專利名稱：頭霉素c的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種頭霉素C的分離純化方法，可將發(fā)酵所得頭霉素C純度提高至90%以上。
背景技術(shù)：
頭霉素C (cephamycin C)最早見于默克公司1971年發(fā)表的專利中。它是繼青霉素、頭孢菌素后又一類新的3 _內(nèi)酰胺類抗生素。屬頭孢稀類抗生素，抗菌作用機(jī)制與青霉素類相同。頭霉素C的鈉鹽為白色結(jié)晶性粉末。對酸比青霉素G穩(wěn)定，抗菌力低，僅略高于頭孢菌素C。它的結(jié)構(gòu)與頭孢菌素相似，但在頭孢稀母核C7上有一個(gè)a-甲氧基，提高了對^ -內(nèi)酰胺酶(包括青霉素酶和頭孢菌素酶)的抗性。
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它的發(fā)現(xiàn)不僅為頭孢菌素類抗生素提供了更廣泛的天然來源，也產(chǎn)生了一類新型抗生素，頭霉素類抗生素。頭孢烯類抗生素是臨床抗感染治療中應(yīng)用最廣泛的一類安全有效的抗菌藥物。雖然由于細(xì)菌耐藥性的發(fā)展，原來對頭孢菌素敏感性很高的某些致病菌由于產(chǎn)生了新的滅活酶如廣譜￠-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)，對頭孢菌素的敏感率有所下降，但總的看來臨床常用的大多數(shù)頭孢菌素類與頭霉素類抗生素仍是目前控制多數(shù)常見感染疾患和救治某些重癥感染疾患不可缺少的有效藥物。頭霉素類抗菌活性大多與二代頭孢菌素相似，個(gè)別品種具有三代頭孢菌素特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種頭霉素C的分離純化方法，可有效大幅度提高頭霉素C純度。為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案頭霉素C的分離純化方法，包括以下步驟a)經(jīng)過預(yù)處理的頭霉素C發(fā)酵濾液通入大孔樹脂后，采用大孔樹脂解吸劑解吸，所得解吸液減壓濃縮，得到頭霉素C固體粗品；b)上述頭霉素C固體粗品水溶后通入U(xiǎn)niCM_50s型陽尚子樹脂后,米用陽尚子樹脂解吸劑解吸，解吸后得到陽離子樹脂解吸液；c)上述所得陽離子樹脂解吸液通入大孔樹脂后，采用大孔樹脂解吸劑解吸后得到頭霉素富集液，頭霉素富集液在丙酮中沉淀結(jié)晶，得到純度90%以上的頭霉素C固體。進(jìn)一步的技術(shù)方案是所述頭霉素C發(fā)酵濾液需經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理的方法是用4N氫氧化鈉調(diào)pH至6 7。進(jìn)一步的技術(shù)方案是所述大孔樹脂為HZ806大孔樹脂。進(jìn)一步的技術(shù)方案是所述步驟a)中大孔樹脂解吸劑為90%乙醇。進(jìn)一步的技術(shù)方案是所述UniCM-50s型陽離子樹脂粒徑為50 u m。
進(jìn)一步的技術(shù)方案是調(diào)節(jié)頭霉素C固體粗品水溶液的pH為5 7。進(jìn)一步的技術(shù)方案是所述陽離子樹脂解吸劑為0. 3、0. 4或0. 5mol/L磷酸二氫鈉水溶液，優(yōu)選0. 4mol/L磷酸二氫鈉水溶液。進(jìn)一步的技術(shù)方案是所述陽離子樹脂在使用前需進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理方法為90%乙醇沖洗，2%氫氧化鈉沖洗，純水沖至中性，2%鹽酸沖洗，純水沖至中性。進(jìn)一步的技術(shù)方案是所述步驟c)中大孔樹脂仍為HZ806大孔樹脂；所述步驟c)中的大孔樹脂解吸劑為95%乙醇。進(jìn)一步的技術(shù)方案是所述步驟c)中的沉淀結(jié)晶的方法為，頭霉素C富集液緩慢倒入3倍體積的丙酮中，沉淀結(jié)晶，布氏漏斗進(jìn)行過濾，濾出的固體真空干燥箱抽干，得到白色固體頭霉素C。本發(fā)明的技術(shù)效果是本發(fā)明涉及的頭霉素C的分離純化方法，工藝操作簡單，工藝條件易于控制，頭霉素C純度提高至90%以上，更適于大規(guī)模的生產(chǎn)?！?br> 具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但不是對本發(fā)明的限定。另外，下面實(shí)驗(yàn)操作均是在室溫2(T3(TC進(jìn)行。頭霉素C的發(fā)酵液采用以下方法而得頭霉素C由鏈霉菌發(fā)酵，培養(yǎng)基主要成分及比例(重量/體積)為淀粉5%、葡萄糖1%、磷酸氫二鉀0. 2%、蛋白胨1%、棉子粉2%。發(fā)酵條件控制在pH7 7. 5，溫度控制在35攝氏度。培養(yǎng)120小時(shí)后，制得頭霉素C發(fā)酵液。