專利名稱：：一種酵母菌株,制備方法及其相關應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種酵母菌株及其制備方法，以及該酵母菌株的生物學培養(yǎng)物，組合物，以及一種酮基選擇性還原的方法，尤其涉及一種對酮基立體選擇性還原的酵母菌株及其制備方法，以及該酵母菌株的細胞培養(yǎng)物，組合物及其在對酮基立體選擇性還原方法中的應用。
背景技術：
：目前，酮基還原通常采用兩種主要方式化學法和生物催化還原法。1.化學技術目前，酮基還原催化加氫常用化學技術有三種方法A)直接加氫，B)鐵粉還原，和C)硼氫化鈉、硼氫化鉀等作為還原劑還原。這些化學方法在生產安全性、環(huán)保性、立體專一性方面存在一些弊端?；瘜W方法生產安全性方面的弊端有1)直接加氫往往需要高壓條件，對設備、設施有較高要求，需要增加耐高壓和防爆裝置；2)硼氫化鈉、硼氫化鉀等作為還原劑進行還原時，硼氫化鈉等還原物質極易爆炸，不僅存在很大安全隱患，同時對設施和設備要求高，生產車間需要合理布置，同時需要防爆等裝置。生產環(huán)保性方面的弊端在于鐵粉還原是最原始的方法，反應后廢棄液污染很嚴重。立體專一性方面的弊端在于如果作用的底物是一個比較復雜的結構、或者擁有多個功能基團(或官能團)、或者對立體專一性要求高的物質，那么常規(guī)的還原加氫方法就顯得力不從心，必須要選擇高立體選擇性的生物催化方法。2.生物催化還原技術針對結構比較復雜、或者擁有多個功能基團(或官能團)、或者對立體專一性要求高的底物，要進行安全、環(huán)保生產，迫切需要找到一種更適合特定物質手性還原加氫的方法，而利用生物細胞本身酶催化進行的生物催化就是目前手性還原最好的辦法之一。生物催化方法進行加氫還原主要通過微生物全細胞和純酶兩種催化方式進行。全細胞的催化利用細胞內的手性識別環(huán)境和胞內相應的酶反應完成特定物質的手性還原。不同的底物需要篩選合適的微生物細胞。如今用在還原催化研究的菌種涉及到放線菌屬、芽孢桿菌屬、短桿菌屬、假單胞菌屬、紅球菌屬、鏈霉菌屬、黃單胞菌屬、曲霉屬、假絲酵母屬、漢遜酵母屬、紅酵母屬、酵母屬、根霉屬、木霉屬等。菌種來源有自然界篩選、誘變篩選、遺傳育種篩選、基因工程育種篩選。其中應用于工業(yè)化大生產的菌株大多數(shù)都是天然菌株經過誘變篩選得到的，這種菌種比基因工程菌要穩(wěn)定。酵母細胞生物還原的機理如下以酵母細胞中存在的氧化還原酶系作為手性合成催化劑，在合適的反應條件下在酵母胞內將酮基化合物催化還原成含有手性C原子具有光學活性的手性產物，同時在氧化還原過程中需要輔酶(NADH、NADPH)參與。在進行酵母全細胞催化過程中通過添加廉價的C源，利用細胞自身的代謝活動產生還原過程中需要的價格3昂貴的輔酶(NADH、NADPH)。利用酵母的手性識別對酮基進行立體選擇性還原，可以得到不同手性的底物。在制藥工業(yè)中的主要生物催化如下1)酮基的立體選擇性還原；2)扁桃酸系列化合物的合成；3)外消旋2_辛醇的不對稱轉化；4)維生素A脂肪酸酯的合成；5)異麥芽酮糖醇的合成；以及6)腺苷甲硫氨酸的合成。采用現(xiàn)有化學方法立體選擇性地還原一些特定結構底物，不僅在立體選擇性方面達不到要求，在設備投入、基礎設施建設等方面投入較大，而且存在很大的安全隱患。針對現(xiàn)有的酵母還原技術，大多數(shù)現(xiàn)有技術都是采用動態(tài)細胞培養(yǎng)法，而不是靜態(tài)細胞催化。動態(tài)細胞培養(yǎng)法要求酵母細胞的培養(yǎng)和酮基還原同時進行，在細胞培養(yǎng)過程中進行酮基還原的生物催化反應。