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一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養(yǎng)條件的方法與流程

文檔序號:12667194閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養(yǎng)條件的方法,其特征在于,其包括以下步驟:

步驟S10確定初步篩選范圍,檢索查閱相關文獻資料,對比其他植物物種組培增殖過程中添加增強光源的種類并確定光源波長,初步篩選范圍;

步驟S20選擇外植體,選擇健康、生長環(huán)境一致并且生長狀態(tài)相似的甘草愈傷組織,將愈傷組織切割成0.5cm3大小的組織塊;

步驟S30對照培養(yǎng),以MS培養(yǎng)基為基礎培養(yǎng)基,添加TDZ(噻苯?。┑臐舛葹?.06mg/L、NAA(萘乙酸)的濃度為2.5 mg/L、活性炭的濃度為0.15 mg/L、硝酸鈰的濃度為3g/L,維生素C的濃度為0.3mg/L,瓊脂粉的濃度為10g/L、白砂糖的濃度為7g/L,配制成測試用培養(yǎng)基,分別接種相同量的甘草愈傷組織,并進行常規(guī)增殖組織培養(yǎng)作為對照組,在常規(guī)培養(yǎng)的基礎上添加不同波段增強增強光源作為實驗組,對照組和實驗組都設置多個平行組;

步驟S40記錄檢測參數,培養(yǎng)20天后統(tǒng)計每個對照組和實驗組的褐化的數量,并計算褐化率;

步驟S50生長量計算,分別將相同實驗組或者對照組的愈傷組織取出,用清水沖洗干凈,擦干表面水分并對愈傷組織進行稱重,記錄重量;

步驟S60計算評估因數,將愈傷組織培養(yǎng)后的重量減去褐化的重量,再除以培養(yǎng)前的重量,計算出實際增殖系數,將實際增殖系數減去褐化率得出評估因數,對比不同濃度梯度的評估因數,挑選出數值最大的評估因數對應的增強光源波長;

步驟S70縮小篩選范圍,使用步驟S60中挑選出的增強光源波長范圍重復進行步驟S10-S60縮小篩選范圍或者確定最適波長范圍;

步驟S80反向篩選基礎培養(yǎng)基,使用步驟S70確定的最適波長范圍搭配不同基礎培養(yǎng)基,重復步驟S40和步驟S50,并使用步驟S60的計算方法計算評估因數,確定最適基礎培養(yǎng)基;

步驟S90不同波長組合篩選,通過單一因數確定不同波長對甘草愈傷組織增殖的生理參數影響,調整最適合波長組合。

2.根據權利要求1所述的一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養(yǎng)條件的方法,其特征在于,所述的步驟S30中每個實驗組或者對照組設置5-15個平行組。

3.根據權利要求1所述的一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養(yǎng)條件的方法,其特征在于,所述的步驟S70中重復的次數是2-3次。

4.根據權利要求1所述的一種篩選促進甘草愈傷組織增殖培養(yǎng)條件的方法,其特征在于,所述的步驟S80中不同的基礎培養(yǎng)基包括MS培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基、B5培養(yǎng)基、Nitsh培養(yǎng)基、White培養(yǎng)基和Miller培養(yǎng)基。

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