專利名稱：應(yīng)答H₂O₂的miRNA-408-5p及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種應(yīng)答H2O2的miRNA-408-5p及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
過氧化氫(H2O2)是一種雙功能分子，在植物體內(nèi)起雙重作用，既是一種毒性分子 能導(dǎo)致細(xì)胞氧化損傷，又是一種信號分子在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮作用(Mittler R. Oxidative stress, antioxidants and stress tolerance. Trends Plant Sci. ,2002,7 405-410.； Mittler R, Vanderauwera S, Gollery Μ, Breusegem F V. Reactiveoxygen gene network of plants. Trends Plant Sci. ,2004,9 =490-498.) H2O2 的雙功能性決定了植物體內(nèi)必 然存在著H2O2相關(guān)的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)，使它的濃度處于相對穩(wěn)態(tài)。在H2O2引起氧化脅迫的條件 下，網(wǎng)絡(luò)中許多基因或蛋白都會對H2O2產(chǎn)生應(yīng)答，自身的表達(dá)發(fā)生變化從而影響植物多種 生理活動，最終使植物對H2O2脅迫產(chǎn)生適應(yīng)。目前，轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的數(shù)據(jù)已經(jīng)揭示 出植物中相當(dāng)多的應(yīng)答H2O2的基因和蛋白，主要集中在細(xì)胞防御、氧化還原平衡等功能 (Vanderauwera S，Van Der Kelen K，Dat J，Gadjev I，Boonefaes T，Morsa S，Rottiers P，Slooten L，Van Montagu M，ZabeauM. et al. A comprehensive analysis of hydrogen peroxide-regulated geneexpression in tobacco.Proc. Natl. Acad. Sci. USA，2003，100 16113-16118. ；Wan X Y,Liu J Y. Comparative proteome analysis reveals an intimate proteinnetwork provoked by hydrogen peroxide stress in rice seedl ing leaves. Mol. CellProteomics，2008，7 1469-1488. )。Wan等通過比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法鑒定出144個 在H2O2處理的水稻幼苗葉片中差異表達(dá)的蛋白，這些蛋白大多與細(xì)胞防御、氧化還原平衡、 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白合成和降解、光合成和光呼吸以及能量代謝相關(guān)，通過這些差異表達(dá)的蛋白 以及它們的功能和參與的生理過程，構(gòu)建了水稻幼苗應(yīng)答H2O2的蛋白網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)闡明了 水稻幼苗葉片通過提高抗氧化相關(guān)蛋白的表達(dá)和抑制代謝相關(guān)蛋白的表達(dá)來適應(yīng)氧化脅 迫(Wan X Y, Liu J Y. Comparative proteome analysis revealsan intimate protein network provoked by hydrogen peroxide stress in riceseedling leaves. Mol. Cell Proteomics,2008,7 :1469_1488.)。miRNA(microRNA,微小RNA)是一類長度約為20_24nt的內(nèi)源單鏈非編碼小分子 RNA，在生物體中廣泛存在(Bartel D P. MicroRNAs genomics, biogenesi s, mechanisms, and function. Cell, 2004,116 :281_297.)。近年來大量研究表明，miRNA參與調(diào)控植物生長 發(fā)育以及應(yīng)答生物和非生物脅迫等許多重要生物學(xué)過程(Bushati N,Cohen S M. MicroRNA functions. Annu. Rev. Cell Dev. Biol.，2007，23 175-205.