專利名稱：：用于預(yù)防和治療獲得性免疫缺陷綜合癥的協(xié)同組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明一般涉及一種用于預(yù)防和治療獲得性免疫缺陷綜合癥的方法和組合物。技術(shù)背景獲得性免疫缺陷綜合癥("AIDS")是一種特征為免疫系統(tǒng)衰弱而很難抵抗機(jī)會性感染的疾病。這些導(dǎo)致嚴(yán)重疾病的機(jī)會性感染會危急到AIDS患者的生命，但其通常會被具有健康免疫系統(tǒng)的未受感染的個(gè)體所控制。不幸的是，AIDS患者的免疫系統(tǒng)通常很弱，從而需要醫(yī)療千涉來控制疾病或預(yù)防死亡AIDS主要由一種已知為人類免疫缺陷病毒1型("HIV-r，)的逆轉(zhuǎn)錄病毒所導(dǎo)致。HIV-1通過侵入人體并接著感染和耗竭輔助性T細(xì)胞來削弱免疫系統(tǒng)。輔助性T細(xì)胞對于一個(gè)健康的免疫系統(tǒng)而言是至關(guān)重要的，因?yàn)槠淇刂艬細(xì)胞產(chǎn)生抗體、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(殺傷性T細(xì)胞)的成熟、巨噬細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞的成熟和活性及免疫系統(tǒng)的很多其它調(diào)節(jié)劑和效應(yīng)子功能。輔助性T細(xì)胞的感染和耗竭經(jīng)過一個(gè)多步驟過程而發(fā)生，該過程需要病毒附著到輔助性T細(xì)胞的CD4受體；病毒附著到共受體CXCR4或CCR5;病毒與細(xì)胞融合；病毒脫殼；病毒RNA反轉(zhuǎn)錄以形成DNA;第二股DNA的合成；DNA遷移到輔助性T細(xì)胞核；病毒DNA整合到輔助性T細(xì)胞基因組；轉(zhuǎn)錄DNA以產(chǎn)生RNA;翻譯病毒RNA以產(chǎn)生病毒多蛋白；所述多蛋白的病毒蛋白酶分裂以產(chǎn)生病毒蛋白；和所述病毒蛋白的組合和出芽(budding)以形成新的病毒并破壞宿主細(xì)胞。已設(shè)計(jì)了不同藥物和治療方法來干涉一個(gè)或一個(gè)以上這些步驟。用于預(yù)防或治療所述疾病的典型方法包括使用具有以下作用的化合物抑制病毒附著到輔助性T細(xì)胞或如巨噬細(xì)胞的其它靶細(xì)胞(附著抑制劑)；抑制病毒與靶細(xì)胞融合(融合抑制劑)；預(yù)防病毒DNA整合到輔助性T細(xì)胞DNA(整合酶抑制劑)；預(yù)防DNA與病毒RNA合成(反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑)；和預(yù)防蛋白酶將病毒多蛋白分裂成病毒蛋白(蛋白酶抑制劑)。此等化合物有一些已經(jīng)顯示出具有協(xié)同作用，例如Beale,K.K.和Robinson,W.E.,Jr.,反轉(zhuǎn)錄酶、蛋白酶和整合酶抑制劑的組合在體外可對防止藥物敏感和抗RT抑制劑的HIV-1的分子克隆具有協(xié)同作用。AntiviralRes.46:223-232(2000)和Essey，R.L,McDougall，B.R.和Robinson,W.E.，Jr.,錯(cuò)位雙股RNA(polyI-polyC12U)與不同類別的抗HIV藥物具有協(xié)同作用且對抵抗體外藥物敏感和抗藥性HIV-l具有增效作用。AntiviralRes.,51:189-202(2001)。然而，已證明很難有效地預(yù)防或治療AIDS。該病毒具有對用來治療該疾病的藥物產(chǎn)生突變和抗性的能力，所述藥物包括添加和協(xié)同藥物組合。因?yàn)榇嬖诖艘浑y題，所以需要不斷發(fā)現(xiàn)用于治療該疾病的新穎藥物和方法。最新焦點(diǎn)問題集中在使用附著抑制劑和融合抑制劑來預(yù)防HIV-1感染，而非使用在感染后起作用的藥物如反轉(zhuǎn)錄酶或蛋白酶抑制劑，即西班牙巴塞羅那，2002年7月7-12日，第十四屆國際艾滋病大會的計(jì)劃和摘要(ProgramandAbstractsoftheXIVInternationalAIDSConference),"Greenberg.，F(xiàn)usionInhibitors.摘要MoOrA139"和"W.Olson等人，TheAttachmentandCCR5InhibitorsPRO542andPRO140.AbstractMoOrA140。摘要Mo0rA140。，，實(shí)際上，已發(fā)現(xiàn)附著和融合抑制劑可有效預(yù)防輔助性T細(xì)胞的HIV-1感染。HIV-1進(jìn)入輔助性T細(xì)胞或巨噬細(xì)胞的發(fā)生分為不同的步驟，即附著和融合。附著和融合要求若干病毒與細(xì)胞蛋白在不同的階段相互作用U)使病毒包膜蛋白附著到主要受體CD4;(2)使病毒蛋白發(fā)生構(gòu)象變化，從而與共受體結(jié)合；和(3)暴露病毒蛋白，使病毒與靶細(xì)胞膜融合。主要通過病毒蛋白gpl"和gp"作為引起附著和融合的媒介。gpl20和gp41形成一種在病毒粒子表面上呈現(xiàn)為三聚體的合成物。gpl20是附著到耙細(xì)胞表面上的主要受體CD4的病毒蛋白。gpl20附著使病毒與細(xì)胞發(fā)生接觸，雖然此接觸不夠充分以開始融合。