專利名稱：：發(fā)酵產(chǎn)生有機(jī)化合物的制作方法發(fā)酵產(chǎn)生有機(jī)化合物本發(fā)明涉及使用含糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物來發(fā)酵產(chǎn)生有機(jī)化合物，所述有機(jī)化合物具有至少3個(gè)C原子或具有至少兩個(gè)C原子和至少一個(gè)N原子，所述培養(yǎng)基包含淀粉原料(feedstock)的至少部分非淀粉固體組分。含糖的液體培養(yǎng)基是用于多種發(fā)酵過程的一種基本營養(yǎng)源；存在于培養(yǎng)基中的糖成分^皮使用的微生物代謝，得到有價(jià)值的有機(jī)產(chǎn)物。這樣制備的#:生物代謝產(chǎn)物(即有機(jī)化合物)的范圍包括例如低分子量揮發(fā)性化合物如乙醇，非揮發(fā)性代謝產(chǎn)物如氨基酸、維生素和類胡蘿卜素，以及多種其它物質(zhì)。根據(jù)多種過程的條件，這類通常已知的微生物發(fā)酵過程利用不同的碳原料。它們從經(jīng)由甜菜和甘蔗糖蜜的純凈蔗糖擴(kuò)展到已知的優(yōu)質(zhì)(high-test)糖蜜(轉(zhuǎn)化的甘蔗糖蜜)到來自淀粉水解產(chǎn)生的葡萄糖。另外，乙酸和乙醇作為協(xié)同底物被提及，其能夠以工業(yè)規(guī)模用于L-賴氨酸的生物技術(shù)生產(chǎn)(Pfefferle等,BiotechnologicalManufactureofLysine,AdvancesinBiochemicalEngineering/Biotechnology,Vol.79(2003)，59-112)。根據(jù)上述的碳原料，建立了多種方法和步驟用于微生物代謝產(chǎn)物的基于糖的發(fā)酵生產(chǎn)。以L-賴氨酸為例，關(guān)于菌株開發(fā)、方法開發(fā)和工業(yè)生產(chǎn)的方法例如由Pfefferle等(上述引文中)描述。用于微生物介導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)微生物代謝產(chǎn)物的一種重要碳原料是淀粉。淀粉首先必須在前面的反應(yīng)步驟中被液化和糖化，然后其可以作為發(fā)酵中的碳原料被利用。為此，通常從天然淀粉原料如馬鈴薯、木薯、谷物(例如小麥、玉米、大麥、黑麥、黑小麥或稻)中以預(yù)純化的形式獲得淀粉，隨后將其用酶液化并糖化，隨后其用于實(shí)際發(fā)酵中來產(chǎn)生目的代謝產(chǎn)物。除了這類預(yù)純化的淀粉原料的用途以外，還描述了未預(yù)處理的淀粉原料用于制備碳原料的用途，所述碳原料用于發(fā)酵產(chǎn)生微生物代謝產(chǎn)物。通常，最初通過磨碎將淀粉原料粉碎。然后將碾磨產(chǎn)物(millbase)進(jìn)行液化和糖化。因?yàn)樵撃肽ギa(chǎn)物除淀粉外天然地含有一系列非淀粉組分，所述非淀粉組分可不利地影響發(fā)酵，所以通常在發(fā)酵前去除這些組分。去除可以在磨碎后直接進(jìn)4亍(WO02/077252;JP2001-072701;JP56-169594;CN1218111)、在液化后進(jìn)行(WO02/077252;CN1173541)或在糖化后進(jìn)行(CN1266102;Beukema等Productionoffermentationsyrupsbyenzymatichydrolysisofpotatoes;potatosaccharifkationtogiveculturemedium(ConferenceAbstract),Symp.Biotechnol.Res.Neth.(1983)，6;NL8302229)。然而，所有的變型涉及在發(fā)酵中使用基本純的淀粉水解產(chǎn)物。發(fā)酵產(chǎn)生有機(jī)化合物的新方法尤其包括在發(fā)酵前純化淀粉原料，例如經(jīng)液化和糖化的淀粉溶液的純化(JP57159500);或提供旨在使得可能從可再生資源制備發(fā)酵培養(yǎng)基的方法(EP1205557)。相反，未加工的淀粉原料已知被大規(guī)模地用于發(fā)酵生產(chǎn)生物乙醇。此處淀粉原料(通常為完整的谷粒)首先進(jìn)行干磨，隨后使用酶將淀粉原料的淀粉組分水解。此處水解可以分批進(jìn)行(例如在攪拌容器中)或連續(xù)進(jìn)行(例如在蒸汽加壓鍋(jetcooker)中)。合適過程的描述可例如見于"TheAlcoholTextbook國Areferenceforthebeverage,fuelandindustrialalcoholindustries",Jaques等(Ed.)，NottinghamUniv.Press1995，ISBN1-8977676-735，Chapter2，pp.7to23，和McAloon等，"Determiningthecostofproducingethanolfromcornstarchandlignocellulosicfeedstocks",NREL/TP-580-28893,NationalRenewableEnergyLaboratory,October2000中因?yàn)樵谏镆掖嫉陌l(fā)酵生產(chǎn)中，價(jià)值產(chǎn)物通過蒸餾獲得，所以使用來自干磨過程的非預(yù)純化形式的淀粉原料不構(gòu)成嚴(yán)重的問題。然而，當(dāng)使用干磨法用于生產(chǎn)其它^t生物代謝產(chǎn)物時(shí)，通過糖溶液被引入發(fā)酵中的固體流是有問題的，因?yàn)槠洳粌H可對發(fā)酵具有例如關(guān)于氧轉(zhuǎn)移速率或使用的微生物的需氧量(在該語境中參閱Mersmann，A.等SelectionandDesignofAerobicBioreactors，Chem.Eng.Technol.13(1990)，357-370)的不良作用，而且也可以可觀地將隨后的加工復(fù)雜化。另外，作為引入固體的結(jié)果，甚至制M淀粉的懸浮液時(shí)懸浮液的粘度可達(dá)到臨M，因?yàn)槔绾卸嘤?0。/。重量玉米粉的懸浮液在水中不再是可均相混溶的(IndustrialEnzymology，第2版，T.Godfrey,S.West,1996)。這限制了傳統(tǒng)步驟中的葡萄糖濃度。就生物酒精的發(fā)酵生產(chǎn)而言這不再有關(guān)，因?yàn)楫a(chǎn)物對用于發(fā)酵的酵母的毒性導(dǎo)致在任何情況下不能以有意義的方式轉(zhuǎn)化更高的濃度。用低糖濃度補(bǔ)充含糖的發(fā)酵培養(yǎng)基原則上在除乙醇外的有機(jī)代謝產(chǎn)物的發(fā)酵生產(chǎn)中是不利的，因?yàn)樵摬襟E導(dǎo)致發(fā)酵液不成比例的稀釋，并因而導(dǎo)致可達(dá)到的目的產(chǎn)物最終濃度被降低，當(dāng)這些產(chǎn)物得自發(fā)酵培養(yǎng)基中時(shí)，這首先導(dǎo)致提高的成本和其次空間時(shí)間產(chǎn)率(space-timeyield)降低。這些考慮是重要的，特別是在淀粉水解產(chǎn)物旨在被部分地添加至較低體積的次級發(fā)酵中用于生產(chǎn)其它化學(xué)品的情況下，所述淀粉水解產(chǎn)物被生產(chǎn)用于大體積生物乙醇生產(chǎn)并傳統(tǒng)地具有按重量計(jì)最多約30%或33。/。的低糖或葡萄糖濃度。由于這些困難和限制，干磨法因?yàn)橐呀?jīng)被廣泛用于生產(chǎn)生物乙醇而至今保留在發(fā)酵生產(chǎn)除乙醇以外的微生物代謝產(chǎn)物中，但不具有特別的經(jīng)濟(jì)學(xué)重要性。迄今為止，僅描述了使用木薯作為淀粉原料，將干磨法概念和原則上與該方法有關(guān)而存在的優(yōu)點(diǎn)應(yīng)用于工業(yè)規(guī)^莫生產(chǎn)^:生物代謝產(chǎn)物的嘗試。因此，JP2001/275693描述了用于發(fā)酵生產(chǎn)氨基酸的一種方法，其中在干燥狀態(tài)下被磨碎的去皮木薯塊莖被用作淀粉原料。為了進(jìn)行該過程，必須將碾磨產(chǎn)物的顆粒尺寸調(diào)節(jié)至S150nm。在用于該目的的過濾步驟中，在將獲得的淀粉液化/糖化和隨后發(fā)酵之前去除使用的一部分碾磨產(chǎn)物，所述部分包括不含淀粉的組分。在該過程中，獲得中等的糖濃度。類似的過程描述于JP2001/309751中，用于生產(chǎn)含氨基酸的飼料添加劑。用于發(fā)酵的液體培養(yǎng)基中提高的糖濃度可以通過使用下述碾磨產(chǎn)物來達(dá)成，所述碾磨產(chǎn)物主要包含淀粉原料的固體的、非淀粉的組分，用于通過申請公司的WO2005/116228(PCT/EP2005/005728)中所述方法糖化。令人驚奇的是，顯示存在于淀粉原料中的固體的、非淀粉的組分不需要在發(fā)酵前被去除。使用在谷粒中選擇淀粉原料的一種類似方法描述于申請公司的PCT/EP2006/066057(較早的專利申請DE102005042541.0)中。在一些情況中，觀察到微生物的受抑制的或延遲的增殖。提供用于發(fā)酵產(chǎn)生有機(jī)化合物的另一方法是本發(fā)明的一個(gè)目的，所述方法不要求之前去除存在于淀粉原料中的非淀粉固體組分，至少不要求完全去除。另外，其特征在于容易操作所使用的培養(yǎng)基和它們在發(fā)酵過程中沒有問題的用途。特別地，該過程將允許使用谷物作為淀粉原料。令人驚奇地，現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)中的上述問題可以如下來克服首先通過碾磨制備第一種含糖的液體培養(yǎng)基(l),液化和糖化淀粉原料而不事先除去淀粉原料的非淀粉固體組分，并用該培養(yǎng)基與可代謝的單糖、二糖或寡糖一起或者與包含濃度為按重量計(jì)至少50%可代謝的單糖或寡糖并且基本上沒有不溶于水的固體的組合物一起提供發(fā)酵。因此本發(fā)明提供了用于發(fā)酵產(chǎn)生至少一種有機(jī)化合物的方法，所述化合物具有至少3個(gè)C原子或具有至少2個(gè)C原子和至少1個(gè)N原子，所述方法包括以下步驟al)碾磨淀粉原料從而獲得碾磨產(chǎn)物，所述碾磨產(chǎn)物包含淀粉原料的至少部分非淀粉固體組分；a2)將碾磨產(chǎn)物懸浮在水性液體中并通過酶促液化水解碾磨產(chǎn)物中的淀粉部分并且，如果合適，隨后糖化，從而得到包含單糖或寡糖的第一種液體(l);和b)將包含單糖或寡糖的液體(l)與可代謝的單糖、二糖或寡糖一起或者包含濃度為按重量計(jì)至少50%可代謝的單糖、二糖或寡糖并且基本上沒有不溶于水的固體的組合物一起加入包含微生物的發(fā)酵培養(yǎng)基中，所述微生物能夠在發(fā)酵條件下過量產(chǎn)生所述有機(jī)化合物。使用通過酶促水解得到的包含單糖或寡糖的液體(l)，導(dǎo)致所述有機(jī)化合物的發(fā)酵生產(chǎn)的成本顯著降低。平行地加入濃縮形式的可代謝糖(即，可代謝的單糖、二糖或)額外避免了發(fā)酵液體的任何不希望的稀釋。此外，由于根據(jù)本發(fā)明的方法，可以避免以較高碾磨產(chǎn)物濃度液化淀粉原料時(shí)可以產(chǎn)生的粘性問題。此外，以這種方式可以避免微生物增殖的問題。當(dāng)涉及包含單糖或寡糖的液體(l)時(shí)，術(shù)語"液體(l)"和"液體培養(yǎng)基(l)"將在這里和下文以同義使用。適合作為本發(fā)明方法的淀粉原料主要是干燥谷物或種子，其中淀粉在干燥狀態(tài)達(dá)到按重量計(jì)至少40%，優(yōu)選按重量計(jì)至少50%。它們在當(dāng)前大規(guī)模生長的谷類植物中祐發(fā)現(xiàn)，所述植物為如玉米、小麥、燕麥、大麥、黑麥、黑小麥、稻、甜菜和馬鈴薯和多種高粱和黍(millet)物種，例如甜高粱(sorgo)和買羅高粱(milo)。淀粉原料優(yōu)選選自谷類，特別優(yōu)選是玉米、黑麥、黑小麥和小麥仁。原則上，根據(jù)本發(fā)明的方法也可以用類似的淀粉原料進(jìn)行，所述淀粉原料例如多種含淀粉谷類或種子的混合物。為了制備液體培養(yǎng)基(l)，將所述淀粉原料在步驟al)中碾磨，期間添加或不添加液體例如水，優(yōu)選不添加液體。也可能將干磨與隨后的濕磨步驟結(jié)合。通常用于干磨的設(shè)備為錘磨機(jī)(hammermill)、轉(zhuǎn)子磨(rotormill)或滾筒式磨(rollermill);適用于濕磨的是槳式混合機(jī)(paddlemixer)、攪拌式球磨機(jī)(agitatedballmill)、環(huán)流磨(circulationmill)、盤式磨(diskmill)、annularchambermill、振動(dòng)磨(oscillatorymill)或行星式磨(planetarymill)。原則上，其它磨也是合適的。濕磨法需要的液體量可以由技術(shù)人員在常規(guī)實(shí)驗(yàn)中確定。通常如下調(diào)節(jié)干物質(zhì)含量按重量計(jì)在從10%到20%的范圍內(nèi)。碾磨得到了適用于隨后方法步驟的顆粒尺寸。在本文語境中，已經(jīng)證明當(dāng)碾磨步驟(特別是干磨步驟)中、步驟al)中獲得的碾磨產(chǎn)物以按重量計(jì)從30%到100%、優(yōu)選按重量計(jì)從40%到95%、特別優(yōu)選按重量計(jì)50%到90%的量含有下述粉末顆粒(即微粒組分)時(shí)是有利的，所述粉末顆粒具有從100jim到630pm范圍內(nèi)的顆粒尺寸。優(yōu)選獲得的碾磨產(chǎn)物按重量計(jì)包含50%的粉末顆粒，所述粉末顆粒具有大于100fim的顆粒尺寸。通常按重量計(jì)至少95%的磨碎的粉末顆粒具有少于2mm的顆粒尺寸。在本文上下文中，借助于使用振動(dòng)分析儀的篩選分析測量顆粒尺寸。通常，小的顆粒尺寸對于獲得高產(chǎn)物產(chǎn)率是有利的。然而，過分小的顆粒尺寸可導(dǎo)致問題，特別是當(dāng)碾磨產(chǎn)物在液化或加工期間被調(diào)成漿時(shí)(例如在發(fā)酵步驟后干燥固體時(shí))由凝塊形成/團(tuán)聚引起的問題。通常，粉末由出粉率(extractionrate)或粉末級別表征，它們彼此之間的關(guān)系是粉末級別特征隨著提高的出粉率而提高。