；金龍國，王川，劉進(jìn)元.植物 MicroRNA.中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報，2006，22 =609-614.)。因此，有理由相信miRNA — 定在植物應(yīng)答H2O2的過程中起著關(guān)鍵作用。但是，目前的植物應(yīng)答H2O2的相關(guān)研究主要集 中在基因和蛋白，還很少涉及到植物小分子RNA、特別是miRNA領(lǐng)域。植物中是否存在著應(yīng) 答H2O2的miRNA，這些miRNA的作用是什么，目前還沒有明確的答案。尋找和鑒定植物體內(nèi) 應(yīng)答H2O2的miRNA，對于完善植物H2O2相關(guān)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，全面解析植物應(yīng)答H2O2的分子機(jī)制具有重要意義。水稻不僅是世界最重要的糧食作物之一，同時也是一種重要的模式生物，在植物 研究特別是單子葉植物研究中占有重要地位。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種應(yīng)答H202的miRNA-408_5p及其應(yīng)用。本發(fā)明保護(hù)的miRNA-408_5p的序列如下(5，一 3，)CAGGGAUGAGGCAGAGCAUGG (序列表的序列 1)。本發(fā)明還保護(hù)序列1所示RNA在抑制單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因(0s01g0567500)表達(dá)中 的應(yīng)用；所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白如序列表的序列2所示。所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因可如序列表的 序列3自5’末端第86至1627位核苷酸所示。所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因也可如序列表的序 列3所示。本發(fā)明還保護(hù)序列1所示RNA在促進(jìn)單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因(0s01g0567500)的mRNA 降解中的應(yīng)用；所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白如序列表的序列2所示。所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因可如序 列表的序列3自5’末端第86至1627位核苷酸所示。所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因也可如序列 表的序列3所示。序列表的序列1所示的RNA可用于水稻種質(zhì)改良。本發(fā)明采用國際上先進(jìn)的Solexa高通量測序技術(shù)結(jié)合生物信息學(xué)分析、 Northern雜交、實時定量PCR等多種生物學(xué)手段，首次從基因組水平鑒定到應(yīng)答H202的 miRNA-408-5p,并且證實該miRNA在植物體內(nèi)調(diào)控的靶基因。本發(fā)明將miRNA-408_5p的表 達(dá)變化、靶基因的表達(dá)變化以及靶基因功能聯(lián)系起來。使正常代謝水平降低是植物適應(yīng)氧 化脅迫等逆境環(huán)境的策略之一，可以儲存能量物質(zhì)等集中用來應(yīng)付不利環(huán)境。H202脅迫下， miR408-5p通過抑制糖等營養(yǎng)物質(zhì)的運輸來降低碳元素的代謝。本發(fā)明揭示了應(yīng)答H202的miRNA-408-5p在植物應(yīng)對氧化脅迫所起的重要作用。 將miRNA-408-5p基因轉(zhuǎn)入水稻中過量表達(dá)或?qū)iRNA-408_5p基因缺失，就可能獲得在耐 受氧化脅迫能力方面有明顯變化的轉(zhuǎn)基因植株，并有望通過改造獲得對氧化脅迫、干旱、高 鹽等有較強(qiáng)耐受性的植株，造福于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。


圖1為Northern雜交檢測不同濃度H202處理的水稻幼苗中miRNA-408_5p的表達(dá)。圖2為miRNA-408-5p的的靶基因5’ RACE驗證；序列上方的箭頭表示發(fā)生切割的 位點，數(shù)值表示該切點處發(fā)生切割的克隆數(shù)與克隆總數(shù)比值。圖3為實時定量RT-PCR檢測靶基因的表達(dá)；誤差桿表示相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。
