一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑及其制備方法
【專利摘要】一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑，包括MS培養(yǎng)基母液或B5培養(yǎng)基母液，每1000毫升培養(yǎng)基抗菌劑中還包括有殼聚糖1-5克，茶多酚1-4克，香蕉泥80-120克,蔗糖15-30克,蛋白胨2-4克，吲哚丁酸鉀0.2-0.5毫克，萘乙酸鈉的0.2-0.6毫克，6嘌呤-芐氨基0.5-1毫克。所述培養(yǎng)基抗菌劑用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)PH值至5.4-5.7。本發(fā)明培養(yǎng)基抗菌劑采用殼聚糖和茶多酚，殼聚糖和茶多酚不僅具有較好抑菌、殺菌作用，且是有益健康的養(yǎng)生精品，在有效降低農(nóng)殘的同時(shí)，又能促進(jìn)金線蓮的健康生長(zhǎng)。香蕉泥.蛋白胨富含有機(jī)鉀.有機(jī)氮能有效提供金線蓮養(yǎng)分需求，同時(shí)提高金線蓮各種有效成分含量，確保藥效。
【專利說明】一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及金線蓮組培的生物技術(shù)，尤其是指金線蓮組培過程中培養(yǎng)基抗菌劑的配制技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]金線蓮是一種名貴中藥材，素有藥王之稱，由于天然野生極少，組培種植前景較好?，F(xiàn)有金線蓮組培培養(yǎng)基大都采用MS培養(yǎng)基或B5培養(yǎng)基為母液，添加蛋白胨，瓊脂等。在組培過程中因受環(huán)境、培養(yǎng)基及人工技術(shù)等多方面因素影響，導(dǎo)致苗瓶污染率較高，從而提高組培成本。目前解決的手段是在培養(yǎng)基中加入殺菌劑，如青霉素或氯霉素.四環(huán)素等抗生素，甚至添加多菌靈咪酰胺等農(nóng)藥，雖起到一定的殺菌效果，但很難控制農(nóng)殘，再者抗生素及農(nóng)藥殺菌劑的添加也影響金線蓮的生長(zhǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明目的在于提供一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑及其制備方法，所述的培養(yǎng)基抗菌劑具有較好抑菌、殺菌作用，又能降低農(nóng)殘，促進(jìn)金線蓮的生長(zhǎng)。
[0004]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明技術(shù)方案為:
[0005]一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑，包括MS培養(yǎng)基母液或B5培養(yǎng)基母液，還包括有殼聚糖和茶多酚；每1000毫升的所述培養(yǎng)基抗菌劑中，殼聚糖的添加比例是1-5克，茶多酚的添加比例是1-4克。還包括有香蕉泥、蔗糖和蛋白胨；每1000毫升的所述培養(yǎng)基抗菌劑中，香蕉泥的添加比例是80-120克，蔗糖的添加比例是15-30克，蛋白胨的添加比例是2-4克。還包括有吲哚丁酸鉀、萘乙酸鈉和6嘌呤-芐氨基；每1000毫升的所述培養(yǎng)基抗菌劑中，吲哚丁酸鉀的添加比例是0.2-0.5毫克、萘乙酸鈉的添加比例是0.2-0.6毫克、6嘌呤-芐氨基的添加比例是0.5-1毫克。所述培養(yǎng)基抗菌劑用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)PH值至5.4-5.7。
[0006]一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑的制備方法，其特征在于:每1000毫升的培養(yǎng)基抗菌劑制備步驟如下:
[0007]步驟一，稱取70毫升-100毫升的MS培養(yǎng)基母液或B5培養(yǎng)基母液待用；
[0008]步驟二，稱取5.5-7克的瓊脂放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠茫?br> [0009]步驟三，稱量1-5克的殼聚糖和1-4克的茶多酚，及80-120克的香蕉泥、15-30克的蔗糖和2-4克的蛋白胨放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠茫?br> [0010]步驟四，在MS培養(yǎng)基母液或B5培養(yǎng)基母液中加入吲哚丁酸鉀0.2-0.5毫克、萘乙酸鈉0.2-0.6毫克、6嘌呤-芐氨基0.5-1毫克，并充分溶解；
[0011]步驟五，在步驟二中的瓊脂中加入步驟三配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙猓?br> [0012]步驟六，混合步驟四和步驟五所配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙?，加熱水定量制?000毫升的培養(yǎng)基抗菌劑；[0013] 其中，步驟一、步驟二和步驟三的順序可置換，步驟四和步驟五的順序可置換。
