本發(fā)明涉及一種提高蟲(chóng)生真菌感染昆蟲(chóng)效率的方法,特別是涉及一種提高冬蟲(chóng)夏草菌感染寄主幼蟲(chóng)效率的方法。
背景技術(shù):
冬蟲(chóng)夏草是我國(guó)的名貴藥材,與人參、鹿茸并稱(chēng)為“中藥三大寶”,性味甘、平,具有保肺益腎、止血化痰、已勞嗽的功效。冬蟲(chóng)夏草產(chǎn)于青藏高原東部區(qū)域,野生產(chǎn)量較小,近幾十年來(lái)有資源量下降的趨勢(shì),面臨著資源枯竭的風(fēng)險(xiǎn)。
冬蟲(chóng)夏草是一種蟲(chóng)生真菌,寄生在蝠蛾屬昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)體內(nèi)才能形成。由于冬蟲(chóng)夏草真菌的感染寄主昆蟲(chóng)的能力較差,加上蝠蛾屬昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)體壁屏障的保護(hù)作用,在通常情況下,一般的技術(shù)方案下,冬蟲(chóng)夏草菌往往無(wú)法高效入侵寄主蝠蛾屬昆蟲(chóng)的幼蟲(chóng)。中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)(授權(quán)號(hào):cn100587057c)公開(kāi)了一種冬蟲(chóng)夏草的生產(chǎn)方法,采用含有中國(guó)被毛孢的菌液或子囊孢子液向寄主幼蟲(chóng)體表噴灑的方法進(jìn)行接種感染,但此方法存在感染效率低、耗費(fèi)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、菌種材料產(chǎn)量有限等問(wèn)題;中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)(公開(kāi)號(hào):cn102106235a)公開(kāi)了一種全人工培養(yǎng)冬蟲(chóng)夏草的方法,該方法采用一端直徑小于0.2mm的不銹鋼實(shí)心針或空心針的針狀器具,沾取中國(guó)被毛孢菌體和孢子混懸液刺傷寄主幼蟲(chóng)以破壞其表皮的方法進(jìn)行接種感染;中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)(公開(kāi)號(hào):cn104920066a)公開(kāi)了一種提高冬蟲(chóng)夏草寄主感染率的方法,該方法用激光照射冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)體表,制造微小傷口,有助于中國(guó)被毛孢菌進(jìn)入寄主幼蟲(chóng)體腔內(nèi),此類(lèi)方法人為造成寄主寄主幼蟲(chóng)體表物理傷口,造成寄主幼蟲(chóng)容易感染飼養(yǎng)基質(zhì)或飼料中含有的其他感染污染雜菌,如白僵菌、擬青霉菌、細(xì)菌等病害菌,引起成草率低、培植環(huán)境污染等問(wèn)題。因此,如何在避免物理創(chuàng)傷帶來(lái)的問(wèn)題的前提下有效提高冬蟲(chóng)夏草菌感染寄主幼蟲(chóng)的效率是冬蟲(chóng)夏草產(chǎn)業(yè)化過(guò)程中亟需解決的問(wèn)題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
基于現(xiàn)有技術(shù)普遍存在感染效率低,且改良技術(shù)中存在造成寄主幼蟲(chóng)難以修復(fù)的物理性創(chuàng)傷、寄主幼蟲(chóng)容易感染飼養(yǎng)基質(zhì)或飼料中含有的其他感染污染雜菌,如白僵菌、擬青霉菌、細(xì)菌等病害菌,引起成草率低、培植環(huán)境污染等問(wèn)題,為解決上述問(wèn)題,本發(fā)明提供一種既不造成寄主幼蟲(chóng)難以修復(fù)的的物理性創(chuàng)口,又能有效提高冬蟲(chóng)夏草菌感染寄主幼蟲(chóng)效率的方法。具體技術(shù)方案為:
在冬蟲(chóng)夏草菌感染寄主幼蟲(chóng)前,采用ph值為3.4~5.6的緩沖溶液所配制的濃度為1×103~5×104u/ml的溶菌酶溶液預(yù)處理冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng),再用冬蟲(chóng)夏草菌感染經(jīng)過(guò)上述預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)。
所述預(yù)處理的方法為將所述的溶菌酶溶液噴在冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)的土壤基質(zhì)中,每立方厘米土壤基質(zhì)噴入溫度為10~18℃的上述溶菌酶溶液0.1~0.5ml,然后將冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)投入上述含有溶菌酶溶液的土壤基質(zhì)中進(jìn)行酶作用,每9~25平方厘米投入1條冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng),酶作用溫度為10~18℃、濕度為40~90%,酶作用時(shí)間為2~7天。優(yōu)選的,所述溶菌酶的濃度為5×103~2×104u/ml,配制溶菌酶溶液的緩沖溶液的ph值為5.0~5.6。優(yōu)選的,每立方厘米所述土壤基質(zhì)中噴入所述溶菌酶溶液的量為0.25~0.35ml、酶作用溫度為12~15℃、濕度為70~80%,酶作用時(shí)間為3~4天。
所述預(yù)處理的方法還可以為:將所述的溫度為10~18℃的溶菌酶溶液涂抹在冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)的表皮,然后進(jìn)行酶作用,酶作用溫度為10~18℃、濕度為40~90%,酶作用時(shí)間為1~8小時(shí)。優(yōu)選的,所述溶菌酶溶液濃度為3×104~4.5×104u/ml,配制溶菌酶溶液的緩沖溶液的ph值為3.4~4.0。優(yōu)選的,所述將冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)浸泡在溶菌酶溶液中的浸泡時(shí)間為30~45秒;所述酶作用溫度為15~18℃、濕度為80~90%,酶作用的時(shí)間為3~4小時(shí)。
所述預(yù)處理的方法還可以為:將冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)浸泡在溫度為10~18℃的所述的溶菌酶溶液10~60秒后取出,然后進(jìn)行酶作用,酶作用溫度為10~18℃、濕度為40~90%,酶作用時(shí)間為1~8小時(shí)。優(yōu)選的,所述溶菌酶溶液濃度為3×104~4.5×104u/ml,配制溶菌酶溶液的緩沖溶液的ph值為3.4~4.0。優(yōu)選的,所述將冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)浸泡在溶菌酶溶液中的浸泡時(shí)間為30~45秒;所述酶作用溫度為15~18℃、濕度為80~90%,酶作用的時(shí)間為3~4小時(shí)。
