專利名稱：一種適宜弱再生基因型甘薯莖尖培養(yǎng)植株再生的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種組織培養(yǎng)改良技木，具體是ー種適宜弱再生基因型甘薯莖尖培養(yǎng)植株再生的方法。
背景技術：
我國是世界第一甘薯生產(chǎn)大國，年種植面積3. 69X106hm2,占世界種植總面積的 45. 06%，年總產(chǎn)8.52 X 107t，占世界總產(chǎn)量的77. 38% (FA0，2008)。因此，我國甘薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展對世界甘薯生產(chǎn)起著舉足輕重的作用。近年來，甘薯病毒病危害日趨嚴重，已成為限制甘薯產(chǎn)量增加和導致品質(zhì)下降的主要因素。對于病毒病的防治，由于高抗病毒品種尚未培育成功，也無有效地防治藥劑，目前生產(chǎn)上為了減輕病毒病帶來的危害，最有效的方法就是生產(chǎn)和推廣脫毒苗(薯)，其增產(chǎn)效果十分顯著，一般增產(chǎn)幅度為20-40%，甚至更高。 現(xiàn)世界各甘薯生產(chǎn)國，多采用莖尖分生組織培養(yǎng)的方法脫除甘薯病毒、繁育和生產(chǎn)脫毒種薯和種苗，以提高甘薯產(chǎn)量和品質(zhì)。但是，基因型是決定植株再生的最主要因素，許多甘薯優(yōu)良品種在生產(chǎn)上推廣應用，病毒侵染后，由于再生能力弱，很難通過莖尖培養(yǎng)獲得大量脫毒苗，嚴重制約了優(yōu)良品種的推廣應用和縮短了優(yōu)良品種服務生產(chǎn)的年限；同樣，在其它作物，如棉花等，也存在由于部分品種難以再生或再生能力較弱，限制了轉基因技術對品種的遺傳改良。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種適宜弱再生基因型甘薯莖尖培養(yǎng)植株再生的方法，通過利用這ー 再生方法，弱再生基因型甘薯可以一次誘導成苗，再生率獲得顯著提高，均超過80. 0 % ；并且植株再生的時間也大大縮短，普遍為20-30d天，植株長勢好，生長速度快。本發(fā)明是通過如下技術方案實現(xiàn)的一種適宜弱再生基因型甘薯莖尖培養(yǎng)植株再生的方法，選取弱再生基因型甘薯品種心香為試驗材料，選取薯塊催生嫩芽為試驗材料，在顯微鏡下剝?nèi)∏o尖分生組織接種于一次性誘導植株再生培養(yǎng)基；莖尖分生組織接種于誘導培養(yǎng)基后，首先經(jīng)過暗培養(yǎng)；然后，在溫度觀士1で、光照10小吋/天條件下培養(yǎng)；待芽分化后，將其轉入光照培養(yǎng)箱，在暗培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，促進植株再生及節(jié)間的伸長；然后將再生植株轉入常規(guī)MS基本培養(yǎng)基、正常光照條件下進行繁殖培養(yǎng)。所述的在顯微鏡下剝?nèi)〉那o尖分生組織是接種于一次性誘導植株再生培養(yǎng)基， MS 基本培養(yǎng)基 +NAA 0. lmg/L+6-BA 2. Omg/L+TDZ 0. 1-1. Omg/L+4-FA 0. lmg/L+ 蔗糖 30g/ L+Phytagel 2. 5g/L，滅菌前調(diào)PH :5. 8-6. 0 ；進行培養(yǎng)的，這ー配方是在發(fā)明人前期大量組培工作及經(jīng)驗基礎上，積極引進新型細胞分裂素4-FA，在同NAA、6-BA、TDZ協(xié)同作用下，能顯著提高弱再生基因型甘薯的植株再生率。所述的接種于一次性誘導植株再生培養(yǎng)基的莖尖分生組織，首先是經(jīng)過32°C暗培養(yǎng)4-8天；暗培養(yǎng)有助于剝離莖尖分生組織的自身修復及細胞分裂的啟動，再同該進一次性誘導培養(yǎng)基的互作，進ー步提高植株再生的頻率。
所述的莖尖分生組織接種于一次性誘導植株再生培養(yǎng)基培養(yǎng)，待芽分化后，轉入光照培養(yǎng)箱，在35°C下暗培養(yǎng)；芽分化后，前人的通常情況是更換培養(yǎng)基(去除植物生長調(diào)節(jié)劑)、光照培養(yǎng)；但是通過本實驗發(fā)現(xiàn)，芽分化后，將其轉入35°C的培養(yǎng)箱中、暗培養(yǎng)，可以促進節(jié)間的快速伸長，加快了植株再生的速度。本發(fā)明的有益效果是通過利用這ー再生方法，弱再生基因型甘薯可以一次誘導成苗，再生率獲得顯著提高，均超過80.0% ；并且植株再生的時間也大大縮短，普遍為 20-30d天，植株長勢好，生長速度快；該方法可操作性強、重復性好；這一再生技術的改迸， 將有助于甘薯優(yōu)良品種的脫毒培養(yǎng)及脫毒種苗(薯)的推廣應用，提高甘薯產(chǎn)量和品質(zhì)。該方法可操作性強、重復性好。


圖1是利用本發(fā)明的再生方法與文獻1 QOll年，江西農(nóng)業(yè)學報，10期，作者周志林，唐君等)方法心香再生率的對比圖片。圖2是心香芽分化后，光照培養(yǎng)的圖片。圖3是心香芽分化后，350C暗培養(yǎng)的圖片。
