一種d-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法，主要以利用低能N+離子注入技術(shù)對(duì)乳酸克魯維酵母進(jìn)行誘變而獲得的突變菌株為篩選對(duì)象，建立了高糖固體培養(yǎng)基初篩，紙色譜法和高效液相色譜法組合使用進(jìn)行復(fù)篩的高通量篩選方法。該方法具有篩選效率高、成本低、篩選周期短、易于操作等優(yōu)點(diǎn)，為高效篩選經(jīng)低能離子注入改造酵母所得D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)菌株提供了新方法。
【專利說明】一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于離子束【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法。

【背景技術(shù)】
[0002]D-阿拉伯糖醇是一種五碳糖醇，分子式為C5H12O5,分子量為152.12，是木糖醇和核糖醇的同分異構(gòu)體。糖醇是經(jīng)糖還原的一類多元醇，具有低熱值、抗齲齒、不影響胰島素水平等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)藥、食品、化工等領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價(jià)值。目前，常規(guī)生產(chǎn)D-阿拉伯糖醇的方法主要是化學(xué)法合成，但是該方法反應(yīng)過程復(fù)雜、設(shè)備要求高、環(huán)境污染嚴(yán)重。針對(duì)化學(xué)合成法的缺點(diǎn)，人們將目光集中于通過生物轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)D-阿拉伯糖醇，其反應(yīng)條件溫和、生產(chǎn)工藝簡單，因而備受關(guān)注。
[0003]Spencer等人研究發(fā)現(xiàn)耐高滲酵母在高滲條件下可產(chǎn)生多元醇，代謝葡萄糖產(chǎn)生的多元醇主要有甘油、D-阿拉伯糖醇、赤醉糖醇等，其中五碳多元醇以D-阿拉伯糖醇為主，截止目前可用于生產(chǎn)D-阿拉伯糖醇的菌株，主要包括曲霉菌屬(Aspergillus)、假絲酵母屬(Candida)、德巴利氏酵母屬(Debaryomyces)、擬內(nèi)袍霉屬(EndomycoPsis)、小叢梗袍屬(Moniliella)、漢遜酵母屬(Hansenula)、畢赤母屬(Pichia)、接合酵母屬(Zygosaccharomyces)。但是,大部分產(chǎn)D-阿拉伯糖醇的酵母菌株對(duì)底物葡萄糖的轉(zhuǎn)化率較低，多數(shù)酵母菌株的轉(zhuǎn)化葡萄糖產(chǎn)D-阿拉伯糖醇的底物葡萄糖的轉(zhuǎn)化率介于10%~40%之間，并且普遍存在甘油及其他多元醇副產(chǎn)物。乳酸克魯維酵母是一種能夠以乳酸作為其唯一的碳源和能源的酵母，具有營養(yǎng)要求簡單、生長旺盛、生物量大、生長溫度適應(yīng)范圍廣(25~46°C )、分泌蛋白能力強(qiáng)、不產(chǎn)生內(nèi)毒素、對(duì)人類安全等優(yōu)點(diǎn)，因此長期以來一直被用于發(fā)酵工業(yè)。
[0004]低能離子N+注入技術(shù)作為一種新的誘變?cè)?，目前在國?nèi)微生物育種中取得顯著成效，其原因在于低能離子注入生物體時(shí)同時(shí)存在能量交換、能量沉積、質(zhì)量沉積及電荷交換四大效應(yīng)。由于注入離子的電荷數(shù)、質(zhì)量數(shù)、能量和劑量的組合不同，可以提供眾多的誘變條件，使離子注入誘變具有突變譜寬，突變率高的特點(diǎn)，從而可以篩選到符合生產(chǎn)要求、提高產(chǎn)量的突變體。然而低能N+離子注入技術(shù)轉(zhuǎn)化的隨機(jī)性較大，建立一種高通量的快速篩選方法尤為重要。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法。