酵母的細胞培養(yǎng)需要專門的發(fā)酵技術、發(fā)酵設備和相應設施，一般的化工企業(yè)不可能實現(xiàn)工業(yè)化酵母生產和催化反應。另外在培養(yǎng)過程中涉及復雜的培養(yǎng)基成分和各種代謝中間產物，導致產物分離過程復雜困難。靜態(tài)細胞催化則是酵母細胞的培養(yǎng)生長和酮基還原兩步分開進行的，先進行酵母細胞的培養(yǎng)，制備催化用酵母。然后用該細胞在特定反應液中進行酮基立體選擇性還原的生物催化反應。這種靜態(tài)催化方式方便工業(yè)催化用戶使用，同時反應液成分簡單，雜質少，有利于產物的分離純化。動態(tài)細胞培養(yǎng)，需要化工企業(yè)掌握生物發(fā)酵技術和相應設備投資，培養(yǎng)后反應液組分復雜，增加下游提取難度和成本，工業(yè)規(guī)模不可能采用，而靜態(tài)細胞催化操作方便，重復性好，另外減少副產物的產生，工業(yè)化規(guī)模催化基本采用靜態(tài)細胞催化法，但這種催化方式需要專業(yè)公司生產酵母細胞催化劑。由于跨行業(yè)，要化工企業(yè)進行生物催化劑產品的生產非常不現(xiàn)實，這就需要專門的生物催化劑公司為化工企業(yè)提供穩(wěn)定、能夠工業(yè)化規(guī)模生產的催化劑產品。針對同一底物的酮基立體選擇性還原有很多文獻報道，不同屬菌種作用的效果不同，目前只有酵母細胞和芽孢桿菌的工業(yè)化生產比較成熟，所以一些效果相對較好的菌種也只能小規(guī)模培養(yǎng)用于學術研究，離工業(yè)化菌體生產還有一段距離。另外一些關于酮基立體選擇性還原的現(xiàn)有技術都泛泛而談，只是初略地涉及到酵母菌株，而并沒有具體披露具有這種功能的菌株種類以及將其工業(yè)化生產的具體步驟。針對以上情況，為了解決現(xiàn)有技術的缺點，本申請人針對特定底物進行了菌種篩選，優(yōu)化篩選目的菌株的生產工藝，優(yōu)化生產和制備還原催化用酵母產品，并對產品進行應用工藝研究，實現(xiàn)手性還原的工業(yè)化應用。
發(fā)明內容本發(fā)明的技術方案大體是酵母菌株通過誘變，篩選到適合酮基立體選擇性還原的目的菌株，這種菌株經過工業(yè)化生產工藝，可以制備出酮基立體選擇性還原用酵母生物催化產品，利用本發(fā)明可以大規(guī)模地生產酵母生物催化產品并可以進行工業(yè)規(guī)模的酮基立體選擇性還原應用。本發(fā)明一方面提供了一種用于酮基立體選擇性還原的酵母菌株，所述菌株選自由以下酵母菌株組成的組酵母菌株l，屬于釀酒酵母(Z1.8)，保藏編號CCTCCNO:M207174;酵母菌株2，屬于粘紅酵母(Z6.2)，保藏編號CCTCCNO:M208092;酵母菌株3，屬于產朊假絲酵母(Z3.l)，保藏編號CCTCCNO:M208090;酵母菌株4，屬于異常漢遜氏酵母(Z4.l)，保藏編號CCTCCNO:M208091。本發(fā)明的另一方面提供了由本發(fā)明提供的酵母菌株所獲得的生物學培養(yǎng)物。本發(fā)明的又一方面提供了一種酵母全細胞制備物，由本發(fā)明提供的酵母菌株經過以下步驟制備A)多次培養(yǎng)；B)發(fā)酵；C)分離，經過進一步加工制得鮮酵母，鮮酵母全細胞制備物水份含量在60-80%。本發(fā)明還涉及一種干酵母，由所述酵母菌株全細胞制備物進一步經過以下步驟D)干燥而制備。本發(fā)明所提供的干酵母，其特征在于，干酵母水份含量在4%8%。本發(fā)明的另一方面涉及本發(fā)明所提供的酵母菌株、酵母菌株培養(yǎng)物或其全細胞制備物在對酮基化合物中的酮基立體選擇性還原中的應用。