具體實施例方式下面結合實施例進ー步說明本發(fā)明的方法和效果，但不限制本發(fā)明的保護范圍。實施例11.試驗材料和方法1. 1試驗材料甘薯品種心香。1.2試驗方法所選材料均來自薯塊的催生嫩芽；在超凈工作臺內(nèi)，所選外植體均放在50ml燒杯內(nèi)，經(jīng)70 %酒精滅菌45s，無菌水沖洗3_4次，然后，加0. 1 % HgCl2消毒5-6min，去除Hgcl2溶液后，用無菌水沖洗3_4次，邊洗邊搖。將滅菌后的材料，在解剖鏡下取帶有1-2個葉原基的莖尖分生組織，接種于一次性誘導植株再生培養(yǎng)基中 (MS 基本培養(yǎng)基+NAA 0. lmg/L+6-BA 2mg/L+TDZ 0-1. Omg/L+4-FA 0. lmg/L+蔗糖 30g/ L+Phytagel 2. 5g/L ；MS 基本培養(yǎng)基 +6-BA 2mg/+ 蔗糖 30g/L+Phytagel 2. 5g/L L 為對照； PH :5. 8-6. 0)，接種后的莖尖分別32°C，暗培養(yǎng)Oday、4day、8day、12day ；待芽分化后，轉入 35°C、暗培養(yǎng)，促進植株再生；植株再生后轉入常規(guī)繁殖培養(yǎng)基(MS基本培養(yǎng)基+蔗糖20g/ L+瓊脂粉9.0g/L ；PH :5. 8-6.0)。接種的莖尖每個重復16個，共計3個重復。培養(yǎng)條件為 ( 士 1) °C,日光燈冷光源強度為MOOLux。1. 3調(diào)查及數(shù)據(jù)統(tǒng)計接種在誘導培養(yǎng)基上30天，統(tǒng)計成活率、芽分化率、植株再生率；同時轉入繁殖培養(yǎng)基。2.結果與分析2. 1不同誘導培養(yǎng)基對莖尖誘導及植株再生的影響研究發(fā)現(xiàn)，在20天調(diào)查吋，心香已有植株再生；具體結果見表1 與對照相比，培養(yǎng)基中添加 NAAO. lmg/L+6-BA2. Omg/L+TDZ 0. 5mg/L+4_FA0. lmg/L，心香的芽分化率及植株再生率都得到了顯著的提高，芽分化率最高達81.25%，植株再生率為75 % (見表1)。表1 不同誘導培養(yǎng)基配方對芽分化率及植株再生率的影響
權利要求
1.一種適宜弱再生基因型甘薯莖尖培養(yǎng)植株再生的方法，其特征是選取弱再生基因型甘薯品種心香為試驗材料，選取薯塊催生嫩芽為試驗材料，在顯微鏡下剝?nèi)∏o尖分生組織接種于一次性誘導植株再生培養(yǎng)基；莖尖分生組織接種于誘導培養(yǎng)基后，首先經(jīng)過暗培養(yǎng)；然后，在溫度觀士1で、光照10小吋/天條件下培養(yǎng)；待芽分化后，將其轉入光照培養(yǎng)箱，在暗培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，促進植株再生及節(jié)間的伸長；然后將再生植株轉入常規(guī)MS基本培養(yǎng)基、正常光照條件下進行繁殖培養(yǎng)；所述的一次性誘導植株再生培養(yǎng)基為MS 基本培養(yǎng)基 +ΝΑΑ0. lmg/L+6-BA 2. Omg/L+TDZ 0. 5mg/L+4_FA 0. lmg/L+ 蔗糖 30g/ L+Phytagel2. 5g/L,滅菌前調(diào) PH :5. 8-6. 0。
2.根據(jù)權利要求1所述的ー種適宜弱再生基因型甘薯莖尖培養(yǎng)植株再生的方法，其特征是接種于一次性誘導植株再生培養(yǎng)基的莖尖分生組織首先經(jīng)過暗培養(yǎng)是在32°C、暗培養(yǎng)4-8天。
3.根據(jù)權利要求1所述的ー種適宜弱再生基因型甘薯莖尖培養(yǎng)植株再生的方法，其特征是所述的莖尖分生組織接種于一次性誘導植株再生培養(yǎng)基培養(yǎng)，待芽分化后，轉入光照培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)的溫度為35°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種適宜弱再生基因型甘薯莖尖培養(yǎng)植株再生的方法，屬甘薯組織培養(yǎng)改良技術。選取弱再生基因型甘薯品種心香作為試驗材料，選取薯塊催生嫩芽為試驗材料，在顯微鏡下剝?nèi)∏o尖接種于一次性誘導植株再生培養(yǎng)基；在32℃下暗培養(yǎng)4-8天；然后在溫度28±1℃、光照10小時/天條件下培養(yǎng)；待芽分化后，將其在35℃暗培養(yǎng)；植株再生后轉入常規(guī)MS基本培養(yǎng)基、正常光照條件下進行繁殖培養(yǎng)。有益的效果通過這一再生方法，弱再生基因型甘薯可以一步誘導成苗，并且再生率獲得顯著提高，均超過80.0％；植株再生的時間大大縮短，普遍為20-30d天，植株長勢好，生長速度快；該方法可操作性強、重復性好。
文檔編號A01H4/00GK102524076SQ201210032809
公開日2012年7月4日 申請日期2012年2月10日 優(yōu)先權日2012年2月10日
發(fā)明者周志林, 唐君, 孫書軍, 曹清河, 趙冬蘭, 項彩云 申請人:江蘇徐州甘薯研究中心