專利名稱：蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及細(xì)菌的應(yīng)用，提供了蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬 菜致病菌中的新應(yīng)用。
背景技術(shù)：
食品安全已經(jīng)成為全世界共同關(guān)注的問題，世界衛(wèi)生組織(WHO)將食品安全看作 是一個世界性的挑戰(zhàn)。而保證食品的安全和衛(wèi)生，目的就是要防止食物中毒的發(fā)生。目前， 細(xì)菌性食物中毒的發(fā)病人數(shù)和發(fā)生件數(shù)在我國各類食物中毒中都占第1位，據(jù)我國近五年 食物中毒統(tǒng)計(jì)資料表明，細(xì)菌性食物中毒占食物中毒總數(shù)的50%左右。誘發(fā)細(xì)菌性食物中毒的細(xì)菌主要是大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等。而對 于新鮮蔬菜來說，大腸埃希氏菌、沙門氏菌、單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌等為常見污染 的致病菌，其中大腸桿菌、沙門氏菌最多。新鮮生食蔬菜主要有香蔥、香菜、番茄、黃瓜等，這些蔬菜在日常食用前基本不會 經(jīng)過殺菌，簡單清洗后直接食用，這樣就導(dǎo)致了很多生食蔬菜過程中細(xì)菌性食物中毒的發(fā) 生。近幾年，市面上出現(xiàn)一種即食蔬菜，為許多市民所喜愛。其原料蔬菜可以采用除葉菜類 的各種蔬菜，包括冬筍、藕、土豆、香芹、胡蘿卜等等。其加工生產(chǎn)流程主要是新鮮蔬菜-清 洗-加工-包裝。因此，清洗過程殺菌就顯得尤為重要。而目前新鮮蔬菜的清洗過程，主要有紫外線 殺菌、臭氧殺菌、化學(xué)藥品殺菌以及酸電解水等物理除菌方法。這些除菌方法都有一定的局 限性，物理方法破壞蔬菜本身的營養(yǎng)成分，而化學(xué)殺菌劑不可避免的在蔬菜中的殘留還容 易導(dǎo)致食物中毒的發(fā)生，其導(dǎo)致工業(yè)三廢的排放也極大的污染了環(huán)境。除此之外，所有這些 除菌方法都不夠經(jīng)濟(jì)方便快捷，不能滿足新鮮生食蔬菜即洗即食的要求，也不能滿足即食 蔬菜加工低成本高利潤的要求，因此研究生物的方法清除蔬菜中常見致病菌，就能從保障 蔬菜的營養(yǎng)價值、安全性、環(huán)保、經(jīng)濟(jì)效益四方面提供一種有效的新技術(shù)。噬菌蛭弧菌(以下簡稱蛭弧菌)是一類專門以捕食細(xì)菌為生的寄生性細(xì)菌。廣泛 存在于自然水體，污水及土壤中，并能從動物或人體糞便中檢出。1962年首次發(fā)現(xiàn)于菜豆枯 萎病假單胞菌體中，命名為Bdellovibrio bacteriovorus，它比通常的細(xì)菌小，能通過細(xì)菌 濾器，有類似噬菌體的作用，但它不是病毒，它具有細(xì)菌的一切形態(tài)特征，單細(xì)胞，呈弧形或 逗點(diǎn)狀，有時呈螺旋狀，大小0. 2 0. 6X0. 8 1. 2微米，端生鞭毛，多為一根。革蘭氏染 色呈陰性，可以裂解致病菌或潛在致病性細(xì)菌。我們的最新研究表明，有的蛭弧菌菌株可以 裂解包括大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌等一些常見食源性致病菌。蛭弧菌的生活史 分兩個階段自由生活，能運(yùn)動，不進(jìn)行增殖的游泳體階段和在特定宿主細(xì)菌的周質(zhì)空間內(nèi) 進(jìn)行生長繁殖的蛭質(zhì)體階段。蛭弧菌游泳體是指蛭弧菌侵入宿主細(xì)菌前的生長形式，蛭弧 菌在游泳體階段，識別并與宿主發(fā)生不可逆結(jié)合，然后侵入宿主。蛭弧菌進(jìn)入宿主菌細(xì)胞周 質(zhì)空間后，宿主細(xì)菌在30分鐘內(nèi)即停止呼吸作用，死亡；而蛭弧菌則分泌多種酶，通過降解 宿主細(xì)胞的大分子成為單體，然后攝入用于其生物大分子的合成。