一種以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，包括如下步驟：A、黃漿水的預(yù)處理：將新鮮黃漿水過濾，分裝，進行62℃,30min巴氏滅菌,滅菌后的黃漿水保存?zhèn)溆?；B、以黃漿水為原料，以廢糖蜜為底物，選擇確定液體發(fā)酵培養(yǎng)基為：廢糖蜜0.5-3.0%，MgSO4·7H2O0.1%，KH2PO40.2%，VB10.01g/L，0.05-1.5%增稠劑，雜木屑粉末0.2%，以預(yù)處理的黃漿水補足100%，調(diào)節(jié)pH至4.5-6.5；C、液體發(fā)酵條件為pH4.5-6.5、接種量10%、溫度25-31℃、搖床轉(zhuǎn)速160r/min、培養(yǎng)49-120h；D、將步驟C發(fā)酵所得桃紅側(cè)耳液體菌種按10%的接種量接至含雜木屑粉末的麥?；|(zhì)種瓶中。本發(fā)明充分利用了黃漿水和廢糖蜜的營養(yǎng)成分，有利于縮短桃紅側(cè)耳的制種周期和生產(chǎn)周期。
【專利說明】一種以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，屬于食用菌液體發(fā)酵【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]我國是大豆的故鄉(xiāng)，有著上千年的大豆種植和食用的歷史，大豆制品種類很多、消費量大。黃漿水是豆制品生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的廢水，在豆腐加工過程中加入約10倍于大豆干重的水來研磨成漿，其中約有1/2-1/3的液體在隨后的加工過程中被浙出，因其呈黃色，也被稱為“黃泔水”。黃漿水富含豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，包括大量的蛋白質(zhì)、糖類、油脂和少量的生理活性成分，并含有多種金屬元素如鈣、鐵、鋅、錳、鎂、銅、鈉、鉀，直接排放黃漿水不僅造成資源的浪費，還嚴重污染環(huán)境，不利于循環(huán)經(jīng)濟的發(fā)展。利用黃漿水的優(yōu)點還有來源廣泛，不需費用，取材容易，保存方便。目前黃漿水的價值逐漸被人發(fā)現(xiàn)，并已開始利用，研究最多的是發(fā)酵黃漿水生產(chǎn)VB12,以及利用黃漿水進行乳酸發(fā)酵、醋酸發(fā)酵等。
[0003]廢糖蜜是制糖廠的一種副產(chǎn)品，常見甘蔗廢糖蜜、甜菜廢糖蜜。每公斤廢糖蜜中含有480-520g的總糖分，其中蔗糖和還原糖比重最大，廢糖蜜還含有多種氨基酸、無機鹽和豐富的維生素和促生素。因廢糖蜜含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，可為微生物生長提供充足的養(yǎng)分，常被用于發(fā)酵酒精、酵母和檸檬酸，也被用作動物飼料或制作青貯飼料。
[0004]黃漿水和廢糖蜜兩種食品生產(chǎn)中的副產(chǎn)品富含豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，前者富含蛋白質(zhì)，后者富含糖類物質(zhì)，兩者結(jié)合可作為很好的食用菌液體培養(yǎng)基進行食用菌的發(fā)酵研究，以黃漿水配制培養(yǎng)基發(fā)酵食用菌獲得多糖的研究已有報道，而黃漿水和廢糖蜜發(fā)酵桃紅側(cè)耳制備液體菌種還未見報道。
[0005]桃紅側(cè)耳(Pleruotussalmoneostramineus L.Vass.)，屬真菌門(Fungi)、擔(dān)子菌亞門(Basidiomycotina)、層菌綱(Hymenomycetes)、傘菌目(Agaricales)、側(cè)耳科(Pleurotaceae)、側(cè)耳屬(Pleruotus)。桃紅側(cè)耳菌蓋扁形,直徑1.5_5cm,淡粉紅色,光滑。菌肉柔韌帶韌性，白色。菌褶淡粉紅色，排列較密，與菌柄延生，菌柄短側(cè)生。桃紅側(cè)耳是高溫型菌類品種，填補了高溫季節(jié)菇市鮮菇空檔，其分解木質(zhì)素、纖維素的能力很強。桃紅側(cè)耳是少見的子實體幼嫩時可生食的食用菌品種，味道鮮美，炸后有蟹味，其富含多種人體必需和非必需的氨基酸、多種維生素和礦物元素，是一種高蛋白低脂肪的健康食品，具有抗腫瘤、抗菌、提高機體免疫力等功能。