專利名稱：：水葫蘆提取物在制備降脂藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及水葫蘆提取物在制備降脂藥中的應(yīng)用，以及水葫蘆提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
：水葫蘆又稱鳳眼蓮、水浮蓮，植物基源為雨久花科植物鳳眼藍^YC力力0T77^crassj'pes6Jfert.5bJ歷sJ的全草。50年前，糧食極度短缺的中國從南美引進水葫蘆，廣泛放養(yǎng)于南方鄉(xiāng)村河塘，作為豬飼料。水葫蘆的繁殖能力極強，以無性繁殖為主，在適宜條件下每5天就能繁殖一新植株，也能開花結(jié)實產(chǎn)生種子而進行有性繁殖，一支花大約結(jié)300粒種子。一公頃水面的水葫蘆約有200萬株，合300多噸。水葫蘆過多會覆蓋水面，堵塞河道，影響航運。如不及時清除，還會阻礙排灌，在汛期阻礙水流。濃密的水葫蘆降低了光線對水體的穿透能力，影響水底生物的生長，并增加水中二氧化碳的濃度，降低水產(chǎn)品產(chǎn)量，因此有些學(xué)者將之列為"世界十大害草"之一。如何化害為利是目前研究的熱占?！吨兴幋筠o典》記載水葫蘆"清涼解毒，除濕，祛風(fēng)熱"。未見水葫蘆或其提取物有降脂作用的文獻報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一是提供水葫蘆提取物用于制備降脂藥中的應(yīng)用。本發(fā)明的另一個目的是提供上述水葫蘆提取物的制備方法。本發(fā)明的另一個目的是提供水葫蘆提取物用于制備降血脂的保健品、食品或食品添加劑的應(yīng)用。本發(fā)明所述的水葫蘆提取物是雨久花科植物鳳眼藍A'c力力OT77^cra"j》es6^/^.6b7y^J的莖、葉和/或根的提取物，所用的提取溶劑是水或中等極性至大極性的有機溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、正丁醇。水葫蘆提取物也可以是水葫蘆的莖、葉和/或根的鮮榨汁或鮮榨汁的干燥物。所述水葫蘆提取物是通過溶劑提取法或鮮榨汁法制備的，其中溶劑提取法包括室溫下浸泡提取、煎煮法提取、滲漉法提取、回流法提取。還可以采用一些新的提取方法，如超臨界流體萃取提取法、微波提取法、超聲波提取法、酶法提取法等制備。本發(fā)明所述的應(yīng)用可以將水葫蘆提取物制備成臨床上可以接受的制劑用于各種疾病引起的血脂紊亂的降血脂治療或脂肪肝患者的抗脂肪肝治療，或?qū)⑺J提取物制備成保健品、食品或食品添加劑，用于特定人群的保健用途。本發(fā)明人通過給予高脂飼料、乙醇灌胃、CCh葵花籽油溶液皮下注射的復(fù)合方式建立小鼠脂肪肝的模型，同時給予不同劑量的水葫蘆提取物，給藥后取血及肝組織，計算肝指數(shù)、檢測血脂、肝臟內(nèi)脂質(zhì)及病理組織學(xué)檢查。結(jié)果水葫蘆提取物對于血清以及肝勻漿中的甘油三酯(TG)、總膽固醇(CH0)、和低密度脂蛋白(LDL-C)的含量均有不同程度的降低，病理組織學(xué)檢査也具有明顯的改善，差別均具有統(tǒng)計學(xué)意義。動物實驗結(jié)果顯示，在一定劑量范圍內(nèi)，水葫蘆提取物具有明顯的降血脂、防治脂肪肝的作用，并呈一定的劑量依賴性。具體實施例方式通過下面給出的具體實施例可以進一步理解本發(fā)明，但下述實施例不是對本發(fā)明的限制。例1水葫蘆提取物的制備將采收的水葫蘆的莖、葉和/或根洗凈，甩干外表水份，用壓榨機搾取鮮汁后，50。