專利名稱：一種蛹蟲草子實(shí)體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蛹蟲草子實(shí)體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng) 域。
背景技術(shù)：
蛹蟲草，又名北冬蟲夏草、北蟲草，屬子囊菌亞門、核菌綱、球殼目、麥角菌科、蟲草 屬，是我國(guó)名貴中藥材之一。北蟲草是蟲草屬的模式種，與冬蟲夏草為蟲草的同屬異種真 菌，兩者的化學(xué)成分、營(yíng)養(yǎng)成分和藥用功能均非常相似；北蟲草主要藥用成分蟲草素等的含 量遠(yuǎn)高于野生冬蟲夏草，而且比冬蟲夏草更易于人工栽培，因此被選為冬蟲夏草的最佳替 代產(chǎn)品而進(jìn)行大量人工培育。20世紀(jì)90年代以來(lái)，對(duì)作為藥物和保健食品的北蟲草的藥 化、藥理、毒理和毒性等進(jìn)行了大量分析和安全評(píng)價(jià)，證明人工栽培的北蟲草無(wú)毒副作用， 具有明顯的鎮(zhèn)靜、抗疲勞、抗腫瘤、抑制癌細(xì)胞和具有雄性激素樣作用，可增強(qiáng)機(jī)體免疫功 能等，作為藥品和食品使用對(duì)人體是安全可靠的。2007年國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì) 劃)已將北蟲草開發(fā)與規(guī)模化生產(chǎn)列入重點(diǎn)研究項(xiàng)目。開發(fā)北蟲草及其活性成分資源不僅 有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，而且有重要的社會(huì)效益。目前，蛹蟲草培養(yǎng)普遍采用固體培養(yǎng)方法，選用大米、小米、玉米、高粱等糧食作 物，加入由氮源、碳源、無(wú)機(jī)元素等配置的營(yíng)養(yǎng)液，經(jīng)過(guò)高溫滅菌后，接入液體菌種，在適宜 的條件下培養(yǎng)。這種培養(yǎng)方法仍存在一些弊端，如糧食利用效率低、滅菌過(guò)程中能源消耗 大、且需要進(jìn)行前期培養(yǎng)基配置、后期采收后殘余培養(yǎng)基的清理及培養(yǎng)瓶的洗刷等，工作量 大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述已有技術(shù)的不足而提供一種操作簡(jiǎn)單、高效節(jié)能、培 養(yǎng)周期短、子實(shí)體產(chǎn)率高、無(wú)污染、無(wú)固態(tài)廢棄物的蛹蟲草子實(shí)體的人工培養(yǎng)方法。該方法 既可以小規(guī)模種植又可以工廠化生產(chǎn)。本發(fā)明的目的可以通過(guò)如下措施來(lái)達(dá)到一種用于培養(yǎng)蛹蟲草子實(shí)體的培養(yǎng) 基，其特征在于以培養(yǎng)瓶容量500mL所裝培養(yǎng)基計(jì)算其配方組分為棉籽殼20-25g，營(yíng) 養(yǎng)液120-140mL ；所述的營(yíng)養(yǎng)液重量份組分為小麥粉2. 0-3. 0份，豆粉1. 0-1. 5份，白 糖3. 0-4. 0份，硫酸鎂0. 1-0. 2份，磷酸二氫鉀0. 1-0. 2份，硫酸鋅0. 05-0. 1份，氯化鈉 0. 05-0. 1 份，水 95-105 份，pH 值 6-8 ；所述的棉籽殼是將棉籽殼浸入水中2-3天后，取出曬干后制成，放棉籽殼的時(shí)候 應(yīng)平鋪于瓶底?！N蛹蟲草子實(shí)體的人工培養(yǎng)方法，其特征在于包括培養(yǎng)基制備、滅菌、接種、培 養(yǎng)、采收等步驟，具體工藝步驟為(1)培養(yǎng)基制備以培養(yǎng)瓶容量500mL所裝培養(yǎng)基計(jì)算
培養(yǎng)基構(gòu)成棉籽殼20-25g+營(yíng)養(yǎng)液120-140mL ；棉籽殼的處理將棉籽殼浸入水中2-3天后，取出曬干，放棉籽殼的時(shí)候應(yīng)平鋪于 瓶底；營(yíng)養(yǎng)液重量份組分為小麥粉2. 0-3. 0份，豆粉1. 0-1. 5份，白糖3. 0_4. 0份，硫酸 鎂0. 1-0. 2份，磷酸二氫鉀0. 1-0. 2份，硫酸鋅0. 05-0. 1份，氯化鈉0. 05-0. 1份，水95-105 份，pH 值 6-8。