桃紅側(cè)耳栽培面積很小，屬于國內(nèi)還沒有商業(yè)化生產(chǎn)、研究報道較少的一種“能吃能觀賞”的珍稀蕈菌，隨著消費者對其營養(yǎng)價值和藥用價值的了解，其市場具有廣闊前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種以豆制品生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢棄黃漿水為發(fā)酵原料，加配廢糖蜜為補充碳源，并在此液體培養(yǎng)基中加入雜木屑粉末，提前進行底物誘導(dǎo)，發(fā)酵桃紅側(cè)耳制備液體菌種，并接種至添加同樣雜木屑粉末的麥?；|(zhì)中制備菌種的方法。[0007]本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的:這種以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，包括如下步驟:
[0008]A、黃漿水的預(yù)處理:將新鮮黃漿水過濾，分裝，進行62°C，30min巴氏滅菌，滅菌后的黃漿水保存?zhèn)溆茫?br> [0009]B、以黃漿水為原料，以廢糖蜜為底物，選擇確定液體發(fā)酵培養(yǎng)基為:廢糖蜜0.5-3.0%, MgS04.7H200.1%，KH2P040.2%, VB10.01g/L,增稠劑 0.05-1.5%,雜木屑粉末0.1-0.5%，以預(yù)處理的黃漿水補足100%，調(diào)節(jié)pH至4.5-6.5 ；
[0010]C、液體發(fā)酵條件為pH4.5-6.5、接種量10%、溫度25_31°C、搖床轉(zhuǎn)速160r/min、培養(yǎng) 49-120h ；
[0011 ] D、將步驟C發(fā)酵所得桃紅側(cè)耳液體菌種按10%的接種量接至含雜木屑粉末的麥?；|(zhì)種瓶中。
[0012]所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，步驟A所述的黃漿水是指生產(chǎn)豆制品所得的新鮮黃漿水。
[0013]所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，步驟B所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中廢糖蜜底物應(yīng)用比例選擇為1.5%。
[0014]所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，步驟B所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中增稠劑包括羧甲基纖維素鈉、瓊脂、海藻酸鈉、卡拉膠、果膠其中一種或幾種。
[0015]所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，步驟B所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中增稠劑選擇為卡拉膠0.15%。`
[0016]所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳大杯蕈液體菌種的方法，步驟B所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中雜木屑粉末選擇為0.2%。
[0017]所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，步驟C所述液體發(fā)酵條件選擇為PH6.0。
[0018]所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，步驟C所述液體發(fā)酵終點時間選擇為96h。
[0019]所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，步驟C所述液體發(fā)酵溫度選擇為28°C
[0020]所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，步驟D所述的麥?；|(zhì)制作過程為:煮沸10-30分鐘至麥粒中央仍有一半白芯，按麥粒79%，雜木屑粉末20%，生石灰1%的比例進行拌料，分裝入250g種瓶中，裝量為每瓶150g，121°C高壓滅菌30min，溫度降至常溫后接種。
[0021]本發(fā)明充分利用了黃漿水和廢糖蜜的營養(yǎng)成分，將其變廢為寶，且降低了環(huán)境污染；加入雜木屑粉末可達到提前誘導(dǎo)纖維素酶、半纖維素酶的作用，加入增稠劑使得到的液體菌球數(shù)量多、小，從而在含雜木屑的麥?；|(zhì)中發(fā)菌快，有利于縮短桃紅側(cè)耳的制種周期和生產(chǎn)周期。
【具體實施方式】
