本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其涉及一種艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法。

背景技術(shù)：

艷山姜(Alpinia zerumbet(Persoon)B.L.Burtt&R.M.Smith)為姜科山姜屬多年生草本植物，植株高可達(dá)3米，花序下垂，花白色，唇瓣黃色具美麗的紫色條紋，花大而艷麗，花期4-6月，是極好的觀花園林用材。目前尚無組織培養(yǎng)與快速繁殖的研究報(bào)道。艷山姜種子土壤播種出芽率低，分株繁殖系數(shù)小，難以快速繁殖種苗應(yīng)用。姜科植物多是采用吸芽分株或根莖等進(jìn)行繁殖，短時(shí)間內(nèi)難以大量繁殖種苗。

綜上所述，艷山姜種子土壤播種出芽率低，分株繁殖系數(shù)小，難以快速繁殖種苗應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法，旨在解決艷山姜種子土壤播種出芽率低，分株繁殖系數(shù)小，難以快速繁殖種苗應(yīng)用的問題。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法，所述艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法是用種子進(jìn)行無菌播種誘導(dǎo)發(fā)芽，然后利用芽擴(kuò)繁繼而生根的快速繁育種苗的方法；是以艷山姜種子作為繁殖外植體，采用適合艷山姜各個(gè)生長(zhǎng)階段的培養(yǎng)基，使種子萌發(fā)、增殖和生根，實(shí)現(xiàn)艷山姜種苗的規(guī)?；a(chǎn)。

進(jìn)一步，所述艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法包括以下步驟：

(1)采集艷山姜果實(shí)，剝出種子，去除癟粒后裝入紙袋中，置于4℃的冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆?；將種子放入紗布中扎緊口，移入超凈工作臺(tái)，置于無菌瓶中，用75﹪酒精消毒20s，倒去酒精后，再用0.1﹪升汞浸泡8min，期間不停晃動(dòng)瓶子，最后用無菌水沖洗5次，洗掉殘余的消毒液；種子預(yù)處理：用手術(shù)刀將已消毒好的種子切破少許種皮。

(2)將預(yù)處理后的種子接入培養(yǎng)基中，接種32d開始萌芽，先長(zhǎng)出胚根，38d時(shí)為種子發(fā)芽高峰，發(fā)芽率57.5﹪，50d種子發(fā)芽率達(dá)到93.8﹪，60d時(shí)基部萌發(fā)出1-3個(gè)新芽。

(3)將萌發(fā)出的芽切分成單芽并去除部分頂端接入培養(yǎng)基，13d后長(zhǎng)出側(cè)芽，30d芽增殖倍率達(dá)到4.89倍；以后每隔30d轉(zhuǎn)入相同的培養(yǎng)基中擴(kuò)繁。

(4)將高約3㎝左右的叢芽切分成單芽接入培養(yǎng)基中培養(yǎng)，3d開始發(fā)根，30d生根率100％，根系粗長(zhǎng)，平均每株生根5.58條，植株葉色綠生長(zhǎng)健壯。

(5)將培養(yǎng)30d左右的組培苗移入室外蔭棚中煉苗，3-5d后小心取出小苗，將其根部附著的培養(yǎng)基清洗干凈，栽植到基質(zhì)中，然后澆水淋透，用75％陰網(wǎng)遮陽(yáng)，以后見干澆水，栽后30d成活率100％。

進(jìn)一步，所述步驟(2)中培養(yǎng)基為MS+6-BA 5.0mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5；培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度1500lx。

進(jìn)一步，所述步驟(3)中培養(yǎng)基為MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5；培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度1500lx。

進(jìn)一步，所述步驟(4)中培養(yǎng)基為：MS+NAA 0.8mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5；培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度1500lx。

進(jìn)一步，所述步驟(5)中移栽基質(zhì)為取椰糖和河沙按體積1：1的比例混合均勻，裝入穴盤中，種植前澆透水。

本發(fā)明的目的在于提供一種利用所述艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法種植艷山姜。

本發(fā)明提供的艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法，是一種用種子進(jìn)行無菌播種誘導(dǎo)發(fā)芽，然后利用芽擴(kuò)繁繼而生根的快速繁育種苗的方法；解決了種子的處理、種子的消毒滅菌方法、種子萌發(fā)和誘芽培養(yǎng)基配方的研制、芽增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基配方的研制及組培苗的移栽。本發(fā)明是用艷山姜種子作為繁殖外植體，通過種子在不同培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌萌發(fā)、增殖、生根培養(yǎng)，獲得了適合于艷山姜各個(gè)生長(zhǎng)階段的獨(dú)特培養(yǎng)基配方，從而實(shí)現(xiàn)了艷山姜種苗的規(guī)模化生產(chǎn)。

通過本發(fā)明無菌萌發(fā)獲得的種子萌發(fā)率為93.8％，增殖培養(yǎng)得到的叢生芽30天增殖倍率達(dá)到4.89倍，生根培養(yǎng)的幼苗生根率100％，移栽成活率達(dá)到100％。與艷山姜種子直接播種到土壤中生長(zhǎng)的方式相比，從無菌播種到煉苗移栽在4個(gè)月即可實(shí)現(xiàn)，大大縮短了艷山姜的生長(zhǎng)周期，且種苗生長(zhǎng)健壯；通過芽增殖擴(kuò)繁可以規(guī)模化快速生產(chǎn)種苗；研制的培養(yǎng)基配方簡(jiǎn)單、成分來源廣泛、易于操作配制。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法流程圖。