(2)培養(yǎng)基分裝，滅菌將配制好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶或罐頭瓶中，封口，在121-125 條件下蒸汽滅菌 20-30分鐘；(3)冷卻，接種:滅完菌后取出培養(yǎng)基，自然冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下，接入蛹蟲草菌種；(4)培養(yǎng)將接好種的蛹蟲草培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱里，20-25°C避光培養(yǎng)5-10天，待菌絲 長(zhǎng)滿瓶面后，轉(zhuǎn)移到22-25°C、每天12-M小時(shí)散射光條件下培養(yǎng)60-90天；(5)采收子實(shí)體將長(zhǎng)出的子實(shí)體用鑷子采出，去掉子實(shí)體連接的培養(yǎng)基。為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的步驟3中接入的蛹蟲草菌種為固體培養(yǎng)的 蛹蟲草菌種。為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的步驟3中接入的蛹蟲草菌種為蛹蟲草液體 菌種，該蛹蟲草液體菌種通過(guò)試管斜面菌種培養(yǎng)和三角瓶液體種子培養(yǎng)而成，具體工藝步 驟為試管斜面菌種培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖2. 0份-3. 0份，蛋白胨0. 5份-1. 0份，硫酸鎂 0. 1份-0. 5份，磷酸二氫鉀0. 1份-0. 5份，瓊脂粉1. 0份-2. 0份，水95-105份，pH值6-8 ； 將培養(yǎng)基滅菌后裝入試管中，室溫?cái)[斜面，將蛹蟲草菌種于無(wú)菌條件下接入試管斜面，20 25°C暗培養(yǎng)5-10天；三角瓶液體種子培養(yǎng)液體培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖1. 0份-3. 0份，蛋白胨0. 5份-1. 0份，硫酸 鎂0. 1份-0. 5份，磷酸二氫鉀0. 1份-0. 5份，，硫酸鋅0. 05-0. 1份，氯化鈉0. 05-0. 1份， 水95-105份，pH值6-8，將配制好的培養(yǎng)基分裝入錐形瓶中，封口后在121 125°C條件下 滅菌20 30分鐘，取出培養(yǎng)基，冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下接入培養(yǎng)后的斜面菌種，20 25 °C搖瓶培養(yǎng)5天 10天。本發(fā)明同已有技術(shù)相比可產(chǎn)生如下積極效果和顯著進(jìn)步1.成本低，效率高。改變了傳統(tǒng)方法中大量使用糧食作物的方法，小麥粉和豆粉的 使用提高了培養(yǎng)基的利用效率，不會(huì)造成糧食作物的浪費(fèi)。2.節(jié)能。本發(fā)明減小了能源的消耗，由于棉籽殼富含大量纖維空隙大且不溶于水， 在本培養(yǎng)基中起到一定支撐物的作用，因此無(wú)論使用高壓或常壓滅菌時(shí)，均可以按照液體 滅菌時(shí)間長(zhǎng)短，因此即節(jié)省了時(shí)間、又減少了滅菌過(guò)程中熱能的消耗。3.生長(zhǎng)周期短。由于棉籽殼間隙大，透氣性好，不會(huì)像糧食作物那樣滅菌后凝結(jié)在一起，因此便于蛹蟲草充分的利用氧氣，發(fā)菌及子實(shí)體生長(zhǎng)時(shí)間均少于傳統(tǒng)培養(yǎng)方法。4.不用控制相對(duì)濕度。由于培養(yǎng)基中含有大量水分，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的相對(duì)濕度適合子 實(shí)體的生長(zhǎng)，因此不用像傳統(tǒng)方法那樣控制空氣濕度也省去后期向培養(yǎng)基補(bǔ)充水分這一步
馬聚ο5.減少了工作量。省去了傳統(tǒng)方法中蟲草采摘后培養(yǎng)瓶中殘余培養(yǎng)基的清潔工 作，由于棉籽殼不會(huì)像糧食作物那樣粘于瓶底，因此方便清潔，且棉籽殼可以重復(fù)利用。
具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式