實(shí)施例I頭霉素C的分離純化方法包括以下步驟步驟a):頭霉素C發(fā)酵液過濾后約10升濾液，用4N氫氧化鈉調(diào)濾液pH至6 7，通A 500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升；然后，純水750ml頂洗；再用I. 5升90%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，收集所得的解吸液減壓旋干，得頭霉素C固體粗品20克。步驟b):取頭霉素C固體粗品3. 2g，固體粗品重含為15%。用少量純水溶解，調(diào)pH至5,通入裝有300ml unicm-50s陽離子樹脂的樹脂柱,流速每分鐘IOml ;再用450ml純水頂洗，流速每分鐘15ml。陽離子樹脂在使用前需經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理方法為先用900ml 90%乙醇沖洗；再用600ml 2%氫氧化鈉沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性；再用600ml 2%的鹽酸沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性。配置0. 5mol/L磷酸二氫鈉溶液1200ml作為陽離子樹脂解吸劑，解吸流速每分鐘10ml，解吸200ml后開始收集，每瓶收集60ml，共收17瓶。將其中純度在83 87%的頭霉素C合并，合并后純度為85. 1%,合并后液體所含頭霉素C的量占上樣量的50%。步驟c):取純度為85%的陽離子樹脂解吸液2升，用4N氫氧化鈉調(diào)pH至6 7，通A 500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升。之后用750ml純水頂洗，再用I. 5升95%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，共收集頭霉素C富集液I. I升，待結(jié)晶。頭霉素C富集液I. I升和3. 5升丙酮，置于-10度冰箱冷藏降溫2h。將頭霉素C富集液緩慢加入3. 3升攪拌中的丙酮，沉淀結(jié)晶出白色固體。布氏漏斗過濾出固體，用200ml冷凍丙酮頂洗。濾出的固體在真空干燥箱中抽干，得到純度為91. 3%的頭霉素C固體。實(shí)施例2頭霉素C的分離純化方法包括以下步驟步驟a):頭霉素C發(fā)酵液過濾后約10升濾液，用4N氫氧化鈉調(diào)濾液pH至6 7，通A 500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升；然后，純水750ml頂洗；再用I. 5升90%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，收集所得的解吸液減壓旋干，得頭霉素C固體粗品20克。 步驟b):取頭霉素C固體粗品3. Og,固體粗品重含為15%。用少量純水溶解，調(diào)pH至6,通入裝有300ml unicm-50s陽離子樹脂的樹脂柱,流速每分鐘IOml ;再用450ml純水頂洗，流速每分鐘15ml。陽離子樹脂在使用前需經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理方法為先用900ml 90%乙醇沖洗；再用600ml 2%氫氧化鈉沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性；再用600ml 2%的鹽酸沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性。配置0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液1800ml作為陽離子樹脂解吸劑，解吸流速每分鐘10ml，解吸200ml后開始收集，每瓶收集60ml，共收27瓶。將其中純度在83 88%的頭霉素C合并,合并后純度為86. 2%，合并后液體所含頭霉素C的量占上樣量的66%。步驟c):取純度為86. 2%的陽離子樹脂解吸液2升，用4N氫氧化鈉調(diào)pH至6 7，通入500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升。之后用750ml純水頂洗，再用I. 5升95%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，共收集頭霉素C富集液I. I升，待結(jié)晶。頭霉素C富集液I. I升和3. 5升丙酮，置于-10度冰箱冷藏降溫2h。將頭霉素C富集液緩慢加入3. 3升攪拌中的丙酮，沉淀結(jié)晶出白色固體。布氏漏斗過濾出固體，用200ml冷凍丙酮頂洗。濾出的固體在真空干燥箱中抽干，得到純度為90以上％的頭霉素C固體。實(shí)施例3頭霉素C的分離純化方法包括以下步驟 步驟a):頭霉素C發(fā)酵液過濾后約10升濾液，用4N氫氧化鈉調(diào)濾液pH至6 7，通A 500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升；然后，純水750ml頂洗；再用I. 5升90%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，收集所得的解吸液減壓旋干，得頭霉素C固體粗品20克。