出粉率對應(yīng)于以按重量計(jì)每100份使用的碾磨產(chǎn)物為1^出獲得的按重量計(jì)的粉末量。當(dāng)在碾磨過程中最初用進(jìn)一步的碾磨(即以提高的出粉率)獲得純凈的、超細(xì)的粉末(例如來自谷物仁內(nèi)部)時(shí)，粉末中的粗纖維和外殼含量提高，淀粉含量下降。因此出粉率也反映在已知的粉末級別中，其用作分級粉末(特別是谷粉)的特征，并以粉末的灰分含量(ashcontent)為基礎(chǔ)(已知為灰分標(biāo)尺(ashscale))。粉末級別或類型編號指出100g粉末固體焚燒后殘余的以mg計(jì)的灰分(礦物)量。在谷粉的情況下，更高的類型編號表示更高的出粉率，因?yàn)楣任锶实暮诵陌粗亓坑?jì)約0.4%的灰分，而外殼包含按重量計(jì)約5%的灰分。因此在更低出粉率的情況下，谷粉主要由粉碎的胚乳(即谷物仁中的淀粉含量)組成；在更高出粉率的情況下，谷粉也包含粉碎的、含蛋白質(zhì)的谷粒糊粉層；在粗粉的情況下，它們也包含胚(其含有蛋白質(zhì)并含有脂肪)和種殼(其含有粗纖維和灰分)的組分。就本發(fā)明的目的而言，原則上優(yōu)選具有高出粉率或高類型編號的粉末。如果使用谷類作為淀粉原料，優(yōu)選將完整的仁與它們的殼一起碾磨并進(jìn)一步加工，如果適當(dāng)?shù)脑捲跈C(jī)械去除胚和殼之后。根據(jù)本發(fā)明，用于制備液體培養(yǎng)基(l)的碾磨產(chǎn)物對應(yīng)于出粉率包含至少一部分、優(yōu)選按重量計(jì)至少20%、尤其是按重量計(jì)至少50%、特別是按重量計(jì)至少90%和非常特別是按重量計(jì)至少99%的存在于碾碎的谷物仁中的非淀粉固體組分。根據(jù)碾磨產(chǎn)物的淀粉組分(從而根據(jù)液體培養(yǎng)基(l)中單糖、二糖或寡糖的量)，碾磨產(chǎn)物中的非淀粉固體組分優(yōu)選總計(jì)為按重量計(jì)至少10%、尤其是按重量計(jì)至少15%、例如按重量計(jì)從15%到75%,特別是按重量計(jì)在從20%到60%的范圍內(nèi)。根據(jù)步驟a2)的碾磨產(chǎn)物的酶促水解可以通過技術(shù)人員已知的慣用方法進(jìn)行，例如,按照"TheAlcoholTextbook-Areferenceforthebeverage,fuelandindustrialalcoholindustries",第2章，7到23頁中描迷的方法,其已經(jīng)在開始時(shí)被引用。為此，首先將碾磨產(chǎn)物與水性液體，例如，新鮮的水、再循環(huán)過程水(例如，來自隨后的發(fā)酵)，或者與這些液體的混合物混合，得到水性懸浮液。該程序通常也稱作制漿(slurring)。通常，以這樣的方式選擇碾磨產(chǎn)物和水性液體的量，使得水解得到水性液體培養(yǎng)基(l)，其中總的單糖、二糖和/或Wl濃度在100到750g/kg,優(yōu)選150到700g/kg，尤其200到650g/kg的范圍內(nèi)。因此，通常以150到800g/kg、通常200到750g/kg，尤其250到700g/kg的量使用(基于懸浮液(漿液)的總重量)。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，以這樣的方式選擇碾磨產(chǎn)物和水性液體的量使得水解得到水性液體培養(yǎng)基(l)，其中總的單糖、二糖和/或寡糖濃度為100到400g/kg，優(yōu)選150到350g/kg，尤其200到300g/kg。因此，通常以150到550g/kg、通常200到500g/kg，尤其250到450g/kg的量使用(基于懸浮液(漿液)的總重量)。原則上，還可能使用更多量的碾磨產(chǎn)物以便實(shí)現(xiàn)更高的總的單糖、二糖和/或寡糖濃度，例如，高于400g/kg到700g/kg，尤其450到650g/kg或500g/kg到650g/kg的濃度。對于碾磨產(chǎn)物的淀粉部分的酶促水解，通常，將碾磨產(chǎn)物在淀粉液化酶、通常a-淀粉酶的存在下液化。也可以使用在所述反應(yīng)條件下有活性的其他酶和液化的穩(wěn)定淀粉。為了液化碾磨產(chǎn)物中存在的淀粉，原則上可能使用所有的液化酶，尤其是a-淀粉酶(酶類別EC3.2.1.1)，例如已經(jīng)得自地衣芽孢桿菌(Bacilluslichenformis)或Bacillusstaerothermophilus的a-》定粉酶,特另'J是f尤生物乙醇生產(chǎn)的目的用于液化通過干磨法獲得的材料的那些。適用于液化的a-淀粉酶也是可以商業(yè)獲得的，例如來自Novozymes的名稱Termamyl120LL型下的；或來自Genencor的名稱Spezyme下的a-淀粉酶。不同a-淀粉酶的組合也可以用于液化。這得到了液體培養(yǎng)基，其包含來自碾磨產(chǎn)物的經(jīng)液化的淀粉部分，通常為具有3到18個(gè)、尤其是6到12個(gè)單糖單元的寡糖，尤其葡萄糖單元，和所使用的碾磨產(chǎn)物的非淀粉組分，尤其是用于液化的碾磨產(chǎn)物的固體非淀粉組分。淀粉液化酶和碾磨產(chǎn)物的量以下述方式有利地選擇膠凝過程中的粘度被足夠降低，使得可能通過例如攪拌將懸浮液有效混合。膠凝過程中反應(yīng)混合物的粘度優(yōu)選不大于20Pas，特別優(yōu)選不大于15Pas，非常特別優(yōu)選不大于8Pas。通常，使用裝備有M5測量系統(tǒng)和MVDIN設(shè)備的RotoViskoRV20型Haake粘度計(jì)，在50'C溫度和200s-1的剪切率下測量粘度。最初可向反應(yīng)容器中引入或者在步驟a2)期間添加a-淀粉酶(或使用的淀粉液化酶)。優(yōu)選在步驟a2)開始時(shí)添加步驟a2)中需要的一部分a-淀粉酶，或該部分可以最初被引入反應(yīng)器中。以使用的淀粉原料總量為^出，a-淀粉酶的總量通常在^J姿重量計(jì)0.002%到3.0%的范圍內(nèi)，優(yōu)選按重量計(jì)從0.01%到1.5%,特別優(yōu)選按重量計(jì)從0.02%到0.5%。液化可以在膠凝溫度之上或之下進(jìn)行。優(yōu)選步驟a2)中的液化至少部分在使用的淀粉的膠凝溫度或膠化溫度之上進(jìn)行(已知為煮過程)。所述淀粉所需的溫度是技術(shù)人員已知的(參閱已經(jīng)在開頭引用的"TheAlcoholTextbook畫Areferenceforthebeverage,fuelandindustrialalcoholindustries"的第2章，第11頁)或可以由他通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。通常，選擇的溫度在80。C和165。C之間、優(yōu)選90。C和150。C之間的范圍內(nèi)，特別優(yōu)選在從100。C到140。C的范圍內(nèi)，所述溫度通常比膠凝溫度高至少5K、尤其至少10K并特別優(yōu)選至少20K，例如10到100K，尤其是20到80K。在這些溫度下，淀粉的顆粒結(jié)構(gòu)被破壞(凝膠)，使得后者的酶降解成為可能。對于最適有效的a-淀粉酶(或使用的淀粉液化酶)而言，步驟a2)優(yōu)選至少有一段時(shí)間在所述液化酶的最適pH下進(jìn)行，通常在弱酸范圍內(nèi)的pH下，優(yōu)選4.0和7.0之間、特別5.0到6,5之間，pH調(diào)節(jié)通常在步驟a2)之前或開始時(shí)進(jìn)行；優(yōu)選在液化過程期間檢查和適當(dāng)?shù)脑捲僬{(diào)節(jié)該pH。優(yōu)選使用稀無機(jī)酸如H2S04或H3P04或稀水性堿性氬氧化物溶液如NaOH或KOH調(diào)節(jié)pH。在步驟a2)中用于液化碾磨產(chǎn)物中淀粉部分的優(yōu)選的實(shí)施方案中，至少部分的碾磨產(chǎn)物被連續(xù)或分批地添加進(jìn)水性液體中。優(yōu)選按重量計(jì)至少40%、尤其是按重量計(jì)至少50%、非常特別優(yōu)選按重量計(jì)至少55%是在液化過程的進(jìn)程期間但是在任何糖化發(fā)生之前向反應(yīng)器中添加的。通常添加的量不超過按重量計(jì)90%、尤其是按重量計(jì)85%、特別優(yōu)選按重量計(jì)80%。優(yōu)選在該過程的進(jìn)程中添加的碾磨產(chǎn)物部分是在液化階段期間主要的條件下被補(bǔ)充進(jìn)反應(yīng)器中的。該添加可以以若干部分分批(即按部分)進(jìn)行或者連續(xù)進(jìn)行，優(yōu)選所述部分在每種情況下總計(jì)占待液化的碾磨產(chǎn)物總量的按重量計(jì)不多于30%、特別優(yōu)選按重量計(jì)不多于20%、例如按重量計(jì)1%到30%、尤其是按重量計(jì)2%到20%。該實(shí)施方案的本質(zhì)方面是只有一些碾磨產(chǎn)物(優(yōu)選按重量計(jì)不多于60%、尤其按重量計(jì)不多于50%、特別優(yōu)選按重量計(jì)不多于45°/。的碾磨產(chǎn)物)在液化開始時(shí)存在于反應(yīng)器中，而碾磨產(chǎn)物的剩余部分在液化階段期間被添加。液化也可以連續(xù)進(jìn)行，例如在多步驟反應(yīng)級聯(lián)中。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明方法的步驟a2)如下進(jìn)行總計(jì)占碾磨產(chǎn)物總量按重量計(jì)不多于60%、優(yōu)選按重量計(jì)不多于50%、特別優(yōu)選按重量計(jì)不多于45%、例如按重量計(jì)10%到60%、尤其是^fe重量計(jì)15%到50°/。、特別優(yōu)選按重量計(jì)20%到45%的部分最初凈皮懸浮于水性液體中，并隨后進(jìn)行液化。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，步驟a2)中一些碾磨產(chǎn)物的不連續(xù)的或連續(xù)的添加(尤其是按部分的添加)如下進(jìn)行液體培養(yǎng)基的粘度不多于20Pas、優(yōu)選不多于15Pas、特別優(yōu)選不多于8Pas。為了幫助控制粘度，在高于存在于碾磨產(chǎn)物中的淀粉的膠化溫度之上的溫度下，添加已添加的碾磨產(chǎn)物總量的按重量計(jì)至少25%、優(yōu)選按重量計(jì)至少35%、特別優(yōu)選按重量計(jì)至少50°/"皮證明是有利的。另外，還可通過按部分地添加至少一種淀粉液化酶(優(yōu)選a-淀粉酶)和/或至少一種糖化酶(優(yōu)選葡糖淀粉酶)自身來影響調(diào)控粘度。為了進(jìn)行根據(jù)本發(fā)明的方法，可能將用于懸浮固體碾磨產(chǎn)物的水性液體在適度提高的溫度下預(yù)熱，例如在從40。C到60。C的范圍內(nèi)。然而，優(yōu)選在室溫下使用液體。然后將至少一種淀粉液化酶(優(yōu)選a-淀粉酶)添加進(jìn)碾磨產(chǎn)物的懸浮液中。如果僅在液化階段添加一些碾磨產(chǎn)物，則僅在開始時(shí)添加一些a-淀粉酶(例如以步驟a2)中使用的所有a-淀粉酶為基礎(chǔ)按重量計(jì)10%到70%，尤其是按重量計(jì)20%到65%)是有利的。在該時(shí)間點(diǎn)添加的a-淀粉酶量取決于所述a-淀粉酶在所用的淀粉原料相關(guān)的反應(yīng)條件下的活性，并一般在以使用的淀粉原料總重為基礎(chǔ)按重量計(jì)從0.0004%到2.0%、優(yōu)選按重量計(jì)從0.001%到1.0%、特別優(yōu)選按重量計(jì)從0.02%到0.3%的范圍內(nèi)?；蛘?，a-淀粉酶部分可以在制備懸浮液之前與使用的液體混合。使用的a-淀粉酶部分的量通常在開始加熱至用于液化的溫度之前被添加至懸浮液中，尤其是在室溫下或僅適度提高的溫度下，例如在20。C到3(TC的范圍內(nèi)。然后加熱這樣制造的懸浮液，優(yōu)選加熱至高于使用的淀粉的膠凝溫度的溫度。通常，選擇在80。C和165。C之間、優(yōu)選90。C和150。C之間、特別優(yōu)選100'C和140。C之間范圍內(nèi)的溫度，該溫度通常優(yōu)選比膠凝溫度(膠化溫度)高至少5K、優(yōu)選至少10K、特別優(yōu)選至少20K、例如10到100K、尤其是20到80K。監(jiān)測粘度的同時(shí)，向含淀粉的懸浮液中逐漸添加更多的淀粉原料部分，例如在各情況下以使用的所有碾磨產(chǎn)物為基礎(chǔ)按重量計(jì)1%到30%、尤其是按重量計(jì)從2%到20%的部分。在該情況下優(yōu)選將液化步驟進(jìn)程中待添加的碾磨產(chǎn)物部分以至少2部分、優(yōu)選至少4部分、特別優(yōu)選至少6部分添加至反應(yīng)混合物中?；蛘呶从糜谥圃鞈腋∫旱哪肽ギa(chǎn)物部分可以在該實(shí)施方案的液化步驟期間連續(xù)添加。添加中應(yīng)當(dāng)有利地將溫度維持高于淀粉的膠凝溫度。達(dá)到期望的溫度后或適當(dāng)時(shí)所有粉末已經(jīng)被添加后，如果需要的話，通常將反應(yīng)混合物在高于淀粉膠凝溫度的溫度設(shè)置下維持一段時(shí)間，例如10到60分鐘或更久，即煮。然后，通常將反應(yīng)混合物冷卻至稍微更低的溫度，但是優(yōu)選高于膠凝溫度，例如70。C到90'C。之后如果適當(dāng)?shù)脑?，添加另一部分a-淀粉酶，優(yōu)選最大的部分。在該情況下，取決于在所用的a-淀粉酶反應(yīng)條件下的活性，在該時(shí)間點(diǎn)添加的a-淀粉酶的量以使用的淀粉原料總量為基礎(chǔ)優(yōu)選按重量計(jì)從0.002%到2.0%、特別優(yōu)選按重量計(jì)從0.01%到1.0%、非常特別優(yōu)選按重量計(jì)從0.02%到0.4%。為了將淀粉完全降解為糊精，將反應(yīng)混合物維持在設(shè)定溫度下，或適當(dāng)時(shí)進(jìn)一步加熱，直到通過硤或適當(dāng)時(shí)通過檢測淀粉的另一測試的淀粉檢測是陰性的或至少基本上是陰性的。如果適當(dāng)?shù)脑?，這時(shí)可以向反應(yīng)混合物中添加一個(gè)或多個(gè)其它a-淀粉酶部分，例如以使用的淀粉原料總量為基礎(chǔ)才姿重量計(jì)從0.001%到0.5%、優(yōu)選按重量計(jì)從0.002%到0.2%的范圍內(nèi)。