隨著細(xì)胞增殖和水解酶產(chǎn)生，使宿主細(xì)胞壁膜被破壞，從而裂解釋放出蛭弧菌。已有的研究表明，作為一種有益微生物制劑，無論是在食品工業(yè)還是在(海洋) 水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域，蛭弧菌的應(yīng)用均是安全的。例如在國外，Lenz and Hespell (1978)研 究發(fā)現(xiàn)，蛭弧菌及對動物及人的細(xì)胞不具侵染性[Lenz R. W.，Hespell R. B. Attempts to growbedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives ofMicrobiology, 1978,119 (3) :245-248]。在國內(nèi)，林茂等(2006)研究了蛭弧菌對魚類細(xì) 胞的作用，發(fā)現(xiàn)它對魚類細(xì)菌沒有侵染作用[林茂，楊先樂，薛暉，曹海鵬，邱軍強(qiáng)。蛭弧菌 BDH2102對魚類細(xì)胞及病原菌的作用。微生物學(xué)通報，2006，33(1) :7_11]。蛭弧菌游泳體侵入宿主細(xì)菌的過程非?？?，一般幾秒鐘內(nèi)即可完成。相對于蛭弧 菌蛭質(zhì)體而言，雖然存在著制備繁瑣、不易保存的弱點(diǎn)，但用蛭弧菌游泳體消除蔬菜中常見 致病菌具有起效快、活力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。從而克服了蔬菜食用前或加工過程清洗時殺菌不徹底 以及物理化學(xué)殺菌方法的不良影響等弊端。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的弊端，提供蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜清洗 過程、加工設(shè)備及加工環(huán)境中致病菌的新應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用。所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp. )BDFM05，于2009年8月7日保藏于中國 典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢武漢大學(xué)，保藏編號為CCTCC NO =M 209172。所述蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用是將蔬菜在蛭弧菌游泳體菌 液中浸泡15-45min或者在蔬菜的加工環(huán)境中噴灑蛭弧菌游泳體菌液，噴灑用量為10 100mL/m2。所述蛭弧菌游泳體菌液濃度至少為IO1PfuAiL,優(yōu)選IO1 IO6 pfu/mL。所述蛭弧菌游泳體菌液的制備方法為接種宿主于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，在35°C和200rpm搖床培養(yǎng)12h，培養(yǎng)液經(jīng) 4 "C，5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌 BDFM05，在溫度25 ;35°C下，以150 300rpm搖床培養(yǎng)36 48h，得到含蛭弧菌蛭質(zhì)體和 蛭弧菌游泳體的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液在4°C溫度下以6000 8000rpm離心15 20min后，上清 經(jīng)16000 18000rpm離心15 20min后，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0. 2mol/ L pH值為7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO11 1012pfu/mL的蛭弧菌游泳體 菌液。