本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種利用抑菌培養(yǎng)基培育茉莉花的組培方法，屬生物
技術領域：
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背景技術：
：茉莉花系木樨科素馨屬植物，學名為Jasminumsambac(Linn.)Aiton，原產(chǎn)于印度、波斯灣等地區(qū)。我國的茉莉花種植面積約占世界種植面積的三分之二，鮮花產(chǎn)量居世界首位。由于茉莉花不僅是裝飾、觀賞的佳品，還具有很高的經(jīng)濟價值。除可供窨制花茶外，還可提取芳香油作為香料，茉莉花香的主要成分是茉莉酮，香質純正優(yōu)雅，風味殊勝，故為我國香料工業(yè)調(diào)制茉莉型香精的主要原料，又是茉莉花茶的花源。用茉莉花窨制的花茶，香氣清雅、鮮靈而芬芳，茶湯醇厚、濃郁而不濁，在國內(nèi)外享有盛名。用茉莉花提取的茉莉油，又是貴重的日用化工原料。還可制作洗眼藥，醫(yī)治結膜炎等。茉莉花傳統(tǒng)是以扦插繁殖，繁殖方法簡便。但是，對于一些優(yōu)良單株或瀕危品種，由于母株有限，可供扦插的枝條很少，難于在短時間內(nèi)達到大量繁殖的目的。通過茉莉花組織培養(yǎng)，一方面可以不受季節(jié)影響，在短時間內(nèi)達到大量繁殖的目的，從而實現(xiàn)規(guī)?；敝?；另一方面，可以在保存其原有的優(yōu)良性狀的基礎上，實現(xiàn)茉莉花的種質資源保存、提純復壯和轉基因研究等。茉莉花組織培養(yǎng)的成本主要包括組培苗生產(chǎn)所需的培養(yǎng)基、設施設備、供電成本、耗材和人工成本。常規(guī)的茉莉花組織培養(yǎng)方法要求外植體接種在高溫高壓滅菌后的無菌培養(yǎng)基中才能正常生長，耗能大，人工操作成本高。如果能通過藥物抑菌的方法來改造培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基無需經(jīng)過高溫高壓滅菌，就能夠獲得茉莉花的正常生長。然而，針對不同的植物品種難以篩選到一種合適的抗菌劑，往往是當培養(yǎng)基抗菌時，植物組織的生長就受到抑制；而植物組織正常生長，就無法獲得滿意的抗菌效果。其原因，一是還沒有一種抗生素對所有的菌類都有效，而且抗生素藥效期短；二是有些抗菌素、防腐劑在有效的濃度下，其殺菌、抗菌離子對植物組織直接產(chǎn)生傷害，有些則產(chǎn)生鹽害。必須選擇與植物組織親和、藥效期長(至少一個生長周期)，不產(chǎn)生鹽害并具有殺菌、抗菌活性的物質作為抗菌劑。因此，篩選合適的抗菌藥劑是抑菌組培技術得以應用的關鍵。本發(fā)明就是為茉莉花組織培養(yǎng)提供一種抑菌培養(yǎng)方法。一方面可以降低茉莉花組織培養(yǎng)對設施設備的要求，尤其不需要高溫高壓滅菌所需配置的高壓鍋設備，縮減了投資成本，電能消耗大幅度降低；另一方面，采用這種培養(yǎng)基開展茉莉花組織培養(yǎng)，組培環(huán)節(jié)大為簡化，人工操作的速度大幅提高，從而降低了人工成本。此外，由于改造后的培養(yǎng)基自身具有殺菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制組織培養(yǎng)過程中的污染問題，又不會對茉莉花生長產(chǎn)生毒害或抑制，即不影響茉莉花的正常生長，從根本上簡化了茉莉花組織培養(yǎng)。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種利用抑菌培養(yǎng)基培育茉莉花的組培方法。本發(fā)明的目的是通過以下方法實現(xiàn)的。本發(fā)明的一種利用抑菌培養(yǎng)基培育茉莉花的組培方法，包括培養(yǎng)容器消毒、培養(yǎng)基配制、無菌水制備、誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和瓶苗移栽，其特征在于：1.培養(yǎng)容器消毒：將培養(yǎng)瓶、瓶蓋及接種用的塑料盤在100mg/L次氯酸鈉+10mg/L環(huán)絲氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸鈉的水溶液中浸泡不少于10h，保存?zhèn)溆茫?.