為了簡化，在下文中將酵母菌株、酵母菌株培養(yǎng)物或其全細胞制備物統(tǒng)一稱為酵母產品。在本發(fā)明所提供的應用中，所作用的酮基化合物可以是具有通式R^OI^的化合物，其中&和R2獨立地代表甲基、乙基、直鏈烷基、苯基、苯磺?；?、或酯基，優(yōu)選的酮基化合物為4-氯-乙酰乙酸乙酯、2_辛酮、1-苯基-1，2-丙酮、或1-氯-3-苯磺酰基-2-丙酮。本發(fā)明還提供了一種酵母組合物，其包括A)本發(fā)明所提供的酵母產品；B)微量銨鹽，其中基于所述的酵母產品的重量，所述銨鹽的含量在0.2-2.0wt%。本發(fā)明的另一方面涉及所提供的酵母組合物在對酮基化合物中的酮基立體選擇性還原中的應用。本發(fā)明的還一個方面涉及一種對酮基化合物中的酮基立體選擇性還原的方法，其特征在于，采用本發(fā)明所提供的酵母菌株作為催化劑來進行還原。在本發(fā)明提供的方法中，所作用的酮基化合物可以是具有通式RfOI^的化合物，其中&和R2獨立地代表甲基、乙基、直鏈烷基、苯基、苯磺?；⒒蝓セ?，優(yōu)選的酮基化合物選自4-氯-乙酰乙酸乙酯、2-辛酮、1-苯基-1，2-丙酮、1-氯-3-苯磺酰基-2-丙酮。本發(fā)明所得到的有益效果主要有以下幾點1)篩選得到的酵母菌株的催化特性優(yōu)于現(xiàn)有酵母產品；2)通過酵母菌種工業(yè)化大生產實現(xiàn)酮基手性還原工業(yè)應用；3)通過添加微量鹽提高催化效率。本發(fā)明酵母的保藏信息酵母菌株l，屬于釀酒酵母，拉丁學名Saccharomycescerevisiae，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏日期2007-11-8，保藏編號CCTCCN0:M207174。酵母菌株2，屬于粘紅酵母，拉丁學名Torulopsiscandida，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏日期2008-6-16，保藏編號CCTCCN0:M208092。5酵母菌株3，屬于產朊假絲酵母，拉丁學名Candidautilis，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏日期:2008-6-16，保藏編號CCTCCNO:M208090。酵母菌株4，屬于異常漢遜氏酵母，拉丁學名Hansenulaanomala，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏日期2008-6-16，保藏編號CCTCCNO:M208091。具體實施例方式根據(jù)本發(fā)明的一個方面，涉及對酮基(特別是4-氯-乙酰乙酸乙酯)還原立體選擇性高的酵母菌株。通過傳統(tǒng)紫外誘變方法篩選得到一系列酮基(特別是4-氯_乙酰乙酸乙酯)還原立體選擇性高的酵母菌株。通過篩選，得到了四種對酮基還原立體選擇性較高的酵母菌株，它們的保藏號碼分別是CCTCCM207174、M208090、M208091、M208092。I.真菌學性質本發(fā)明酵母的真菌學性質如下表所示。表1-1本發(fā)明釀酒酵母CCTCCM207174的真菌學性質(I)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>本發(fā)明的紅酵母CCTCCM208092具有上述真菌學性質，與《Theyeasts，ATaxonomicStudy》(酵母，分類學研究)(1998年，荷蘭，LodderJ主編，第4版)比較，結果確定上述菌株屬于粘紅酵母屬。