蛭弧菌BDFM05進(jìn)行負(fù)染后于電子顯微鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察BDFM05呈單細(xì)胞，橢圓 形，大小為1.43X0. 53μπι，端生鞭毛，鞭毛長度至少2μπι;所述蛭弧菌BDFM05以雙層平板 法于培養(yǎng)三天可形成直徑2 3mm的透明圓形噬菌斑。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)1、本發(fā)明蛭弧菌游泳體菌液在蔬菜清洗中，消除其攜帶菌落總數(shù)及常見致病菌應(yīng) 用效果顯著。如圖1至圖5所示，菌落總數(shù)及各致病性的消除率均可達(dá)99%以上。
2、用蛭弧菌游泳體菌液消除食用前、加工過程蔬菜中菌落總數(shù)及常見致病菌安全 性好。蛭弧菌游泳體菌液消除蔬菜中常見致病菌的方法是生物的方法，蛭弧菌可侵染、 裂解宿主細(xì)菌的特性使之適合應(yīng)用于蔬菜食用前、加工清洗過程中，以抑制或清除蔬菜表 面的致病菌，且其在裂解完宿主細(xì)菌后，會因饑餓而自動消亡，因此對人和動物無毒副作 用。不僅可提高消費(fèi)者食用蔬菜的安全系數(shù)，保護(hù)消費(fèi)者的健康，也為即食蔬菜的綠色加工 生產(chǎn)提供保障。3、用蛭弧菌游泳體菌液消除蔬菜食用前、加工過程的常見致病菌可以最大程度的 保存蔬菜的營養(yǎng)價值，使新鮮生食蔬菜食用起來更安全，使即食蔬菜加工前帶菌基數(shù)更低。4、本發(fā)明為消除蔬菜所攜帶的食源性致病菌提供一種新的方法，并適合推廣應(yīng)用 于所有蔬菜食用、加工前的預(yù)處理過程，特別有利于減少或消除化學(xué)藥物殺菌劑殘留的可 能，確保蔬菜的優(yōu)質(zhì)、安全，從根本上避免食用蔬菜食物中毒事件的發(fā)生。5、在新鮮生食蔬菜食用前和即食蔬菜加工前清洗過程使用蛭弧菌游泳體除菌，不 僅滿足生食蔬菜即洗即食方便快速的特點(diǎn)，還能夠節(jié)省即食蔬菜加工前清洗設(shè)備投資成 本，節(jié)約能源，保護(hù)環(huán)境。6、本發(fā)明所用蛭弧菌游泳體消除蔬菜中常見致病菌具有起效快、活力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。


圖1不同濃度蛭弧菌游泳體菌液做為除菌劑在消除蔬菜表面菌落總數(shù)的試驗(yàn)效 果比較圖。圖2不同濃度蛭弧菌游泳體菌液做為除菌劑在消除蔬菜表面致病菌的試驗(yàn)效果 比較圖。圖3蔬菜施加l(fpfu/mL蛭弧菌游泳體菌液時致病菌濃度對數(shù)值-時間圖；圖4蔬菜施用lOpfu/ml蛭弧菌游泳體菌液消除大腸桿菌時的致病菌殘留率-時 間圖；圖5加工設(shè)備及環(huán)境噴灑蛭弧菌游泳體菌液時菌落總數(shù)殘留率-噴灑量圖。圖6各常規(guī)殺菌劑在蔬菜清洗中消除其攜帶致病菌時各致病菌濃度平均值的對 數(shù)值-時間圖。圖7蛭弧菌游泳體菌液在蔬菜清洗中消除其攜帶大腸桿菌(Escherichia coli)、 沙門氏菌(Salmonella)、單增李斯特菌(Listeriamonocytohenes)、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)時的致病菌濃度對數(shù)值-時間圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1蛭弧菌游泳體菌液在黃瓜清洗過程，對其攜帶菌落總數(shù)、致病菌的消除作用。蛭弧菌游泳體優(yōu)選通過申請?zhí)枴?00710031166. X”，的發(fā)明專利公開的高密度蛭弧 菌游泳體的發(fā)酵方法進(jìn)行制備，具體步驟如下步驟一、蛭弧菌游泳體菌液的制備