具體實施例方式以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購買得到的。下述實施例中的％，如無特殊說明，均為質(zhì)量百分含量。
以下實施例中所用水稻品種均為秈稻品種93-11 (Oryza sativa L. ssp indica cv. 93-11)，水稻種子購自國家農(nóng)作物種質(zhì)保存中心(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物科學(xué)研究所，郵 編100081聯(lián)系電話010-68919715)。該水稻品種已經(jīng)由中國北京基因組研究所完成基因
組測序工作。實施例1、miRNA-408-5p 的發(fā)現(xiàn)一、H202 處理水稻種子經(jīng)表面消毒后，37°C浸泡24h，然后催芽萌發(fā)45h。萌發(fā)后將水稻轉(zhuǎn)移 到光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)箱條件設(shè)定為溫度28°C /21V (白天16h/夜晚8h)，光照強(qiáng)度 400umol/m2 s，相對濕度70%，由Hogland營養(yǎng)液提供水稻生長所需的全部營養(yǎng)，營養(yǎng)液 每2天更換一次。12天齡的水稻幼苗采用H202處理分別浸泡在0. 6mM、3. OmM和15. OmM H202水溶 液中，將浸泡在蒸餾水中的水稻幼苗作為對照；各種處理的幼苗同時置于25°C搖床中處理 6h。處理完畢后，將各個處理的水稻樣品按0. 5g分裝，液氮速凍后保存于_80°C備用。二、miRNA-408_5p 的發(fā)現(xiàn)1、RNA 提取將水稻樣品在液氮中研磨，用TRIZ0L試劑盒(Invitrogen)提取總RNA，操作步驟 按TRIZ0L試劑盒自帶的說明書進(jìn)行。使用Ultrospec 3000型紫外分光光度計(Amersham Biosciences)測定提取的RNA在260nm(D26C1)和280nm(0D28C1)波長的吸光度值以確定RNA 的純度和濃度。質(zhì)量合格的RNA濃度應(yīng)在1 y g/ yl以上，OD260/OD280的比值在1. 8-2. 0之 間，且經(jīng)電泳檢測條帶清晰，無明顯降解和DNA污染。2、小RNA文庫的構(gòu)建將質(zhì)量檢驗合格的水稻幼苗總RNA用于構(gòu)建小RNA文庫。3種濃度(0. 6mM、3. OmM 和15. 0mM)H202處理的水稻樣品提取的RNA各取10 y g等量混合，總共30 u g用于構(gòu)建水 稻幼苗H202處理的小RNA文庫。對照樣品提取的RNA取30 y g，用于構(gòu)建水稻幼苗對照小 RNA文庫。小RNA文庫的構(gòu)建按照Illumina Sample Preparation Protocol文庫構(gòu)建方 法進(jìn)行，構(gòu)建好的文庫采用Solexa高通量測序(北京華大基因研究中心)，獲得高質(zhì)量的 18-30nt的小RNA序列(兩個小RNA文庫均獲得了五百多萬條序列)。3、兩個小RNA文庫中應(yīng)答H202的miRNA的鑒定參考之前國外文獻(xiàn)對高通量測序數(shù)據(jù)分析的成功方法(Jones-Rhoades M ff, Bartel D P. Computational identification of plant miRNAs and their targets, including a stress-induced miRNA. Mol. Cell，2004，14 :787_799.)，建立一套計算機(jī) 分析方法用來發(fā)現(xiàn)和鑒定測序數(shù)據(jù)中的水稻miRNA。①將獲得的兩個小RNA文庫中的 原始序列通過計算機(jī)方法去掉3’接頭，并過濾掉序列長度在18nt以下的序列；②通過 S0AP 禾呈序(Li R, Li Y, Kristiansen K, Wang J. SOAP short oligonucleotidealignment program. Bioinformatics, 2008, 24 :713_714.)將序列與水稻 93-11 基因組(http://rice, genomics, org. cn/rice/)進(jìn)行匹配，保留能與基因組完全匹配的序列，進(jìn)行后續(xù)分析；③ 將與基因組匹配的序列與國際權(quán)威的miRNA數(shù)據(jù)庫miRBase (http //microrna. sanger. ac. uk/sequences/)中公布的水稻miRNA成熟序列及前體序列進(jìn)行BLAST，從而發(fā)現(xiàn)哪些序 列來自于已知的水稻miRNA。鑒定出近300個水稻miRNA序列，分屬于100余個miRNA家族。由于高通量測序能給出每個miRNA的測序次數(shù)，通過比較水稻幼苗H2O2處理小 RNA文庫和對照小RNA文庫中miRNA的測序數(shù)(測序數(shù)已經(jīng)根據(jù)小RNA文庫測序總數(shù)進(jìn)行 了標(biāo)準(zhǔn)化)，可以從中發(fā)現(xiàn)兩個庫中測序數(shù)相差較大的miRNA，這部分miRNA可能就是應(yīng)答 H2O2的miRNA?