作詳細(xì)說(shuō)明實(shí)施例1 ( 一)菌種準(zhǔn)備低溫保藏蛹蟲草菌種蛹蟲草菌種cfcc5973，來(lái)源于中國(guó)林業(yè)微生物菌種保藏管 理中心。蛹蟲草菌種還可采用其他普通栽培品種。蛹蟲草液體菌種按下述工藝步驟培養(yǎng)試管斜面菌種培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖2. 0g，蛋白胨1. Og,硫酸鎂0. 5g，磷酸二氫鉀 0. lg，瓊脂粉2. 0g，水95g，pH值6-8 ；將培養(yǎng)基滅菌后裝入試管中，室溫?cái)[斜面，將蛹蟲草菌 種于無(wú)菌條件下接入試管斜面，20 25°C暗培養(yǎng)5-10天；三角瓶液體種子培養(yǎng)液體培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖l.Og，蛋白胨1.(^，硫酸鎂0. lg，磷酸二氫鉀 0. 5g，硫酸鋅0. 05g，氯化鈉0. Ig,水95g，pH值6_8，將配制好的培養(yǎng)基分裝入錐形瓶中，封 口后在121 125°C條件下滅菌20 30分鐘，取出培養(yǎng)基，冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下接入 培養(yǎng)后的斜面菌種，18 25°C搖瓶培養(yǎng)5天 10天。(二)培養(yǎng)基制備營(yíng)養(yǎng)液重量份組分為小麥粉2. 0g，豆粉1. 5g，白糖3. 0g，硫酸鎂0. 2g，磷酸二氫 鉀0. lg，硫酸鋅0. lg，氯化鈉0. 05g，水95g，pH值6-8。將棉籽殼20g浸入水中2-3天后，取出曬干，然后平鋪于500mL培養(yǎng)瓶的瓶底；將 120mL的營(yíng)養(yǎng)液裝入培養(yǎng)瓶中；(三)培養(yǎng)基分裝，滅菌將配制好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶或罐頭瓶中，封口，在121-125 條件下蒸汽滅菌 20-30分鐘；(四)冷卻，接種滅完菌后取出培養(yǎng)基，自然冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下，接入蛹蟲草菌種；(五)培養(yǎng)將接好種的蛹蟲草培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱里，20-25°C避光培養(yǎng)5-10天，待菌絲 長(zhǎng)滿瓶面后，轉(zhuǎn)移到22-25°C、每天12-M小時(shí)散射光條件下培養(yǎng)60-90天；(六)采收子實(shí)體將長(zhǎng)出的子實(shí)體用鑷子采出，去掉子實(shí)體連接的培養(yǎng)基。實(shí)施例2 ( —)菌種準(zhǔn)備低溫保藏蛹蟲草菌種蛹蟲草菌種cfcc5973，來(lái)源于中國(guó)林業(yè)微生物菌種保藏管理中心。蛹蟲草菌種還可采用其他普通栽培品種。蛹蟲草液體菌種按下述工藝步驟培養(yǎng)試管斜面菌種培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖3. 0g，蛋白胨0. 5g，硫酸鎂0. Ig,磷酸二氫鉀 0. 5g，瓊脂粉1. OgjK 105g，pH值6-8 ；將培養(yǎng)基滅菌后裝入試管中，室溫?cái)[斜面，將蛹蟲草 菌種于無(wú)菌條件下接入試管斜面，20 25°C暗培養(yǎng)5-10天；三角瓶液體種子培養(yǎng)液體培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖3. 0g，蛋白胨0. 5g，硫酸鎂0. 5g，磷酸二氫鉀 0. lg，硫酸鋅0. lg，氯化鈉0. 05g，水105g，pH值6-8，將配制好的培養(yǎng)基分裝入錐形瓶中， 封口后在121 125°C條件下滅菌20 30分鐘，取出培養(yǎng)基，冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下接 入培養(yǎng)后的斜面菌種，20 25 °C搖瓶培養(yǎng)5天 10天。( 二)培養(yǎng)基制備營(yíng)養(yǎng)液重量份組分為小麥粉3. 0g，豆粉1. Og,白糖4. 0g，硫酸鎂0. lg，磷酸二氫 鉀0. 2g，硫酸鋅0. 05g，氯化鈉0. lg，水105g，pH值6-8。