蛭弧菌游泳體通過申請?zhí)枴?00710031166. X”，的發(fā)明專利公開的高密度蛭弧菌游 泳體的發(fā)酵方法進(jìn)行制備，具體步驟如下取103pfu/mL 蛭弧菌 BDFM0510mL，與嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila,購于 廣東省微生物所菌種保藏中心，編號GIM1. 172)菌液混合后加入到含有IOOmL DNB培養(yǎng)基 的三角錐瓶中，恒溫?fù)u床250rpm、28°C培養(yǎng)Mh。培養(yǎng)物經(jīng)過6000rpm、4°C離心20min，取上 清液，再16000rpm、4°C條件下離心20min，棄上清，5mL pH7. 2磷酸鹽緩沖液(PBS)懸浮，制 成IO11 1012pfU/mL蛭弧菌游泳體菌液，待用。步驟二、蛭弧菌游泳體菌液對蔬菜攜帶致病菌的消除(1)致病菌的制備于4瓶含IOOmL普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，分別接種IOmL X101(lCfu/mL大腸桿 菌(Escherichia coli，購于廣東省微生物研究所，編號GIM1. 137)、鼠傷寒沙門氏菌 (Salmonella typhimurium，購于廣東省微生物研究所，編號GIM1. 237)、單增李斯特菌 (Listeriamonocytogenes,購于廣東省微生物研究所，編號GIM1. 2 )、金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus，購于廣東省微生物研究所，編號GIM1. 142)，搖床培養(yǎng)，160rpm培養(yǎng)12-16h，增殖培養(yǎng)液經(jīng)6000rpm、4°C離心20min，棄上清液，沉淀菌體用5mL無菌 PH7. 2的PBS (磷酸鹽緩沖溶液)懸浮，得到濃度為109CfU/ml的原液，最后制備上述四種菌 的混合液，每種菌的終濃度為105CfU/ml。(2)致病菌消除取新鮮黃瓜，試驗(yàn)設(shè)對照組和試驗(yàn)組。其中對照三個黃瓜，為三個平行樣，剩下 黃瓜為試驗(yàn)組，所有對照組和試驗(yàn)組的黃瓜先經(jīng)75%酒精殺菌，后浸泡到(1)中制備好的 500mL混合菌液中l(wèi)min，取出浙干后，試驗(yàn)組的黃瓜浸漬于蛭弧菌游泳體菌液中，菌液濃度 分別為IolPfuAiLuoYfuAiLuo5PfuAiLuo6PfuAiL,每濃度均有三個平行樣，對照組的黃 瓜用清水(常規(guī)方法)浸泡，浸泡時間為30min。具體檢測方法是從每組試樣中取出黃瓜 放入無菌攪碎機(jī)中同時加入適量的無菌蒸餾水?dāng)囁?，震蕩均勻后取原液依次用無菌蒸餾水 進(jìn)行10倍稀釋后，取0. ImL涂布檢測。根據(jù)GB4789. 2-2010菌落總數(shù)用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基檢 測、根據(jù)國標(biāo)4789. 38-2008大腸桿菌用VRB-MUG (中性紅-膽鹽培養(yǎng)基)培養(yǎng)基檢測、根據(jù) 國標(biāo)4789. 4-2010沙門氏菌用BS (亞硫酸鉍瓊脂)培養(yǎng)基檢測、根據(jù)國標(biāo)4789. 30-2010 單增李斯特菌用李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基檢測、根據(jù)國標(biāo)4789. 10-2010金黃色葡萄球菌用 Baird-Parker瓊脂平板檢測。檢測結(jié)果如圖1，2、3所示蛭弧菌游泳體菌液消除致病菌的殘留量要遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于單純用自來水沖洗的效果，而 且蛭弧菌游泳體濃度越高，消除致病菌的效果越好，最低濃度IO1PfuAiL對于致病菌的消除 率已經(jīng)達(dá)到96 %，當(dāng)蛭弧菌濃度達(dá)103pfu/mL及以上時，對致病菌的消除率可達(dá)99. 99 %。 而且蛭弧菌游泳體在蔬菜表面通過裂解而消除病原菌，不會對水果的質(zhì)量產(chǎn)生影響，也不 會導(dǎo)致殺菌劑在水果中的殘留。殺菌快速，高效，安全使得蛭弧菌游泳體在消除蔬菜攜帶的 致病菌方面應(yīng)用潛力廣大，將其做為一種蔬菜的新型的清洗方法既能達(dá)到殺菌的目的，也 能保護(hù)蔬菜制品的食用安全。實(shí)施例2蛭弧菌游泳體菌液在清洗過程消除鮮藕表面大腸桿菌的應(yīng)用