[0006]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案:
[0007]I)初篩:將經(jīng)過誘變的出發(fā)酵母菌株接種于YPD液體培養(yǎng)基中，然后于28~370C >160~200r/min下振蕩培養(yǎng)24~28h得預(yù)培養(yǎng)液，將預(yù)培養(yǎng)液涂布于高糖固體培養(yǎng)基上，然后于28~37°C恒溫培養(yǎng)48~60h，所述高糖固體培養(yǎng)基含有500~550g/L的葡萄糖；
[0008]2)復(fù)篩:經(jīng)過恒溫培養(yǎng)后，挑取生長于高糖固體培養(yǎng)基上的單菌落并接種于YPD液體培養(yǎng)基中，然后于28~37°C、160~200r/min下振蕩培養(yǎng)24~28h得種子培養(yǎng)液，將種子培養(yǎng)液接種于YPD發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后于160~200r/min、28~37°C下振蕩培養(yǎng)96~144h得發(fā)酵液，將發(fā)酵液離心，將離心得到的上清液用紙色譜法進(jìn)行分析，根據(jù)紙色譜上D-阿拉伯糖醇對(duì)應(yīng)的顯色斑點(diǎn)篩選D-阿拉伯糖醇產(chǎn)量較高的突變菌株。
[0009]利用低能離子注入技術(shù)對(duì)出發(fā)酵母菌株進(jìn)行誘變。
[0010]所述出發(fā)酵母菌株為乳酸克魯維酵母。
[0011]所述誘變具體包括以下步驟:
[0012]a)挑取出發(fā)酵母菌株單菌落接種于YPD液體培養(yǎng)基中，然后于28~37°C、160~200r/min下振蕩培養(yǎng)18~24h得菌液；
[0013]b)用無菌水將菌液稀釋至0.5~1.0 X 107CFU/mL得菌體稀釋液，將100~150 μ L菌體稀釋液均勻涂布于無菌平皿中央，然后用無菌風(fēng)吹干得菌膜；
[0014]c)將菌膜置于離子注入機(jī)的無菌靶臺(tái)上，并按以下條件對(duì)菌膜進(jìn)行低能離子注入:注入離子為N+，注入劑量為1.5 X 115~2.5X10161ns/cm2，注入能量為15~25KeV，脈沖時(shí)間為5~10s，間隔時(shí)間為5~10s，真空度為1.5~2.0XlO^4Pa0
[0015]所述高糖固體培養(yǎng)基的組成包括500.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的蛋白胨、10.0g/L的酵母膏以及20.0g/L的瓊脂。
[0016]所述YPD發(fā)酵培養(yǎng)基的組成包括200.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的蛋白胨以及10.0g/L的酵母膏。
[0017]所述紙色譜法采用的展開劑為正丁醇、吡啶與水的混合物，正丁醇:吡啶:水的體積比為14:3:3 ;紙色譜法采用的顯色劑是飽和硝酸銀-丙酮溶液和飽和氫氧化鈉-無水乙醇溶液，飽和硝酸銀-丙酮溶液的制備方法為:將0.1mL飽和硝酸銀水溶液加入到40mL丙酮中得混合物，向混合物中加入ImL水后通過攪拌使結(jié)晶析出的硝酸銀完全溶解，飽和氫氧化鈉-無水乙醇溶液的制備方法為:將1mL飽和氫氧化鈉水溶液與520mL無水乙醇混合；紙色譜法采用的標(biāo)準(zhǔn)品為質(zhì)量濃度30g/L的葡萄糖水溶液、質(zhì)量濃度30g/L的D-阿拉伯糖醇水溶液和質(zhì)量濃度30g/L的甘油水溶液的等體積混合液。
[0018]所述篩選方法還包括以下步驟:
[0019]驗(yàn)證:利用高效液相色譜對(duì)D-阿拉伯糖醇產(chǎn)量較高的突變菌株的發(fā)酵液進(jìn)行分析。
[0020]本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在:
[0021]本發(fā)明以利用低能離子(N+)注入技術(shù)對(duì)出發(fā)酵母菌株(乳酸克魯維酵母)進(jìn)行誘變而獲得的突變菌株為篩選對(duì)象，建立了高糖培養(yǎng)基初篩，紙色譜法復(fù)篩的高通量篩選方法。
[0022] 本發(fā)明對(duì)利用的低能離子注入技術(shù)的條件進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)摸索，所確定的注入劑量等條件可以保證穩(wěn)定的篩選效率。本發(fā)明對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的組成和顯色劑進(jìn)行了優(yōu)化，可以加快篩選速度，提高篩選結(jié)果的可靠性。本發(fā)明通過整合高糖培養(yǎng)基初篩的高效性，紙色譜法復(fù)篩的簡便性和高效液相色譜法驗(yàn)證的高準(zhǔn)確性而建立的高通量快速篩選方法可以保證穩(wěn)定的篩選效率。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1為高產(chǎn)菌株的傳代穩(wěn)定性試驗(yàn)。

【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作詳細(xì)說明。
[0025](一 )培養(yǎng)基
[0026]高糖固體培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖500.0g/L，蛋白胨20.0g/L，酵母膏10.0g/L，瓊脂 20.0g/L, pH 為 6.5 ;
[0027]YPD液體培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖20.0g/L，蛋白胨20.0g/L，酵母膏10.0g/L, pH為 6.5 ;
[0028]YPD發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖200.0g/L，蛋白胨20.0g/L，酵母膏10.0g/L, pH為 6.5。
[0029]斜面培養(yǎng)基的組成為:葡萄糖20.0g/L，蛋白胨20.0g/L，酵母膏10.0g/L，瓊脂20g/L，pH 為 6.5 ;
[0030](二)篩選所依據(jù)的方法
[0031](I)耐高糖實(shí)驗(yàn):將經(jīng)低能離子注入的出發(fā)菌株接種于高糖固體培養(yǎng)基上，于37 °C恒溫培養(yǎng)48h，觀察菌體生長情況。
[0032](2)紙色譜法復(fù)篩:分別將5 μ L上清液(發(fā)酵液離心)和標(biāo)準(zhǔn)品在層析濾紙上點(diǎn)樣，在展開劑正丁醇-吡啶-水(V/V/V, 14:3:3)中層析24h(室溫)，晾干后用顯色劑(①取0.1mL飽和硝酸銀溶液加入到40mL丙酮中，然后逐滴加ImL水?dāng)嚢枋菇Y(jié)晶析出的硝酸銀至完全溶解，配制成飽和硝酸銀-丙酮溶液，其中飽和硝酸銀溶液為質(zhì)量濃度為2500g/L的硝酸銀水溶液；②取1mL飽和氫氧化鈉溶液加入到520mL無水乙醇中，配制成飽和氫氧化鈉-無水乙醇溶液，其中飽和氫氧化鈉溶液為質(zhì)量濃度為530g/L的氫氧化鈉水溶液)顯色，顯色步驟為:于室溫下向晾干后的濾紙上先噴灑一層飽和硝酸銀-丙酮溶液，待濾紙自然干燥后，再向?yàn)V紙上噴灑一層飽和氫氧化鈉-無水乙醇溶液，標(biāo)準(zhǔn)品為以下三種溶液的等體積混合液:質(zhì)量濃度30g/L的葡萄糖水溶液、質(zhì)量濃度30g/L的D-阿拉伯糖醇水溶液和質(zhì)量濃度30g/L的甘油水溶液。標(biāo)準(zhǔn)品中葡萄糖、D-阿拉伯糖醇以及甘油在濾紙上的位置順序?yàn)?下面為葡萄糖，中間為D-阿拉伯糖醇，上面為甘油，觀察D-阿拉伯糖醇對(duì)應(yīng)位置上的斑點(diǎn)大小。
[0033](3)高效液相色譜驗(yàn)證:檢測發(fā)酵液中胞外D-阿拉伯糖醇含量。色譜柱=SHlOll ；流動(dòng)相:0.01mol/L H2SO4 ;流速:0.8mL/min ;進(jìn)樣量:5 μ L ;柱溫:50°C ;檢測器:示差檢測器(RID)。