[0022]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的實施方式做進一步說明，本發(fā)明所用桃紅側(cè)耳菌種為上海農(nóng)科院食用菌研究所保藏。[0023]以黃漿水發(fā)酵桃紅側(cè)耳制備液體菌種的方法，包括如下步驟:
[0024]A、黃漿水的預(yù)處理；
[0025]B、以黃漿水為原料，優(yōu)化桃紅側(cè)耳液體發(fā)酵配方，基本配方重量比例包括:廢糖蜜 0.5-3.0%, MgS04.7H200.1%，KH2P040.2%, VB10.01g/L，增稠劑 0.05-1.5%，雜木屑粉末
0.2%，以預(yù)處理的黃漿水補足100%，調(diào)節(jié)pH至4.5-6.5。
[0026]C、液體發(fā)酵基本條件為pH4.5-6.5、接種量10%、溫度25-31 °C、搖床轉(zhuǎn)速160r/min、培養(yǎng) 49-120h ；
[0027]D、將步驟C發(fā)酵所得桃紅側(cè)耳液體菌種按10%的接種量接至含雜木屑粉末的麥粒基質(zhì)種瓶中，培養(yǎng)后進入產(chǎn)業(yè)應(yīng)用環(huán)節(jié)。
[0028]上述方法中有關(guān)技術(shù)參數(shù)選擇如下:
[0029]步驟A所述的黃漿水是指生產(chǎn)豆制品所得的新鮮黃漿水。其中:
[0030]A-1、將當(dāng)日生產(chǎn)豆制品產(chǎn)生的新鮮黃漿水取回后，進行四層紗布過濾濾去豆渣和雜質(zhì)；
[0031]A-2、將過濾 后的黃漿水分裝入500mL三角瓶內(nèi)，每瓶裝液200ml，進行62°C，30min巴氏滅菌，滅菌后的黃漿水保存?zhèn)溆谩?br> [0032]步驟B所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組分優(yōu)化選擇如下:
[0033]B-1、補充碳源廢糖蜜加入量的優(yōu)化選擇=MgSO4.7H200.1%，KH2PO40.2%，VB10.01g/L配置培養(yǎng)基，以預(yù)處理的黃漿水補足100%，，調(diào)節(jié)pH至6其中廢糖蜜分別設(shè)置0.5%、
1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%六個濃度梯度；按D步驟所確定的發(fā)酵條件進行，以發(fā)酵菌球數(shù)量和菌絲體干重為指標(biāo)篩選最適配方，結(jié)果為:桃紅側(cè)耳液體配方為廢糖蜜1.5%，MgSO4.7Η200.1%，KH2PO40.2%，VB10.01g/L,以預(yù)處理的黃漿水補足 100% ；
[0034]B-2、增稠劑的優(yōu)化選擇:
[0035]按上述步驟B中配方配制液體培養(yǎng)基，按D步驟所確定的發(fā)酵條件進行，選擇羧甲基纖維素鈉、瓊脂、海藻酸鈉、卡拉膠、果膠五種增稠劑，并分別設(shè)置四種濃度:羧甲基纖維素鈉 0.1、0.5、1.0、1.5%，瓊脂 0.2、0.3、0.4%，海藻酸鈉 0.1、0.2、0.3%、卡拉膠 0.05、0.10、
0.15%、果膠0.1,0.2,0.3%，實驗設(shè)置空白對照，每個濃度設(shè)三個平行，實驗重復(fù)3次。
[0036]發(fā)酵96h后，測量菌絲體干重、菌球直徑和菌球密度，結(jié)果顯示，添加0.10%的卡拉膠的液體培養(yǎng)基發(fā)酵桃紅側(cè)耳得到的菌絲體干重最大、菌球直徑小且均勻，所以選擇卡拉膠作為增稠劑，0.10%為其優(yōu)化添加濃度。
[0037]B-3、添加雜木屑粉末提前進行底物誘導(dǎo)的優(yōu)化選擇:
[0038]將干燥的雜木屑粉碎，過80目篩，分別以0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的添加量
加入到液體培養(yǎng)基中，按步驟C所確定的條件進行發(fā)酵，設(shè)置空白對照，每個濃度設(shè)三個平行，實驗重復(fù)3次，
[0039]培養(yǎng)96h后，接種至含雜木屑粉末的麥?；|(zhì)中，測定滿肩時間、長速及滿瓶時間，篩選出桃紅側(cè)耳液體菌種雜木屑粉末的最佳添加量為0.2%。
[0040]步驟C液體培養(yǎng)條件的優(yōu)化選擇如下:包括初始pH、溫度、搖床轉(zhuǎn)速、接種量、發(fā)酵時間；