試驗(yàn)具體步驟及條件如下
蛭弧菌游泳體制備方法同例1。大腸桿菌菌液制備方法同例1，稀釋到105Cfu/mL備用。取新鮮藕，試驗(yàn)設(shè)對照和實(shí)驗(yàn)組，每組三個平行，每個平行用藕一根。所有對照組 和試驗(yàn)組的鮮藕先經(jīng)75%酒精殺菌，后浸泡到制備好的500mL混合體菌液中l(wèi)min，取出 浙干后，實(shí)驗(yàn)組噴灑10pfu/mL蛭弧菌游泳體液5mL，對照組噴清水，室溫放置30min，每隔 IOmin取樣檢測一次，具體方法是取經(jīng)無菌生理鹽水濕潤的滅菌拭子(棉花簽)在藕表面上 均勻的涂抹4次后，置含無菌生理鹽水的無菌離心管中振蕩、混勻，然后采用平板涂布方法 檢測。檢測檢測方法同例1。結(jié)果如圖4所示，在使用蛭弧菌游泳體菌液(BDFM05)的實(shí)驗(yàn)組，在30min的試驗(yàn) 結(jié)束時，大腸桿菌已檢測不到，即完全消除；而施用清水的對照組，大腸桿菌的殘留率仍達(dá) 到 85%。實(shí)施例3蛭弧菌游泳體菌液應(yīng)用于蔬菜加工過程應(yīng)用設(shè)備、加工環(huán)境的消毒殺菌。試驗(yàn)包括以下具體步驟及其條件步驟一同實(shí)施例1的步驟一步驟二 致病菌消毒的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。對蔬菜加工車間地面和墻體、運(yùn)輸蔬菜的傳送帶及蔬菜清洗設(shè)備的表面，均勻噴 灑濃度為lOpfu/mL的蛭弧菌游泳體菌液，噴灑使用量則按試驗(yàn)組的不同分別為10mL/m2、 30mL/m2、50mL/m2、70mL/m2、或100mL/m2，每天噴灑一次，連續(xù)噴灑兩天，對照噴灑清水。具體 檢測方法是用濕的無菌棉簽在加工設(shè)備表面或車間地、墻表涂擦涂取樣，再用平板培養(yǎng)計(jì) 數(shù)。如圖5所示，在隨后的環(huán)境病菌檢測中，噴灑清水的對照組各種致病菌均有檢出， 菌落總數(shù)的殘留率依然很高，達(dá)到78%，而在噴灑蛭弧菌游泳體的試驗(yàn)組中，僅在噴灑量為 10mL/m2組中檢測到1 2cfu/mL的沙門氏菌，其他噴灑量的試驗(yàn)組沒有檢測到常見致病 菌。本試驗(yàn)研究的結(jié)果表明蛭弧菌在消除蔬菜加工過程中致病菌方面的效果顯著，可確保 蔬菜產(chǎn)品品質(zhì)及安全。由此可見，蛭弧菌作為殺菌劑可以廣泛地推廣應(yīng)用于蔬菜的清洗加 工過程中。實(shí)施例4蛭弧菌游泳體菌液與常規(guī)蔬菜殺菌劑的比較常規(guī)蔬菜殺菌劑有氯系殺菌劑(次氯酸鈉、漂白粉、漂粉精等)、電解酸性離子水、 二氧化氯、臭氧、過氧化物與氯氧化物混合。本例以新鮮小白菜為例，蛭弧菌采用BDFM05，蔬菜用75%酒精殺菌后，先將新鮮 蔬菜浸泡到制備好的500mL致病菌混合液中l(wèi)min，取出浙干，再將其浸泡到500mL各種殺菌 劑及蛭弧菌游泳體菌液中，40min。初始每隔Imin檢測一次，IOmin后，每隔IOmin檢測一 次。實(shí)施方法同例2，具體檢測方法同例1。蛭弧菌游泳體菌液制備同例1，濃度為10pfU/mL。致病菌混合液制備方法同例1， 各致病菌濃度為105cfu/mL，常規(guī)殺菌劑殺菌圖中致病菌取各致病菌數(shù)平均值。結(jié)果如圖6及圖7所示。從圖6中可以看出常規(guī)殺菌劑起效快，一般aiiin內(nèi)可基本上殺滅病原菌。從圖7中可以看出單株蛭弧菌游泳體菌液30min內(nèi)可殺滅99%的致病 菌，40min時致病菌已檢測不到。蛭弧菌游泳體菌液通過菌裂解消除致病菌需要一個過程， 所以起效慢，但是20min內(nèi)可殺滅75%的病原菌。蛭弧菌游泳體菌液通過裂解消除致病菌 屬于生物防治，使用安全不會對環(huán)境造成污染，也不會對蔬菜品質(zhì)造成影響。