或者，可能如下液化淀粉部分，首先通過引入蒸汽將包含碾磨產(chǎn)物的水性懸浮液加熱至高于存在于淀粉原料中的淀粉或碾磨產(chǎn)物的膠化溫度。通常懸浮液會被加熱至比所述膠化溫度高至少10K、尤其是至少20K、例如10到100K、尤其是20到80K的溫度。尤其是將懸浮液加熱至從90。C到15(TC的范圍內(nèi)、特別是從10(TC到140'C的范圍內(nèi)。用于加熱懸浮液的蒸汽通常是具有至少105°C、尤其是至少110°C、例如ll(TC到210°C溫度的預(yù)熱蒸汽。該蒸汽優(yōu)選在超大氣壓(superatmosphericpressure)下4皮引入。因此，該蒸汽優(yōu)選具有至少1.5巴、例如1.5巴到16巴、尤其是2巴到12巴的壓強(qiáng)。通常如下將蒸汽引入懸浮液中優(yōu)選以高速度將蒸汽在超大氣壓下引入懸浮液中，優(yōu)選1到10或11巴、尤其是1,5到5巴的超大氣壓。引入蒸汽的結(jié)果是懸浮液被瞬間加熱至高于90。C的溫度，即高于膠化溫度的溫度。用蒸汽加熱優(yōu)選在裝有懸浮液的連續(xù)操作的設(shè)備中以特定的補(bǔ)料壓強(qiáng)連續(xù)進(jìn)行，所述補(bǔ)料壓強(qiáng)是由懸浮液粘度、補(bǔ)料速率和設(shè)備的幾何形狀引起的，并在懸浮液負(fù)荷區(qū)中通過可調(diào)節(jié)的噴嘴在提高的壓強(qiáng)下根據(jù)補(bǔ)料壓強(qiáng)補(bǔ)充熱蒸汽。在提高的壓強(qiáng)下補(bǔ)充蒸汽表示不僅加熱懸浮液，而且向體系中引入機(jī)械能，并且該機(jī)械能促進(jìn)碾磨產(chǎn)物顆粒的進(jìn)一步粉碎，導(dǎo)致特別均一的能量供應(yīng)，并從而導(dǎo)致碾磨產(chǎn)物中顆粒狀淀粉顆粒的特別均一的凝膠化。這些設(shè)備通常具有管狀的幾何形狀。優(yōu)選蒸汽沿管狀設(shè)備的縱軸補(bǔ)充。通常，懸浮液以至少45。的角度或以直角提供?？烧{(diào)節(jié)區(qū)域噴嘴通常具有圓錐形的幾何形狀，該圓錐在蒸汽的流動(dòng)方向逐漸變細(xì)。在該噴嘴中安置了針或安置于縱向可移動(dòng)桿上的推體(cone)。針或推體與噴嘴的圓錐一起形成孔。通過縱向移動(dòng)針或桿，可以以簡單的方式調(diào)節(jié)孔的大小并從而調(diào)節(jié)噴嘴末端的橫斷面積，藉此可以以簡單的方式控制提供蒸汽的速度。這些設(shè)備通常也裝備有混合管，在提供蒸汽后懸浮液被運(yùn)入其中并在該管中離開設(shè)備。該混合管通常沿著蒸汽提供方向并與補(bǔ)料垂直設(shè)置?；旌瞎芎蛧娮煲黄鹜ǔＰ纬煽祝瑧腋∫和ㄟ^該孔運(yùn)輸。作為該孔的結(jié)果，在運(yùn)輸過程中額外的剪切力作用于懸浮液并從而提高對懸浮液的機(jī)械能供應(yīng)?；旌瞎芸梢砸钥煽v向移置的方式安置。移動(dòng)混合管是調(diào)節(jié)孔的尺寸從而調(diào)節(jié)設(shè)備壓差(dropofpressure)的簡單途徑?，F(xiàn)有技術(shù)中這類設(shè)備已知稱作蒸汽加壓鍋，例如"TheAlcoholTextbook"第2章(上述引文中)的圖13中所示的i殳備是可商業(yè)獲得的，例如來自HydroThermalCorp.WaukeshaWI,USA的名稱HYDROHEATER。當(dāng)反應(yīng)連續(xù)進(jìn)行時(shí)，用蒸汽處理的懸浮液通常隨后被轉(zhuǎn)移進(jìn)入"反應(yīng)后區(qū)域，，(after-reactionzone)中以繼續(xù)淀粉組分的膠凝。通常，在反應(yīng)后區(qū)域中主要為超大氣壓(通常是在2到8巴范圍內(nèi)的絕對壓強(qiáng))。反應(yīng)后區(qū)域中的溫度通常在90。C到150。C的范圍內(nèi)。該反應(yīng)后區(qū)域中的滯留時(shí)間可以在1分鐘到4小時(shí)的范圍內(nèi)，取決于懸浮液的溫度。反應(yīng)后區(qū)域通常具有管狀或柱狀的幾何形狀。在一個(gè)實(shí)施方案中，反應(yīng)后區(qū)域具有垂直安置的柱的幾何形狀。此處懸浮液一旦離開蒸汽處理設(shè)^^更被施加于柱的上部區(qū)域，并在下部區(qū)域離開。在本發(fā)明的另一實(shí)施方案中，反應(yīng)后區(qū)域具有管狀的幾何形狀。懸浮液離開反應(yīng)后區(qū)域后，壓強(qiáng)通常被釋放，并隨后進(jìn)行液化。壓強(qiáng)的釋放優(yōu)選以閃蒸的形式進(jìn)行，從而將懸浮液冷卻至(優(yōu)選)低于ioo'c、尤其是低于85'C的溫度。通常，然后在獨(dú)立的反應(yīng)容器中將被這樣崩解的淀粉液化。液化可以如上文所述進(jìn)行。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，至少一些或所有的、通常至少50%、尤其是至少80%或者所有的淀粉液化酶在蒸汽加熱過程之前被添加進(jìn)水性液體中的碾磨產(chǎn)物懸浮液中。如此，當(dāng)混合物被加熱至高于膠化溫度時(shí)，液化過程已經(jīng)發(fā)生。用蒸汽加熱和反應(yīng)后階段可以適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行。獨(dú)立的反應(yīng)容器中隨后的液化步驟可以省略。然而，會優(yōu)選進(jìn)行這類液化步驟來完成淀粉到糊精的降解。為了穩(wěn)定使用的酶，如果適當(dāng)?shù)脑捒梢岳缡褂肅aCl2將Ca"離子的濃度調(diào)節(jié)為酶特異的最佳值。合適的濃度值可以由技術(shù)人員在常規(guī)實(shí)驗(yàn)中確定。如果例如使用Termamyl作為a-淀粉酶，則將液體培養(yǎng)基中的Ca2+離子濃度調(diào)節(jié)至例如10到100ppm、優(yōu)選20到80ppm和特別優(yōu)選約30到70ppm是有利的，單位ppm是以重量為基礎(chǔ)的并表示g/1000kg。為了將淀粉完全降解為糊精，將反應(yīng)混合物保持在設(shè)定溫度下，直到通過硤或適當(dāng)時(shí)通過檢測淀粉的另一測試的淀粉檢測是陰性的或至少基本上是陰性的。如果適當(dāng)?shù)脑?，這時(shí)可以向反應(yīng)混合物中添加一個(gè)或多個(gè)其它a-淀粉酶部分，例如以使用的淀粉原料總量為基礎(chǔ)按重量計(jì)從0.001%到0.5%、優(yōu)選按重量計(jì)從0.002%到0.2%的范圍內(nèi)。這得到水性淀粉水解產(chǎn)物，其包含來自碾磨產(chǎn)物的液化的淀粉部分，通常為糊精，和如果合適，其他寡糖和單糖或二糖，和碾磨產(chǎn)物的非淀粉成分，尤其用于液化的碾磨產(chǎn)物的固體的非淀粉組分。淀粉液化結(jié)束后，可以將液體培養(yǎng)基中存在的糊精以本身已知的方式連續(xù)或者分批糖化，即分解成葡萄糖。液化的培養(yǎng)基在用于例如隨后的發(fā)酵步驟前可以在特定糖化罐中完全糖化。在本發(fā)明的笫一個(gè)實(shí)施方案中，在隨后的發(fā)酵前進(jìn)行僅僅部分的糖化。例如，可以按照如下程序，其中將液體培養(yǎng)基中存在的一些糊精(例如，基于糊精的總重量(或者最初的淀粉)按重量計(jì)10到90%,尤其按重量計(jì)20到80%的范圍)糖化并在發(fā)酵中使用所得的含糖液體培養(yǎng)基。可以在發(fā)酵培養(yǎng)基中原位實(shí)現(xiàn)進(jìn)一步的糖化。此外，可以在發(fā)酵罐(原位)中直接進(jìn)行糖化，免除了單獨(dú)的糖化罐。原位糖化(即，在發(fā)酵罐中部分或完全進(jìn)行糖化)的優(yōu)點(diǎn)首先是降低了投資支出；其次，葡萄糖的延遲釋放可以(如果合適)允許在批次中最初導(dǎo)入較高的葡萄糖濃度而在使用的微生物中不發(fā)生抑制或代謝改變。例如，在大腸桿菌中，不適當(dāng)?shù)母咂咸烟菨舛葘?dǎo)致形成有機(jī)酸(乙酸)，而釀酒酵母(Saccharomyceseerevisae)在這種情況下轉(zhuǎn)向例如發(fā)酵，盡管在充氧的發(fā)酵罐中存在足夠的氧(Crabtree效應(yīng))。通過控制葡糖淀粉酶濃度可以調(diào)節(jié)葡萄糖的延遲釋^i。這使得可能抑制上述效應(yīng)，并且可以在最初導(dǎo)入更多的底物，使得所提供的進(jìn)料流引起的稀釋度可以被降低。液化淀粉溶液中糊精(即，寡糖)的糖化酶促地進(jìn)行，即借助至少一種糊精糖化酶。可以用于該目的的酶原則上是所有葡糖淀粉酶(酶類別EC3.2.1.3)，尤其從曲霉屬得到的葡糖淀粉酶，特別是用于糖化通過與生物乙醇的生產(chǎn)有關(guān)的干磨法得到的物質(zhì)的那些葡糖淀粉酶。適于糖化的葡糖淀粉酶也可以通過商業(yè)途徑得到，如從Novozymes以名稱DextrozymeGA;或從Genencor以名稱Optidex得到。也可以使用不同的葡糖淀粉酶的組合。將至少一種糖化酶，尤其至少一種葡糖淀粉酶加入液化后得到的含有糊精的液體培養(yǎng)基中，所加入的葡糖淀粉酶的量基于所用的淀粉原料的總量為按重量計(jì)通常0.001到5.0%,優(yōu)選按重量計(jì)0.005到3.0%,特別優(yōu)選按重量計(jì)0.01到1.0%。如果在發(fā)酵罐中進(jìn)行糖化，那么通常將液化的淀粉溶液冷卻到發(fā)酵溫度，即，32到37X:，然后送入發(fā)酵罐中。在該情況中，將用于糖化的葡糖淀粉酶(或者至少一種糖化酶)直接加入發(fā)酵罐液體中。根據(jù)步驟a2)的液化淀粉的糖化現(xiàn)在與微生物對糖的代謝平行地發(fā)生。如果糖化在糖化罐中發(fā)生，那么通常將液化的淀粉溶液冷卻或升溫到糖化酶的最適溫度或者稍低的溫度，例如到50至70°C,優(yōu)選60至65'C，并隨后用葡糖淀粉酶處理。有利地的是在加入糖化酶，尤其葡糖淀粉酶之前，調(diào)節(jié)液體培養(yǎng)基的pH值到所用的葡糖淀粉酶的最佳活性范圍內(nèi)的值，優(yōu)選3.5到6.0;特別優(yōu)選4.0到5.5，非常特別優(yōu)選4.0到5.0。然而，尤其當(dāng)在發(fā)酵罐中直接進(jìn)行糖化時(shí)，還可能調(diào)節(jié)pH到上述范圍之外的值，例如，高于6.0到8.0的范圍內(nèi)。這例如在賴氨酸、泛酸和維生素B2的發(fā)酵生產(chǎn)中總體上是有利的，盡管在該pH范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)的葡糖淀粉酶具有有限的活性，或者由于將設(shè)置的發(fā)酵條件而是必要的。在優(yōu)選實(shí)施方案中，在特定糖化罐中進(jìn)行糖化。為此，將液化的淀粉溶液升溫到酶的最佳溫度，或者稍低的溫度，并且以上述方式調(diào)節(jié)pH到酶的最佳pH值。加入糖化酶之后，優(yōu)選將含有糊精的懸浮液保持設(shè)定的溫度一段時(shí)間，例如，2到72小時(shí)或更長，如果需要，尤其5到48小時(shí)，在該時(shí)間內(nèi)，糊精被糖化而得到單糖。本領(lǐng)域技術(shù)人員使用已知的方法，如HPLC、酶測定法或者葡萄糖試紙來監(jiān)測糖化過程的進(jìn)展。當(dāng)單糖濃度基本上不再升高或者再次下降時(shí)，糖化已經(jīng)結(jié)束。因此，通常，將包含淀粉原料的至少一些或所有成分的碾磨產(chǎn)物用于制備含有糖的液體培養(yǎng)基(l)(即，不除去或不完全除去淀粉原料的非淀粉固體組分)，所得的液體培養(yǎng)基(l)也含有淀粉原料的一些或所有非淀粉固體組分。這經(jīng)常引起引入如來自谷類的一定量的肌醇六礴酸，所述量將不被忽視。為了避免這樣產(chǎn)生的抑制效應(yīng)，有利的是在步驟a2)中向液體培養(yǎng)基中加入至少一種肌醇六磷酸酶，然后將含有糖的液體培養(yǎng)基進(jìn)行發(fā)酵步驟?？梢栽谝夯蛱腔?、期間或者之后加入肌醇六磷酸酶，如果其對于各自的高溫足夠穩(wěn)定的話?？梢允褂萌魏渭〈剂姿崦福灰诜磻?yīng)條件下它們的活性在每種情況下至多受到可忽略的影響。使用的肌醇六磷酸酶優(yōu)選具有〉50。C，特別優(yōu)選>60^1的熱穩(wěn)定性(T50)。肌醇六磷酸酶的量通常為1到10000單位/kg淀粉原料，尤其10到4000單位/kg淀粉原料。為了增加總的糖產(chǎn)率，或者得到游離氨基酸，可以在含有糖的液體培養(yǎng)基的生產(chǎn)期間向反應(yīng)混合物中額外加入其他酶，如支鏈淀粉酶、纖維素酶、半纖維素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、葡糖苷酶或蛋白酶。這些酶的加入對粘性具有積極作用，即降低粘性(例如，通過切割長鏈(也稱作較長鏈)葡聚糖和/或(阿拉伯)木聚糖)，并導(dǎo)致釋放可代謝的葡糖苷和釋放(殘留的)淀粉。蛋白酶的使用具有類似的積極作用，還可能的是釋放作為發(fā)酵的生長因子的氨基酸。取決于是否已經(jīng)進(jìn)行了糖化，本文所述的步驟al)和a2)的應(yīng)用得到液體培養(yǎng)基，其包含糊精或單糖或二糖并且其具有上述范圍內(nèi)的總的單糖、二糖和/或寡糖濃度。糖化后液體培養(yǎng)基(l)中存在的糖尤其是葡萄糖，也可能存在葡萄糖之外的其他單糖，如己糖和戊糖，例如，果糖、甘露糖、半乳糖、山梨糖、木糖、阿拉伯糖和核糖。葡萄糖之外的單糖的量可以取決于使用的淀粉原料和其中存在的非淀粉成分，并且可以受到方法控制的影響，例如，通過加入纖維素酶分解纖維素成分。含有糖的液體培養(yǎng)基的單糖優(yōu)選包含基于該含糖液體培養(yǎng)基中存在的糖的總量，按重量計(jì)至少60%，通常按重量計(jì)至少70%，尤其按重量計(jì)至少80%，特別按重量計(jì)至少85%的葡萄糖含量。基于該含糖液體培養(yǎng)基中存在的糖的總量，葡萄糖含量通常為按重量計(jì)75到99.9%,尤其按重量計(jì)80到99%,特別按重量計(jì)85到97%。如果沒有進(jìn)行糖化，那么培養(yǎng)基(l)中存在的單糖、二糖和寡糖中糊精的量基本上對應(yīng)于葡萄糖的量。如果沒有進(jìn)行糖化，那么可代謝的葡萄糖當(dāng)量基本上以寡糖，尤其糊精存在。