表3-1本發(fā)明產朊假絲酵母CCTCCM208090的真菌學性質(I)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3-2本發(fā)明產朊假絲酵母CCTCCM208090的真菌學性質(II)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本發(fā)明的產朊假絲酵母CCTCCM208090具有上述真菌學性質，與《Theyeasts，ATaxonomicStudy》(酵母，分類學研究)(1998年，荷蘭，LodderJ主編，第4版)比較，結果確定上述菌株屬于假絲酵母屬。表4-1本發(fā)明異常漢遜氏酵母CCTCCM208091的真菌學性質(I)營養(yǎng)細胞的形態(tài)圓形、橢圓形或臘腸形增殖方式多邊芽殖生長情況發(fā)酵液面有白色菌醭，培養(yǎng)液混濁，有菌體沉淀于管底。在麥芽汁瓊脂斜面上，菌落平坦，乳白色，無光澤，邊緣絲狀。在加蓋玻片馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上，能形成發(fā)達的樹枝狀假菌絲。子囊孢子不易產生子囊孢子最適宜生長條件pH4.5-5.5，溫度30-32。C，12Brix麥芽汁培養(yǎng)基表4-2本發(fā)明異常漢遜氏酵母CCTCCM208091的真菌學性質(II)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>本發(fā)明的異常漢遜氏酵母CCTCCM208091具有上述真菌學性質，與《Theyeasts，ATaxonomicStudy》(酵母，分類學研究)(1998年，荷蘭，LodderJ主編，第4版)比較，結果確定上述菌株屬于異常漢遜氏酵母屬。II.培養(yǎng)條件本發(fā)明所提供的酵母菌株的培養(yǎng)方法可以采用普通面包酵母中所使用的常規(guī)方法，無特殊限制。例如，可以用糖蜜的連續(xù)添加方式制造菌體。糖蜜可以用其它同化作用糖蜜代替。還可以加入生長促進劑。將培養(yǎng)獲得的酵母收集、洗滌后，脫水，可以得到本發(fā)明的鮮酵母(壓縮酵母)。酵母的培養(yǎng)方法在本領域是熟知，在此不再贅述。本領域技術人員應理解，本領域熟知的酵母培養(yǎng)方法都可以用在本發(fā)明的各酵母菌株的培養(yǎng)中。本發(fā)明還通過將上述酵母進行干燥而提供干酵母。本發(fā)明的一個方面涉及對酮基(特別是4-氯-乙酰乙酸乙酯，COBE)還原立體選擇性高的酵母菌株的生產方法。本發(fā)明的紫外誘變過程為先將待誘變酵母菌株在斜面培養(yǎng)基上進行斜面培養(yǎng)(3(TC培養(yǎng)23天)，取斜面菌體，采用生理鹽水稀釋酵母細胞濃度到1061(f個/mL，取5mL菌懸液于無菌空平皿中，并進行磁力攪拌，在紫外燈(30W，2537A波長)距離2030cm下照射1530s，取處理過的100iiL菌液于50mL新鮮液體種子培養(yǎng)基中，3(TC恒溫避光中間培養(yǎng)一天。中間培養(yǎng)液涂布于篩選平板中進行篩選，獲得一系列對酮基化合物(特別是4-氯-乙酰乙酸乙酯)還原立體選擇性高的酵母菌株。所述斜面培養(yǎng)基(g/L)為20g葡萄糖，20g蛋白胨，10g酵母膏，和20g瓊脂，溶解在800mL水中，然后調節(jié)pH到6.0，0.lMPa滅菌15min。