將棉籽殼25g浸入水中2-3天后，取出曬干，然后平鋪于500mL培養(yǎng)瓶的瓶底；將 140mL的營(yíng)養(yǎng)液裝入培養(yǎng)瓶中；(三)培養(yǎng)基分裝，滅菌將配制好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶或罐頭瓶中，封口，在121-125 條件下蒸汽滅菌 20-30分鐘；(四)冷卻，接種滅完菌后取出培養(yǎng)基，自然冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下，接入蛹蟲草菌種；(五)培養(yǎng)將接好種的蛹蟲草培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱里，20-25°C避光培養(yǎng)5-10天，待菌絲 長(zhǎng)滿瓶面后，轉(zhuǎn)移到22-25°C、每天12-M小時(shí)散射光條件下培養(yǎng)60-90天；(六)采收子實(shí)體將長(zhǎng)出的子實(shí)體用鑷子采出，去掉子實(shí)體連接的培養(yǎng)基。實(shí)施例3 ( —)菌種準(zhǔn)備低溫保藏蛹蟲草菌種蛹蟲草菌種cfcc5973，來(lái)源于中國(guó)林業(yè)微生物菌種保藏管 理中心。蛹蟲草菌種還可采用其他普通栽培品種。蛹蟲草液體菌種按下述工藝步驟培養(yǎng)試管斜面菌種培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖2. 5g，蛋白胨0. 7g，硫酸鎂0. 3g，磷酸二氫鉀 0. 3g，瓊脂粉1. 7g，水100g，pH值6-8 ；將培養(yǎng)基滅菌后裝入試管中，室溫?cái)[斜面，將蛹蟲草 菌種于無(wú)菌條件下接入試管斜面，20 25°C暗培養(yǎng)5-10天；三角瓶液體種子培養(yǎng)液體培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖2g，蛋白胨0. 6g，硫酸鎂0. 4g，磷酸二氫鉀 0. 25g，硫酸鋅0. 08g,氯化鈉0. 07g,水100g，pH值6_8，將配制好的培養(yǎng)基分裝入錐形瓶中， 封口后在121 125°C條件下滅菌20 30分鐘，取出培養(yǎng)基，冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下接 入培養(yǎng)后的斜面菌種，20 25 °C搖瓶培養(yǎng)5天 10天。
( 二)培養(yǎng)基制備營(yíng)養(yǎng)液重量份組分為小麥粉2. 5g，豆粉1. 2g，白糖3. 5g，硫酸鎂0. 15g，磷酸二氫 鉀 0. 15g，硫酸鋅 0. 08g，氯化鈉 0. 06g，水 100g，pH 值 6-8。將棉籽殼22g浸入水中2-3天后，取出曬干，然后平鋪于500mL培養(yǎng)瓶的瓶底；將 130mL的營(yíng)養(yǎng)液裝入培養(yǎng)瓶中；(三)培養(yǎng)基分裝，滅菌將配制好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶或罐頭瓶中，封口，在121-125 條件下蒸汽滅菌 20-30分鐘；(四)冷卻，接種滅完菌后取出培養(yǎng)基，自然冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下，接入蛹蟲草菌種；(五)培養(yǎng)將接好種的蛹蟲草培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱里，20-25°C避光培養(yǎng)5-10天，待菌絲 長(zhǎng)滿瓶面后，轉(zhuǎn)移到22-25°C、每天12-M小時(shí)散射光條件下培養(yǎng)60-90天；(六)采收子實(shí)體將長(zhǎng)出的子實(shí)體用鑷子采出，去掉子實(shí)體連接的培養(yǎng)基。
權(quán)利要求
1.一種用于培養(yǎng)蛹蟲草子實(shí)體的培養(yǎng)基，其特征在于以培養(yǎng)瓶容量500mL所裝培養(yǎng)基 計(jì)算其配方組分為棉籽殼20-25g，營(yíng)養(yǎng)液120-140mL ；所述的營(yíng)養(yǎng)液重量份組分為小 麥粉2. 0-3. 0份，豆粉1. 0-1. 5份，白糖3. 0-4. 0份，硫酸鎂0. 1-0. 2份，磷酸二氫鉀0. 1-0. 2 份，硫酸鋅0. 05-0. 1份，氯化鈉0. 05-0. 1份，水95-105份，pH值6-8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于培養(yǎng)蛹蟲草子實(shí)體的培養(yǎng)基，其特征在于所述的棉 籽殼是將棉籽殼浸入水中2-3天后，取出曬干后制成。