這些寡糖或糊精的主要成分通常是葡萄糖，還可能的是培養(yǎng)基包含少量由其他單糖單位組成的單糖和/或二糖和寡糖單位。在這種情況下，液體培養(yǎng)基(l)中的含糖成分，即單糖、二糖和寡糖通常包含按寡糖，尤其糊精的重量計(jì)至少60%，通常按重量計(jì)至少70%，尤其按重量計(jì)至少80%，特別按重量計(jì)至少90%，例如單糖和二糖達(dá)到按重量計(jì)小于40%，通常按重量計(jì)小于30%，尤其按重量計(jì)小于20%，特別按重量計(jì)小于10%?；谄咸烟钱?dāng)量的總重量，以游離或結(jié)合形式存在的葡萄糖通常達(dá)到按培養(yǎng)基(l)的葡萄糖當(dāng)量的重量計(jì)50到99%,尤其按重量計(jì)75到97%，特別按重量計(jì)80到95%。根據(jù)本發(fā)明，使用液體培養(yǎng)基(l)和該液體培養(yǎng)基之外的可代謝的單糖、二糖和/或寡糖原料(下文中也稱作糖原料)進(jìn)行隨后的發(fā)酵。用于該目的的單糖、二糖和/或寡糖可以原樣使用或者以組合物的形式使用，該組合物包含可代謝的單糖、二糖和/或寡糖，其濃度基于培養(yǎng)基的總重量為按重量計(jì)至少50°/。，優(yōu)選濃度為按重量計(jì)至少60%,并且與水性液體培養(yǎng)基(l)相比，該組合物基本上沒有不溶于水的固體。糖原料中存在的單糖、二糖或寡糖優(yōu)選選自單糖，通常為己糖和/或戊糖，例如，葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、山梨糖、木糖、阿拉伯糖和核糖，特別選自葡萄糖、果糖和半乳糖，和二糖，如蔗糖、麥芽糖、乳糖，特別是蔗糖。還適宜的是單糖和二糖和具有高比例的摻入的葡萄糖組分的寡糖混合物，和這些混合物與單糖和/或二糖的混合物。包含濃度為按重量計(jì)至少50%的單糖、二糖和/或寡糖并且基本上沒有不溶于水的固體的組合物的實(shí)例包含葡萄糖糖漿、蔗糖糖漿、濃汁、麥芽糖糖漿、糊精糖漿，以及來自糖生產(chǎn)的廢品(糖蜜)，尤其來自甜菜糖生產(chǎn)的糖蜜和來自甘蔗糖生產(chǎn)的糖蜜。特別優(yōu)選的是主要包含單糖和/或二糖，尤其葡萄糖和/或蔗糖的物質(zhì)，和包含葡萄糖和/或蔗糖和高比例的摻入的葡萄糖組分的寡糖的混合物，如葡萄糖、蔗糖、葡萄糖糖漿、蔗糖糖漿、濃汁和糖蜜。像液體培養(yǎng)基(l)一樣，單糖、二糖和/或寡糖和包含它們的組合物不僅可以用于初步制備發(fā)酵培養(yǎng)基(分批相)，而且可以用于在發(fā)酵期間喂飼(如果后者以補(bǔ)料分批或者半連續(xù)形式進(jìn)行)。通過加入液體培養(yǎng)基(l)向發(fā)酵中導(dǎo)入的單糖、二糖和/或寡糖的總量優(yōu)選占導(dǎo)入發(fā)酵的單糖、二糖和寡糖總量的按重量計(jì)至少40%,尤其按重量計(jì)至少50%，特別優(yōu)選按重量計(jì)至少60%,例如按重量計(jì)40到95%,尤其按重量計(jì)50到90%，特別按重量計(jì)60到90%?？梢詫⒁后w培養(yǎng)基(l)和單糖、二糖和/或奮，或者包含它們的組合物相互單獨(dú)地或一起送入發(fā)酵。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，液體培養(yǎng)基(l)和單糖、二糖和/或寡糖，或者包含它們的組合物在送入發(fā)酵前相互混合。從而，當(dāng)使用通常具有100到400g/kg低的總單糖、二糖和，濃度的液體培養(yǎng)基時(shí)，步驟al)和a2)后得到的含有糖的液體培養(yǎng)基(l)的總糖含量增加，優(yōu)選增加至少50g/kg,尤其至少100g/kg，特別至少150g/kg,例如50到300g/kg,尤其100到250g/kg,特別120到200g/kg,達(dá)到基于總重量按重量計(jì)超過40%，優(yōu)選按重量計(jì)至少45%，尤其按重量計(jì)至少50%,特別優(yōu)選按重量計(jì)至少55%。向液體培養(yǎng)基(l)加入這些糖原料后，所得的液體培養(yǎng)基基于總重量優(yōu)選具有按重量計(jì)45到80%的范圍內(nèi)，優(yōu)選具有按重量計(jì)50到75%或按重量計(jì)55到75%范圍內(nèi)的干物質(zhì)含量。在該上下文中，有利的是例如通過調(diào)節(jié)溫度控制液體培養(yǎng)基(l)的粘度，使得不超過最大值20Pas，特別優(yōu)選15Pas，非常特別優(yōu)選8Pas。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，將單糖和/或二糖以來自糖生產(chǎn)的包含葡萄糖或蔗糖的副產(chǎn)物的形式加入到第一種液體培養(yǎng)基(l)中。實(shí)例是在糖生產(chǎn)中從甘蔗糖或尤其甜菜糖產(chǎn)生的糖蜜。根據(jù)本發(fā)明，將步驟al)和a2)中制備的液體培養(yǎng)基(l)和與其不同的糖原料送入發(fā)酵，其中它們用于培養(yǎng)微生物。在發(fā)酵中，微生物產(chǎn)生微生物代謝產(chǎn)物?？梢砸约夹g(shù)人員已知的常規(guī)方式進(jìn)行發(fā)酵。為此，所希望的微生物將通常在通過本文所述的方法得到的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)?？梢砸苑峙l(fā)酵或補(bǔ)料分批(包括補(bǔ)料分批與中間收獲)進(jìn)行發(fā)酵方法，優(yōu)選補(bǔ)料分批方法。例如，根據(jù)本發(fā)明方法得到的液體培養(yǎng)基(l)或常規(guī)的糖原料，即可代謝的單糖、二糖和/或寡糖或包含按重量計(jì)至少50%濃度的可代謝的單糖、二糖和/或寡糖并且通常沒有不溶于水的固體的組合物或它們的混合物，可以接種所希望的^t生物，如果合適，用水稀釋并加入常規(guī)的培養(yǎng)基成分，如緩沖劑、營養(yǎng)鹽、氮原料，如硫酸銨、尿素等等、包含氨基酸的復(fù)雜培養(yǎng)基成分，如酵母提取物、蛋白胨、CSL等等后，該微生物可以在發(fā)酵條件下增殖直到微生物濃度達(dá)到發(fā)酵所希望的穩(wěn)定態(tài)。這里，液體培養(yǎng)基(l)中存在的糖被代謝并且形成所希望的代謝產(chǎn)物(也稱作分批法或分批相)。當(dāng)進(jìn)行補(bǔ)料分批方法時(shí)，將通過提供根據(jù)本發(fā)明的方法可以得到的另一液體培養(yǎng)基(l)和不同于液體培養(yǎng)基(l)的糖源，尤其通過提供將液體培養(yǎng)基(l)與不同于液體培養(yǎng)基(l)的糖原料混合得到的液體培養(yǎng)基繼續(xù)發(fā)酵過程，并且微生物過量產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物在發(fā)酵液中積累，代謝產(chǎn)物可能存在于所述微生物的細(xì)胞中和發(fā)酵培養(yǎng)基的水相中。發(fā)酵將優(yōu)選以補(bǔ)料分批法進(jìn)行。為此，將按照這樣的程序，其中首先使用含糖的液體培養(yǎng)基，如使用液體培養(yǎng)基(l)或者另一種糖原料進(jìn)行增殖，直到發(fā)酵罐中達(dá)到希望的微生物濃度。之后，將液體培養(yǎng)基(l)與所述另一糖原料一起喂飼到發(fā)酵罐中，所述糖原料即可代謝的單糖、二糖和/或寡糖或者包含濃度為按重量計(jì)至少50%單糖、二糖和/或寡糖并且基本上沒有不溶于水的固體的培養(yǎng)基。這維持發(fā)酵過程，并且^t生物過量產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物在發(fā)酵液中積累(見上文)。喂飼的含糖液體培養(yǎng)基(l)和向分批培養(yǎng)基中最初導(dǎo)入并且包含微生物的其他糖原料的體積比通常為約1:10到10:1，優(yōu)選約1:5到5*.1,特別到5:1。通過含糖液體培養(yǎng)基的喂銅速率可以控制發(fā)酵液中的糖含量。通常，將以這樣的方式調(diào)節(jié)喂飼速率使得發(fā)酵液中的單糖含量為按重量計(jì)>0%到按重量計(jì)約5%，并且尤其不超過按重量計(jì)3%的值。步驟a2)中得到的含糖液體培養(yǎng)基或者其與另一糖原料的混合物如果合適，可以在發(fā)酵前滅菌，所述微生物通常被熱或者化學(xué)方法破壞。為此，通常將含糖液體培養(yǎng)基在高于80'C的溫度加熱。細(xì)胞的破壞或裂解可以在臨發(fā)酵前發(fā)生。為此，將所有的含糖液體培養(yǎng)基進(jìn)行裂解或破壞。這可以通過熱、機(jī)械或者化學(xué)手段進(jìn)行。本發(fā)明尤其涉及產(chǎn)生有機(jī)的非揮發(fā)性化合物的方法，所述化合物具有至少3個(gè)C原子或者具有至少2個(gè)C原子和至少1個(gè)N原子。在該上下文中，將非揮發(fā)性有機(jī)化合物理解為指在不經(jīng)歷分解的情況下通過蒸餾不能從發(fā)酵液回收的那些化合物。通常，這些化合物具有高于水的沸點(diǎn)的沸點(diǎn)，在大氣壓下通常高于150°C，尤其高于200X:。通常，它們是在標(biāo)準(zhǔn)條件(298K，101.3kPa)下為固體的化合物。然而，還可能在發(fā)酵中使用根據(jù)本發(fā)明的含糖液體培養(yǎng)基來生產(chǎn)非揮發(fā)性微生物代謝產(chǎn)物，其在大氣壓下具有低于水的沸點(diǎn)的熔點(diǎn)和/或油性稠度。術(shù)語非揮發(fā)性微生物代謝產(chǎn)物尤其包括有機(jī)的單、二和三羧酸，其優(yōu)選地具有3到10個(gè)碳原子，并且適當(dāng)時(shí)附著有一個(gè)或多個(gè)(例如1、2、3或4個(gè))羥基，例如酒石酸、衣康酸、琥珀酸、丙酸、乳酸、3-羥基丙酸、延胡索酸、馬來酸、2，5-呋喃二羧酸、戊二酸、乙酰丙酸、葡糖酸、烏頭酸和二氨基庚二酸、檸檬酸；產(chǎn)蛋白質(zhì)的的和不產(chǎn)蛋白質(zhì)的氨基酸，例如賴氨酸、谷氨酸、曱硫氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、色氨酸和蘇氨酸；噪呤和嘧咬堿基；核苷和核苷酸，例如煙酰胺腺噪呤二核苷酸(NAD)和腺苦-5，-單磷酸(AMP);脂類；優(yōu)選具有10到22個(gè)碳原子的飽和和不飽和的脂肪酸，例如，亞麻酸、二高-y-亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸；優(yōu)選具有3到8個(gè)碳原子的二元醇，例如丙二醇和丁二醇；具有3個(gè)或更多(例如3、4、5或6個(gè))OH基團(tuán)的多元醇(也稱作具有高官能度的醇)，例如甘油、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇和阿拉伯糖醇；具有至少4個(gè)碳原子(例如4到22個(gè)碳原子)的長鏈(也稱作較長鏈)醇，例如丁醇；糖類，例如透明質(zhì)酸和海藻糖；芳香族化合物，例如芳香族胺、香草醛和靛藍(lán)；維生素和維生素原，例如抗壞血酸、維生素B6、維生素Bu和核黃素，輔因子和已知的營養(yǎng)藥；蛋白質(zhì)如酶，例如淀粉酶，果膠酶，酸性、雜合或中性的纖維素酶，酯酶如脂肪酶，胰腺酶，蛋白酶，木聚糖酶和氧化還原酶如漆酶、過氧化氫酶和過氧化物酶，葡聚糖酶，肌醇六磷酸酶；類胡蘿卜素，例如番茄紅素、p-胡蘿卜素、蝦青素、玉米黃素和角黃素；優(yōu)選具有3到10個(gè)碳原子和適當(dāng)時(shí)1個(gè)或多個(gè)羥基基團(tuán)的酮，例如丙酮和3-羥基丁酮；內(nèi)酯，例如Y-丁內(nèi)酯、環(huán)糊精、生物聚合物例如聚羥基乙酸酯、聚酯例如聚交酯、多糖、聚類異戊二烯、聚酰胺；和上述化合物的前體和衍生物。適合用作不揮發(fā)微生物代謝產(chǎn)物的其它化合物由Gutcho描述于ChemicalsbyFermentation,NoyesDataCorporation(1973),ISBN:0818805086中。術(shù)語"輔因子"包含正常酶活性發(fā)生所需的非蛋白質(zhì)的化合物。這些化合物可以是有機(jī)的或無機(jī)的；優(yōu)選本發(fā)明的輔因子分子是有機(jī)的。這類分子的實(shí)例是NAD和煙酰胺腺噤呤二核香酸磷酸(NADP);這些輔因子的前體是煙酸。術(shù)語"營養(yǎng)藥，，包含促進(jìn)植物和動(dòng)物、尤其是人健康的食品添加劑。這類分子的實(shí)例是維生素、抗氧化劑和某些脂類，例如多不飽合脂肪酸。產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物尤其選自酶、氬基酸、維生素、二糖、具有3到10個(gè)C原子的脂肪族單羧酸和二羧酸、具有3到10個(gè)C原子的脂肪族羥基羧酸、具有3到IO個(gè)C原子的酮、具有4到IO個(gè)C原子的鏈烷醇和具有3到10個(gè)、尤其是3到8個(gè)C原子的鏈烷二醇(alkanediol)。技術(shù)人員明白這樣發(fā)酵產(chǎn)生的化合物在各情況下以使用的微生物產(chǎn)生的對映異構(gòu)體形式獲得(如果存在不同的對映異構(gòu)體的話)。因此，在氨基酸的情況下通常獲得各自的L-對映異構(gòu)體。如下文所詳細(xì)描迷的。它們可以是天然來源或經(jīng)遺傳修飾的。合適的微生物和發(fā)酵方法的實(shí)例為下文表A中給出的那些:表A:<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，被產(chǎn)生的有機(jī)化合物選自任選地連接有羥基并具有3到10個(gè)碳原子的單羧酸、二羧酸和三羧酸、產(chǎn)蛋白質(zhì)的和不產(chǎn)蛋白質(zhì)的氨基酸、嘌呤堿基、嘧咬堿基；核苷、核苷酸、脂類；飽和和不飽和的脂肪酸；具有4到10個(gè)碳原子的二元醇、具有3個(gè)或更多羥基的多元醇、具有至少4個(gè)碳原子的長鏈醇、糖類、芳香族化合物、維生素、維生素原、輔因子、營養(yǎng)藥、蛋白質(zhì)、類胡蘿卜素、具有3到10個(gè)碳原子的酮、內(nèi)酯、生物聚合物和環(huán)糊精。