[0014]將配制好的培養(yǎng)基抗菌劑趁熱倒入培養(yǎng)器中，培養(yǎng)基抗菌劑占容器的體積為1/3-1/4，在121°C _126°C，壓力111-115千帕下維持15-20分鐘，滅菌后冷卻靜置5天后使用。
[0015]本發(fā)明培養(yǎng)基抗菌劑采用殼聚糖和茶多酚，殼聚糖和茶多酚不僅具有較好抑菌、殺菌作用，且是有益健康的養(yǎng)生精品，在有效降低農(nóng)殘的同時(shí)，又能促進(jìn)金線蓮的健康生長(zhǎng)。香蕉泥.蛋白胨富含有機(jī)鉀.有機(jī)氮能有效提供金線蓮養(yǎng)分需求，同時(shí)提高金線蓮各種有效成分含量，確保藥效。
【具體實(shí)施方式】
[0016]為了使本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題、技術(shù)方案及有益效果更加清楚、明白，以下通過實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0017]本發(fā)明提供的金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑，在每1000毫升的所述培養(yǎng)基抗菌劑中，包括70-100毫升的MS培養(yǎng)基母液B5培養(yǎng)基母液待用、1-5克的殼聚糖、1_4克的茶多酚、80-120克的香蕉泥、15-30克的蔗糖、2-4克的蛋白胨、0.2-0.5毫克的吲哚丁酸鉀、
0.2-0.6毫克的萘乙酸鈉和0.5-1毫克的6嘌呤-芐氨基，且所述培養(yǎng)基抗菌劑用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)PH值至5.4-5.7。
[0018]實(shí)施例一
[0019]本發(fā)明每1000毫升的金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑的制備步驟是:
[0020]步驟一，MS培養(yǎng)基母液的的配制:
[0021]母液A:硫酸鎂18.5克硝酸銨82.5克硝酸鉀95.0克，加入水定容到1000毫升，
配I升培養(yǎng)基抗菌劑量取20毫升
[0022]母液B:氯化鈣22.0克加入水定容到500毫升，配I升量培養(yǎng)基抗菌劑取10毫升。
[0023]母液C:磷酸二氫鉀8.5克加入水定容500毫升，配I升培養(yǎng)基抗菌劑量取10毫升
[0024]母液D:乙二胺四乙酸二鈉3.73克和硫酸亞鐵2.78克加水定容到1000毫升，配I
升培養(yǎng)基抗菌劑加10毫升。
[0025]母液E:硼酸620毫克，硫酸錳2230毫克，硫酸鋅860毫克，硫酸銅2.5毫克，碘酸鉀83毫克，鉬酸鈉25毫克和氯化鈷2.5毫克加水定容到1000毫升，配I升培養(yǎng)基抗菌劑
量取10毫升。
[0026]母液F.:肌醇5克，甘氨酸100毫克，煙酸25毫克，鹽酸吡哆醇25毫克和鹽酸硫銨素5暈克加水定容到500毫升,配I升培養(yǎng)基抗菌劑量取10毫升。
[0027]按上述順序量取母液混合后制得70毫升的MS培養(yǎng)基母液待用；
[0028]步驟二，稱取5.5克的瓊脂放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠?；本文所述的熱水的水溫?0°C左右。
[0029]步驟三，稱量I克的殼聚糖和I克的茶多酚，及80克的香蕉泥、15克的蔗糖和2克蛋白胨放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠茫?br> [0030]步驟四，在MS培養(yǎng)基母液或B5培養(yǎng)基母液中加入吲哚丁酸鉀0.2毫克、萘乙酸鈉0.2毫克、6嘌呤-芐氨基0.5毫克，并充分溶解；
[0031]步驟五，在步驟二中的瓊脂中加入步驟三配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙猓?br> [0032]步驟六，混合步驟四和步驟五所配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙?，加熱水定量制?000毫升的培養(yǎng)基抗菌劑。所述培養(yǎng)基抗菌劑用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)PH值至5.4。其中，步驟一、步驟二和步驟三的順序可置換，步驟四和步驟五的順序可置換。
[0033]將配制好的培養(yǎng)基抗菌劑趁熱倒入培養(yǎng)器中，培養(yǎng)基抗菌劑占容器的體積為1/3，在121°C，壓力111千帕下維持15分鐘，滅菌后冷卻靜置5天后使用。
[0034]實(shí)施例二
[0035]本發(fā)明每1000毫升的金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑的制備步驟是:
[0036]步驟一，MS培養(yǎng)基母液的的配制:
[0037]①母液A:硫酸鎂18.5克硝酸銨82.5克硝酸鉀95.0克，加入水定容到1000毫升，
配I升培養(yǎng)基量取22.5毫升。
[0038]②母液B:氯化鈣22.0克加入水定容到500毫升，配I升量培養(yǎng)基取？ 12.5毫升。