上述冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)為蝙蝠蛾科昆蟲(chóng)中的蝙蝠蛾屬昆蟲(chóng)中的一種或二種以上。
優(yōu)選的,上述ph緩沖溶液為磷酸氫二鈉和/或檸檬酸緩沖溶液。
本發(fā)明提供的方法利用溶菌酶破壞寄主幼蟲(chóng)體壁屏障,同時(shí)又提前將寄主幼蟲(chóng)體表附著的病害雜菌清除,有利于侵染活性較弱的冬蟲(chóng)夏草菌入侵寄主幼蟲(chóng),有效提高冬蟲(chóng)夏草菌感染蝠蛾幼蟲(chóng)的效率,且該方法不造成寄主幼蟲(chóng)難以修復(fù)的的物理性創(chuàng)口,減少雜菌感染,提高成草率。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例一
取市售5000u/mg的溶菌酶0.2g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為3.4,配制成1×103u/ml的溶菌酶溶液。將配制好的溫度為10℃的溶菌酶溶液噴在冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的土壤基質(zhì),每立方厘米噴入所述的溶菌酶溶液0.1ml,然后將冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)投入預(yù)處理過(guò)的土壤基質(zhì)中,每9平方厘米投入1條冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng),在溫度為10℃、濕度40%環(huán)境條件下飼養(yǎng)2天后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種涂抹在寄主幼蟲(chóng)體表,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為52.3%,雜菌感染率為0%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率只有3%,雜菌感染率為32.5%。
實(shí)施例二
取市售10000u/mg的溶菌酶5g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為5.6,配制成5×104u/ml的溶菌酶溶液。將配制好的溫度為18℃的溶菌酶溶液噴在冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的土壤基質(zhì),每立方厘米噴入所述的溶菌酶溶液0.5ml,然后將冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)投入預(yù)處理過(guò)的土壤基質(zhì)中,每25平方厘米投入1條冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng),在溫度為18℃、濕度90%環(huán)境條件下飼養(yǎng)7天后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的基質(zhì)中,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為87.3%,雜菌感染率為0.1%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率只有2%,雜菌感染率為57.8%。
實(shí)施例三
取市售10000u/mg的溶菌酶0.5g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為5.0,配制成5×103u/ml的溶菌酶溶液。將配制好的溫度為12℃的溶菌酶溶液噴在冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的土壤基質(zhì),每18平方厘米投入1條冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng),每立方厘米噴入所述的溶菌酶溶液0.25ml,然后將冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)投入預(yù)處理過(guò)的土壤基質(zhì)中,在溫度為12℃、濕度70%環(huán)境條件下飼養(yǎng)3天后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種涂抹在寄主幼蟲(chóng)體表,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為89.3%,雜菌感染率為0%,對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為3%,雜菌感染率為38.2%。
實(shí)施例四
取市售10000u/mg的溶菌酶2g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為5.6,配制成2×104u/ml的溶菌酶溶液。將配制好的溫度為15℃的溶菌酶溶液噴在冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的土壤基質(zhì),每15平方厘米投入1條冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng),每立方厘米噴入所述的溶菌酶溶液0.35ml,然后將冬蟲(chóng)夏草寄主幼蟲(chóng)投入預(yù)處理過(guò)的土壤基質(zhì)中,在溫度為15℃、濕度80%環(huán)境條件下飼養(yǎng)4天后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)生長(zhǎng)的基質(zhì)中,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為95.3%,雜菌感染率為1.3%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為3%,雜菌感染率為42.5%。
實(shí)施例五
取市售10000u/mg的溶菌酶1g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為3.4,配制成1×103u/ml的溶菌酶溶液。將配制好的溫度為10℃的溶菌酶溶液涂抹在蝠蛾幼蟲(chóng)的表皮,然后將寄主幼蟲(chóng)至于在溫度為10℃、濕度40%環(huán)境條件下酶作用1小時(shí)后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)表面,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為66.7%,雜菌感染率為1.2%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為2%,雜菌感染率為32.4%。
實(shí)施例六