本發(fā)明笫一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案涉及可以根據(jù)本發(fā)明獲得的含糖液體培養(yǎng)基用于發(fā)酵產(chǎn)生酶的用途，所述酶是例如肌醇六磷酸酶、木聚糖酶或葡本發(fā)明第二個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案涉及可以根據(jù)本發(fā)明獲得的含糖液體培養(yǎng)基用于發(fā)酵產(chǎn)生氨基酸的用途，所述氨基酸是如賴氨酸、曱疏氨酸、蘇氛酸。本發(fā)明另一優(yōu)選的實(shí)施方案涉及可以根據(jù)本發(fā)明獲得的含糖液體培養(yǎng)基用于發(fā)酵產(chǎn)生維生素的用途，所述維生素是如泛酸和核黃素，及其前體和4汙生物。本發(fā)明的其他進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案涉及根據(jù)本發(fā)明可以得到的含糖液體培養(yǎng)基在下列化合物的發(fā)酵生產(chǎn)中的用途國具有3到IO個(gè)碳原子的單和二羧酸，尤其脂肪族單、二和三羧酸，例如丙酸、延胡索酸和琥珀酸；國具有3到10個(gè)C原子的脂肪族羥基羧酸，例如乳酸；-如上所述的長鏈鏈烷醇，尤其是具有4到10個(gè)C原子的鏈烷醇，例如丁醇；-如上所述的二元醇，尤其是具有3到10個(gè)、尤其是3到8個(gè)C原子的鏈烷二醇，例如丙二醇；國如上所述的酮，尤其是具有3到IO個(gè)C原子的酮，例如丙酮；和-如上所述的糖類，尤其是二糖，如海藻糖。在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是聚羥鏈烷酸，例如聚-3-羥基丁酸和與其它有機(jī)羥基羧酸的共聚多酯，所述其它有機(jī)羥基羧酸例如3-羥基戊酸、4-羥基丁酸和描述于Steinbiichel(上文所述)中的其它有機(jī)羥基羧酸，包括例如長鏈(也稱作較長鏈)的羥基羧酸，如3-羥基辛酸、3-羥基癸酸和3-羥基十四烷酸及其混合物。為了進(jìn)行發(fā)酵，39可以使用已經(jīng)例如在S.Y.Lee，PlasticBacteriaProgressandprospectsforpolyhydroxyalkanoateproductioninbacteria,Tibtech,Vol.14，(1996)，pp.431-438中描述用于其它碳原料的類似條件和步驟。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，可用于發(fā)酵的微生物因此選自天然或重組的微生物，所述微生物過量產(chǎn)生至少一種以下的代謝產(chǎn)物-酶，例如肌醇六磷酸酶、木聚糖酶或葡聚糖酶；-氨基酸，例如賴氨酸、蘇氨酸或曱硫氨酸；-維生素，例如泛酸和核黃素；和它們的前體和/或衍生物；-二糖，如海藻糖；-具有3到10個(gè)碳原子的脂肪族單和二羧酸，例如丙酸、延胡索酸和琥珀酸；-具有3到10個(gè)C原子的脂肪族羥基羧酸，例如乳酸；-聚羥鏈烷酸，例如聚-3-羥基丁酸和3-羥基丁酸的共聚多酯；-具有3到10個(gè)C原子的酮，例如丙酮；-具有4到10個(gè)C原子的鏈烷醇，例如丁醇；和-具有3到8個(gè)C原子的鏈烷二醇，例如丙二醇。合適的微生物通常選自棒桿菌屬(Corynebacterium)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、阿舒嚢霉屬(Ashbya)、埃希氏菌屬(Escherichia)、曲霉屬(Aspergillus)、產(chǎn)械菌屬(Alcaligenes)、放線桿菌屬(Actinobacillus)、厭氧螺菌屬(Anaerobiospirillum)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、丙酸桿菌屬(Propionibacterium)、根霉屬(Rhizopus)和梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)，尤其是選自谷氨酸棒桿菌(Corynebacteriumglutamicum)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、棉阿舒嚢霉(Ashbyagossypii)、大腸桿菌(Escherichiacoli)、黑曲霉(Aspergillusniger)或廣泛產(chǎn)械菌(Alcaligeneslatus)、Anaerobiospirillumsucdniproducens、Actinobacillussuccinogenes、德氏享L軒菌(Lactobacillusdelbriickii)、Lactobacillusleichmannii、阿拉伯糖丙酸軒菌(Propionibacteriumarabinosum)、Propionibacteriumschermanii、費(fèi)氏丙酸軒菌(Propionibacteriumfreudenreichii)、丙酸梭菌(Clostridiumpropionicum)、蚊酸乙酸梭菌(Clostridiumformicoaceticum)、醋酪酸梭狀芽孢桿菌、少根根霉(Rhizopusarrhizus)和米根霉(Rhizopusoryzae)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)酵中使用的微生物是棒桿菌屬的菌林，尤其是谷氨酸棒桿菌的菌林。過量產(chǎn)生氨基酸，特別是賴氨酸、曱硫氨酸或谷氨酸的尤其是棒桿菌屬的菌林，特別是谷氨酸棒桿菌的菌林。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)酵中使用的微生物是埃希氏菌屬，尤其是大腸桿菌。其尤其是過量產(chǎn)生氨基酸(特別是賴氨酸、甲硫氨酸或蘇氨酸)的埃希氏菌屬菌株，特別是大腸桿菌。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是賴氨酸。為了進(jìn)行發(fā)酵，可以使用已經(jīng)針對其它碳原料描述的類似條件和步驟，例如在上文所述的Pfefferle等和US3，708，395中所描述。原則上，連續(xù)和不連續(xù)(分批或補(bǔ)料分批)的操作模式都是合適的，優(yōu)選補(bǔ)料分批模式。在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是甲硫氨酸。為了進(jìn)行發(fā)酵，可使用針對其它碳原料描述的類似條件和步驟，例如WO03/087386和WO03/100072中所述。在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是泛酸。為了進(jìn)行發(fā)酵，可使用例如WO01/021772中針對其它碳原料描述的類似條件和步驟。在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是核黃素。為了進(jìn)行發(fā)酵，可使用例如WO01/011052、DE19840709、WO98/29539、EP1186664和Fujioka，K.:Newbiotechnologyforriboflavin(vitaminB2)andcharacterofthisriboflavin.FragranceJournal(2003)，31(3)，44-48中針對其它碳原料描述的類似條件和步驟。在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是延胡索酸。為了進(jìn)行發(fā)酵，可使用例如Rhodesetal，ProductionofFumaricAcidin20—LFermentors,AppliedMicrobiology,1962，10(1)，9-15中針對其它碳原料描述的類似條件和步驟。在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是琥珀酸。為了進(jìn)行發(fā)酵，可4吏用例如Int.J.Syst.Bacteriol.26，498-504(1976);EP249773(1987)，Lemme&Datta;US5504004(1996)，Guettler，Jain&Soni;Arch.Microbiol.167，332—342(1997);GuettlerMV，RumlerD，JainMK.，Actinobacillussuccinogenessp.nov.，anovelsuccinic畫acid-producingstrainfromthebovinerumen.IntJSystBacteriol.1999Jan;49Pt1:207-16;US5,723,322，US5,573,931、US5,521,075、WO99/06532、US5,869,301或US5,770,435中針對其它碳原料描述的類似條件和步驟。在另一特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物是肌醇六磷酸酶。為了進(jìn)行發(fā)酵，可使用例如WO98/55599中針對其它碳原料描述的類似條件和步驟。發(fā)酵產(chǎn)生發(fā)酵液，所述發(fā)酵液除了所期望的微生物代謝產(chǎn)物外，主要含有發(fā)酵中產(chǎn)生的生物量、糖化的淀粉溶液的未代謝的組分，和尤其是淀粉原料的非淀粉固體組分，例如纖維和未利用的糖，以及未利用的緩沖液和營養(yǎng)鹽。在本申請中，該液體培養(yǎng)基也稱作發(fā)酵液，術(shù)語發(fā)酵液也包含(含糖)液體培養(yǎng)基，其中存在的糖僅進(jìn)行部分或不完全的發(fā)酵轉(zhuǎn)化，即其中發(fā)生可利用的糖(例如單糖和二糖)的部分或不完全的微生物代謝。在分離或耗盡微生物代謝產(chǎn)物之前或去除發(fā)酵液的揮發(fā)性組分之前，可以以上述方式進(jìn)行滅菌步驟。本發(fā)明的特定實(shí)施方案涉及方法，該方法中至少一種微生物代謝產(chǎn)物被從發(fā)酵液中耗盡或分離。隨后去除發(fā)酵液的大部分揮發(fā)性組分，得到固體或半固體蛋白質(zhì)組合物。進(jìn)行這類耗盡的更詳細(xì)描述，以及獲得的蛋白質(zhì)組合物的更纖細(xì)描述是本申請公司的WO2005/116228(PCT/EP2005/005728)的主題，其涉及進(jìn)一步的細(xì)節(jié)。從發(fā)酵液中分離或耗盡代謝產(chǎn)物，即具有至少3個(gè)C原子或至少2個(gè)C原子和至少1個(gè)N原子的有機(jī)化合物(下文中也稱作價(jià)值產(chǎn)物)通常以下迷方式進(jìn)行至少一種代謝產(chǎn)物被從發(fā)酵液中耗盡或分離，使得發(fā)酵液中該代謝產(chǎn)物的含量維持在按重量計(jì)不多于20%、尤其是按重量計(jì)不多于10%、特別是按重量計(jì)不多于5%、非常特別地按重量計(jì)不多于2.5%，每種情況下以剩余的發(fā)酵液總重為基礎(chǔ)。微生物代謝產(chǎn)物可以在一個(gè)或多個(gè)步驟中從發(fā)酵液中被分離或耗盡。該上下文中的一個(gè)關(guān)鍵步驟是從發(fā)酵液中去除固體組分。這可以在分離價(jià)值產(chǎn)物之前或之后進(jìn)行。本領(lǐng)域常規(guī)4吏用的方法(其也包括用于粗清潔和精純化價(jià)值產(chǎn)物的步驟和用于配制的步驟)是已知用于分離價(jià)值產(chǎn)物和用于去除固體的，即固液相分離(例如描述于Belter,P.A，Bioseparations:DownstreamProcessingforBiotechnology,JohnWiley&Sons(1988),和Ullmann，sEncyclopediaofIndustrialChemistry,第五版CD-ROM上，Wiley-VCH)。為了分離價(jià)值產(chǎn)物，隨后可有利地進(jìn)行一個(gè)步驟，其中首先例如借助于離心或過濾將固體組分從發(fā)酵液中去除，隨后例如通過結(jié)晶、沉淀、吸附或蒸餾將價(jià)值產(chǎn)物從液相中分離?；蛘?，價(jià)值產(chǎn)物也可以通過例如使用層析方法或萃取方法從發(fā)酵液中直接分離。必須提到的層析方法尤其是離子交換層析，其中價(jià)值產(chǎn)物可以在層析柱上選擇性地被分離。在該情況下，例如通過傾析、蒸發(fā)和/或干燥有利地從剩余的發(fā)酵液中去除固體。在揮發(fā)性或油性化合物的情況下，通常必須在加工期間、尤其在干燥期間監(jiān)測最大溫度。也可以通過將其配制在吸附劑上的假固體形式中有利地制備這些化合物。適用于該目的的吸附劑詳細(xì)地描述于例如本申請公司的WO2005/116228(PCT/EP2005/005728)中?？梢杂欣匾赃@種方式制備的化合物的實(shí)例為"亞麻酸、二高-y亞麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸，以及丙酸、乳酸、丙二醇、丁醇和丙酮。就本發(fā)明的目的而言，假固體制劑中的這些化合物也被理解為固體形式的非揮發(fā)性微生物代謝產(chǎn)物。另一特定實(shí)施方案涉及一種方法，其中發(fā)酵液的揮發(fā)性組分大部分或完全被去除，而之前不分離或耗盡非揮發(fā)性微生物代謝產(chǎn)物，并且如果適當(dāng)?shù)脑?，之前不去除至少一些固體組分，得到非揮發(fā)性微生物代謝產(chǎn)物的固體制劑。進(jìn)行這類方法的更詳細(xì)的描述可見于本申請公司的43PCT/EP2006/066057(較早專利申請為DE102005042541.0)。"大部分，，表示一旦揮發(fā)性組分被去除，固體或至少半固體的殘余物如果適當(dāng)?shù)脑捒梢酝ㄟ^添加固體被轉(zhuǎn)化為固體產(chǎn)物。通常，這表示揮發(fā)性組分的去除低至按重量計(jì)不多于30%、通常按重量計(jì)不多于20%、尤其是按重量計(jì)不多于15%的殘余水分含量。通常，發(fā)酵液的揮發(fā)性組分會有利地從發(fā)酵液中去除，低至按重量計(jì)0.2%到30%、優(yōu)選按重量計(jì)1%到20%、特別優(yōu)選按重量計(jì)2%到15%、非常特別優(yōu)選按重量計(jì)5%到15%范圍內(nèi)的殘余水分含量，其以干燥后測定的固體組分的總重為基礎(chǔ)?？