[0034](三)突變菌株的構(gòu)建
[0035]用低能N+離子注入技術(shù)對(duì)乳酸克魯維酵母進(jìn)行誘變，構(gòu)建D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)工程菌。
[0036](I)菌懸液的制備
[0037]將本實(shí)驗(yàn)室保藏的乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis, ATCC12426,購自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心)作為出發(fā)菌株，出發(fā)菌株于斜面培養(yǎng)基上劃線，置于37°C恒溫培養(yǎng)24h后，挑取單菌落接種到Y(jié)PD液體培養(yǎng)基中，于37°C、160r/min振蕩培養(yǎng)18h得菌液。
[0038](2)菌膜制備
[0039]用無菌水將菌液稀釋至1.0X 107CFU/mL得菌體稀釋液，取100 μ L菌體稀釋液均勻涂布于無菌平皿中央，用無菌風(fēng)吹干制成菌膜。
[0040](3)低能離子注入最佳參數(shù)
[0041]在能量為20KeV、脈沖時(shí)間為5s、間隔時(shí)間為10s，真空度為1.5 X KT4Pa條件下，用不同劑量(0X1014、15X1014、35X1014、55X1014、75X1014、95X1014、115X1014、135X10141ns/cm2)對(duì)乳酸克魯維酵母進(jìn)行誘變處理，結(jié)合低能離子對(duì)細(xì)胞的致死率情況，繪出致死率和注入劑量的曲線，致死率隨著注入劑量增加呈先增大后降低再增大的“馬鞍”型曲線，獲得最佳誘變注入?yún)?shù)為:能量為20KeV、脈沖時(shí)間為5s、間隔時(shí)間為10s，真空度為 1.5Xl(T4Pa，注入劑量為 75X10141ns/cm2。
[0042](4)低能離子注入菌膜
[0043]將帶有所述菌膜的無菌平皿置于離子注入機(jī)的無菌靶臺(tái)上，用能量為20keV、注入劑量為75X10141ns/cm2、脈沖時(shí)間為5s、間隔時(shí)間為10s、真空度為1.5X 10_4Pa，進(jìn)行低能離子注入。
[0044](四)突變菌株篩選流程
[0045]將經(jīng)低能離子注入后的乳酸克魯維酵母接種于高糖固體培養(yǎng)基上進(jìn)行初步篩選；將初篩得到的菌株進(jìn)一步進(jìn)行YPD液體發(fā)酵培養(yǎng)，利用紙色譜法和液相色譜法分析發(fā)酵所得發(fā)酵液，從而對(duì)突變菌株進(jìn)一步篩選鑒定。所述發(fā)酵培養(yǎng)包括以下步驟:轉(zhuǎn)接到Y(jié)ro發(fā)酵培養(yǎng)基，于28~37°C、轉(zhuǎn)速為160~200r/min條件下培養(yǎng)96~144h。
[0046]具體說明如下:
[0047](I)預(yù)培養(yǎng)
[0048]經(jīng)過上述步驟(4)低能離子注入菌膜后，用2mL YPD液體培養(yǎng)基浸泡菌膜，37°C溫育2h，用無菌玻璃刮鏟洗脫平皿上的菌膜，獲得洗脫液；未注入的對(duì)照菌膜也作同樣處理。用移液槍將洗脫液轉(zhuǎn)移至裝有5mL YPD液體培養(yǎng)基的試管中，于37°C、160r/min振蕩培養(yǎng)24h得預(yù)培養(yǎng)菌液。
[0049](2)高糖固體培養(yǎng)基初篩結(jié)果
[0050]將所得預(yù)培養(yǎng)菌液涂布于高糖固體培養(yǎng)基上，于37°C恒溫培養(yǎng)48h后，挑取生長情況較好的菌落復(fù)篩。
[0051](3)紙色譜法初步復(fù)篩