[0039]③母液C:磷 酸二氫鉀8.5克加入水定容500毫升，配I升培養(yǎng)基量取？ 12.5毫升。
[0040]④母液D:乙二胺四乙酸二鈉3.73克和硫酸亞鐵2.78克加水定容到1000毫升，配I升培養(yǎng)基加12.5毫升。
[0041]⑤母液E:硼酸620毫克，硫酸錳2230毫克，硫酸鋅860毫克，硫酸銅2.5毫克，碘酸鉀83毫克，鉬酸鈉25毫克和氯化鈷2.5毫克加水定容到1000毫升，配I升培養(yǎng)基量取12.5毫升。
[0042]⑥母液F.:肌醇5克，甘氨酸100毫克，煙酸25毫克，鹽酸吡哆醇25毫克和鹽酸硫銨素5暈克加水定容到500毫升,配I升培養(yǎng)基量取12.5毫升。
[0043]按上述順序量取母液混合后制得85毫升的MS培養(yǎng)基母液；
[0044]步驟二，稱取6.3克的瓊脂放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠?；本文所述的熱水的水溫?0°C左右。
[0045]步驟三，稱量2.5克的殼聚糖和2.0克的茶多酚，及100克的香蕉泥、22.5克的蔗糖和3克蛋白胨放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠茫?br> [0046]步驟四，在MS培養(yǎng)基母液中加入吲哚丁酸鉀0.35毫克、萘乙酸鈉0.4毫克、6嘌呤-芐氨基0.75毫克，并充分溶解；
[0047]步驟五，在步驟二中的瓊脂中加入步驟三配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙猓?br> [0048]步驟六，混合步驟四和步驟五所配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙?，加熱水定量制?000毫升的培養(yǎng)基抗菌劑。所述培養(yǎng)基抗菌劑用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)PH值至5.6。其中，步驟一、步驟二和步驟三的順序可置換，步驟四和步驟五的順序可置換。
[0049]將配制好的培養(yǎng)基抗菌劑趁熱倒入培養(yǎng)器中，培養(yǎng)基抗菌劑占容器的體積為7/12，在123.5°C，壓力112.5千帕下維持17.5分鐘，滅菌后冷卻靜置5天后使用。
[0050]實(shí)施例三
[0051]本發(fā)明每1000毫升的金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑的制備步驟是:
[0052]步驟一，MS培養(yǎng)基母液的的配制:
[0053]①母液A:硫酸鎂18.5克硝酸銨82.5克硝酸鉀95.0克，加入水定容到1000毫升，配I升培養(yǎng)基量取25毫升。
[0054]②母液B:氯化鈣22.0克加入水定容到500毫升，配I升量培養(yǎng)基取15毫升。
[0055]③母液C:磷酸二氫鉀8.5克加入水定容500毫升，配I升培養(yǎng)基量取15毫升
[0056]④母液D:乙二胺四乙酸二鈉3.73克和硫酸亞鐵2.78克加水定容到1000毫升，配I升培養(yǎng)基加15毫升。
[0057]⑤母液E:硼酸620毫克，硫酸錳2230毫克，硫酸鋅860毫克，硫酸銅2.5毫克，碘酸鉀83毫克，鉬酸鈉25毫克和氯化鈷2.5毫克加水定容到1000毫升，配I升培養(yǎng)基量取15毫升。
[0058]⑥母液F.:肌醇5克，甘氨酸100毫克，煙酸25毫克，鹽酸吡哆醇25毫克和鹽酸硫銨素5暈克加水定容到500毫升,配I升培養(yǎng)基量取15毫升。
[0059]按上述順序量取母液混合后制得100毫升的MS培養(yǎng)基母液；
[0060]步驟二，稱取7克的瓊脂放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠?；本文所述的熱水的水溫?0°C左右。
[0061]步驟三，稱量5克的殼聚糖和4克的茶多酚，及120克的香蕉泥、30克的蔗糖和4克蛋白胨放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠茫?br> [0062]步驟四，在MS培養(yǎng)基母液或B5培養(yǎng)基母液中加入吲哚丁酸鉀0.5毫克、萘乙酸鈉
0.6毫克、6嘌呤-芐氨基I毫克，并充分溶解；
[0063]步驟五，在步驟二中的瓊脂中加入步驟三配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙猓?br> [0064]步驟六，混合步驟四和步驟五所配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙?，加熱水定量制?000毫升的培養(yǎng)基抗菌劑。所述培養(yǎng)基抗菌劑用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)PH值至5.7。其中，步驟一、步驟二和步驟三的順序可置換，步驟四和步驟五的順序可置換。
[0065]將配制好的培養(yǎng)基抗菌劑趁熱倒入培養(yǎng)器中，培養(yǎng)基抗菌劑占容器的體積為1/4,在126°C，壓力115千帕下維持20分鐘，滅菌后冷卻靜置5天后使用。