CD4的胞外區(qū)包含4個(gè)區(qū)域(Dl、D2、D3和D4)。CD4上的HIV-1gpl20結(jié)合部位包含CD4區(qū)域1(D1)中的氨基酸40到60(股(7、C"和D)、類似于免疫球蛋白(Ig)5區(qū)的CDR2的延伸物(stretch)。gpl20附著到CD4之后，gpl20經(jīng)歷構(gòu)象變化，且因此結(jié)合到趨化因子共受體(CCR5或CXCR4)。CCR5是巨噬細(xì)胞嗜性和特定T細(xì)胞嗜性主要HIV-1分離物所使用的趨化因子受體，而多數(shù)T細(xì)胞嗜性主要HIV-1分離物和T細(xì)胞系適應(yīng)HIV-1抹使用CXCR4。一些T細(xì)胞嗜性分離物為可使用CCR5或CXCR4作為共受體的雙嗜性。HIV-1gpl20與共受體相互作用之后暴露HIV-1gp41。gp"接著經(jīng)歷形成與靶細(xì)胞膜的附著的叉形(harpoon-like)構(gòu)象變化，并接著使用一個(gè)類彈簧機(jī)械以形成三螺旋、u型蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，已知為發(fā)夾(hairpin)三聚體。形成所述發(fā)夾結(jié)構(gòu)拉近了病毒與細(xì)胞的距離并開始了膜融合。此融合導(dǎo)致所述病毒顆粒進(jìn)入靶細(xì)胞并隨后感染所述細(xì)胞。通過抑制附著來預(yù)防HIV-1感染的嘗試被證明是成功的。2001年10月30日頒給Chang等人(轉(zhuǎn)讓給Tanox公司(休斯頓，TX))的題為"AntibodiesspecificforCD4-bindingdomainofHIV-1"的美國專利第6,309，880號揭示了位于HIV-1gpl20的CD4結(jié)合區(qū)域中的特定抗原決定部位和特定用于所述抗原決定部位的、可通過各種病毒^f朱和分離物而抑制人類細(xì)胞HIV-1感染的抗體。1999年2月16日頒給Burkly等人(轉(zhuǎn)讓給Biogen公司(劍橋，MA))的題為"Anti-CD4antibodyhomologsusefulinprophylaxisandtreatmentofAIDS,ARCandHIVinfection"的美國專利第5,871，732號揭示了適用于預(yù)防或治療哺乳動物的疾病(包括AIDS)的抗CD4抗體同系物。1998年10月6日頒給Allaway等人(轉(zhuǎn)讓給Progenies制藥公司(塔利頓，NY))的題為"SynergisticcompositionofCD4-basedproteinandanti-HIV-lantibody,andmethodsofusingsame，，的美國專利第5，817,767號揭示了含有特定用于HIV-l包膜糖蛋白的CD4基免疫交聯(lián)物和抗體的組合物。本發(fā)明的組合物可協(xié)同作用以中和HIV-1。1999年7月13日頒給Tilley等人(轉(zhuǎn)讓給紐約城市公共衛(wèi)生研究所(PublicHealthResearchInstituteoftheCityofNewYork)公司(紐約，NY))的題為"SynergisticneutralizationofHIV-lbyhumanmonoclonalantibodiesandotherantibodiesdirectedagainsttheV3.loopandtheCD-4bindingsiteofGP-120,andtheuseforimmunotherapyofHIV-linfection"的美國專利第5，922，325號揭示了特定用于HIV-l包膜糖蛋白gpl20的抗體的協(xié)同組合。所述抗體中的一個(gè)特定用于第三變異環(huán)(V3loop),另一個(gè)特定用于gpl20的CD-4結(jié)合部位。2001年6月5日頒給Zolla-Pazner等人(轉(zhuǎn)讓給紐約大學(xué)(紐約,N")的題為"HumanmonoclonalantibodiestotheCD4-bindingdomainofHIV，usesthereofandsynergisticneutralizationofHIV"的美國專利第6,241,986號揭示了特定用于HIVgpl20的CD4結(jié)合區(qū)域的單克隆抗體，其適用于中和HIV-l及預(yù)防HIV感染和治療經(jīng)HIV感染的患者。2000年10月24日頒給Hanna等人(轉(zhuǎn)讓給IDEC藥品公司(圣地亞哥，CA))的題為"Recombinantanti-CD4antibodiesforhumantherapy"的美國專利第6，136，310號揭示了特定用于人類CD4抗原的嵌合抗體。通過抑制融合來預(yù)防HIV感染的嘗試也已經(jīng)被證明是成功的。分別于2000年1月18日和2001年8月28日頒給Kang等人(轉(zhuǎn)讓給特里美里斯乂>司(Trimeris,Inc))的題為"Methodsandcompositionsforpeptidesynthesis"的美國專利第6，015，881號和第6，281，331號揭示了肽T-20和適用于治療HIV-l感染的相關(guān)的肽。T-20,又稱為pentafuside，是一種36氨基酸肽，其預(yù)防HIV-l與靶細(xì)胞之間的體外和體內(nèi)融合。T-20及其類似物衍生自HIV-lgp41的C-端肽(C-terminuspeptide)片斷。