培養(yǎng)基配制：誘導培養(yǎng)基為MS+1～3mg/L6-BA+0.1～1.0mg/LIBA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L環(huán)絲氨酸+10～50mg/L丙酸鈣+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；增殖培養(yǎng)基為：MS+1～2mg/L6-BA+0.1～0.5mg/LIBA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L環(huán)絲氨酸+10～50mg/L丙酸鈣+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；生根培養(yǎng)基為1/2MS+1～3mg/LIBA+40～100mg/L次氯酸鈉+1～5mg/L環(huán)絲氨酸+10～50mg/L丙酸鈣+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；所述MS，為1962年，Murashige和Skoog公開的MS培養(yǎng)基；所述6-BA，指6-芐氨基嘌呤；所述IBA，指α-吲哚丁酸；配制培養(yǎng)基時，先稱各培養(yǎng)基配方中的蔗糖和瓊脂粉，加培養(yǎng)基總重量1/2的自來水，加熱至瓊脂粉完全溶解，再按各培養(yǎng)基配方配齊其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調(diào)pH值至5.8，分裝到消毒過的培養(yǎng)容器中，封口，冷卻凝固后備用；3.無菌水的制備：采用次氯酸鈉、環(huán)絲氨酸、十二烷基磺酸鈉和水配制無菌水，終濃度為100mg/L次氯酸鈉、10mg/L環(huán)絲氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸鈉，現(xiàn)配現(xiàn)用；4.誘導培養(yǎng)：剪取無病蟲害、生長健壯、半木質化的茉莉花新梢，剪去葉片后，剪成2～3cm的帶腋芽莖段，用洗衣粉浸泡沖洗15min后，用體積比為75％酒精消毒30s，再用重量體積比為0.1％升汞浸泡消毒12min，無菌水反復沖洗不少于3次；消毒后的莖段在無菌條件下接種于誘導培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30d后長出新芽；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1000Lx；5.增殖培養(yǎng)：將誘導出的茉莉花新芽轉入增殖培養(yǎng)基中，30d后逐步長大或誘導出叢生芽，將長出的新芽再切成帶腋芽的莖段，或叢生芽切開，接種到增殖培養(yǎng)基上；每30d轉接一次，獲得大量幼芽；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1500Lx；6.生根培養(yǎng)：取高度為3～5cm芽苗，接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)25d后成為完整植株；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1500Lx；7.瓶苗移栽：將生根培養(yǎng)獲得的完整植株取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800倍的多菌靈浸泡30min后，移栽至透水性好的微酸性土壤中，大棚上層用遮光網(wǎng)遮蓋，移栽的環(huán)境溫度為22～28℃。本發(fā)明的應用效果：本發(fā)明的抑菌組培方法，利用化學試劑添加到各種培養(yǎng)基中，達到滅菌或抑菌的作用，配制的培養(yǎng)基無需高溫高壓滅菌。因此，在茉莉花誘導培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)各個階段，除了要考慮常用的評價指標外，還要考慮污染率的問題。1.誘導培養(yǎng)：通過實驗證實，本發(fā)明的一種利用抑菌培養(yǎng)基培育茉莉花的組培方法與常規(guī)的茉莉花組培方法相比，結果如表1所示，在誘導培養(yǎng)階段的外植體培養(yǎng)的成活率差異不明顯。表1本發(fā)明的抑菌組培方法對茉莉花誘導培養(yǎng)的影響組培方式外植體數(shù)外植體污染數(shù)成活率(％)常規(guī)組培方法603558.3抑菌組培方法603355.02.增殖培養(yǎng)：本發(fā)明的抑菌組培方法與常規(guī)組培茉莉花的增殖倍數(shù)和污染率的比較，結果如表2所示，增殖倍數(shù)和污染率二個指標都差異不明顯。從瓶苗的生長狀況看，本發(fā)明的抑菌組培方法的培養(yǎng)基由于不經(jīng)過高溫高壓滅菌，激素和營養(yǎng)元素損失較少，茉莉花組培苗更壯，葉色更綠。表2本發(fā)明的抑菌組培方法對茉莉花增殖倍數(shù)和污染率的影響3本發(fā)明的抑菌組培方法對茉莉花生根率和污染率的影響：在組培苗生根過程中，本發(fā)明的抑菌組培方法與常規(guī)的茉莉花組培方法相比，結果如表3所示，生根率和污染率的差異不顯著。表3本發(fā)明的抑菌組培方法的茉莉花瓶苗生根情況組培方式平均生根率(％)平均污染率(％)常規(guī)組培方法900.3抑菌組培方法920.24.