；诖朔椒ǎ容^了兩個小RNA文庫中miRNA的測序數(shù)，并采用以下兩個限 制條件來提高發(fā)現(xiàn)應(yīng)答H2O2的miRNA的成功率①miRNA在H2O2處理小RNA文庫或?qū)φ招?RNA文庫中測序數(shù)要大于100，從而可以保證比較的可靠性；②miRNA在H2O2處理小RNA文 庫和對照小RNA文庫中測序數(shù)相對差異要大于30%。發(fā)現(xiàn)有7個miRNA家族的測序數(shù)存 在顯著差異，可能是應(yīng)答H2O2的miRNA家族，其中一個為osa-miR408-5p (miRNA-408_5p ； miR408-5p)。osa-miR408-5p 的序列如下(5，— 3，) :CAGGGAUGAGGCAGAGCAUGG (序列 1)。三、miRNA Northern 雜交為了進(jìn)一步驗證osa-miR408-5p具有應(yīng)答H2O2的表達(dá)模式，采用miRNA Northern 雜交檢測幾種H2O2處理濃度下(0、0. 6,3. 0,15. 0mM)miRNA的表達(dá)情況。1、制備探針檢測osa-miR408-5p 的探針(5，一 3，)的序列CCATGCTCTGCCTCATCCCTG。采用T4多聚核苷酸激酶(New England Biolabs)對上述序列末端磷酸基團(tuán)進(jìn)行 同位素(Y -32P ATP)標(biāo)記，得到探針，用Microspin G-25柱(GE Healthcare)純化探針，去 除未標(biāo)記的同位素，純化后的探針用于Northern雜交。2、miRNA Northern 雜交Northern雜交中，每個泳道上樣量為20 μ g低分子量RNA，TO基因作為內(nèi)參，與 miRNA在同一張膜上檢測。TO基因的探針序列為TATGCGTGTCATCCTTGCGCAG。(1)分別提取步驟一制備的各水稻樣品的總RNA。(2)采用 Park 等報道的 PEG8000/NaCl 沉淀法(Park W, Li J, Song R, MessingJ， Chen X. CARPEL FACTORY,a Dicer homolog, and HENl, a novel protein,act inmicroRNA metabolism in Arabidopsis thaliana. Curr. Biol.，2002，12 :1484_1495.)從總 RNA 中富 集低分子量RNA (有利于提高miRNA的檢測能力)。(3) miRNA Northern 雜交①富集的低分子量RNA溶于DEPC水，再加入等體積的2 X RNA上樣緩沖液(95%甲 酰胺，18mM EDTA, 0. 1 %溴酚藍(lán)和0. 1 %二甲苯青)，混合后95°C變性5min，得到RNA樣品。②RNA樣品用15%尿素變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，隨后用電轉(zhuǎn)移裝置 (BIO-RAD)轉(zhuǎn)移到 Hybond N+尼龍膜(Amersham Biosciences)上。③轉(zhuǎn)移有RNA樣品的尼龍膜經(jīng)6XSSC溶液短暫漂洗，紫外交聯(lián) (Stratagene) 5min,再80°C烘烤2h，使RNA完全固定在尼龍膜上。④將轉(zhuǎn)移了 RNA的尼龍膜放入雜交管中，加入5ml ULTRAhyb-Oligo雜交液 (Ambion)在雜交爐中42°C預(yù)雜交2h，然后加入探針，混勻，42°C雜交過夜。⑤雜交結(jié)束后，小心倒出雜交液，加入含0. 5% SDS的2XSSC溶液，42°C洗滌三次， 每次IOmin。⑥洗膜結(jié)束后，將膜用保鮮膜包裹，平整壓于X光片下，附加增感屏，-70°C曝光1周。⑦曝光結(jié)束后，沖洗X光片，進(jìn)行光密度掃描，以對照組的雜交信號為1，計算各個 處理組雜交信號的相對強(qiáng)度。結(jié)果見圖1。Northern雜交結(jié)果和測序數(shù)據(jù)很吻合，osa-miR408-5p受H2O2誘導(dǎo) 表達(dá)。實施例2、應(yīng)答H2O2的miRNA的靶基因預(yù)測與驗證由于植物miRNA與靶基因mRNA近乎完全互補(bǔ)，因此可以通過生物信息學(xué)方法預(yù) 測osa-miR408-5p的靶基因。采用Schwab等描述的方法預(yù)測miRNA的靶基因(Schwab R, Palatnik J F, Riester Μ, Schommer C, Schmid Μ, Weigel D. Specific effects ofmicroRNAs on the plant transcriptome. Dev. Cell, 2005,8 :517_527.)。