C干燥，干燥物加入等于干燥物重量3—8倍的30—95%的乙醇或甲醇或丙酮，室溫浸泡2—3天，收集乙醇提取液，回收乙醇后提取液與鮮汁合并減壓濃縮至比重1.l一l.2，再以同體積的氯仿多次萃取,直至氯仿萃取液顏色變成無色透明為止，合并氯仿萃取液，回收氯仿得到水葫蘆的氯仿提取物。剩余的水相以上述方法，相繼以乙酸乙酯或正丁醇萃取得到相應(yīng)的提取物。最后剩余的水相過濾后，濃縮蒸干得到水提取物。各部分提取物合并為總提取物。例2水葫蘆總提取物的降血脂作用將60只18—22g的雄性昆明種小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，按體重隨機分為6組，正常對照組，脂肪肝模型組(即模型對照組)，復(fù)方蛋氨酸膽堿片陽性對照，水葫蘆乙酸乙酯提取物組劑量以含生藥量計算，分別為3g/kg組6g/kg組，9g/kg組。除正常組給予普通伺料喂養(yǎng)外，其余各組每天均給予高脂飼料喂養(yǎng)，30%乙醇(0.15ml/10g)灌胃，從實驗第一天開始，用40%CCl4葵花籽油溶液(0.05ml/10g)皮下注射，以后每隔3天注射一次，共4次。正常組同時注射同等劑量的生理鹽水。每天下午除正常組和模型對照組給予生理鹽水0.2ml/10g灌胃外，陽性對照組給予復(fù)方蛋氨酸膽堿片懸液(1.8g/kg)0.2ml/10g灌胃，其余3組分別給予3g/kg、6g/kg、9g/kg水葫蘆提取物灌胃。實驗周期為15天。實驗期間實驗動物自由飲水和進食。實驗期間觀察小鼠的一般情況，如體重、活動度、皮毛等；實驗第15天下午給藥后，從晚上8點開始禁食12小時，不禁水；實驗第16天上午8點，小鼠稱重，摘眼球取血，3000rpm/min，離心15分鐘，取上清，并檢測血脂TG，CH0，LDL-C。小鼠血清TG，CH0,LDL-C結(jié)果比較，見表1。模型組與正常組相比較，血清TG，CH0，LDL-C含量都有顯著性增高。與模型對照組比較，水葫蘆3g/kg組只有血清TG含量的下降有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01=，而水葫蘆6g/kg組對血清TG和CH0以及9g/kg組對TG、CH0和LDL-C均有明顯的降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義。說明水葫蘆提取物對于降低血清甘油三酯的作用最明顯，其次分別為降低膽固醇和低密度脂蛋白的作用，且這些作用均具有一定的劑量依賴性。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01;與正常組比較#P<0.05，##P<0.01。例3水葫蘆總提取物的抗脂肪肝作用將60只18—22g的雄性昆明種小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，按體重隨機分為6組，正常對照組，脂肪肝模型組(即模型對照組)，復(fù)方蛋氨酸膽堿片陽性對照，水葫蘆乙酸乙酯提取物組，劑量以含生藥量計算，分別為3g/kg組6g/kg組，9g/kg組。除正常組給予普通飼料喂養(yǎng)外，其余各組每天均給予高脂飼料喂養(yǎng)，30%乙醇(0.15ml/10g)灌胃，從實驗第一天開始，用40%CCl4葵花籽油溶液(0.05ml/10g)皮下注射，以后每隔3天注射一次，共4次。正常組同時注射同等劑量的生理鹽水。每天下午除正常組和模型對照組給予生理鹽水0.2ml/10g灌胃外，陽性對照組給予復(fù)方蛋氨酸膽堿片懸液(1.8g/kg)0.2ml/10g灌胃，其余3組分別給予3g/kg、6g/kg、9g/kg水葫蘆提取物灌胃。