上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用，其特征在于 所述蛭弧菌為蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05，于2009年8月7日保藏于中國典型培養(yǎng) 物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO =M 209172。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用，其特征在于 所述蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用是將蔬菜在蛭弧菌游泳體菌液中浸泡 15-45min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用，其特征在于 所述蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用是在蔬菜的加工環(huán)境中噴灑蛭弧菌游 泳體菌液，噴灑用量為10 100mL/m2。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用，其特征在 于所述蛭弧菌游泳體菌液濃度至少為K^pfu/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用，其特征在于 所述蛭弧菌游泳體菌液濃度為IO1 Kfpfu/mL。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用，其特征在于 所述蛭弧菌游泳體菌液的制備方法為接種宿主于營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，在35°C和200rpm搖床培養(yǎng)12h，培養(yǎng)液經(jīng)4°C， 5000 8000rpm離心10 20min后，沉淀加入至DNB液體培養(yǎng)基中，接入蛭弧菌BDFM05，在 溫度25 35°C下，以150 300rpm搖床培養(yǎng)36 48h，得到含蛭弧菌蛭質(zhì)體和蛭弧菌游泳 體的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液在4°C溫度下以6000 8000rpm離心15 20min后，上清經(jīng)16000 18000rpm離心15 20min后，沉淀用DNB液體培養(yǎng)基、水、生理鹽水或0. 2mol/L pH值為 7. 2 7. 6的磷酸鹽緩沖液懸浮，得到濃度為IO11 1012pfU/mL的蛭弧菌游泳體菌液。
全文摘要
本發(fā)明涉及細(xì)菌的應(yīng)用，特別涉及蛭弧菌游泳體菌液在消除蔬菜致病菌中的應(yīng)用。在污染了致病菌的新鮮蔬菜中噴灑蛭弧菌游泳體菌液或使其浸泡在蛭弧菌游泳體菌液中，使其濃度至少達(dá)到101pfu/mL。在加工設(shè)備及操作環(huán)境中噴灑或涂擦蛭弧菌游泳體菌液，使其濃度至少達(dá)到101pfu/mL。應(yīng)用中致病菌清除率均在99％以上。本發(fā)明適合推廣應(yīng)用于所有蔬菜中，不僅可提高消費(fèi)者生食即食蔬菜的安全系數(shù)，保護(hù)消費(fèi)者的健康，也為蔬菜的綠色加工生產(chǎn)提供保障。
文檔編號C12R1/01GK102038003SQ20101026862
公開日2011年5月4日 申請日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者李娜, 蔡俊鵬 申請人:華南理工大學(xué)