梢酝ㄟ^技術(shù)人員熟悉的常規(guī)方法測定殘余的水分含量，例如借助于熱重量分析法(Hemminger等，MethodenderthermischenAnalyse[Methodsofthermalanalysis]，SpringerVerlag，Berlin,Heidelberg,1989)。以固體形式從發(fā)酵液中獲得不揮發(fā)代謝產(chǎn)物可以在一個(gè)、兩個(gè)或更多步驟中，尤其是在一步或兩步的操作中達(dá)成。通常，用于以固體形式獲得代謝產(chǎn)物的至少一個(gè)步驟，尤其是最終步驟應(yīng)包括干燥步驟。在一步操作中，發(fā)酵液的揮發(fā)性組分會被去除，如果適當(dāng)?shù)脑捲谇笆龀醪饺コ?，直到達(dá)到期望的殘余水分含量。在兩步或多步操作中，應(yīng)首先例如通過過濾(微量過濾、超濾)濃縮發(fā)酵液，或通過蒸發(fā)一部分揮發(fā)性組分熱濃縮發(fā)酵液。在該步驟中被去除的揮發(fā)性組分的量通常總計(jì)為按重量計(jì)10%到80%、尤其是按重量計(jì)20%到70%，所述量以發(fā)酵液的揮發(fā)性組分的干重為基礎(chǔ)。在一個(gè)或多個(gè)步驟隨后的中，發(fā)酵液的殘余的揮發(fā)性組分被去除，直到達(dá)到期望的殘余水分含量。根據(jù)該實(shí)施方案，揮發(fā)性組分基本上被從液體培養(yǎng)基中去除，不事先耗盡或事實(shí)上分離價(jià)值產(chǎn)物。因此，當(dāng)去除發(fā)酵液的揮發(fā)性組分時(shí)，非揮發(fā)性代謝產(chǎn)物基本上不與液體培養(yǎng)基的揮發(fā)性組分一起被去除，而是與來自發(fā)酵液的至少一部分、通常大部分和尤其是所有的其它固體組分一起保留在得到的殘余物中。然而，因此可能在去除發(fā)酵液的揮發(fā)性組分時(shí)與其一起去除一定量(優(yōu)選小量)的期望的非揮發(fā)性微生物代謝產(chǎn)物，通常按重量計(jì)不多于20%、例如按重量計(jì)0.1%到20%，優(yōu)選不多于10%、尤其按重量計(jì)不多于5%、特別優(yōu)選按重量計(jì)不多于2.5%、非常特別優(yōu)選按重量計(jì)不多于1%，所述用量以代謝產(chǎn)物的總干重為&出。在非常特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，期望的不揮發(fā)微生物代謝產(chǎn)物作為混合物中的固體，維持為按重量計(jì)至少卯。/。、尤其是按重量計(jì)至少95%、特別是按重量計(jì)至少99%、非常特別是按重量計(jì)約100%,每種情況以代謝產(chǎn)物總干重為基礎(chǔ)，所述物，或者是與發(fā)酵培養(yǎng)基的所有固體組分的混合物。如果期望的話，可以在去除揮發(fā)性組分前，例如借助于離心或過濾將一部分非淀粉固體組分從發(fā)酵液中分離，所述部分例如為按重量計(jì)5%到80%,尤其是按重量計(jì)30%到70%。如果適當(dāng)?shù)脑拺?yīng)進(jìn)行這類初步分離，從而去除粗固體顆粒，所述顆粒不包含或僅包含小量的非揮發(fā)性微生物代謝產(chǎn)物。該初步過濾可以使用技術(shù)人員已知的常規(guī)方法進(jìn)行，例如使用粗篩、網(wǎng)、穿孔板(perforatedorificeplates)等。如果適當(dāng)?shù)脑?，也可以在離心力分離器中分離粗固體顆粒。此處使用的儀器如傾析器、離心機(jī)、sedicanters和分離器也是技術(shù)人員已知的。以此種方式獲得固體或半固體的(例如糊狀的)殘余物，所述殘余物包含非揮發(fā)性代謝產(chǎn)物和淀粉原料的非揮發(fā)性、通常是固體的、非淀粉的組分或其至少一大部分，通常按重量計(jì)至少90%或所有的固體非淀粉組分。與發(fā)酵的固體組分一起存在的干的代謝產(chǎn)物的特性可以通過添加配制輔料(如載體和包衣材料、粘合劑和其它添加劑)，以本身已知的方式，特別是根據(jù)多種參數(shù)配制，所述參數(shù)如活性物質(zhì)含量、顆粒尺寸、顆粒形狀、成塵趨勢、吸濕性、穩(wěn)定性尤其是儲存穩(wěn)定性、顏色、氣味、流動(dòng)行為、團(tuán)聚趨勢、靜電荷、對光和溫度的敏感性、機(jī)械穩(wěn)定性和再分散性。常規(guī)使用的配制輔料包括例如粘合劑、載體材料、成粉/流動(dòng)佐劑，另外有色素、殺生物劑、^:劑、消泡劑、粘度調(diào)節(jié)劑、酸、堿、抗氧化劑、酶穩(wěn)定劑、酶抑制劑、吸附劑、脂肪、脂肪酸、油或這些的混合物。這類配方輔料有利地作為干燥助劑使用，尤其是使用例如噴霧千燥、流化床干燥和冷凍干燥的配制和干燥方法時(shí)。進(jìn)一步的細(xì)節(jié)可見于PCT/EP2006/066057(較早申請DE102005042541.0)。上述添加劑和適當(dāng)時(shí)其它添加劑(如包衣材料)的用量可顯著變化，取決于所述代謝產(chǎn)物的特定要求和使用的添加劑的特征，并可以例如在按重量計(jì)0.1%到80%的范圍內(nèi)，尤其是按重量計(jì)從1%到30%的范圍內(nèi)，各情況下以完成配制形式的產(chǎn)物或物質(zhì)混合物的總重為fc出。配制輔料的添加可以在加工發(fā)酵液(也稱作產(chǎn)物配制或固體設(shè)計(jì))之前、期間或之后進(jìn)行，尤其是在干燥期間進(jìn)行。在加工發(fā)酵液或代謝產(chǎn)物之前添加配制輔料可以是有利的，尤其是對促進(jìn)要加工的物質(zhì)或產(chǎn)物的可加工性是有利的。配制輔料可以添加至固體形式獲得的代謝產(chǎn)物中，或添加至含有代謝產(chǎn)物的溶液或懸浮液中，例如在發(fā)酵完成后直接添加進(jìn)發(fā)酵液中或在加工期間和最后的干燥步驟之前添加進(jìn)獲得的溶液或懸浮液中。因此，例如輔料可以與微生物代謝產(chǎn)物的懸浮液混合；這類懸浮液也可以例如通過噴霧或混合應(yīng)用于栽體材料。在干燥期間添加配制輔料可以是重要的，例如當(dāng)包含代謝產(chǎn)物的溶液或懸浮液被噴霧時(shí)。配制輔料的添加尤其是在干燥后進(jìn)行，例如當(dāng)對干燥的顆粒應(yīng)用包衣/包衣層時(shí)。也可以在干燥后和任選的包衣步驟后對產(chǎn)物應(yīng)用其它輔料。從發(fā)酵液中去除揮發(fā)性組分以本身已知的方式、通過用于將固相從液相中分離的常規(guī)方法進(jìn)行，所述方法包括過濾方法和蒸發(fā)液相的揮發(fā)性組分的方法。這類方法(其也可以包含用于粗清潔價(jià)值產(chǎn)物的步驟和配制步驟)描述于侈ij^口Belter,P.A，Bioseparations:DownstreamProcessingforBiotechnology,JohnWiley&Sons(1988)和Ullmann，sEncyclopediaofIndustrialChemistry,5thed.onCD-ROM,Wiley-VCH中。發(fā)酵結(jié)束后產(chǎn)物配制或加工的范圍內(nèi)可以使用的、技術(shù)人員已知的方法、儀器、輔料和一般或特定的實(shí)施方案進(jìn)一步描述于EP1038527、EP0648076、EP835613、EP0219276、EP0394022、EP0547422、EP1088486、WO98/55599、EP0758018和WO92/12645中。在該實(shí)施方案的一個(gè)變型中，非揮發(fā)性微生物代謝產(chǎn)物如果以溶解的形式存在于液相中，將例如通過結(jié)晶或沉淀從液相中轉(zhuǎn)化進(jìn)入固相中。此后，非揮發(fā)性固體組分(包括代謝產(chǎn)物)例如借助于離心、傾析或過濾被分離。油性4義謝產(chǎn)物也可以以類似的方式^皮分離，所述油性發(fā)酵產(chǎn)物通過添加吸附劑(例如二氧化硅、硅膠、壤土、粘土和活性炭)被轉(zhuǎn)化成為固體形式。在該實(shí)施方案的第二個(gè)變型中，揮發(fā)性組分通過蒸發(fā)被去除。蒸發(fā)可以以本身已知的方式進(jìn)行。用于蒸發(fā)揮發(fā)性組分的合適方法的實(shí)例是噴霧干燥、流化床干燥或流化床團(tuán)聚、冷凍干燥、氣流干燥器(pneumaticdriers)和接觸干燥器，以及擠壓干燥。也可以進(jìn)行上述方法與形狀賦予方法(shape-impartingmethod,例如擠壓、造粒(pelleting)或成球(prilling))的組合。在這些最后提到的方法中，優(yōu)選部分或主要地使用含預(yù)干燥的代謝產(chǎn)物的物質(zhì)混合物。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，發(fā)酵液的揮發(fā)性組分的去除包括噴霧干燥方法或流化床干燥方法，包括流化床顆粒化。為此，如果適當(dāng)?shù)脑捲诔醪椒蛛x以去除粗固體顆粒(其僅包含小量的不揮發(fā)微生物代謝產(chǎn)物，如果有的話)后，將發(fā)酵液補(bǔ)料進(jìn)一個(gè)或多個(gè)噴霧干燥或流化床干燥裝置中。固體負(fù)荷的發(fā)酵液的運(yùn)輸或補(bǔ)料方便地借助于常規(guī)運(yùn)輸設(shè)備進(jìn)行，所述設(shè)備用于含固體的液體，例如泵，如偏心單轉(zhuǎn)子螺旋泵(例如來自于DelascoPCM)或高壓泵(例如來自于LEWAHerbertOttGmbH)。發(fā)酵也可以以如下方式進(jìn)行(i)將以總重為基礎(chǔ)按重量計(jì)不多于50%、例如按重量計(jì)在5%到45%范圍內(nèi)的一部分從在步驟a2)中獲得的液體培養(yǎng)基(l)或其與另一糖原料的混合物中去除，并將剩余部分(如果合適，與上文定義的另一糖原料一起)提供給用于產(chǎn)生第一種代謝產(chǎn)物(A)的發(fā)酵，例如固體形式的不揮發(fā)代謝產(chǎn)物(A)或揮發(fā)性代謝產(chǎn)物(A);和(ii)如果適當(dāng)?shù)脑?，在先前去除了淀粉原料的所有或一些非淀粉固體組分之后，將該;波去除的部分(如果合適，與如上文定義的另一糖原料一起)提供給用于產(chǎn)生第二種代謝產(chǎn)物(B)的發(fā)酵，所述第二種代謝產(chǎn)物與代謝產(chǎn)物(A)相同或不同。如果(ii)的非淀粉固體組分被分離，則液體培養(yǎng)基剩余部分的固體含量總計(jì)為優(yōu)選按重量計(jì)不多于50%、尤其是按重量計(jì)不多于30%、特別優(yōu)選按重量計(jì)不多于10%、非常特別優(yōu)選按重量計(jì)不多于5%。在這類情況下，尤其優(yōu)選在用于產(chǎn)生第二種代謝產(chǎn)物(B)的發(fā)酵之前分離所有的固體。該步驟使得可能在(ii)的獨(dú)立發(fā)酵中使用下述微生物，所述微生物的某些最小需要(例如關(guān)于輸氧率)必須被滿足。用于(ii)的獨(dú)立發(fā)酵中的合適微生物是例如芽孢桿菌物種，優(yōu)選枯草芽孢桿菌。由這類微生物在獨(dú)立發(fā)酵中產(chǎn)生的化合物尤其選自維生素、輔因子和營養(yǎng)藥、嘌呤和嘧吱堿基、核苷和核苷酸、脂類、飽和和不飽和的脂肪酸、芳香族化合物、蛋白質(zhì)、類胡蘿卜素，特別是選自維生素、輔因子和營養(yǎng)藥、蛋白質(zhì)和類胡蘿卜素，非常特別選自核黃素和泛酸鈣。該步驟的優(yōu)選的實(shí)施方案涉及在兩個(gè)獨(dú)立的發(fā)酵中平行產(chǎn)生相同的代謝產(chǎn)物(A)和(B)。這是有利的，尤其是相同的代謝產(chǎn)物的不同應(yīng)用具有不同的純度要求時(shí)。因此，使用含固體的發(fā)酵液產(chǎn)生第一種代謝產(chǎn)物(A),例如要用作飼料添加劑的氨基酸(例如賴氨酸、甲硫氨酸、蘇氨酸或谷氨酸)；而使用(ii)的固體被耗盡的發(fā)酵液產(chǎn)生相同的第二種代謝產(chǎn)物(B)，例如要用作食物添加劑的相同氨基酸。由于非淀粉固體組分的完全或部分去除，加工代謝產(chǎn)物時(shí)純化的復(fù)雜性可以被降低，所述代謝產(chǎn)物的應(yīng)用領(lǐng)域具有更高的純度要求，例如作為食品添加劑。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，該步驟可以例如如下進(jìn)行。用于產(chǎn)生代謝產(chǎn)物A(例如氨基酸如賴氨酸、曱疏氨酸、谷氨酸或蘇氨酸)或檸檬酸或乙醇優(yōu)選的大體積發(fā)酵例如才艮據(jù)WO2005/116228(PCT/EP2005/005728)或PCT/EP2006/066057(較早申請DE102005042541.0)、或根據(jù)已知的生物乙醇發(fā)酵生產(chǎn)的現(xiàn)有技術(shù)實(shí)現(xiàn)(見上文)。根據(jù)(i)，去除在步驟a2)中獲得的一些液體培養(yǎng)基(l)或除去其與所述另一糖原料的混合物。根據(jù)(i)被去除的部分可以通過常規(guī)方法根椐(ii)完全或部分沒有固體，所述常規(guī)方法例如離心或過濾，取決于發(fā)酵產(chǎn)生B的需要。以此種方式獲得的液體培養(yǎng)基(l)(如果合適與上文定義的另一糖原料一起)根據(jù)(ii)被喂飼給用于產(chǎn)生代謝產(chǎn)物B的發(fā)酵中，所述液體培養(yǎng)基(l)任選全部或部分地沒有固體。才艮據(jù)(ii)分離的固體流被有利地返回大體積發(fā)酵的含糖液體培養(yǎng)基的流中。如果在大體積發(fā)酵中產(chǎn)生的微生物代謝產(chǎn)物(A)是乙醇，將其從液體培養(yǎng)基(l)回收。液體培養(yǎng)基(l)現(xiàn)在將具有乙醇(生物乙醇)的發(fā)酵產(chǎn)生中常規(guī)的糖濃度，例如按重量計(jì)從20%到30%的范圍內(nèi)。通常，步驟(l)中得到的含糖液體培養(yǎng)基(l)的剩余物在該程序中被提供給發(fā)酵以產(chǎn)生A(即，在該情況中為乙醇)。如果合適，在根據(jù)步驟(ii)除去固體后，將步驟(l)中除去的含糖液體培養(yǎng)基(l)的部分與另一糖原料一起提供給B的發(fā)酵生產(chǎn)。在上述步驟的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物B是核黃素。