步驟b):取頭霉素C固體粗品3. 3g，固體粗品重含為15%。用少量純水溶解，調(diào)pH至7,通入裝有300ml unicm-50s陽離子樹脂的樹脂柱,流速每分鐘IOml ;再用450ml純水頂洗，流速每分鐘15ml。陽離子樹脂在使用前需經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理方法為先用900ml 90%乙醇沖洗；再用600ml 2%氫氧化鈉沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性；再用600ml 2%的鹽酸沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性。配置置0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液1800ml作為陽離子樹脂解吸劑，解吸流速每分鐘10ml，解吸200ml后開始收集，每瓶收集60ml，共收27瓶。將其中純度在83 87%的頭霉素C合并，合并后純度為85. 7%，合并后液體所含頭霉素C的量占上樣量的64%。步驟c):取純度為85. 7%的陽離子樹脂解吸液2升，用4N氫氧化鈉調(diào)pH至6 7，通入500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升。之后用750ml純水頂洗，再用I. 5升95%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，共收集頭霉素C富集液I. I
升，待結(jié)晶。頭霉素C富集液I. I升和3. 5升丙酮，置于-10度冰箱冷藏降溫2h。將頭霉素C富集液緩慢加入3. 3升攪拌中的丙酮，沉淀結(jié)晶出白色固體。布氏漏斗過濾出固體，用200ml冷凍丙酮頂洗。濾出的固體在真空干燥箱中抽干，得到純度為90%以上的頭霉素C固體。實(shí)施例4頭霉素C的分離純化方法包括以下步驟步驟a):頭霉素C發(fā)酵液過濾后約10升濾液，用4N氫氧化鈉調(diào)濾液pH至6 7，通A 500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升；然后，純水750ml頂洗；再用I. 5升90%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，收集所得的解吸液減壓旋干，得頭霉素C固體粗品20克。 步驟b):取頭霉素C固體粗品3. 2g，固體粗品重含為15%。用少量純水溶解，調(diào)pH至6,通入裝有300ml unicm-50s陽離子樹脂的樹脂柱，流速每分鐘IOml ;再用450ml純水頂洗，流速每分鐘15ml。陽離子樹脂在使用前需經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理方法為先用900ml 90%乙醇沖洗；再用600ml 2%氫氧化鈉沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性；再用600ml 2%的鹽酸沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性。配置0. 4mol/L磷酸二氫鈉溶液1500ml作為陽離子樹脂解吸劑，解吸流速每分鐘10ml，解吸200ml后開始收集，每瓶收集60ml，共收23瓶。將其中純度在83 87%的頭霉素C合并，合并后純度為85. 5%，合并后液體所含頭霉素C的量占上樣量的75%。步驟c):取純度為85. 5%的陽離子樹脂解吸液2升，用4N氫氧化鈉調(diào)pH至6 7，通入500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升。之后用750ml純水頂洗，再用I. 5升95%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，共收集頭霉素C富集液I. I升，待結(jié)晶。頭霉素C富集液I. I升和3. 5升丙酮，置于-10度冰箱冷藏降溫2h。將頭霉素C富集液緩慢加入3. 3升攪拌中的丙酮，沉淀結(jié)晶出白色固體。布氏漏斗過濾出固體，用200ml冷凍丙酮頂洗。濾出的固體在真空干燥箱中抽干，得到純度為90%以上的頭霉素C固體。實(shí)施例5頭霉素C的分離純化方法包括以下步驟步驟a):頭霉素C發(fā)酵液過濾后約10升濾液，用4N氫氧化鈉調(diào)濾液pH至6 7，通A 500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升；然后，純水750ml頂洗；再用I. 5升90%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，收集所得的解吸液減壓旋干，得頭霉素C固體粗品20克。步驟b):取頭霉素C固體粗品3. 2g，固體粗品重含為15%。用少量純水溶解，調(diào)pH至5,通入裝有300ml unicm-50s陽離子樹脂的樹脂柱,流速每分鐘IOml ;再用450ml純水頂洗，流速每分鐘15ml。