[0052]從步驟(2)中生長情況較好的菌落中隨機(jī)挑選出50個(gè)較大單菌落分別接種于含5mL YPD液體培養(yǎng)基的試管中，并于37°C、160r/min下培養(yǎng)24h得種子培養(yǎng)液，以體積比為5%的接種量將種子培養(yǎng)液接種于含10mL YPD發(fā)酵培養(yǎng)基的250mL三角瓶中，然后于160r/min、37°C下培養(yǎng)96h，然后于10000r/min離心10min，用紙色譜法對(duì)離心得到的上清液進(jìn)行分析。
[0053](4)高效液相色譜法確證
[0054]將步驟(3)得到的顯色斑點(diǎn)較大的5株菌株的發(fā)酵液濃縮(將發(fā)酵液在70°C恒溫濃縮至原體積的1/50)后用微孔濾膜過濾，用高效液相色譜法對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。試驗(yàn)結(jié)果表明顯色較大的斑點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的發(fā)酵液中D-阿拉伯糖醇含量較高，最高可達(dá)88.23g/L。
[0055](五)篩選方法的可重復(fù)性
[0056]本發(fā)明進(jìn)行了多個(gè)(1000個(gè)批次)批次的出發(fā)菌株誘變處理(注入)，然后分別對(duì)各個(gè)批次處理后的菌株進(jìn)行初篩和復(fù)篩，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)，各個(gè)批次均可以從初步篩選中的30~50個(gè)克隆中篩選出5~6株高產(chǎn)菌株，發(fā)酵液中D-阿拉伯糖醇含量至少為81.35g/L。
[0057](六)突變菌株的遺傳穩(wěn)定性
[0058]將篩選出來的突變菌株活化后接種于含200mLYPD液體培養(yǎng)基的三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)(37°C、160r/min)，傳代培養(yǎng)8代測定突變菌株的遺傳穩(wěn)定性結(jié)果參見圖1。D-阿拉伯糖醇的產(chǎn)量略有波動(dòng)，但變化不顯著，說明菌株遺傳穩(wěn)定性高。
[0059] 本發(fā)明使用低能N+離子注入技術(shù)對(duì)乳酸克魯維酵母進(jìn)行誘變，構(gòu)建D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)突變菌株。根據(jù)高產(chǎn)菌株有耐高滲的性質(zhì)，建立了用高糖固體培養(yǎng)基初篩的方法。再結(jié)合紙色譜法和高效液相色譜法聯(lián)合使用進(jìn)行組合復(fù)篩，根據(jù)紙層析顯色斑點(diǎn)的大小篩選得到較高產(chǎn)菌株，再利用高效液相色譜法對(duì)紙色譜法的篩選結(jié)果進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明建立的高糖固體培養(yǎng)基進(jìn)行初篩以及組合紙色譜法與高效液相色譜法聯(lián)用復(fù)篩的篩選方法具有篩選成本低，操作方便，能快速地從大批量誘變菌株中篩選出高產(chǎn)菌株。
【權(quán)利要求】
1.一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法，其特征在于:該篩選方法包括以下步驟: 1)初篩:將經(jīng)過誘變的出發(fā)酵母菌株接種于YPD液體培養(yǎng)基中，然后于28~37°C、160~200r/min下振蕩培養(yǎng)24~28h得預(yù)培養(yǎng)液，將預(yù)培養(yǎng)液涂布于高糖固體培養(yǎng)基上，然后于28~37°C恒溫培養(yǎng)48~60h，所述高糖固體培養(yǎng)基含有500~550g/L的葡萄糖； 2)復(fù)篩:經(jīng)過恒溫培養(yǎng)后，挑取生長于高糖固體培養(yǎng)基上的單菌落并接種于YH)液體培養(yǎng)基中，然后于28~37°C、160~200r/min下振蕩培養(yǎng)24~28h得種子培養(yǎng)液，將種子培養(yǎng)液接種于YPD發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后于160~200r/min、28~37°C下振蕩培養(yǎng)96~144h得發(fā)酵液，將發(fā)酵液離心，將離心得到的上清液用紙色譜法進(jìn)行分析，根據(jù)紙色譜上D-阿拉伯糖醇對(duì)應(yīng)的顯色斑點(diǎn)篩選D-阿拉伯糖醇產(chǎn)量較高的突變菌株。