此肽片斷涉及到與HIV-1gp41的N-端肽對應(yīng)部分的相互作用中。這些C-和N-端肽的結(jié)合導(dǎo)致發(fā)夾三聚體(trimer-of-hairpin)的形成，所述發(fā)夾三聚體對于靶細(xì)胞膜與HIV-1病毒外套(viralcoat)(Sodroski,Cel11999;99:243-6)之間的融合來說是至關(guān)重要的。小分子肽干擾發(fā)夾三聚體的形成。Trimeris和Hoffmann-LaRoche將小分子肽發(fā)展為FuzeonTM牌恩弗韋特(enfuvirtide)(T-20)。一種已知為T-1249的39氨基酸肽是一種具有類似功能的融合抑制劑。已知為5-Helix的蛋白質(zhì)通過使用HIV-1gp41的N-端肽片斷來阻斷HIV-1gp41的C-端肽片斷從而抑制發(fā)夾三聚體的形成。所述蛋白質(zhì)5-Helix由交替連接的gp41的N-和C-端肽片斷(N-C-N-C-N)組成。以此方式構(gòu)成此一結(jié)構(gòu)，使其不會引起蛋白質(zhì)分子的聚集(Root等人，Sci.2001;291:884-8)。使用附著和融合抑制劑及其它抗病毒藥物來治療AIDS是有效的。目前對HIV-1感染的臨床治療包括三聯(lián)藥物組合，稱為高活性抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法("HAART")。HAART通常涉及核香反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和HIV-1蛋白酶抑制劑的各種組合。在順應(yīng)的患者中，HAART在降低死亡率和HIV-1感染向AIDS發(fā)展的方面是有效的。然而，這些多藥物療法并未消除HIV-1，且長期的治療常常導(dǎo)致多藥抗性。同樣，這些藥物很多是高毒性的且/或需要復(fù)雜的劑量表，其降低了順應(yīng)性并限制了功效。因此，需要不斷開發(fā)用于預(yù)防和治療HIV-1感染和AIDS的額外藥物。理想地是這些藥物能針對HIV-1感染生命周期的早期階段，即抑制或預(yù)防附著和融合。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是提供一種用于預(yù)防或治療如輔助性T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的靶細(xì)胞的HIV-1感染的方法和組合物。本發(fā)明的另一目標(biāo)是提供用于預(yù)防或治療AIDS的方法和組合物。此等和其它目標(biāo)通過將靶細(xì)胞暴露給至少一種附著抑制劑(如結(jié)合到CD4的抗體)與至少一種融合抑制劑(如小分子肽)的協(xié)同組合來達(dá)成。所述組合是有用的，因?yàn)楫?dāng)以與單獨(dú)使用時(shí)相同的量一起使用此兩者時(shí)，其協(xié)同作用允許使用更少的藥物或增加了該等藥物的功效。所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將不難發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的其它和另外目標(biāo)、特征和優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)施方式定義術(shù)語"患者"指易感染HIV-1和發(fā)展成AIDS的靈長類動物。根據(jù)本發(fā)明而治療的靈長類動物優(yōu)選為人類。術(shù)語"接連，，指將本發(fā)明的附著抑制劑和融合抑制劑(1)以相同或不同的投藥途徑以相同或不同頻率分別投予患者，或(2)以一種醫(yī)藥上可接受的組合物形式一起投予患者。術(shù)語"非經(jīng)腸"指通過靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)或腹膜內(nèi)注射而投藥，或指通過皮下植入而投藥。術(shù)語"協(xié)同作用，，指個(gè)別化合物之間的協(xié)作效應(yīng)，使總效應(yīng)大于獨(dú)立采用化合物的效應(yīng)的總和。術(shù)語"功能等效肽，，指具有與多肽相同生物活性的多肽片段。術(shù)語"靶細(xì)胞，，指HIV-1可附著和感染的任何表達(dá)細(xì)胞膜上的CD4和/或趨化因子共受體CCR5或CXCR4的細(xì)胞，例如輔助性T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，或可通過未經(jīng)感染的細(xì)胞與表達(dá)細(xì)胞膜上的HIV-1gpl"和gp"的HIV-1感染細(xì)胞之間的融合而被感染的任何細(xì)胞。本發(fā)明并不限于本文所描述的特定方法論、協(xié)議和試劑，因?yàn)樗鼈兪强梢愿淖兊?。另外，本文中所使用的術(shù)語僅為了描述特定實(shí)施例的目的，且不欲限制本發(fā)明的范圍。除非本文另有規(guī)定，如在上述權(quán)利要求書中所使用的單數(shù)形式"一"和"所述，，包括復(fù)數(shù)指代，例如對"一宿主細(xì)胞"的指代包括復(fù)數(shù)個(gè)該等宿主細(xì)胞。