實驗周期為15天。實驗期間實驗動物自由飲水和進食。實驗期間觀察小鼠的一般情況，如體重、活動度、皮毛等；實驗第15天下午給藥后，從晚上8點開始禁食12小時，不禁水；實驗第16天上午8點，小鼠稱體重，頸椎脫臼處死，取肝臟，并稱重，計算肝指數(shù)肝指數(shù)=肝重/體重><100%;取同一部位小鼠肝臟，用10%中性甲醛固定，脫水，包埋，切片，HE染色，在光鏡下觀察肝組織的脂肪變程度。剩余的肝臟組織取0.3g，在4°C下加入TMS液(Tris6.05g，MgCl2609mg，蔗糖68.4g，加蒸餾水約500ml，用濃HC1調(diào)PH至7.5,補蒸餾水至IOOOml)制成1(F。(W/V)肝勻漿，3000rpm/min，離心15分鐘，取上清，并按試劑盒說明檢測肝臟內(nèi)脂質(zhì)TG，CHO，LDL-C。肝濕重和肝指數(shù)的結(jié)果比較，見表2。與正常組比較，模型對照組肝臟濕重和肝指數(shù)顯著的增加，P<0.01。其余各組與模型組比較，肝臟重量和肝指數(shù)均有減輕。表2各組肝濕重和肝指數(shù)結(jié)果的比較(x土s)n肝濕重(g)肝指數(shù)(%)正常組101.19±0.114.16±0.26模型對照組102.35±0.86##8.21±2.26鼎陽性對照組101.93±0.397.19±0.94水葫蘆3g/kg102.07±0.477.74±1.336g/kg102.05±0.787.46±2.259g/kg102.16±0.417.81±1.13注與模型對照組比較，*P<0.05,**P<0.01;與正常組比較#P<0.05,##P<0.01。小鼠肝臟TG，CHO，LDL-C結(jié)果比較，見表3。水葫蘆各組肝勻漿TG，CHO，LDL-C與模型對照組比較都有明顯的下降，水葫蘆6g/kg和9g/kg組對肝勻漿TG、CHO和LDL-C的下降作用均具有顯著性差異。說明水葫蘆對肝臟甘油三酯，膽固醇和低密度脂蛋白具有比較明顯的降低作用，且這種作用呈現(xiàn)出一定的劑量依賴性。表3各組肝臟勻漿TG，CH0，LDL-C結(jié)果比較(x士s，mmol/L)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01;與正常組比較#P<0.05,*P<0.01。肝臟肉眼及組織學(xué)觀察正常組的小鼠肝臟外觀呈紅褐色，質(zhì)地軟而富有彈性。模型對照組肝臟體積明顯增大，重量增加，呈黃褐色，彈性減弱，切面油膩，甚至表面有明顯的顆粒感。鏡下觀察，正常組肝竇清晰可見，肝索排列整齊，見附圖1。模型對照組肝細胞體積明顯增大，細胞漿內(nèi)含有大量大小不一的脂肪空泡，肝細胞結(jié)構(gòu)紊亂，有炎癥細胞浸潤，見附圖2。水葫蘆3g/kg組肝細胞內(nèi)的脂肪空泡有所減少，且細胞內(nèi)的脂肪空泡明顯減小，見附圖3。水葫蘆6g/kg組細胞內(nèi)脂肪空泡明顯減少，部分肝小葉出現(xiàn)了正常的肝細胞和肝索結(jié)構(gòu)，見附圖4。水葫蘆9g/kg組見附圖5和陽性對照組見附圖6，細胞內(nèi)的脂肪空泡幾乎消失，細胞結(jié)構(gòu)也基本接近正常。肝組織脂變程度比較結(jié)果見表4。表4表明，水葫蘆提取物對改善小鼠的肝組織脂變程度具有較好的效果。表4各組肝組織脂變程度比較<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注與模型組比較，*P<0.05,**P<0.01;與正常組比較#P<0.05,糾P<0.01。