[0041]C-U pH值優(yōu)化選擇:按照步驟B所篩選出的培養(yǎng)基配方配置液體培養(yǎng)基，121°C，滅菌30min。在接種量10%、溫度25°C、搖床轉(zhuǎn)速150r/min、培養(yǎng)4d的條件下，設(shè)置4.5、5.5、6.5、7.5、8.5六個不同初始pH值。結(jié)果顯示，桃紅側(cè)耳菌絲在設(shè)置的初始pH范圍內(nèi)均能生長，當(dāng)PH4.5-6.5時，菌絲體干重呈上升趨勢，當(dāng)pH值為6.5時，菌絲體干重最大；繼續(xù)提高PH值，菌絲體干重逐漸減少。本方法中發(fā)酵桃紅側(cè)耳作為液體菌種使用，無需發(fā)酵到最大干重，所以確定PH6.0為初始pH。
[0042]C-2、接種量的優(yōu)化選擇:在pH6.0、溫度25°C、搖床轉(zhuǎn)速150r/min、培養(yǎng)4d的條件下，設(shè)置3%、6%、9%、12%、15%、18%六個不同接種量。結(jié)果顯示，接種量在3%_12%時，菌絲干重呈上升趨勢；接種量為12%時菌絲干重達到最大；接種量為12%-18%時，菌絲體干重有所下降，可能是因為相對于轉(zhuǎn)速為150r/min時，接種量過大，菌球過于密集，培養(yǎng)液黏度增加，溶氧過少，影響了菌球的呼吸作用導(dǎo)致菌球不能正常生長，數(shù)量沒有增多反而下降，所以此處接種量選擇10%為宜。
[0043]C-3、培養(yǎng)溫度的優(yōu)化選擇:在pH6.0、接種量10%、搖床轉(zhuǎn)速150r/min、培養(yǎng)4d的條件下，設(shè)置19、22、25、28、31、34°C六個不同溫度。結(jié)果表明，桃紅側(cè)耳液體搖瓶隨溫度上升菌絲體重量不斷增加，25°C -28°C時菌絲體干重上升明顯，28°C _31°C時趨于平緩，31°C達到最大，后隨溫度上升菌絲體干重變化不大，34°C時菌絲干重有所下降，因而確定28 0C -31°C為最適溫度，此處選擇28 °C為優(yōu)化發(fā)酵溫度。
[0044]C-4、搖瓶轉(zhuǎn)速的優(yōu)化選擇:在初始pH6.0、接種量10%、溫度28°C、培養(yǎng)4d的條件下，設(shè)置100、120、140、160、180、200r/min六個不同轉(zhuǎn)速。隨著轉(zhuǎn)速增大，菌絲體干重增大，菌絲體直徑變小，當(dāng)轉(zhuǎn)速為160-180r/min時，菌絲體干重上升趨于平緩，當(dāng)轉(zhuǎn)速為180r/min時，雖然菌絲體干重最大，菌球直徑最小，但菌絲活力即將變?nèi)酰赃x擇160r/min為適宜轉(zhuǎn)速。
[0045]C-5、發(fā)酵時 間的優(yōu)化選擇:配制液體培養(yǎng)基，調(diào)整初始pH6.0，設(shè)置48、72、96、120、144、168h六個培養(yǎng)時間，以10 %接種量接種后放入搖床，160r/min，28°C培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)至120h時，菌絲體重量達到最大，但作為液體種子使用，菌齡為96h的菌絲體處于對數(shù)生長期，生命力更加旺盛，接種后有利于菌絲生長，所以選擇96h作為發(fā)酵終點。
[0046]步驟D液體菌種接入含雜木屑粉末麥?；|(zhì)中具體處理方法如下:
[0047]D-1、麥粒的煮制時間，因液體菌種已有一定粘稠度，故麥粒作為液體菌種培養(yǎng)基質(zhì)的煮制時間要有所不同，煮沸10-30分鐘至麥粒中央仍有一半白芯，按麥粒79%，雜木屑粉末20%，生石灰1%的比例進行拌料，分裝入250g種瓶中，裝量為每瓶150g，121°C高壓滅菌30min，溫度降至常溫后可接種。
[0048]這樣處理的麥粒基質(zhì)不僅提供了養(yǎng)分，避免了麥粒熟爛，保持了較好的分散度，利于液體菌種的分散和生長，其發(fā)菌時間比常規(guī)方法制種的發(fā)菌時間縮短了 20%。
[0049]D-2、將上述步驟發(fā)酵所得的桃紅側(cè)耳液體菌種按10%的接種量接至每個種瓶中，測量滿肩時間、長速以及滿瓶時間。以常規(guī)方法處理的純麥?；|(zhì)作為空白對照。結(jié)果表明，使用本發(fā)明方法接種的種瓶，桃紅側(cè)耳滿肩時間和滿瓶時間分別為4d和lld，而對照組的滿肩時間和滿瓶時間分別為6d和15d，滿瓶時間縮短了 26%，這大大縮短了制種周期，從而縮短生產(chǎn)周期。
[0050]綜上所述，以黃漿水、廢糖蜜為主要原料發(fā)酵桃紅側(cè)耳備液體菌種，并接種至含雜木屑粉末的麥?；|(zhì)中作為栽培菌種的技術(shù)工藝，充分利用了食品加工副產(chǎn)物-黃漿水和廢糖蜜，不僅降低制種成本，還大大縮短了桃紅側(cè)耳液體菌種制種時間。[0051]關(guān)于本發(fā)明的有關(guān)對比研究說明:
[0052]1、以黃漿水、廢糖蜜替代碳氮源作為原料，發(fā)酵桃紅側(cè)耳制備液體菌種的成本優(yōu)勢非常明顯，利用了食品加工中的廢棄物:黃漿水和廢糖蜜含有豐富的可被食用菌利用的營養(yǎng)物質(zhì)，丟棄不僅浪費還嚴重破壞環(huán)境，用來制備桃紅側(cè)耳液體菌種，比起以葡萄糖、蛋白胨作為碳氮源的傳統(tǒng)液體培養(yǎng)基配方成本大大降低，而且取材方便。
[0053]2、將卡拉膠作為增稠劑添加到用黃漿水和廢糖蜜配制的液體培養(yǎng)基中，桃紅側(cè)耳的菌球直徑明顯減小，且菌球大小均勻，更有利于作為液體種子使用。
[0054]表1添加0.1%卡拉膠對于桃紅側(cè)耳菌球直徑、菌球數(shù)量和生物量的影響
[0055]
【權(quán)利要求】
1.一種以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，其特征包括如下步驟: A、黃漿水的預(yù)處理:將新鮮黃漿水過濾，分裝，進行62°C，30min巴氏滅菌，滅菌后的黃漿水保存?zhèn)溆茫? B、以黃漿水為原料，以廢糖蜜為底物，選擇確定液體發(fā)酵培養(yǎng)基為:廢糖蜜0.5-3.0%，MgS04 ?7Η200.1%, KH2P040.2%,VB10.01g/L，增稠劑 0.05-1.5%，雜木屑粉末 0.1-0.5%,以預(yù)處理的黃漿水補足100%，調(diào)節(jié)pH至4.5-6.5 ； C、液體發(fā)酵條件為pH4.5-6.5、接種量10%、溫度25-31 °C、搖床轉(zhuǎn)速160r/min、培養(yǎng)49-120h ； D、將步驟C發(fā)酵所得桃紅側(cè)耳液體菌種按10%的接種量接至含雜木屑粉末的麥粒基質(zhì)種瓶中。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，其特征在于:步驟A所述的黃漿水是指生產(chǎn)豆制品所得的新鮮黃漿水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，其特征在于:步驟B所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中廢糖蜜底物應(yīng)用比例選擇為1.5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，其特征在于:步驟B所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中增稠劑包括羧甲基纖維素鈉、瓊脂、海藻酸鈉、卡拉膠、果膠其中一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，其特征在于:步驟B所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中增稠劑選擇為卡拉膠0.15%?！?br> 6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳大杯蕈液體菌種的方法，其特征在于:步驟B所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中雜木屑粉末選擇為0.2%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，其特征在于:步驟C所述液體發(fā)酵條件選擇為pH6.0。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，其特征在于:步驟C所述液體發(fā)酵終點時間選擇為96h。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，其特征在于:步驟C所述液體發(fā)酵溫度選擇為28°C。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的以黃漿水為主要原料制備桃紅側(cè)耳液體菌種的方法，其特征在于:步驟D所述的麥?；|(zhì)制作過程為:煮沸10-30分鐘至麥粒中央仍有一半白芯，按麥粒79%，雜木屑粉末20%,生石灰1%的比例進行拌料，分裝入250g種瓶中，裝量為每瓶150g, 121°C高壓滅菌30min，溫度降至常溫后接種。
【文檔編號】A01G1/04GK103704018SQ201310714709
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2013年12月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月20日
【發(fā)明者】王謙, 王婷婷, 劉敏, 榮群 申請人:河北大學(xué)