成本分析：本發(fā)明的抑菌組培方法與常規(guī)組培的成本分析見表4。本發(fā)明組培省去了高壓滅菌環(huán)節(jié)，簡化了組培程序，提高了工作效率。從直接費用計算，每年可以節(jié)約5.5萬元左右(以每天配制50L培養(yǎng)基計算)。常規(guī)組培還需要添置高壓鍋等設備及日常維護，此外，常規(guī)組培還存在實驗室安全等問題。表4本發(fā)明的茉莉花簡便組培方法與常規(guī)組培的成本分析表本發(fā)明具有如下有益效果：1.本發(fā)明的茉莉花抑菌組培方法中，培養(yǎng)容器和培養(yǎng)基都無需高溫高壓滅菌，減少了工作量和能源消耗，簡化了茉莉花組培技術環(huán)節(jié)，降低了茉莉花組培成本。2.本發(fā)明的茉莉花抑菌組培方法，操作簡單，只需按不同的培養(yǎng)基配方配制后即可，實用性強，推廣性好。3.本發(fā)明的茉莉花抑菌組培方法與常規(guī)的茉莉花組培方法對比，可以降低成本10％以上。具體實施方式為了進一步闡明本發(fā)明而不是限制本發(fā)明，以下結合實施例加以說明。實施例一：一種利用抑菌培養(yǎng)基培育茉莉花的組培方法一種利用抑菌培養(yǎng)基培育茉莉花的組培方法，包括以下步驟：1.培養(yǎng)容器消毒：將培養(yǎng)瓶、瓶蓋及接種用的塑料盤在取100mg/L次氯酸鈉+5mg/L環(huán)絲氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸鈉的水溶液中浸泡不少于10h，保存?zhèn)溆茫?.培養(yǎng)基配制：誘導培養(yǎng)基為MS+2mg/L6-BA+0.5mg/LIBA+60mg/L次氯酸鈉+3mg/L環(huán)絲氨酸+30mg/L丙酸鈣+0.1mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；增殖培養(yǎng)基為：MS+1.5mg/L6-BA+0.3mg/LIBA+60mg/L次氯酸鈉+3mg/L環(huán)絲氨酸+30mg/L丙酸鈣+0.1mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；生根培養(yǎng)基為1/2MS+1～3mg/LIBA+60mg/L次氯酸鈉+3mg/L環(huán)絲氨酸+30mg/L丙酸鈣+0.1mg/L十二烷基磺酸鈉+30g/L蔗糖+3.0g/L瓊脂粉，pH5.8；配制培養(yǎng)基時，先稱各培養(yǎng)基配方中的蔗糖和瓊脂粉，加培養(yǎng)基總重量1/2的自來水，加熱至瓊脂粉完全溶解，再按各培養(yǎng)基配方配齊其他原料后，定容，然后用1.0mol/L的NaOH或1mol/L的HCl調(diào)pH值至5.8，分裝到消毒過的培養(yǎng)容器中，封口，冷卻凝固后備用；3.無菌水的制備：采用次氯酸鈉、環(huán)絲氨酸、十二烷基磺酸鈉和水配制無菌水，終濃度為100mg/L次氯酸鈉、10mg/L環(huán)絲氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸鈉，現(xiàn)配現(xiàn)用；4.誘導培養(yǎng)：剪取無病蟲害生長健壯的茉莉花新梢，剪去葉片后，剪成2～3cm長的帶腋芽莖段，用洗衣粉浸泡沖洗15min后，用體積比為75％酒精消毒30s，再用重量體積比為0.1％升汞浸泡消毒12min，無菌水反復沖洗3次。消毒后的莖段在無菌條件下接種于誘導培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30d后長出新芽；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1000Lx；5.增殖培養(yǎng)：將誘導出的新芽轉入增殖培養(yǎng)基中，30d后逐步誘導出叢生芽。將叢生芽切開(或將長的新芽再切成帶腋芽的莖段)接種到增殖培養(yǎng)基上；每30d轉接一次，可獲得大量幼芽；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1500Lx；6.生根培養(yǎng)：取高度為3～5cm芽苗，接種到生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)25d后成為完整植株；培養(yǎng)室溫度為26℃，光照12h，光照強度為1500Lx；7.瓶苗移栽：將生根培養(yǎng)獲得的完整植株取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，用800倍的多菌靈浸泡30min后，移栽至透水性好的微酸性土壤中，大棚上層用遮光網(wǎng)遮蓋，移栽的環(huán)境溫度為22～28℃。當前第1頁1 2 3