例4水葫蘆提取物用于制備降血脂藥的不同劑型的制備4.1片劑水葫蘆提取物加適量淀粉，壓成片劑，每片含水葫蘆提取物O.lg，基片重0.5g。4.2膠囊水葫蘆提取物與輔料混合后直接填充入膠囊，每粒膠囊相當(dāng)于0.1g—0.5g水葫蘆提取物。4.3口服液水葫蘆提取物加入適量的矯味劑、防腐劑，澄清、過濾、罐裝后滅菌，制成每支5ml或10ml的口服液，每支口服液含水葫蘆提取物0.1g—0.5g。例5水葫蘆提取物用于保健品、食品或食品添加劑的制備5.1用于高血脂或脂肪肝人群的保健飲料在10公斤純凈水中加入10g—1000g的水葫蘆提取物及適量芒果、菠蘿或橙汁、西番蓮和添加劑，做成調(diào)血脂功能果汁飲料。5.2用于高血脂或脂肪肝人群的的蛋糕在10公斤面粉中加入10g—1000g的水葫蘆提取物及1公斤雞蛋和添加劑，做成具有調(diào)血脂功能的蛋糕。5.3用于高血脂或脂肪肝人群的的餅千或饅頭在10公斤面粉中加入10g—1000g的水葫蘆提取物和適量的添加劑，做成具有調(diào)血脂功能的的餅干或饅頭。權(quán)利要求1、水葫蘆提取物在制備降脂藥中的應(yīng)用。2、權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述的水葫蘆提取物是雨久花科植物鳳眼藍i5Yc//027n'acrassipes6J/art.5b7/zsJ的莖、葉和/或根的提取物。3、權(quán)利要求l所述的應(yīng)用，其特征在于所述的水葫戶提取物是氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、正丁醇或水的提取物，或水葫戸的鮮榨汁。4、權(quán)利要求l一3任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述的水葫蘆提取物是通過溶劑提取法或鮮搾汁法制備的，其中溶劑提取法包括室溫下浸泡提取、煎煮法提取、滲漉法提取、回流法提取。5、權(quán)利要求l一3任一所述的應(yīng)用，其特征在于所述的水葫蘆提取物是通過超臨界流體萃取提取法、微波提取法、超聲波提取法、酶法提取法制備的。6、權(quán)利要求1所述的降脂藥，其特征在于能調(diào)節(jié)血脂使之恢復(fù)正常，并減少肝臟的脂肪沉積。7、權(quán)利要求l所述的在制備降脂藥中的應(yīng)用，其特征在于水葫蘆提取物可用于制備降血脂、抗脂肪肝的藥品、保健品、食品或食品添加劑。全文摘要本發(fā)明涉及水葫蘆提取物在制備降脂藥中的應(yīng)用，以及水葫蘆提取物的制備方法。本發(fā)明所述的水葫蘆提取物是雨久花科植物鳳眼藍Eichhorniacrassipes(Mart.Solms)的莖、葉和/或根的提取物，所用的提取溶劑是水或中等極性至大極性的有機溶劑，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、正丁醇。水葫蘆提取物也可以是水葫蘆的莖、葉和/或根的鮮榨汁或鮮榨汁的干燥物。水葫蘆提取物具有降血脂、抗脂肪肝作用。將水葫蘆提取物制備成臨床上可以接受的制劑用于各種疾病引起的血脂紊亂的降血脂治療或脂肪肝患者的抗脂肪肝治療，或?qū)⑺J提取物制備成保健品、食品或食品添加劑，用于特定人群的保健用途。文檔編號A23L1/30GK101337009SQ20081007159公開日2009年1月7日申請日期2008年8月18日優(yōu)先權(quán)日2008年8月18日發(fā)明者許漢珍申請人:許漢珍