除非另外定義，本文中所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語及任何縮寫的意義與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員所一般理解的意義相同。盡管本文描述了優(yōu)選方法、裝置和材料，但是與本發(fā)明所描述的方法和材料類似或等同的任何方法和材料均可用于本發(fā)明的實(shí)踐中。本文中所提及的所有專利案和公開案均在合法范圍內(nèi)以引用的方式并入本文中，其目的是描述和揭示其中所報(bào)導(dǎo)的可用于本發(fā)明的抗體、多肽、肽和方法論。然而，其內(nèi)容并無法推斷承認(rèn)本發(fā)明不具有在根據(jù)先前發(fā)明的此一揭示內(nèi)容之前的權(quán)利。發(fā)明一方面，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防靶細(xì)胞感染人類免疫缺陷病毒1型("HIV-1")的方法。所述方法包含將耙細(xì)胞暴露給預(yù)防感染量的至少一種附著抑制劑與至少一種融合抑制劑的協(xié)同組合。所述方法適用于為有患AIDS的高度危險(xiǎn)或在暴露給HIV-1后已患有AIDS的患者預(yù)防或治療AIDS。本發(fā)明的所述附著抑制劑為多肽或其它化合物，所述化合物是結(jié)合到靶細(xì)胞上的CD4受體或結(jié)合到HIV-1上的gpl20并抑制或預(yù)防HIV-1附著到所述靶細(xì)胞，或允許HIV-1附著到所述靶細(xì)胞但是抑制或預(yù)防HIV-1與所述靶細(xì)胞之間發(fā)生細(xì)胞融合的化合物。一般來說，所述附著抑制劑為抗體、抗體片段、包含如gpl20的CD4配體的片段的CD4拮抗體或包含CD4的片段的gpl2Q拮抗體，如與人類IgG2的CD4融合蛋白質(zhì)。所述附著抑制劑優(yōu)選為結(jié)合到gpl20并預(yù)防gpl20附著到CD4或允許gpUO附著到CD4但抑制或預(yù)防所述病毒與所述靶細(xì)胞發(fā)生融合的多克隆或單克隆抗體，和結(jié)合到CD4并預(yù)防gpl20附著到CD4或允許gpl20附著到CD4但抑制或預(yù)防所述病毒與所述靶細(xì)胞發(fā)生融合的多克隆或單克隆抗體。所述附著抑制劑更優(yōu)選為結(jié)合到CD4并允許gpl20附著但抑制或預(yù)防HIV-1與所述靶細(xì)胞發(fā)生融合的單克隆抗體，包括(但不限于)美國專利第5,871，732號中所揭示的抗體。本發(fā)明的融合抑制劑為多肽或其它化合物，所述化合物與gp41相互作用以抑制或預(yù)防其叉形結(jié)合到靶細(xì)胞，或抑制或預(yù)防其發(fā)生使HIV-1與靼細(xì)胞緊密接觸的反沖形作用(recoil-likeaction)。所述融合抑制劑優(yōu)選為與gp41相互作用以預(yù)防其發(fā)生將gP41結(jié)合到靶細(xì)胞的叉形作用或其發(fā)生使HIV-1與靶細(xì)胞緊密接觸的反沖形作用的多肽。所述融合抑制劑最優(yōu)選為抗gp41抗體或具有30到50個(gè)氨基酸并具有與gp41相互作用以預(yù)防其發(fā)生叉形或反沖形作用的能力的較小多肽。在一個(gè)實(shí)施例中，所述融合抑制劑為選自由下列各物組成的群組的多肽已知為T-1249的39氨基酸多肽、已知為T-649的36氨基酸多肽、蛋白質(zhì)5-Helix或其功能等效肽。所述融合抑制劑最優(yōu)選為小分子肽(T-20)和其功能等效肽。在一個(gè)實(shí)施例中，所述方法包含將靶細(xì)胞暴露給結(jié)合到CD4并抑制或預(yù)防gpl2Q附著到CD4的抗CD-4抗體與小分子肽或其功能等效肽的協(xié)同組合。數(shù)種此等抗體是此項(xiàng)技術(shù)中已知的，或可通過此項(xiàng)技術(shù)中已知的技術(shù)制得，如美國專利第5，961,576號和第5,912,176號中所揭示的抗體。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述方法包含將靶細(xì)胞暴露給允許gpl20結(jié)合到CD4受體但抑制把細(xì)胞感染HIV-1的抗CD-4抗體與小分子肽或其功能等效肽的協(xié)同組合。數(shù)種此等抗體是此項(xiàng)技術(shù)中已知的，或可通過此項(xiàng)技術(shù)中已知的技術(shù)制得，如美國專利第5,871,732號中所揭示的抗體。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述方法包含將靶細(xì)胞暴露給結(jié)合到gpl20并抑制或預(yù)防gpl20附著到CD4的抗HIV-1gpl20抗體與小分子肽或其功能等效肽的協(xié)同組合。在此實(shí)施例中，所述附著抑制劑優(yōu)選為結(jié)合到gpl20上的CD4結(jié)合部位的單克隆抗體。數(shù)種此等抗體是此項(xiàng)技術(shù)中已知的，或可通過此項(xiàng)技術(shù)中已知的技術(shù)制得，如美國專利第6,309,880號和美國專利第6,241，986號中所揭示的抗體。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述方法包含將靶細(xì)胞暴露給允許gpl20結(jié)合到CD4受體但抑制靶細(xì)胞感染HIV-1的抗HIV-1gpl20抗體與小分子肽或其功能等效肽的協(xié)同組合。