所述種子培養(yǎng)基(g/L)為20g葡萄糖，20g蛋白胨，和10g酵母膏，溶解在800mL水中，然后調節(jié)pH到6.0，0.lMPa滅菌15min。本發(fā)明的另一方面涉及由上述酵母菌株獲得的培養(yǎng)物。本發(fā)明的培養(yǎng)物可以是酵母菌株經過多次培養(yǎng)、發(fā)酵、分離洗滌、干燥而成的干酵母，也可以是不經干燥而獲得的鮮酵母。本發(fā)明的干酵母的制備方法，包括如下步驟由酵母菌株經過多次培養(yǎng)、發(fā)酵、分離洗滌、干燥而成。多次培養(yǎng)分別為試管斜面培養(yǎng)、培養(yǎng)瓶液體培養(yǎng)、旁氏罐液體培養(yǎng)、純培養(yǎng)罐培養(yǎng)和種子罐培養(yǎng)。發(fā)酵條件為pH5.56.5、發(fā)酵溫度2832°C、通氧量0.51.5克02/克酵母X分鐘、發(fā)酵時間2022小時、酵母濃度170250克/升。補料方式采用指數(shù)流加方式，在1520小時后控制葡萄糖濃度不能過高，細胞濕重控制在170250g/L。所述干燥可采用噴霧干燥或低溫快速干燥工藝。所述低溫快速干燥采用沸騰床進行干燥處理。物料的最高溫度不超過35°C，干酵母的水份含量控制在4%8%。具體地說，所述對酮基還原立體選擇性高的干酵母的制備方法包括如下步驟首先將菌種置于盛有麥芽汁瓊脂的斜面、3(TC培養(yǎng)4050小時，然后在以麥芽汁為培養(yǎng)基在培養(yǎng)瓶中接種、3(TC培養(yǎng)4050小時，再以麥芽汁和糖蜜混合液為培養(yǎng)基在旁氏罐中接種、3(TC培養(yǎng)4050小時，再以糖蜜為培養(yǎng)基在純培養(yǎng)罐中接種、培養(yǎng)1520小時，再以糖蜜為原料，添加(NH》2S04，磷源以及微量元素為培養(yǎng)基在種子罐中接種、培養(yǎng)2030小時，培養(yǎng)溫度為2832"，風量為0.51.5克02/克酵母X分鐘，含糖量為0.11克/100毫升，最終酵母濃度為150200克/升，再以糖蜜為主要原料，添加(NH》2S(V磷源以及微量元素為培養(yǎng)基在商品罐中接種培養(yǎng)2022小時，發(fā)酵溫度為2832t:，ra值為5.56.5，風量為0.51.5克02/克酵母X分鐘左右，酵母濃度為170250g/L，再將商品罐的發(fā)酵液分離洗滌，用真空轉鼓抽濾，然后用濾得的酵母進行造粒，最后用沸騰干燥床進行低溫快速干燥，物料的最高溫度不超過35t:，干酵母的水份含量控制在4%8%。本發(fā)明的干酵母對COBE的催化效率可以達到68%，產物光學純度達到97%。本發(fā)明的另一方面涉及一種酵母組合物，包括A)本發(fā)明所提供的酵母產品；B)銨鹽，基于所述的酵母產品的重量，含量為0.2_2wt%。本發(fā)明組合物中的銨鹽優(yōu)選為(NH4)2S04。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)，微量的(NH》^04可以提高酵母的催化效率。根據(jù)本發(fā)明的一種具體實施，(NH4)2S04的含量基于100重量份的酵母，為0.22重量份。酵母的還原催化應用本發(fā)明的另一方面涉及酮基(特別是4-氯_乙酰乙酸乙酯)立體選擇性還原的方法?？梢杂帽景l(fā)明的酵母進行酮基立體選擇性還原的化合物可以是具有以下化學式的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中和R2獨立地代表甲基、乙基、直鏈烷基、苯基、苯磺酰基、酯基。