使用 Patscan 程序在水稻93-11全長cDNA和基因庫(http://rice. genomics, org. cn/rice/)中尋找能 與miRNA序列近乎完全互補(bǔ)的cDNA或基因，即為miRNA的靶標(biāo)；參數(shù)設(shè)置為=Patscan程序 參數(shù)為默認(rèn)設(shè)置，允許最大錯配數(shù)為3個，miRNA的第10和11位堿基不允許有錯配，靶標(biāo) 的功能通過NCBI (http://www. ncbi. nlm. nih. gov/)同源性檢索，以同源性最高的已知功 能基因進(jìn)行注釋。預(yù)測結(jié)果見表1。表1 osa-miR408-5p的靶基因及功能 注(丨)表示在H2O2處理下表達(dá)量上調(diào)；bNB，Northern雜交分析得出的結(jié)果。osa-miR408-5p 的革巴標(biāo)是單糖轉(zhuǎn)運蛋白(Monosaccharide transport protein)基 因 0s01g0567500(GENBANK ACCESSION NO. 0s01g0567500，見序列表的序列 3 ；0s01g0567500 編碼的蛋白質(zhì)如序列表的序列2所示)。單糖轉(zhuǎn)運蛋白在體內(nèi)單糖的運輸中發(fā)揮作用，與營 養(yǎng)運輸相關(guān)。實施例3、miRNA對靶基因mRNA的切割osa-miR408-5p對靶基因0s01g0567500 (見序列表的序列3) mRNA的切割用 5' RACE Tj^tilE (Jones-Rhoades M W, Bartel D P. Computational identification ofplant miRNAs and their targets, including a stress-induced miRNA. Mol. Cell, 2004，14 :787-799.)。靶基因mRNA被miRNA切割后，其較為穩(wěn)定的3’切割產(chǎn)物5’端核苷 酸磷酸集團(tuán)暴露，用T4 RNA連接酶在該切割產(chǎn)物5’端連接上5’ RACE專用接頭；通過反轉(zhuǎn) 錄反應(yīng)合成cDNA ；通過靶基因特異的巢式外引物和試劑盒所帶的巢式外引物進(jìn)行第一輪 PCR，靶基因特異的巢式內(nèi)引物和試劑盒所帶的巢式內(nèi)引物進(jìn)行第二輪PCR;將5’RACE獲得 的PCR產(chǎn)物連接到pMD 19-T載體后測序，就能知道精確的靶基因mRNA切割位點。1、分別提取實施例1的步驟一制備的各水稻樣品的總RNA。2、按Firstchoice RLM-RACE試劑盒(Ambion)操作說明進(jìn)行5，RACE，靶基因特異 的巢式外引物的序列為GCGATGGAGACGAAGGTGGCGAAC，靶基因特異的巢式內(nèi)引物的序列為 GCGTAGAACATGACGACGTTGATGC。
3、PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖電泳，回收200bp左右的特異條帶(圖2中泳道1所示)。
4、將回收的PCR產(chǎn)物連接到pMD 19-T載體(TaKaRa)，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌 DH5α (TaKaRa)。5、挑單克隆測序，根據(jù)測序結(jié)果確定靶基因mRNA的切割位點。測序結(jié)果顯示的切割位點見圖2。osa-miR408-5p的靶基因在與其互補(bǔ)的區(qū)域發(fā) 生了切割，這個結(jié)果強(qiáng)有力的證明了 0s01g0567500確實是OSa-miR408-5p體內(nèi)真正調(diào)控的 靶基因(圖2中，有兩個切割位點，切割概率比為1:2)。實施例4、靶基因的表達(dá)量分析為了進(jìn)一步考察OSa-miR408-5p的功能，用實時定量RT-PCR檢測靶基因 0s01g0567500在幾種H2O2處理濃度下(0、0. 6,3. 0,15. OmM)的水稻幼苗中的表達(dá)情況。1、分別提取實施例1的步驟一制備的各水稻樣品(2g)的總RNA。2、總RNA加入DNase I (TaKaRa)，室溫放置30min以除去基因組DNA的污染。3、加入終止緩沖液(50mM EDTA)后，70°C加熱IOmin以變性DNase I和RNA。4、采用TaKaRa RNA PCR Kit，用RNA合成cDNA模板，操作按試劑盒說明書進(jìn)行。Power SYBR Green PCR Master Mix (Applied Biosystems) ^t iCycler iQ5Multicolor實時定量PCR檢測儀(Bio-Rad)上進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，通過比較Ct值 法(Δ Δ Ct {t ^ )(Schmittgen T D. Real-Time Quantitative PCR. Methods,2001,25 383-385.)