所述抗HIV-1gpl20抗體可結(jié)合到gpl20上的任何抗原決定部位，包括趨化因子共受體CCR5或CXCR4的結(jié)合部位。數(shù)種此等抗體是此項(xiàng)技術(shù)中已知的，或可通過此項(xiàng)技術(shù)中已知的技術(shù)制得，如美國專利第5,922,325號中所揭示的抗體。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述方法包含將靶細(xì)胞暴露給結(jié)合到所述趨化因子共受體CCR5或CXCR4并抑制或預(yù)防所述共受體附著到gpl20的抗HIV-1共受體抗體與小分子肽或其功能等效肽的協(xié)同組合。數(shù)種此等抗體是此項(xiàng)技術(shù)中已知的，或可通過此項(xiàng)技術(shù)中已知的技術(shù)制得?？墒褂么隧?xiàng)技術(shù)中已知的蛋白質(zhì)模建方法來設(shè)計(jì)和制造本發(fā)明的多肽。此項(xiàng)技術(shù)(例如，WO98/47089)中已描述了許多用于設(shè)計(jì)和/或模建蛋白質(zhì)構(gòu)象的計(jì)算算法。所述附著抑制劑和融合抑制劑可與其它藥物組合投藥，所述其它藥物如整合酶抑制劑、核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑，包括在HAART類治療中。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述方法進(jìn)一步包含將靶細(xì)胞暴露給與至少一種其它藥物組合的本發(fā)明的附著抑制劑和融合抑制劑，所述至少一種其它藥物如整合酶抑制劑、核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和HIV蛋白酶抑制劑。所述藥物優(yōu)選為至少一種整合酶抑制劑和/或至少一種轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和/或至少一種蛋白酶抑制劑。所述方法適用于HAART系統(tǒng)。所述方法最優(yōu)選包含將靶細(xì)胞暴露給至少一種抗CD4或抗gpl20抗體和小分子肽和一種或一種以上整合酶、轉(zhuǎn)錄酶或蛋白酶抑制劑。所述抗gpl20抗體優(yōu)選為美國專利第6，309，880號所揭示的抗體。所迷抗CD4抗體優(yōu)選為美國專利第5,871,732號所揭示的抗體。在另一方面，本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療獲得性免疫缺陷綜合癥("AIDS")的方法。所述方法包含將預(yù)防或治療疾病量的至少一種附著抑制劑與至少一種融合抑制劑的協(xié)同組合投予有感染AIDS或患AIDS的危險(xiǎn)的患者。在另一方面，本發(fā)明提供了一種適用于預(yù)防耙細(xì)胞感染HIV-1并適用于預(yù)防或治療AIDS的組合物，其包含至少一種附著抑制劑和至少一種融合抑制劑。所述組合物包含單獨(dú)的抑制劑或其與醫(yī)藥上可接受的載劑的組合，所述載劑如各種賦形劑、輔劑、添加劑和稀釋劑。所述組合物適用于預(yù)防或治療AIDS?？赏ㄟ^此項(xiàng)技術(shù)中已知的任何適當(dāng)?shù)姆椒?尤其是用于投藥肽或多肽的方法)將本發(fā)明的所述附著抑制劑和融合抑制劑投予或共同投予給一個(gè)患者。所述方法包括(但不限于)注射、植入等等。優(yōu)選是用注射，因?yàn)樽⑸淇删_控制投藥用時(shí)間和劑量水平。所述抑制劑可經(jīng)以下方式投藥非經(jīng)腸、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、經(jīng)皮、舌下、肌肉內(nèi)、皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)或鞘內(nèi)。所述抑制劑優(yōu)選是以非經(jīng)腸方式投藥。所述附著抑制劑和融合抑制劑優(yōu)選是大約同時(shí)投藥，但是如果投藥比較困難，那么所述抑制劑接連投藥則比較有效。例如，可在合理的時(shí)間內(nèi)將所述附著抑制劑通過靜脈內(nèi)注射投予患者并將所述融合抑制劑通過肌肉內(nèi)注射而投予患者，一般為8小時(shí)內(nèi)，優(yōu)選為2小時(shí)內(nèi)，且最優(yōu)選為0.1-0.5小時(shí)內(nèi)。很多此類投藥方式對所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的。本發(fā)明涵蓋一單一的附著抑制劑和一單一的融合抑制劑的使用，一單一的附著抑制劑和兩種或兩種以上融合抑制劑的使用，兩種或兩種以上附著抑制劑和一單一的融合抑制劑的使用，和兩種或兩種以上附著抑制劑和兩種或兩種以上融合抑制劑的使用，所有這些使用均與多種其它藥物向組合以組合療法來治療AIDS。所述附著抑制劑和融合抑制劑可在所定義的周期以單劑量投藥或以多劑量投藥。例如，所述附著抑制劑可通過靜脈內(nèi)注射以單劑量投藥，而所述融合抑制劑可在數(shù)天的周期內(nèi)通過每日注射進(jìn)行投藥。