陽離子樹脂在使用前需經(jīng)過預(yù)處理，預(yù)處理方法為先用900ml 90%乙醇沖洗；再用600ml 2%氫氧化鈉沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性；再用600ml 2%的鹽酸沖洗，純水沖柱，至樹脂柱流出液為中性。配置0. 3mol/L磷酸二氫鈉溶液1800ml作為陽離子樹脂解吸劑，解吸時(shí)流速每分鐘10ml，解吸200ml后開始收集，每瓶收集60ml，共收27瓶。將其中純度在83 87%的頭霉素C合并，合并后純度為85. 3%，合并后液體所含頭霉素C的量占上樣量的63%。步驟c):取純度為85. 3%的陽離子樹脂解吸液2升，用4N氫氧化鈉調(diào)pH至6 7，通入500ml大孔樹脂HZ806，流速為每小時(shí)2升。之后用750ml純水頂洗，再用I. 5升95%乙醇解吸，解吸流速每小時(shí)I升。解吸液從300ml后開始收集，共收集頭霉素C富集液I. I
升，待結(jié)晶。頭霉素C富集液I. I升和3. 5升丙酮，置于-10度冰箱冷藏降溫2h。將頭霉素C富集液緩慢加入3. 3升攪拌中的丙酮，沉淀結(jié)晶出白色固體。布氏漏斗過濾出固體，用200ml冷凍丙酮頂洗。濾出的固體在真空干燥箱中抽干，得到純度為90%以上的頭霉素C固體?！?br> 權(quán)利要求
1.一種頭霉素C的分離純化方法，其特征在于包括以下步驟 a)經(jīng)過預(yù)處理的頭霉素C發(fā)酵濾液通入大孔樹脂后，采用大孔樹脂解吸劑解吸，所得解吸液減壓濃縮，得到頭霉素C固體粗品； b)上述頭霉素C固體粗品水溶后通入U(xiǎn)niCM-50s型陽離子樹脂后，采用陽離子樹脂解吸劑解吸，解吸后得到陽離子樹脂解吸液； c)上述所得陽離子樹脂解吸液通入大孔樹脂后，采用大孔樹脂解吸劑解吸后得到的頭霉素C富集液，頭霉素C富集液在丙酮中沉淀結(jié)晶，得到純度90%以上的頭霉素C固體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述頭霉素C的分離純化方法，其特征在于，所述大孔樹脂為HZ806大孔樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述頭霉素C的分離純化方法，其特征在于，所述步驟a)中大孔樹脂解吸劑為90%乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述頭霉素C的分離純化方法，其特征在于，所述UniCM-50s型陽離子樹脂粒徑為50 u m。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述頭霉素C的分離純化方法，其特征在于，所述陽離子樹脂解吸劑為磷酸二氫鈉水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述頭霉素C的分離純化方法，其特征在于，所述磷酸二氫鈉水溶液的濃度為0. 3,0. 4,0. 5mol/L中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述頭霉素C的分離純化方法，其特征在于，所述陽離子樹脂在使用前需進(jìn)行預(yù)處理，預(yù)處理方法為90%乙醇沖洗，2%氫氧化鈉沖洗，純水沖至中性，2%鹽酸沖洗,純水沖至中性。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述頭霉素C的分離純化方法，其特征在于，所述步驟c)中的大孔樹脂解吸劑為95%乙醇。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述頭霉素C的分離純化方法，其特征在于，所述步驟c)中沉淀結(jié)晶的方法為頭霉素C富集液緩慢倒入3倍體積的丙酮中，沉淀結(jié)晶，布氏漏斗進(jìn)行過濾，濾出的固體置于真空干燥箱抽干，得到白色固體頭霉素C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種頭霉素C的分離純化方法，包括以下步驟經(jīng)過預(yù)處理的頭霉素C發(fā)酵濾液通入大孔樹脂后，采用大孔樹脂解吸劑解吸，所得解吸液減壓濃縮，得到頭霉素C固體粗品；上述頭霉素C固體粗品水溶后通入U(xiǎn)niCM-50s型陽離子樹脂后，采用陽離子樹脂解吸劑解吸，解吸后得到陽離子樹脂解吸液；上述所得陽離子樹脂解吸液通入大孔樹脂后，采用大孔樹脂解吸劑解吸后得到的頭霉素C富集液，頭霉素C富集液在丙酮中沉淀結(jié)晶，得到純度90%以上的頭霉素C固體。本發(fā)明方法工藝操作簡單，工藝條件易于控制，頭霉素C純度提高至90%以上，更適于大規(guī)模的生產(chǎn)。
文檔編號C07D501/12GK102964360SQ201210404968
公開日2013年3月13日 申請日期2012年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月22日
發(fā)明者朱輝, 楊益, 張翠英, 范雪濤, 黃運(yùn)昌, 朱春燕, 龍燕, 韓曉彤, 周彤 申請人:成都雅途生物技術(shù)有限公司