[0066] 上述說明示出并描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，如前所述，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并非局限于本文所披露的形式，不應(yīng)看作是對(duì)其他實(shí)施例的排除，而可用于各種其他組合、修改和環(huán)境，并能夠在本文所述發(fā)明構(gòu)想范圍內(nèi)，通過上述教導(dǎo)或相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)或知識(shí)進(jìn)行改動(dòng)。而本領(lǐng)域人員所進(jìn)行的改動(dòng)和變化不脫離本發(fā)明的精神和范圍，則都應(yīng)在本發(fā)明所附權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑，包括MS培養(yǎng)基母液或B5培養(yǎng)基母液，其特征在于:還包括有殼聚糖和茶多酚；每1000毫升的所述培養(yǎng)基抗菌劑中，殼聚糖的添加比例是1-5克，茶多酚的添加比例是1-4克。
2.如權(quán)利要求1所述的一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑，其特征在于:還包括有香蕉泥、蔗糖和蛋白胨；每1000毫升的所述培養(yǎng)基抗菌劑中，香蕉泥的添加比例是80-120克，鹿糖的添加比例是15-30克，蛋白腺的添加比例是2_4克。
3.如權(quán)利要求2所述的一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑，其特征在于:還包括有吲哚丁酸鉀、萘乙酸鈉和6嘌呤-芐氨基；每1000毫升的所述培養(yǎng)基抗菌劑中，吲哚丁酸鉀的添加比例是0.2-0.5毫克、萘乙酸鈉的添加比例是0.2-0.6毫克、6嘌呤-芐氨基的添加比例是0.5-1暈克。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑，其特征在于:所述培養(yǎng)基抗菌劑用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)PH值至5.4-5.7。
5.一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑的制備方法，其特征在于:每1000毫升的培養(yǎng)基抗菌劑制備步驟如下: 步驟一，稱取70毫升-100毫升的MS培養(yǎng)基母液或B5培養(yǎng)基母液待用； 步驟二，稱取5.5-7克的瓊脂放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠茫? 步驟三，稱量1-5克的殼聚糖和1-4克的茶多酚，及80-120克的香蕉泥、15-30克的蔗糖和2-4克的蛋白胨放在熱水中充分?jǐn)嚢枞芙夂蟠茫? 步驟四，在MS培養(yǎng)基母液或B5培養(yǎng)基母液中加入吲哚丁酸鉀0.2-0.5毫克、萘乙酸鈉0.2-0.6毫克、6嘌呤-芐氨基0.5-1毫克，并充分溶解； 步驟五，在步驟二中的瓊脂中加入步驟三配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙猓? 步驟六，混合步驟四和步驟五所配制的溶液，并充分?jǐn)嚢枞芙猓訜崴恐频?000毫升的培養(yǎng)基抗菌劑； 其中，步驟一、步驟二和步驟三的順序可置換，步驟四和步驟五的順序可置換。
6.如權(quán)利要求5所述的一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑的制備方法，其特征在于:將配制好的培養(yǎng)基抗菌劑趁熱倒入培養(yǎng)器中，培養(yǎng)基抗菌劑占容器的體積為1/3-1/4，在121°C _126°C，壓力111-115千帕下維持15-20分鐘，滅菌后冷卻靜置5天后使用。
7.如權(quán)利要求5或6所述的一種金線蓮組培的培養(yǎng)基抗菌劑的制備方法，其特征在于:所述MS培養(yǎng)基母液是按下面順序量取母液混合后制得的: 母液A:硫酸鎂18.5克硝酸銨82.5克硝酸鉀95.0克，加入水定容到1000毫升，配I升培養(yǎng)基量取20-25毫升 母液B:氯化鈣22.0克加入水定容到500毫升，配I升量培養(yǎng)基取10-15毫升。 母液C:磷酸二氫鉀8.5克加入水定容500毫升，配I升培養(yǎng)基量取10-15毫升母液D:乙二胺四乙酸二鈉3.73克和硫酸亞鐵2.78克加水定容到1000毫升，配I升培養(yǎng)基加10-15毫升。 母液E:硼酸620毫克，硫酸錳2230毫克，硫酸鋅860毫克，硫酸銅2.5毫克，碘酸鉀83毫克，鉬酸鈉25毫克和氯化鈷2.5毫克加水定容到1000毫升，配I升培養(yǎng)基量取10-15毫升。 母液F:肌醇5克，甘氨酸100毫克，煙酸25毫克，鹽酸吡哆醇25毫克和鹽酸硫銨素5暈克加水定容到500毫升，配1升培養(yǎng)基量取10-15毫升。
【文檔編號(hào)】A01N43/16GK103918714SQ201410035582
【公開日】2014年7月16日 申請(qǐng)日期:2014年1月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月25日
【發(fā)明者】黃阿賢 申請(qǐng)人:漳州美利德生物工程有限公司