很多所述投藥方式對所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員將是顯而易見的。根據(jù)患者的年齡、體格和健康狀況、投藥方式、疾病的嚴(yán)重度以及所述劑量是用于治療還是用于預(yù)防，所投的附著抑制劑和融合抑制劑的量和劑量可不同。一般而言，附著抑制劑以每千克體重約1到50毫克(mg/kg)、優(yōu)選約5到30mg/kg的劑量向患者投藥，且所述融合抑制劑通常以每千克體重約0.1到10毫克(rag/kg)、優(yōu)選約0.5到5mg/kg的劑量向患者投藥。所述附著抑制劑通常按周時(shí)刻表來投藥，但可以按每日時(shí)刻表來投藥。所述融合抑制劑通常每天投藥，但可以每天投藥數(shù)次。對于數(shù)日、數(shù)周或更長時(shí)間的重復(fù)投藥而言，需根據(jù)病情重復(fù)治療，直到達(dá)成所希望的對HIV-1病毒負(fù)荷和/或病癥的遏制或達(dá)到所希望的對患者病情的改善。所述劑量可以一周一次到每六個(gè)月一次的時(shí)間間隔進(jìn)行再投藥。投藥的最佳劑量和最佳途徑和頻率的確定在所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員的知識范圍內(nèi)。類似地，無需額外的試驗(yàn)即可確定本發(fā)明范圍內(nèi)的其它藥物的劑量。本發(fā)明的組合物包括醫(yī)藥上可接受的本來無毒性和非治療用的載劑。所述載劑的實(shí)例包括離子交換劑、氧化鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白，如人類血清白蛋白；緩沖物質(zhì)，如磷酸鹽；甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀；飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物；水；鹽；或電解質(zhì)，如硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉、鋅鹽、硅膠、三硅酸鎂、聚烯吡酮、纖維素基物質(zhì)和聚乙二醇?？赏ㄟ^此項(xiàng)技術(shù)中已知的方法以劑型來制備和配制所述醫(yī)藥組合物。在另一方面，由于所述附著抑制劑和融合抑制劑可分別或與其它藥物一起投藥，本發(fā)明提供了一種套組形式的制品，其在獨(dú)立的容器中一單一封裝中包含(1)附著抑制劑、(2)融合抑制劑及視情況(3)用于抑制或預(yù)防靶細(xì)胞感染HIV-1或用于預(yù)防或治療AIDS的其它藥物的兩種或兩種以上的組合。當(dāng)向患者投藥時(shí)，所述套組含有足以提供每千克體重約1到50毫克(mg/kg)、優(yōu)選約5到30mg/kg的量劑，且的附著抑制所述融合抑制劑通常以每千克體重約0.1到10毫克(mg/kg)、優(yōu)選約0.5到5mg/kg的劑量向患者投藥。所述套組所包含的其它藥物的量通過參考特定藥物的批準(zhǔn)或建議劑量而確定。所述套組通常含有一種附著抑制劑和一種融合抑制劑。所述套組優(yōu)選含有抗CD4抗體、抗HIV-1gpl20抗體或抗HIV-1gp41抗體和小分子肽。所述套組最優(yōu)選含有抗CD4抗體和小分子肽。所述可選藥物優(yōu)選為整合酶、轉(zhuǎn)錄酶或蛋白酶抑制劑。在另一方面，本發(fā)明提供了一種用于傳遞信息或說明的手段，所述信息或說明是關(guān)于協(xié)同使用附著抑制劑和融合抑制劑以預(yù)防耙細(xì)胞感染HIV-1并預(yù)防或治療AIDS的信息或說明。所述傳遞手段包含一含有所述信息或說明的文檔或視覺顯示。所述傳遞優(yōu)選為一顯示于一視頻監(jiān)控器上的網(wǎng)址、小冊子或含有所述信息或說明的包裝插頁。有用信息包括所述抑制劑具有協(xié)同作用的事實(shí)、有關(guān)由組合使用所述抑制劑或與其它藥物組合使用而導(dǎo)致的副作用(如果有的話)的細(xì)節(jié)、和如果患者遇到有關(guān)所述抑制劑或其用途的問題時(shí)供其使用的聯(lián)系信息。有用說明包括抑制劑劑量、投藥量和頻率和投藥途徑。所述傳遞手段適用于向患者說明使用本發(fā)明的協(xié)同抑制劑的益處，和將所述抑制劑的經(jīng)批準(zhǔn)的投藥方法傳遞給患者。實(shí)例通過本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例的以下實(shí)例可進(jìn)一步說明本發(fā)明，但是應(yīng)了解此等實(shí)例僅是為了說明的目的，且除非另外特定說明，該等實(shí)例并非意欲限制本發(fā)明的范圍。材泮牛和方法病毒滴定6種病毒。每種病毒分離物的TCID50/ml如下HIV-1302076(小兒):39810;HIV-1302077(小兒):39810;HIV-1302143(小兒):158489;HIV-12054(成人):19952;HIV-1301714(成人):10000;NIH.HTLV-IIIB(實(shí)驗(yàn))5011將病毒儲備液稀釋到2,000TCID50/ml。將512.2^的HIV-1302076添加到9487.8pi的R-3介質(zhì)中。將512.2ptl的HIV-1302077添加到9487.8的R-3介質(zhì)中。將126.3pi的HIV-1302143添加到9873.7pi的R-3介質(zhì)中。