取市售10000u/mg的溶菌酶5g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為5.6,配制成5×104u/ml的溶菌酶溶液。將配制好的溫度為18℃的溶菌酶溶液涂抹在蝠蛾幼蟲(chóng)的表皮,然后將寄主幼蟲(chóng)至于在溫度為18℃、濕度90%環(huán)境條件下酶作用8小時(shí)后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)表面,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為75.6%,雜菌感染率為3.3%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為4%,雜菌感染率為53.9%。
實(shí)施例七
取市售5000u/mg的溶菌酶6g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為3.4,配制成3×104u/ml的溶菌酶溶液。將配制好的溫度為15℃的溶菌酶溶液涂抹在蝠蛾幼蟲(chóng)的表皮,然后將寄主幼蟲(chóng)至于在溫度為15℃、濕度80%環(huán)境條件下酶作用3小時(shí)后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)表面,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為88.2%,雜菌感染率為1.5%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為2%,雜菌感染率為44.7%。
實(shí)施例八
取市售10000u/mg的溶菌酶4.5g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為4.0,配制成4.5×104u/ml的溶菌酶溶液。將配制好的溫度為18℃的溶菌酶溶液涂抹在蝠蛾幼蟲(chóng)的表皮,然后將寄主幼蟲(chóng)至于在溫度為18℃、濕度90%環(huán)境條件下酶作用4小時(shí)后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)表面,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為90.6%,雜菌感染率為2.8%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為2%,雜菌感染率為56.4%。
實(shí)施例九
取市售5000u/mg的溶菌酶0.2g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為3.4,配制成1×103u/ml的溶菌酶溶液。將幼蟲(chóng)浸泡在配制好的溫度為10℃的溶菌酶溶液中10秒,然后將寄主幼蟲(chóng)至于在溫度為10℃、濕度40%環(huán)境條件下酶作用1小時(shí)后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)表面,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為68.2%,雜菌感染率為0.8%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為2%,雜菌感染率為39.1%。
實(shí)施例十
取市售10000u/mg的溶菌酶5g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為5.6,配制成5×104u/ml的溶菌酶溶液。將幼蟲(chóng)浸泡在配制好的溫度為18℃的溶菌酶溶液中10秒,然后將寄主幼蟲(chóng)至于在溫度為18℃、濕度90%環(huán)境條件下酶作用8小時(shí)后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)表面,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為78.9%,雜菌感染率為3.6%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為3%,雜菌感染率為56.5%。
實(shí)施例十一
取市售5000u/mg的溶菌酶6g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為3.4,配制成3×104u/ml的溶菌酶溶液。將幼蟲(chóng)浸泡在配制好的溫度為15℃的溶菌酶溶液中30秒,然后將寄主幼蟲(chóng)至于在溫度為15℃、濕度80%環(huán)境條件下酶作用3小時(shí)后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)表面,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為87.8%,雜菌感染率為2.1%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為2%,雜菌感染率為47.9%。
實(shí)施例十二
取市售10000u/mg的溶菌酶4.5g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為4.0,配制成4.5×104u/ml的溶菌酶溶液。將幼蟲(chóng)浸泡在配制好的溫度為18℃的溶菌酶溶液中45秒,然后將寄主幼蟲(chóng)至于在溫度為18℃、濕度90%環(huán)境條件下酶作用4小時(shí)后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)表面,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為94.8%,雜菌感染率為2.8%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為2%,雜菌感染率為51.7%。
實(shí)施例十三
取市售10000u/mg的溶菌酶5g加入1000ml純水中,利用磷酸氫二鈉和檸檬酸調(diào)節(jié)ph值為5.6,配制成5×104u/ml的溶菌酶溶液。將幼蟲(chóng)浸泡在配制好的溫度為18℃的溶菌酶溶液中60秒,然后將寄主幼蟲(chóng)至于在溫度為18℃、濕度90%環(huán)境條件下酶作用8小時(shí)后,再讓發(fā)酵獲得的液體冬蟲(chóng)夏草菌種噴在寄主幼蟲(chóng)表面,使之與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸,同時(shí)將未經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)以同樣的方法與冬蟲(chóng)夏草菌種接觸作為對(duì)照,接觸后2周取血淋巴液鏡檢是否被感染冬蟲(chóng)夏草菌形成梭狀單細(xì)胞蟲(chóng)菌體,結(jié)果顯示經(jīng)溶菌酶預(yù)處理的寄主幼蟲(chóng)的感染率為82.3%,雜菌感染率為3.1%;對(duì)照組寄主幼蟲(chóng)的感染率為3%,雜菌感染率為52.1%。