具體實(shí)施方式

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作詳細(xì)的描述。

如圖1所示，本發(fā)明實(shí)施例提供的艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法包括以下步驟：

S101:采集艷山姜果實(shí)，剝出種子，去除癟粒后裝入紙袋中，置于4℃的冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆?；將種子放入紗布中扎緊口，紗布不宜太緊要有足夠的松動(dòng)以利于種子接觸消毒液，然后將其移入超凈工作臺(tái)，置于無菌瓶中，用75﹪酒精消毒20s，倒去酒精后，再用0.1﹪升汞浸泡8min，期間不?；蝿?dòng)瓶子，最后用無菌水沖洗5次，充分洗掉殘余的消毒液；種子預(yù)處理：用手術(shù)刀將已消毒好的種子切破少許種皮；

S102:將預(yù)處理后的種子接入培養(yǎng)基中，接種32d開始萌芽，先長(zhǎng)出胚根，38d時(shí)為種子發(fā)芽高峰，發(fā)芽率57.5﹪，50d種子發(fā)芽率達(dá)到93.8﹪，60d時(shí)基部萌發(fā)出1-3個(gè)新芽；

S103:將萌發(fā)出的芽切分成單芽并去除部分頂端接入培養(yǎng)基，13d后長(zhǎng)出側(cè)芽，30d芽增殖倍率達(dá)到4.89倍。以后每隔30d轉(zhuǎn)入相同的培養(yǎng)基中擴(kuò)繁；

S104:將高約3㎝左右的叢芽切分成單芽接入培養(yǎng)基中培養(yǎng)，3d開始發(fā)根，30d生根率100％，根系粗長(zhǎng)，平均每株生根5.58條，植株葉色綠生長(zhǎng)健壯；

S105:將培養(yǎng)30d左右的組培苗移入室外蔭棚中煉苗，3-5d后小心取出小苗，將其根部附著的培養(yǎng)基清洗干凈，栽植到基質(zhì)中，然后澆水淋透，用75％陰網(wǎng)遮陽(yáng)，以后見干澆水；栽后30d成活率100％。

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理作進(jìn)一步的描述。

本發(fā)明實(shí)施例提供的艷山姜種子無菌萌發(fā)與快速繁殖的方法包括以下步驟：

1種子處理

1.1種子采集：采集艷山姜果實(shí)，剝出種子，去除癟粒后裝入紙袋中，置于4℃的冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

1.2種子消毒：將種子放入紗布中扎緊口，紗布不宜太緊要有足夠的松動(dòng)以利于種子接觸消毒液，然后將其移入超凈工作臺(tái)，置于無菌瓶中，用75﹪酒精消毒20s，倒去酒精后，再用0.1﹪升汞浸泡8min，期間不?；蝿?dòng)瓶子，最后用無菌水沖洗5次，充分洗掉殘余的消毒液。

1.3種子預(yù)處理：用手術(shù)刀將已消毒好的種子切破少許種皮，注意不要損傷到種胚。

2種子萌發(fā)和芽誘導(dǎo)培養(yǎng)

2.1培養(yǎng)基配方

MS+6-BA 5.0mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5。

2.2培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度1500lx。

2.3接種

將預(yù)處理后的種子接入培養(yǎng)基中，接種32d開始萌芽，先長(zhǎng)出胚根，38d時(shí)為種子發(fā)芽高峰，發(fā)芽率57.5﹪，50d種子發(fā)芽率達(dá)到93.8﹪，60d時(shí)基部萌發(fā)出1-3個(gè)新芽。

3芽增殖繼代培養(yǎng)

3.1培養(yǎng)基配方

MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5。

3.2培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度1500lx。

3.3接種

將萌發(fā)出的芽切分成單芽并去除部分頂端接入培養(yǎng)基，13d后長(zhǎng)出側(cè)芽，30d芽增殖倍率達(dá)到4.89倍。以后每隔30d轉(zhuǎn)入相同的培養(yǎng)基中擴(kuò)繁。

4生根培養(yǎng)

4.1培養(yǎng)基配方

MS+NAA 0.8mg/L+蔗糖30g/L，pH值6.5。

4.2培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度(26±2)℃，光照時(shí)間9h/d，光照強(qiáng)度1500lx。

4.3接種

將高約3㎝左右的叢芽切分成單芽接入培養(yǎng)基中培養(yǎng)，3d開始發(fā)根，30d生根率100％，根系粗長(zhǎng)，平均每株生根5.58條，植株葉色綠生長(zhǎng)健壯。

5組培苗移栽

5.1移栽基質(zhì)

取椰糖和河沙按體積1：1的比例混合均勻，裝入穴盤中，種植前澆透水。

5.2移栽方法

將培養(yǎng)30d左右的組培苗移入室外蔭棚中煉苗，3-5d后小心取出小苗，將其根部附著的培養(yǎng)基清洗干凈，栽植到基質(zhì)中，然后澆水淋透，用75％陰網(wǎng)遮陽(yáng)，以后見干澆水。栽后30d成活率100％。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所作的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。