例如，可以用本發(fā)明的酵母進行酮基立體選擇性還原的化合物有4-氯_乙酰乙酸乙酯(COBE)、2-辛酮、1-苯基-1，2-丙酮、1-氯-3-苯磺酰基-2-丙酮。在一種優(yōu)選的具體實施方式中，本發(fā)明的酵母用于4-氯_乙酰乙酸乙酯(COBE)的手性還原，還原反應的條件如下酵母用量為100200g/L，反應溫度254(TC，5-20X的蔗糖或者葡萄糖溶液中進行催化反應，催化過程中添加一定量的微量鹽(如硫酸銨)，反應在224小時左右完成。反應液離心或者板框過濾得到清液，然后用3倍清液體積的乙酸乙酯進行二次萃取，萃取液旋轉蒸發(fā)，濃縮液通過氣相色譜檢測底物C0BE和產物4-氯-3-羥基-丁酸乙酯(CHBE)的含量。實例1將4-氯-乙酰乙酸乙酯(C0BE)3g溶于100mL的10%的蔗糖溶液中，加入本發(fā)明提供的酵母CCTCCM207174產品使得其含量為200g/L，按酵母的量的2wt^添加(NH4)2S04鹽。反應溫度35t:，進行催化反應12小時。將反應液離心得到清液，然后用3倍清液體積的乙酸乙酯進行二次萃取，將萃取液旋轉蒸發(fā)，通過Agilent公司的6890型號氣相色譜檢測濃縮液，測得產物(S)-4-氯-3-羥基-丁酸乙酯(CHBE)的含量為68%(Agilent-6890型號氣相色譜儀測定)，產物CHBE光學純度為97%(Agilent-6890型號氣相色譜儀，手性柱測定)。實例2將2-辛酮3g溶于100mL的10%的葡萄糖溶液中，加入本發(fā)明提供的酵母CCTCCM208092產品使得其含量為200g/L，按酵母量的2wt^添加(朋4)2504鹽。反應溫度30。C，進行催化反應24小時。將反應液離心得到清液，然后用3倍清液體積的乙酸乙酯進行二次萃取，將萃取液旋轉蒸發(fā)，通過Agilent公司的6890型號氣相色譜檢測濃縮液，測得產物(R)-4-辛醇的含量為50%(Agilent-6890型號氣相色譜儀測定)，產物光學純度為97%(Agilent-6890型號氣相色譜儀，手性柱測定)。實例3將l-苯基-l，2-丙酮3g溶于100mL的10%的葡萄糖溶液中，加入本發(fā)明提供的酵母CCTCCM208090產品使得其含量為200g/L，按酵母的量的2wt^添加(朋4)2504鹽。反應溫度32t:，進行催化反應12小時。將反應液離心得到清液，然后用3倍清液體積的乙酸乙酯進行二次萃取，將萃取液旋轉蒸發(fā)，通過Agilent公司的6890型號氣相色譜檢測濃縮液，測得產物(S)-2-羥基-l-苯基-l-丙酮的含量為77X(Agilent-6890型號氣相色譜儀測定)，產物光學純度為95%(Agilent-6890型號氣相色譜儀，手性柱測定)。實例4將1-氯-3-苯磺?；?2-丙酮3g溶于100mL的10%的葡萄糖溶液中，加入本發(fā)明提供的酵母CCTCCM208091產品使得其含量為200g/L，按酵母的量的2wt^添加(NH4)2S04鹽。反應溫度3(TC，進行催化反應12小時。將反應液離心得到清液，然后用3倍清液體積乙酸乙酯進行二次萃取，將萃取液旋轉蒸發(fā)，通過Agilent公司的6890型號氣相色譜檢測濃縮液，測得產物(2R)_1-氯-3-苯磺?；?2-丙醇的含量為76%(Agilent-6890型號氣相色譜儀測定)，產物光學純度為96%(Agilent-6890型號氣相色譜儀，手性柱測定)。比較例1采用購自梅山馬利(MAURI)的酵母，其它條件與實施例l相同。反應完畢后，測得產物(S)-4-氯-3-羥基-丁酸乙酯(CHBE)的含量為50%(Agilent-6890型號氣相色譜儀測定)，產物CHBE光學純度為95%(Agilent-6890型號氣相色譜儀，手性柱測定)。