為了進(jìn)行發(fā)酵，可以使用例如WO01/011052、DE19840709、WO98/29539、EP1186664和Fujioka，K.:Newbiotechnologyforriboflavin(vitaminB2)andcharacterofthisriboflavin.FragranceJournal(2003)，31(3),44-48中針對其他碳原料描述的類似條件和步驟。為了進(jìn)行該方法的變型，如上所迷進(jìn)行優(yōu)選的大體積發(fā)酵用于產(chǎn)生代謝產(chǎn)物A，例如氨基酸如賴氨酸、谷氨酸、蘇氨酸或甲硫氨酸，或檸檬酸或乙醇。根據(jù)(i)，在步驟a2)中獲得的含糖液體培養(yǎng)基的一些通過常規(guī)方法被去除并根據(jù)(ii)被完全或部分地沒有固體，所迷常規(guī)方法例如為離心或過濾。從中獲得的幾乎完全或部分地沒有固體的含糖液體培養(yǎng)基根據(jù)(ii)在加入另一糖原料后^皮提供給用于產(chǎn)生代謝產(chǎn)物B的發(fā)酵中，所述代謝產(chǎn)物B在本情況下為核黃素。根據(jù)(ii)分離的固體流被有利地返回大體積發(fā)酵的含糖液體培養(yǎng)基的流中。如此根據(jù)(ii)產(chǎn)生的含核黃素的發(fā)酵液可以例如通過DE4037441、EP464582、EP438767和DE3819745中針對其他碳原料描述的類似條件和步驟加工。在細(xì)胞量裂解之后，將以結(jié)晶形式存在的核黃素被分離，優(yōu)選通過傾析分離。分離固體的其他途徑(例如過濾)也是可能的。此后優(yōu)選借助于噴霧干燥器和流化床干燥器干燥核黃素?；蛘撸梢酝ㄟ^例如EP1048668和EP730034中描述的類似條件和使用類似步驟加工根據(jù)(ii)產(chǎn)生的含核黃素的發(fā)酵混合物。巴氏消毒后，離心發(fā)酵液并用無機(jī)酸處理剩余的含固體級分。通過離心將形成的核黃素從水性酸性培養(yǎng)基中去除、洗滌，如果適當(dāng)?shù)脑掚S后干燥。在該步驟的另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，由微生物在發(fā)酵中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物B為泛酸。為了進(jìn)行發(fā)酵，可以使用例如WO01/021772中針對其他碳原料描述的類似條件和步驟。為了進(jìn)行該步驟變型，可以隨后進(jìn)行如上針對核黃素所述的步驟。將已經(jīng)根據(jù)i)進(jìn)行初步純化并優(yōu)選基本不含固體的含糖液體培養(yǎng)基(l)或其與所述另一糖原料的混合物提供給用于產(chǎn)生泛酸的才艮據(jù)ii)的發(fā)酵中。此處，與含固體的液體培養(yǎng)基相比粘度被降低的事實(shí)是尤其有利的。獨(dú)立的固體流優(yōu)選被返回大體積發(fā)酵的含糖液體培養(yǎng)基的流中。才艮據(jù)(ii)產(chǎn)生的含泛酸發(fā)酵液可以通過例如EP1050219和WO01/83799中針對其他碳原料描述的類似條件和使用類似步驟加工。當(dāng)所有的發(fā)酵液被巴氏消毒后，例如通過離心或過濾分離剩余的固體。在該固體分離步驟中得到的澄清流出液被部分蒸發(fā)，如果適當(dāng)?shù)脑捰寐然炋幚聿⒏稍铮绕涫菄婌F干燥。已經(jīng)被分離的固體可以與平行的大體積發(fā)酵方法范圍內(nèi)各自期望的微生物代謝產(chǎn)物(A)—起獲得。干燥和/或配制步驟后，可以向產(chǎn)物制劑或蛋白質(zhì)組合物中添加完整的或碾碎的谷物仁，優(yōu)選玉米、小麥、大麥、粟、黑小麥和/或黑麥。以下的實(shí)施例旨在闡述本發(fā)明的各方面，但是不應(yīng)以任何方式被理解為限制。實(shí)施例I.碾磨淀粉原料如下產(chǎn)生本文下文中使用的碾磨產(chǎn)物。使用轉(zhuǎn)子磨將完整的玉米仁充分磨碎。使用不同的打漿機(jī)、碾磨途徑或篩選元件，得到三種不同的精細(xì)程度。借助于實(shí)驗(yàn)室振動(dòng)篩(振動(dòng)分析儀RetschVibrotronicVE1型，篩分時(shí)間5分鐘，振幅1.5mm)對碾磨產(chǎn)物進(jìn)行的篩選分析得到表I中所列的結(jié)果。表I<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>II.淀粉的酶促液化和淀粉糖化II.l.糖化步驟中沒有肌醇六磷酸酶II.la)淀粉的酶促液化將320g干磨的玉米粉(T71/03)懸浮于480g水中并與310g氯化鈉通過連續(xù)攪拌混合。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中持續(xù)攪拌。用112804將？11調(diào)節(jié)至6.5并^奪混合物加熱至35"C后，添加2.4gL型Termamyl120L(NovozymesA/S)。在40分鐘的進(jìn)程中，將反應(yīng)混合物加熱至86.5'C的溫度，如果必要的話用NaOH將pH再調(diào)節(jié)至上述值。在30分鐘內(nèi)，再添加400g千磨的玉米粉(T71/03),期間將溫度提高到9in。將反應(yīng)混合物在該溫度保持約100分鐘。隨后再添加2.4g的Termamyl120L并將溫度維持約100分鐘。使用碘-淀粉反應(yīng)在實(shí)驗(yàn)期間監(jiān)測液化的進(jìn)程。最終將溫度提高到IO(TC并將反應(yīng)混合物煮沸20分鐘。在該時(shí)間點(diǎn)中，不再能夠檢測到淀粉。將反應(yīng)器冷卻至35°C。II.lb)糖化持續(xù)攪拌下將II.la)中得到的反應(yīng)混合物加熱到61X:。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中持續(xù)攪拌。用H2SO^吏pH達(dá)到4.3后，加入10.8g(9.15ml)DextrozymeGA(NovozymesA/S)。保持溫度約3小時(shí)，在該期間內(nèi)用葡萄糖試紙(Boehringer的S-Glucotest)監(jiān)測反應(yīng)的ii^。結(jié)果在下面的表II中列出。隨后將反應(yīng)混合物加熱到80X:，然后冷卻。這得到約1180g液體產(chǎn)物，密度為約1.2kg/1,通過紅外干燥器測定的干物質(zhì)含量達(dá)到按重量計(jì)約53.7%。用水洗滌后，得到按重量計(jì)約14%的千物質(zhì)含量(沒有水溶性成分)。如通過HPLC測定的反應(yīng)混合物的葡萄糖含量達(dá)到380g/l(見表2，樣品號7)。表II<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>II.2.在糖化步驟中使用肌醇六磷酸酶IL2a)淀粉液化如II.la)中所述將干磨的玉米粉樣品液化。IL2b)糖化恒定攪拌下將IL2a)中得到的反應(yīng)混合物加入到61°C。在整個(gè)反應(yīng)期間持續(xù)攪拌。用H:jS04使pH達(dá)到4.3后，加入10.8g(9.15ml)DextrozymeGA(NovozymesA/S)和70pl肌醇六磷酸酶(700單位肌醇六磷酸酶，NatuphytLiquid10000L,來自BASFAG)。保持溫度約3小時(shí)，在該期間內(nèi)用葡萄糖試紙(Boehringer的S-Glucotest)監(jiān)測反應(yīng)的選艮。隨后將反應(yīng)混合物加熱到80匸，然后冷卻。通過紅外干燥器得到產(chǎn)物并將其用水洗滌。通過HPLC測定反應(yīng)混合物的葡萄糖含量。II.3用于淀粉的i^l液化和糖化的其它方案IL3a)玉米粉向反應(yīng)容器中引入360g去離子水。向醪液中添加1.54ml的CaCl2儲存液(IOOgCaCl2x21120/1)至約70ppm〔32+的終濃度。向水中緩慢加入240g玉米粉，持續(xù)攪拌。用按重量計(jì)50%強(qiáng)度的NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)至6.5后，加入4.0ml(-按重量計(jì)2%酶/干物質(zhì))的L型Termamyl120L(NovozymesA/S)。然后將醪液(slurry)快速加熱至。在該過程中，持續(xù)監(jiān)測并在適當(dāng)時(shí)調(diào)節(jié)pH。達(dá)到最終溫度后，添加更多粉，最初添加50g粉。另外，向醪液中添加0.13ml的CaCh儲存液，從而將Ca"濃度維持在70ppm。添加中將溫度保持在恒定85。C。允許經(jīng)過至少10分鐘以確保在另一部分(50g粉和0.13ml的CaCl2儲存液)之前完全反應(yīng)。添加兩部分后，添加1.67mlTermamyl;之后再添加兩部分(每次50g粉和0.13ml的CaCh儲存液)。獲得按重量計(jì)55%的干物質(zhì)含量。添加后將溫度提高到100。C,并將醪液煮沸10分鐘。取樣并冷卻至室溫。用去離子水稀釋樣品(約1:10)后，加入一滴濃魯戈碘溶液(每升5g碘和10g碘化鉀的混合物)。濃藍(lán)色指出存在殘余的淀粉；當(dāng)所有的淀粉都被水解時(shí)觀察到棕色。當(dāng)測試指出存在一部分殘余的淀粉時(shí)，將溫度再次降低至85。C并保持恒定。再添加1.67ml的Termamyl直到碘-淀粉反應(yīng)呈陰性。對于隨后的糖化反應(yīng)，使混合物(對于淀粉測試為陰性)達(dá)到61'C。通過加入50%濃度的硫酸使pH達(dá)到4.3。在反應(yīng)過程中，使pH保持在該值。溫度保持在61°C。加入5.74ml(=1.5%重量的酶/干物質(zhì))DextrozymGA(NovozymesA/S)以便將液化的淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖。允許反應(yīng)進(jìn)行1小時(shí)。為了失活酶，在85匸加熱混合物。將熱的混合物裝入無菌容器中，將其冷卻并在4。C保存。得到420g/1的最終葡萄糖濃度。IL3b)黑麥粉(包括用纖維素酶/半纖維素酶預(yù)處理)向反應(yīng)容器中引入360g去離子水。向水中緩慢加入155g黑麥粉，持續(xù)攪拌。將溫度維持在恒定50。C。用按重量計(jì)50%強(qiáng)度的NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)至5.5后，加入3.21ml(=按重量計(jì)2.5%酶/干物質(zhì))的ViscozymeL(NovozymesA/S)。30分鐘后再添加粉，最初添加55g粉。再過30分鐘后，再添力口50g粉；30分鐘后，再添加40g粉。最后的添加后30分鐘，可以開始液4匕。添加1.7ml的CaCl2儲存液(IOOgCaCl2x2H20/1)。用按重量計(jì)50%的NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)至6.5后，加入5.0ml(=按重量計(jì)2%酶/干物質(zhì))的L型Termamyl120L(NovozymesA/S)。然后將醪液快速加熱至85°C。在該過程中，持續(xù)監(jiān)測并在適當(dāng)時(shí)調(diào)節(jié)pH。達(dá)到最終溫度后，添加更多粉，最初添加60g粉。另外，向醪液中添加0.13ml的CaCh儲存液，從而將Ca"濃度維持在70ppm。添加中將溫度保持在恒定85°C。允許經(jīng)過至少10分鐘以確保在另一部分(40g粉和0.1ml的CaCl2儲存液)之前完全反應(yīng)。添加1.1ml的Termamyl;隨后再添加一部分(40g粉和0.1ml的CaCl2儲存液)。達(dá)到按重量計(jì)55%的干物質(zhì)含量。添加后將溫度提高到IOO'C，并將醪液煮沸10分鐘。取樣并冷卻至室溫。用去離子水稀釋樣品(約1:10)后，加入一滴濃魯戈溶液(每升5g碘和10g碘化鉀的混合物)。濃藍(lán)色指出存在殘余的淀粉；當(dāng)所有的淀粉都^C水解時(shí)觀察到棕色。當(dāng)測試指出存在一部分殘余的淀粉時(shí)，將溫度再次降低至85。C并保持恒定。再添加1.1ml的Termamyl直到碘-淀粉反應(yīng)呈陰性。對于隨后的糖化反應(yīng)，使混合物(對于淀粉測試為陰性)達(dá)到61'C。通過加入50%濃度的硫酸使pH達(dá)到4丄在反應(yīng)過程中，使pH保持在該值。溫度保持在61°C。加入5.74ml(=1.5%重量的酶/干物質(zhì))DextrozymGA(NovozymesA/S)以便將液化的淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖。允許反應(yīng)進(jìn)行l(wèi)小時(shí)。為了失活酶，在85C加熱混合物。將熱的混合物裝入無菌容器中，將其冷卻并在4'C保存。得到370g/1的最終葡萄糖濃度。11.3c)小麥粉(包4舌用木聚糖酶預(yù)處理)將360g去離子水導(dǎo)入反應(yīng)容器中。在55'C加熱水，并用按重量計(jì)50%濃度的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH到6.0。調(diào)節(jié)溫度和pH后，加入3.21ml(=2.5%按重量計(jì)酶/干物質(zhì))Shearzyme500L(NovozymesA/S)。恒定攪拌下，155g小麥粉緩慢流入溶液中。溫度和pH保持恒定。30分鐘后，加入另一粉，55g粉為最初加入的。再過30分鐘后，加入另一50g粉；30分鐘后，加入另外的40g粉，最后加入后30分鐘，可以開始液化。如IL3b中所述的進(jìn)行液化和糖化。得到400g/l最終葡萄糖濃度。III.菌林ATCC13032lysCfbr在下面的一些實(shí)施例中，使用改良的谷氨酸棒桿菌菌林，其在WO05/059144中以名稱ATCC13032lysCfbr描述。實(shí)施例1在每種情況中，如下文l)中所述的制備玉米、小麥和黑麥粉水解產(chǎn)物。通過加入多種糖溶液(包含葡萄糖、粗糖、糖蜜)增加這些培養(yǎng)基的每一種中的總糖含量。在搖瓶實(shí)驗(yàn)中使用培養(yǎng)基，使用谷氨酸棒桿菌(ATCC13032lysC"")和芽孢桿菌PA824(在WO02/061108中詳細(xì)描述)作為碳原料。