計算靶基因在不同樣品中的相對表達(dá)量(對照組基因的表達(dá)量設(shè)定為1)。靶 基因的檢測設(shè)置3個重復(fù)，結(jié)果取平均值。以水稻β-tubulin基因作為內(nèi)參(Zhao B， Ge L, LiangR, Li W, Ruan K, Lin H, Jin Y. Members of miR-169 family are induced by highsalinity and transiently inhibit the NF-YA transcription factor. BMC Mol. Biol. ，2009，10 :29·)。擴(kuò)增靶基因的引物如下(5’ 一 3’)上游引物GCCGCCAACCTCATCAACTACT；下游引物CGCCGAATCCGATGGTCTTG。擴(kuò)增β -tubulin基因引物如下(5，一 3，)上游引物CCTCCAAGGATTTCAAGTCTGC；下游引物TTGTAAGGTTCCACCACGGTA。結(jié)果見圖3。靶基因0s01g0567500在H2O2處理下表達(dá)量發(fā)生了明顯的變化，通過 和osa-miR408-5p的表達(dá)(圖1)進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)0s01g0567500的表達(dá)和osa-miR408_5p 的表達(dá)呈現(xiàn)出明顯的負(fù)相關(guān)性，即oSa-miR408-5p表達(dá)上調(diào)的時候，0s01g0567500的表達(dá) 就相應(yīng)下調(diào)，這與miRNA對靶基因的負(fù)調(diào)控作用是完全一致的。OSa-miR408-5p的表達(dá)隨著 H2O2處理濃度從0-3. OmM提高而增加，如果濃度進(jìn)一步增大(3. 0-15. OmM)，osa-miR408-5p 的表達(dá)會下降；相應(yīng)地，0s01g0567500的表達(dá)隨著H2O2處理濃度增加而呈現(xiàn)出先下降后上 升的表達(dá)模式，與OSa-miR408-5p的表達(dá)完全負(fù)相關(guān)。實時定量PCR的結(jié)果進(jìn)一步證明了 0s01g0567500 確實是 osa-miR408_5p 的靴基因。
權(quán)利要求
序列表的序列1所示的RNA。
2.序列1所示RNA在抑制單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因表達(dá)中的應(yīng)用；所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白如序列 表的序列2所示。
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因如序列表的序列3 自5，末端第86至1627位核苷酸所示。
4.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因如序列表的序列3 所示。
5.序列1所示RNA在促進(jìn)單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因的mRNA降解中的應(yīng)用；所述單糖轉(zhuǎn)運蛋 白如序列表的序列2所示。
6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因如序列表的序列3 自5，末端第86至1627位核苷酸所示。
7.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因如序列表的序列3 所示。
8.序列表的序列1所示的RNA在水稻種質(zhì)改良中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種應(yīng)答H2O2的miRNA-408-5p及其應(yīng)用。本發(fā)明保護(hù)的miRNA-408-5p是序列表的序列1所示的RNA。本發(fā)明還保護(hù)序列1所示RNA在抑制單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因表達(dá)和/或促進(jìn)單糖轉(zhuǎn)運蛋白基因的mRNA降解中的應(yīng)用；所述單糖轉(zhuǎn)運蛋白如序列表的序列2所示。應(yīng)用miRNA-408-5p有望獲得對氧化脅迫、干旱、高鹽等有較強(qiáng)耐受性的植株，造福于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。
文檔編號C12N15/63GK101892231SQ201010221429
公開日2010年11月24日 申請日期2010年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月29日
發(fā)明者劉進(jìn)元, 李甜 申請人:清華大學(xué)