比較例2采用購自梅山馬利(MAURI)的酵母，其它條件與實施例l相同。反應完畢后，測得產物(R)-4-辛醇的含量為40%(Agilent-6890型號氣相色譜儀測定)，產物光學純度為<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>權利要求一種用于酮基立體選擇性還原的酵母菌株，其中所述酵母菌株選自由酵母菌株1，酵母菌株2，酵母菌株3和酵母菌株4組成的組，所述酵母菌株1的保藏編號為CCTCCNOM207174，所述酵母菌株2的保藏編號為CCTCCNOM208092，所述酵母菌株3的保藏編號為CCTCCNOM208090，所述酵母菌株4的保藏編號為CCTCCNOM208091。2.由任一種權利要求1所述的酵母菌株獲得的生物學培養(yǎng)物。3.—種酵母全細胞制備物，由任一種權利要求1所述的酵母菌株經過以下步驟制備A)多次培養(yǎng)；B)發(fā)酵；C)分離，經過進一步加工制得鮮酵母，鮮酵母全細胞制備物水份含量在60-80%。4.根據(jù)權利要求3所述的酵母全細胞制備物，其特征在于，所述酵母全細胞制備物為干酵母，干酵母由任一種權利要求l中所述的酵母菌株進一步經過步驟D)干燥而制備。5.根據(jù)權利要求4所述的酵母全細胞制備物，其特征在于，所述干酵母全細胞制備物水份含量在4%8%。6.權利要求1-4中任一項所述的酵母菌株、酵母菌株培養(yǎng)物或其全細胞制備物在對酮基化合物中的酮基立體選擇性還原中的應用。7.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于，所述酮基化合物是具有通式I^COI^的化合物，其中&和R2獨立地代表甲基、乙基、直鏈烷基、苯基、苯磺酰基、或酯基。8.根據(jù)權利要求7所述的應用，所述酮基化合物選自由4-氯-乙酰乙酸乙酯，2-辛酮，1-苯基-1，2-丙酮和1-氯-3-苯磺酰基-2-丙酮組成的組。9.一種酵母組合物，包括A)權利要求1至4中任一項所述的酵母菌株、酵母菌株培養(yǎng)物或其全細胞制備物；B)銨鹽，基于所述的酵母菌株、酵母菌株培養(yǎng)物或其全細胞制備物的重量含量在0.2-2wt%。10.根據(jù)權利要求9所述的酵母組合物在對酮基化合物中的酮基立體選擇性還原中的應用。11.一種對酮基化合物中的酮基立體選擇性還原的方法，其特征在于，在反應過程中加入的催化劑選自權利要求1至4中任一項所述的酵母菌株、酵母菌株或其全細胞制備物。12.根據(jù)權利要求11所述的方法，其特征在于，所述酮基化合物是具有通式R^01^的化合物，其中&和R2獨立地代表甲基、乙基、直鏈烷基、苯基、苯磺酰基、或酯基。13.根據(jù)權利要求12所述的方法，其特征在于，所述酮基化合物選自由4-氯-乙酰乙酸乙酯，2-辛酮，1-苯基-1，2-丙酮和1-氯-3-苯磺酰基-2-丙酮組成的組。全文摘要本發(fā)明提供了對酮基立體選擇性還原的酵母菌株，其制備方法，培養(yǎng)物，組合物及在對酮基立體選擇性還原方法中的應用。通過紫外誘變篩選出活性較好的酵母菌株作為本發(fā)明的對酮基立體選擇性還原的酵母菌株，然后將這些酵母菌株經培養(yǎng)后得到的酵母產物及組合物應用到酮基立體選擇性還原中。文檔編號C12P7/02GK101760436SQ20081018731公開日2010年6月30日申請日期2008年12月26日優(yōu)先權日2008年12月26日發(fā)明者余華順,余明華,俞學鋒,姚鵑,李知洪,楊海珍,熊茂盛申請人:安琪酵母股份有限公司