l)粉水解產(chǎn)物的制備a)玉米粉水解產(chǎn)物將360g去離子水導(dǎo)入反應(yīng)容器中。恒定攪拌下，155g玉米粉緩慢流入水中。-液化用按重量計(jì)50n/o濃度的NaOH水溶液將pH調(diào)節(jié)到5.8后，加入2.6ml(=按重量計(jì)2%的酶/干物質(zhì))LiquozymeSC(來自NovozymesA/S)。然后快速加熱漿液至10。C并沸騰10分鐘。在該過程中，不斷監(jiān)測pH并且，如果適宜，調(diào)節(jié)pH。取樣品并冷卻到室溫。用去離子水稀釋樣品(約1:10)后，加入1滴濃魯戈溶液(每升5g硪和10g碘化鉀的混合物)。強(qiáng)烈的藍(lán)色表明存在殘留淀粉；當(dāng)所有淀粉都被水解時(shí)，觀察到褐色。-糖化作用對于隨后的糖化反應(yīng)，使淀粉測試為陰性的混合物達(dá)到6ix:。通過加入50。/o濃度的硫酸使pH達(dá)到4.3。在反應(yīng)過程中，pH保持在該值。溫度保持在61°C。加入2.0ml(=按重量計(jì)的1.5。/o酶/干物質(zhì))的DextrozymGA(NovozymesA/S)以便將液化的淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖。允許反應(yīng)進(jìn)行1小時(shí)。為了失活酶，在85'C加熱混合物。將熱混合物裝入無菌容器中，將其冷卻并在4XM呆存。b)小麥粉水解產(chǎn)物-木聚糖酶預(yù)處理將360g去離子水導(dǎo)入反應(yīng)容器中。在55。C加熱水，并用按重量計(jì)50%濃度的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH到6.0。調(diào)節(jié)溫度和pH后，加入3.21ml(=2.5%按重量計(jì)酶/干物質(zhì))Shearzyme500L(NovozymesA/S)。恒定攪拌下，155g小麥粉緩慢流入溶液中。溫度和pH保持恒定。最后加入后30分鐘，可以開始液4匕。如la)中所述的進(jìn)行液化和糖化作用。c)黑麥粉水解產(chǎn)物用纖維素酶/半纖維素酶預(yù)處理將360g去離子水導(dǎo)入反應(yīng)容器中。恒定攪拌下，155g黑麥粉緩慢流入水中。溫度和pH保持恒定在50r。用按重量計(jì)50。/。濃度的硫酸使pH達(dá)到5,5后，加入3.21ml(=按重量計(jì)2.5%酶/干物質(zhì))ViscozymeL(NovozymesA/S)。最后加入后30分鐘，可以開始液化。如la)中所述的進(jìn)行液化和糖化作用。2)接種物的制備a)對于谷氨酸棒桿菌將細(xì)胞在無菌CM+CaAc瓊脂(組成見表1;121C下20分鐘)上劃線并在30C過夜培育。隨后從平板刮除細(xì)胞并重懸浮在鹽水中。將裝備兩個(gè)擋板的250ml錐形瓶中25ml培養(yǎng)基(見表4)在每種情況下用一定量的所制備的細(xì)胞懸浮液接種使得在610nm下的光密度達(dá)到OD610值為0.5。表1:CM+CaAc瓊脂板的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>b)對于芽孢桿菌將裝備兩個(gè)擋板的250ml錐形瓶中的42ml預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基(見表2)在每種情況下用0.4ml冷凍的培養(yǎng)基接種并在濕潤搖床中搖動(dòng)(250rpm)下在43。C培養(yǎng)24小時(shí)。表2:預(yù)培養(yǎng)培養(yǎng)基的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>*將用稀釋的KOH水溶液調(diào)節(jié)在裝備兩個(gè)擋板的250ml錐形瓶中的42ml主要培養(yǎng)基(見表6)中在每種情況下用lml預(yù)培養(yǎng)物接種。3)培養(yǎng)液的制備a)對于谷氨酸棒桿菌培養(yǎng)瓶培養(yǎng)基的組成在表4中列出。它應(yīng)該具有最初的糖濃度60g/l。一半的糖來自水解產(chǎn)物(發(fā)酵培養(yǎng)基(l)),而另一半以糖溶液的形式加入。為此，制備水解產(chǎn)物和糖溶液的混合物并加入培養(yǎng)瓶培養(yǎng)基中。在對照培養(yǎng)基中使用對應(yīng)量的葡萄糖溶液。用加，制備下面的溶液(見表3):表3:用加入的糖制備粉水解產(chǎn)物<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>*用稀的NaOH水溶液調(diào)節(jié)接種后，將燒瓶在濕潤的搖床中搖動(dòng)(200rpm)下在30X:培育3天。發(fā)酵結(jié)束后，通過HPLC測定賴氨酸含量。用Agilent1100系列LC系統(tǒng)進(jìn)行HPLC分析。借助于高壓液相層析在Agilent1100系列LC系統(tǒng)HPLC上測定氨基酸濃度。用鄰苯二醛柱前衍生允許定量形成的氨基酸；使用AgilentHypersilAA柱分離氨基酸混合物。結(jié)果列于表5中。表5:平均值<table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table>*基于總葡萄糖當(dāng)量b)對于芽孢桿菌在表6中列出了培養(yǎng)瓶培養(yǎng)基的組成。它應(yīng)該具有28.6g/l的最初葡萄糖濃度。一半的糖來自水解產(chǎn)物，而另一半以葡萄糖溶液的形式加入。在對照培養(yǎng)基中使用對應(yīng)量的葡萄糖溶液。表6:培養(yǎng)瓶培養(yǎng)基<table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>*將用稀的NaOH溶液調(diào)節(jié)t水解產(chǎn)物中的葡萄糖濃度J每升培養(yǎng)基中以水解產(chǎn)物稱量的需要量接種后，將培養(yǎng)瓶在濕潤搖床中搖動(dòng)(250rpm)下在43'C培養(yǎng)24小時(shí)。發(fā)酵終止后，通過HPLC測定葡萄糖和泛酸含量。借助來自Bio-Rad的AminexHPX-87H柱子測定葡萄糖。通過在AquaC18柱(Phenomenex)上分離測定泛酸濃度。結(jié)果在表7編輯。表7:24小時(shí)后的平均值<table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>權(quán)利要求1.發(fā)酵產(chǎn)生至少一種有機(jī)化合物的方法，所迷有機(jī)化合物具有至少3個(gè)C原子或具有至少2個(gè)C原子和至少1個(gè)N原子，所述方法包括以下步驟al)碾磨淀粉原料，從而獲得碾磨產(chǎn)物，所述碾磨產(chǎn)物包含淀粉原料的至少部分非淀粉固體組分；a2)將碾磨產(chǎn)物懸浮在水性液體中并通過酶促液化水解碾磨產(chǎn)物中的淀粉部分，并且，如果合適，隨后進(jìn)行糖化作用，從而得到包含單糖或寡糖的第一種液體(l);和b)向發(fā)酵培養(yǎng)基中加入包含單糖或寡糖的液體(l)以及可代謝的單糖、二糖或寡糖或者以及組合物，所述組合物包含濃度為按重量計(jì)至少50%的可代謝的單糖、二糖或寡糖并且基本上沒有不溶于水的固體，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含在發(fā)酵條件下能夠過量產(chǎn)生所述有機(jī)化合物的微生物。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中步驟a2)中所得液體(l)的總的單糖、二糖和寡糖濃度在100到400g/kg的范圍內(nèi)。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其中通過加入液體(l)導(dǎo)入發(fā)酵中的單糖、二糖和/或寡糖的量按重量計(jì)占導(dǎo)入發(fā)酵的單糖、二糖和寡糖總量的40到95%。4.才艮據(jù)前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中通過加入可代謝的單糖、二糖和/或寡糖或通過加入培養(yǎng)基使得所述第一種液體(l)中總的單糖、二糖和寡糖濃度增加至少50g/kg，所述培養(yǎng)基包含按重量計(jì)至少50%濃度的可代謝的單糖、二糖和/或寡糖并且基本上無不溶于水的固體。5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中液體(l)中總的單糖、二糖和寡糖濃度升高到450到600g/kg范圍中的值。6.根據(jù)前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所用的包含可代謝的單糖或寡糖的組合物是糖生產(chǎn)的副產(chǎn)物，其包含葡萄糖和/或蔗糖，和如果合適，糊精。7.根據(jù)權(quán)利要求6的方法，其中所用的包含可代謝的單糖、二糖和/或寡糖的組合物是來自甜菜糖生產(chǎn)的糖蜜。8.根據(jù)前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中步驟al)中的淀粉原料是谷物仁。9.根據(jù)前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中在步驟a2)中，通過將步驟al)中得到的碾磨產(chǎn)物的至少部分在水解條件下連續(xù)或者分批加入所述水性液體中將其水解。10.根據(jù)權(quán)利要求1到8任一項(xiàng)的方法，其中在步驟a2)中，通過將蒸汽導(dǎo)入碾磨產(chǎn)物的懸浮液中將該懸浮液加熱到高于碾磨產(chǎn)物中存在的淀粉的膠化溫度。11.根據(jù)前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所產(chǎn)生的有機(jī)化合物選自任選地連接有羥基并具有3到10個(gè)碳原子的單羧酸、二羧酸和三羧酸、產(chǎn)蛋白質(zhì)的和不產(chǎn)蛋白質(zhì)的氨基酸、嘌呤堿基、嘧咬堿基；核苷、核苷酸、脂類；飽和和不飽和的脂肪酸；具有4到10個(gè)碳原子的二元醇、具有3個(gè)或更多羥基的多元醇、具有至少4個(gè)碳原子的長鏈醇、糖類、芳香族化合物、維生素、維生素原、輔因子、營養(yǎng)藥、蛋白質(zhì)、類胡蘿卜素、具有3到10個(gè)碳原子的酮、內(nèi)酯、生物聚合物和環(huán)糊精。12.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中用于發(fā)酵的微生物選自過量產(chǎn)生至少一種以下代謝產(chǎn)物的天然或重組的微生物酶、氛基酸、維生素、二糖、具有3到10個(gè)碳原子的脂肪族單和二羧酸、具有3到10個(gè)碳原子的脂肪族羥基羧酸、具有3到10個(gè)C原子的酮、具有4到10個(gè)C原子的鏈烷醇、具有3到8個(gè)C原子的鏈烷二醇和聚羥鏈烷酸。13.根據(jù)前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中所述微生物選自棒桿菌屬(Corynebacterium)、芽孢桿菌屬(Bacillus)、阿舒嚢霉屬(Ashbya)、埃希氏菌屬(Escherichia)、曲霉屬(Aspergillus)、產(chǎn)堿菌屬(Alealigenes)、》文線#于菌屬(ActinobaciIIus)、厭氧蟲累菌屬(AnaeroWospirillum)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、丙酸桿菌屬(Propionibacterium)、梭狀芽孢桿菌屬(Clostridium)和根霉屬(RWzopus)。14.根據(jù)權(quán)利要求12或13的方法，其中用于發(fā)酵的微生物選自過量產(chǎn)生氨基酸的天然的或重組的微生物。15.根據(jù)權(quán)利要求13或14的方法，其中所述微生物是棒桿菌屬的菌林。16.根據(jù)權(quán)利要求12或13的方法，其中用于發(fā)酵的微生物選自過量產(chǎn)生酶的天然的或重組微生物。17.根據(jù)權(quán)利要求16的方法，其中所述微生物選自過量產(chǎn)生肌醇六磷酸酶的孩i生物。18.根據(jù)前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，所述所述有機(jī)化合物被耗盡或從發(fā)酵液中分離，并且發(fā)酵液的揮發(fā)性組分隨后被基本去除，獲得固體或半固體的蛋白質(zhì)組合物。19.根據(jù)權(quán)利要求1到17任一項(xiàng)的方法，其中發(fā)酵液的至少一些揮發(fā)性組分^L去除，不事先分離或耗盡非揮發(fā)性的微生物代謝產(chǎn)物，并且如果適當(dāng)?shù)脑?，不事先去除固體組分，獲得非揮發(fā)性的微生物代謝產(chǎn)物的固體制劑。全文摘要發(fā)酵產(chǎn)生至少一種有機(jī)化合物的方法，所述有機(jī)化合物具有至少3個(gè)C原子或具有至少2個(gè)C原子和至少1個(gè)N原子，所述方法包括以下步驟a1)碾磨淀粉原料，從而獲得碾磨產(chǎn)物，所述碾磨產(chǎn)物包含淀粉原料的至少部分非淀粉固體組分；a2)將碾磨產(chǎn)物懸浮在水性液體中并通過酶促液化水解碾磨產(chǎn)物中的淀粉部分，并且，如果合適，隨后進(jìn)行糖化作用，從而得到包含單糖或寡糖的第一種液體(1)；和b)向發(fā)酵培養(yǎng)基中加入包含單糖或寡糖的液體(1)以及可代謝的單糖、二糖或寡糖或者以及組合物，所述組合物包含濃度為按重量計(jì)至少50％的可代謝的單糖、二糖或寡糖并且基本上沒有不溶于水的固體，所述發(fā)酵培養(yǎng)基包含在發(fā)酵條件下能夠過量產(chǎn)生所述有機(jī)化合物的微生物。文檔編號C12P13/08GK101313073SQ200680044005公開日2008年11月26日申請日期2006年11月27日優(yōu)先權(quán)日2005年11月28日發(fā)明者M(jìn)·博伊,M·洛沙德伊特,M·蓬佩尤斯,O·策爾德爾,S·弗里爾申請人:巴斯夫歐洲公司