將1002.4jil的HIV-1301714添加到8997.6pi的R-3介質(zhì)中。將2000pi的HIV-lm2054添加到8000.0的R-3介質(zhì)中。將4000pi的HTLV-IIIB添加到6000W的R-3介質(zhì)中。將病毒稀釋為100TCID50病毒儲備液將2.5ml的2000TCID50/ml添加到2.5ml的R-3介質(zhì)中，這就是100TCID50(100pi)原料。PBMC:通過Ficoll-Hypaque密度梯度離心法將外周血單核細(xì)胞(PBMC)從未感染HIV-l的供體中分離出來。使PBMC在補(bǔ)充有20。/。胎牛血清、5。/。IL-2和5(ig/mlPHA(R-3介質(zhì))的RPMI1640中生長。5A8(對CD4的人源化單克隆抗體)在PH7.0、11.55mg/ml的無菌PBS中進(jìn)行制備。將所述抗體儲存在4-8。C的無菌條件下。HPLC分析顯示所述抗體是等軸的且具有高于99%的純度。稀釋5A8儲備溶液(500pg/ml)。將60pi的5A8(11.55mg/ml)添加到1326的PBS,得到5A8儲備溶液(500pg/ml)。將5A8儲備溶液稀釋到用于實(shí)驗(yàn)的濃度將192(il的5A8儲備溶液添加到1008pi的PBS中，得到80pg/ml溶液(1:6.25稀釋度)。取200pi的5A880|_ig/ml并添加800jil的PBS(1:31.25稀釋度)。重復(fù)以上步驟得到1:156.25、781,25、3906.25和19531.25稀釋度。最后，用于實(shí)驗(yàn)的濃度為2、0.4、0.08、0.016、0.0032、0.00064^g/ml。T-20:所述制劑的純度高于96.55%。將T-20存儲于-20°C下并使其免受光照。稀釋T-20到儲備溶液將5mgT-20溶于5mlPBS中，得到T-20儲備稀釋液(1mg/ml)。將T-20稀釋到用于實(shí)驗(yàn)的濃度將48piT-20儲備溶液添加到1152|ilPBS中，得到40pg/ml溶液(1:25稀釋度)。取200piT-2040pg/ml并添加800|alPBS(1:1.25稀釋度)。重復(fù)以上步驟得到1:625、1:3125、1:15625、1:78125和390625的稀釋度。最后，用于實(shí)驗(yàn)的濃度為l、0.2、0.04、0.008、0.0016、0.00032pg/ml。實(shí)例1將藥物暴露于感染下并維持12小時(shí)將病毒、細(xì)胞和試劑在37。C下隔夜培養(yǎng)，如下共18個(gè)試管用于6種5A8稀釋液，3個(gè)試管用于病毒對照；共18個(gè)試管用于6種T-20稀釋液，3個(gè)試管用于病毒對照；共18個(gè)試管用于6種5A8/T-20稀釋液，3個(gè)試管用于病毒對照。從最高濃度開始將50jil5A8濃縮液和50|ilT-20濃縮液添加到所述第一批18個(gè)試管中。將100jilPBS添加到最后三個(gè)試管中。從最高濃度開始將50piT-20濃縮液和50jilPBS添加到所述第二批18個(gè)試管中。將100jilPBS添加到最后3個(gè)試管中。從最高濃度開始將50(il5A8和50plPBS添加到所述第三批18個(gè)試管中。將100plPBS添加到最后3個(gè)試管中。將100pl的100TCID50病毒儲備液等分到所有63個(gè)試管中。將2X106PBMC添加到1.8ml的R-3介質(zhì)中(每個(gè)試管共2.Oml)。將所述試管在37。C下隔夜培養(yǎng)。以PBS洗滌所述細(xì)胞3次。在沒有添加新的5A8或T-20的情況下使所述細(xì)胞再懸浮于24孔板中的2mlR-3介質(zhì)中。在第4天和第7天，在每個(gè)共培養(yǎng)孔(coculturewell)的上清液中進(jìn)行HIV-1PM抗原測量。在第4天添加R-3介質(zhì)中的0.5ml細(xì)胞(106/ml)。使用"Chou劑量效應(yīng)"來計(jì)算IC50和組合指數(shù)。結(jié)果顯示于表l中。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>實(shí)例2連續(xù)藥物暴露重復(fù)實(shí)例l,但是將T-20和5A8的濃度改變?nèi)缦耇-20:0.1、0.02、0.004、0.0008、0.00016、0.000032|ig/ml;5A8:L0、0.2、0.04、0.008、0.0016、0.0Q032pg/ml。結(jié)果顯示于表2中。<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>IC50(嗎/ml)和承CI(第7天)病毒^朱5A8T-205A8/T-20*CIT-20/5A8*CIHIV-13020760.0280.00360.0130.750.00130.075HIV-13020770.0670.00650.0150.410.00150.041HIV-13021430.0220.0210.00600.270.00600.27HIV-120540.0170.160.00920.490.00160.049HIV-13017140.300.0400.0970.510.00970.052HTLV-niB0.〗60.0130.0420,310.00430.03*CI:組合指數(shù)CI<0.9表示協(xié)同作用；0.9<CI<1.1表示添加劑相互作用；CI〉1.1表示拮抗作用。