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法，其特征在于:利用低能離子注入技術(shù)對(duì)出發(fā)酵母菌株進(jìn)行誘變。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法，其特征在于:所述出發(fā)酵母菌株為乳酸克魯維酵母。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法，其特征在于:所述誘變具體包括以下步驟: a)挑取出發(fā)酵母菌株單菌落接種于YPD液體培養(yǎng)基中，然后于28~37°C、160~200r/min下振蕩培養(yǎng)18~24h得菌液； b)用無菌水將菌液稀釋至0.5~1.0X 107CFU/mL得菌體稀釋液，將100~150 μ L菌體稀釋液均勻涂布于無菌平皿中央，然后用無菌風(fēng)吹干得菌膜； c)將菌膜置于離子注入機(jī)的無菌靶臺(tái)上，并按以下條件對(duì)菌膜進(jìn)行低能離子注入:注入離子為N+，注入劑量為1.5 X 115~2.5 X 10161ns/cm2，注入能量為15~25KeV，脈沖時(shí)間為5~10s，間隔時(shí)間為5~10s，真空度為1.5~2.0XlO^4Pa0
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法，其特征在于:所述高糖固體培養(yǎng)基的組成包括500.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的蛋白胨、10.0g/L的酵母膏以及20.0g/L的瓊脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法，其特征在于:所述Yro發(fā)酵培養(yǎng)基的組成包括200.0g/L的葡萄糖、20.0g/L的蛋白胨以及10.0g/L的酵母膏。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法，其特征在于:所述紙色譜法采用的展開劑為正丁醇、吡啶與水的混合物，正丁醇:吡啶:水的體積比為14:3:3 ;紙色譜法采用的顯色劑是飽和硝酸銀-丙酮溶液和飽和氫氧化鈉-無水乙醇溶液，飽和硝酸銀-丙酮溶液的制備方法為:將0.1mL飽和硝酸銀水溶液加入到40mL丙酮中得混合物，向混合物中加入ImL水后通過攪拌使結(jié)晶析出的硝酸銀完全溶解，飽和氫氧化鈉-無水乙醇溶液的制備方法為:將1mL飽和氫氧化鈉水溶液與520mL無水乙醇混合；紙色譜法采用的標(biāo)準(zhǔn)品為質(zhì)量濃度30g/L的葡萄糖水溶液、質(zhì)量濃度30g/L的D-阿拉伯糖醇水溶液和質(zhì)量濃度30g/L的甘油水溶液的等體積混合液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種D-阿拉伯糖醇高產(chǎn)酵母突變菌株的篩選方法，其特征在于:所述篩選方法還包括以下步驟:驗(yàn)證:利用 高效液相色譜對(duì)D-阿拉伯糖醇產(chǎn)量較高的突變菌株的發(fā)酵液進(jìn)行分析。
【文檔編號(hào)】C12N15/01GK104164415SQ201410387843
【公開日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月7日
【發(fā)明者】錢衛(wèi)東, 周穎欣, 王婷, 寧肖肖, 蔡長龍, 毛培宏 申請(qǐng)人:陜西科技大學(xué)