列，其特征在于從 分泌抗溶藻弧菌獨特型mAb的雜交瘤細胞株(2F4)中提取總RNA，利用RT-PCR技術(shù)，克隆抗 溶藻弧菌獨特型mAbVL基因，并將其重組入PMD18-T vector中進行測序分析，該基因全長 為339bp，編碼113個氨基酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體輕鏈可變區(qū)基因\的基 因序列，其特征在于的核苷酸序列為
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體輕鏈可變區(qū)基因\的基 因序列，其特征在于的氨基酸序列為
全文摘要
一種用于基因工程技術(shù)領域的抗溶藻弧菌獨特型單克隆抗體重鏈可變區(qū)及輕鏈可變區(qū)基因VH和VL的基因序列。應用RT-PCR技術(shù)，從分泌抗溶藻弧菌獨特型mAb的雜交瘤細胞株2F4中，擴增了該mAb的重鏈可變區(qū)基因VH和輕鏈可變區(qū)基因VL的基因片段，并進行了克隆和序列測定，其中，VH基因全長為369bp，編碼123個氨基酸；VL基因全長為339bp，編碼113個氨基酸，通過國際聯(lián)機檢索及Kabat庫分析，二者均符合小鼠IgG V區(qū)基因的特征，含有4個框架區(qū)(FR)，3個抗原互補決定區(qū)(CDR)及兩個抗體特征性的半胱氨酸殘基。本發(fā)明可以通過制備該基因的蛋白作為抗原，用于研究mAb基因工程疫苗。
文檔編號C12N15/13GK101955940SQ201010272799
公開日2011年1月26日 申請日期2010年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月3日
發(fā)明者付建芳, 付菊芳, 涂艷陽 申請人:付建芳;涂艷陽;付菊芳