3.一種蛹蟲草子實(shí)體的人工培養(yǎng)方法，其特征在于包括培養(yǎng)基制備、滅菌、接種、培養(yǎng)、 采收等步驟，具體工藝步驟為(1)培養(yǎng)基制備以培養(yǎng)瓶容量500mL所裝培養(yǎng)基計(jì)算培養(yǎng)基構(gòu)成棉籽殼20-25g+營(yíng)養(yǎng)液120-140mL ；棉籽殼的處理將棉籽殼浸入水中2-3天后，取出曬干，放棉籽殼的時(shí)候應(yīng)平鋪于瓶底；營(yíng)養(yǎng)液重量份組分為小麥粉2. 0-3. 0份，豆粉1. 0-1. 5份，白糖3. 0-4. 0份，硫酸鎂 0. 1-0. 2份，磷酸二氫鉀0. 1-0. 2份，硫酸鋅0. 05-0. 1份，氯化鈉0. 05-0. 1份，水95-105 份，pH 值 6-8。(2)培養(yǎng)基分裝，滅菌將配制好的培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)瓶或罐頭瓶中，封口，在121-125°C條件下蒸汽滅菌 20-30分鐘；(3)冷卻，接種滅完菌后取出培養(yǎng)基，自然冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下，接入蛹蟲草菌種；(4)培養(yǎng)將接好種的蛹蟲草培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱里，20-25°C避光培養(yǎng)5-10天，待菌絲長(zhǎng)滿 瓶面后，轉(zhuǎn)移到22-25°C、每天12-M小時(shí)散射光條件下培養(yǎng)60-90天；(5)采收子實(shí)體將長(zhǎng)出的子實(shí)體用鑷子采出，去掉子實(shí)體連接的培養(yǎng)基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種蛹蟲草子實(shí)體的人工培養(yǎng)方法，其特征在于所述的步驟 3中接入的蛹蟲草菌種為固體培養(yǎng)的蛹蟲草菌種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種蛹蟲草子實(shí)體的人工培養(yǎng)方法，其特征在于所述的步驟 3中接入的蛹蟲草菌種為蛹蟲草液體菌種，該蛹蟲草液體菌種通過(guò)試管斜面菌種培養(yǎng)和三 角瓶液體種子培養(yǎng)而成，具體工藝步驟為試管斜面菌種培養(yǎng)斜面培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖2. 0份-3. 0份，蛋白胨0. 5份-1. 0份，硫酸鎂0. 1 份-0. 5份，磷酸二氫鉀0. 1份-0. 5份，瓊脂粉1. 0份-2. 0份，水95-105份，pH值6-8 ；將 培養(yǎng)基滅菌后裝入試管中，室溫?cái)[斜面，將蛹蟲草菌種于無(wú)菌條件下接入試管斜面，20 25°C暗培養(yǎng)5-10天；三角瓶液體種子培養(yǎng)液體培養(yǎng)基重量份組分為葡萄糖1. 0份-3. 0份，蛋白胨0. 5份-1. 0份，硫酸鎂0. 1 份-0. 5份，磷酸二氫鉀0. 1份-0. 5份，，硫酸鋅0. 05-0. 1份，氯化鈉0. 05-0. 1份，水95—105份，pH值6-8，將配制好的培養(yǎng)基分裝入錐形瓶中，封口后在121 125°C條件下滅菌20 30分鐘，取出培養(yǎng)基，冷卻至室溫，在無(wú)菌條件下接入培養(yǎng)后的斜面菌種，20 25°C搖瓶培 養(yǎng)5天 10天。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種蛹蟲草子實(shí)體的人工培養(yǎng)方法及其培養(yǎng)基，以培養(yǎng)瓶容量500mL所裝培養(yǎng)基計(jì)算其配方組分為棉籽殼20-25g，營(yíng)養(yǎng)液120-140mL；所述的營(yíng)養(yǎng)液重量份組分為小麥粉2.0-3.0份，豆粉1.0-1.5份，白糖3.0-4.0份，硫酸鎂0.1-0.2份，磷酸二氫鉀0.1-0.2份，硫酸鋅0.05-0.1份，氯化鈉0.05-0.1份，水95-105份，pH值6-8，其人工培養(yǎng)方法包括培養(yǎng)基制備，分裝，滅菌；冷卻，接種；培養(yǎng)；采收子實(shí)體步驟；本發(fā)明操作簡(jiǎn)單、高效節(jié)能、培養(yǎng)周期短、子實(shí)體產(chǎn)率高、無(wú)污染、無(wú)固態(tài)廢棄物。
文檔編號(hào)A01G1/04GK102100152SQ20101056199
公開日2011年6月22日 申請(qǐng)日期2010年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月17日
發(fā)明者何洋, 劉林德 申請(qǐng)人:魯東大學(xué)