參看表1和表2,所述數(shù)據(jù)顯示了在所有研究的條件下5A8與T-20之間存在對抗活體外HIV-1復(fù)制的協(xié)同活性。在存在兩種試劑的情況下，所有計(jì)算出的CI值均小于0.9且IC50的值被減少了1-IO倍。一般而言，5A8增加了更多的T-20活性，而T-20增加較少的5A8活性。當(dāng)將5A8和T-20的濃度保持7天時(shí)，相較于將感染性病毒添加到靶細(xì)胞12小時(shí)之后移除藥物的情況，5A8和T-20的IC50減少了數(shù)倍。在本說明書中，已揭示了本發(fā)明的典型優(yōu)選實(shí)施例，盡管采用了特定的術(shù)語，但是其僅用于一般性和描述性的意義，而非用于限制本發(fā)明的目的，上述權(quán)利要求書中陳述了本發(fā)明的范圍。顯然，鑒于上述教示，本發(fā)明的很多修改和改變都是可能的。因此，應(yīng)了解，在上述權(quán)利要求書范圍內(nèi)本發(fā)明的實(shí)施方法也可不同于本文所明確描述的實(shí)施方法。權(quán)利要求1.一種組合物，該組合物包含附著抑制劑以及HIV融合抑制劑，其中所述附著抑制劑為抗趨化因子共受體抗體或其結(jié)合片斷。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述附著抑制劑為抗CCR5抗體或其結(jié)合片段。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述附著抑制劑為抗CXCR4抗體或其結(jié)合片段。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述HIV融合抑制劑為抗gp41抗體或其結(jié)合片段。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述HIV融合抑制劑為具有30到50個(gè)氨基酸并具有與gp41相互作用能力的多肽。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述HIV融合抑制劑為T-1249、T-649、5-Heiix、潘它夫西地(pentafuside)、或與其功能等效的多肽。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中所述HIV融合抑制劑為潘它夫西地或與其功能等效的多肽。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其進(jìn)一步包含至少一種選自由下列組成的群組的其它藥物整合酶抑制劑、核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、非核苷反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑、和HIV蛋白酶抑制劑。9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所迷的組合物在制備藥物方面的用途，該藥物用于治療或預(yù)防由人類免疫缺陷病毒1型("HIV-r，)引起的靶細(xì)胞感染。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述組合物包含協(xié)同量。11.根據(jù)權(quán)利要求l-8任一所述的組合物在制備藥物方面的用途，該藥物用于預(yù)防或治療獲得性免疫缺陷綜合癥("AIDS")。12.—種制品，其在分離的容器中單一封裝內(nèi)包含附著抑制劑和HIV融合抑制劑的兩種或兩種以上的組合，其中所述附著抑制劑為結(jié)合到CCR5或CXCR4的抗趨化因子共受體抗體。13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的制品，其中所述附著抑制劑為抗CXCR4抗體和/或抗CCR5抗體，且所述HIV融合抑制劑為T-1249、T-649、5-Helix、潘它夫西地、和/或與它們功能等效的多肽。14.根據(jù)權(quán)利要求12所述的制品，其進(jìn)一步包含用于抑制或預(yù)防由HIV-1引起的靶細(xì)胞感染或者預(yù)防或治療AIDS的其它藥物。15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的制品，其中所述藥物為整合酶抑制劑、轉(zhuǎn)錄酶抑制劑或蛋白酶抑制劑。全文摘要一種用于預(yù)防輔助性T細(xì)胞和其它靶細(xì)胞感染人類免疫缺陷病毒1型(“HIV-1”)和用于通過將靶細(xì)胞暴露于至少一種附著抑制劑與至少一種融合抑制劑的協(xié)同組合來預(yù)防和治療獲得性免疫缺陷綜合癥(“AIDS”)的方法。所述附著抑制劑為結(jié)合到靶細(xì)胞上的CD4受體或結(jié)合到HIV-1上的gp120的化合物，例如抗體；且所述融合抑制劑為與gp41相互作用以抑制或預(yù)防其與靶細(xì)胞相互作用的化合物，例如，潘它夫西地(pentafuside)。文檔編號C12Q1/70GK101152573SQ200710152110公開日2008年4月2日申請日期2003年9月26日優(yōu)先權(quán)日2002年9月27日發(fā)明者豐錫中申請人:唐納士公司