專利名稱：沼濕草的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及沼濕草的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
沼濕草為禾本科沼濕草屬植物，緊湊叢生，高可達(dá)90cm，冠幅45cm。葉有白色條 紋，長17-25cm，花莖緊湊直立，稍帶拱形，棕色圓錐形花序與綠色葉片對(duì)比鮮明，開花時(shí)，草 的整體外觀更加挺直。該草喜陽光充足或半陰環(huán)境，可耐輕度干旱或輕度潮濕的土壤，抗病 蟲害能力強(qiáng)。秋季，草體下部葉片會(huì)變成黃色或淺紅色，觀賞性更強(qiáng)。可用于園林綠化、岸 邊或庭院中栽培，具有優(yōu)良的生態(tài)適應(yīng)性和觀賞價(jià)值。但是作為國外引進(jìn)的新品種，該植物 的弓I種數(shù)量較少，種苗供應(yīng)受限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度的沼濕草的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得在春季取萌發(fā)的沼濕草的小芽，除去葉片，用自來水沖洗l_3h，再于超凈工作 臺(tái)上，依次利用質(zhì)量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0. 5_2%。的汞浸泡 10-30min,再用無菌水沖洗4_6次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將小球莖切成 0. 5-2cm的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上1-3周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，3-4 周后節(jié)段上可以看見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個(gè)月，芽可以長到3-4cm長，將不定芽切下移 入不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織較多，但不定芽仍增殖較快， 生長發(fā)育良好，并無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的不定芽處于矮化狀態(tài)，將不定芽分成小叢，然后 將分成小叢的不定芽轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速伸長，20-30天后可以長到3-4cm ；(4)生根培養(yǎng)取3_4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，8-15天后小植株幼苗 的基部分化出白色的根原基，25-35天后可以長至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 90-100% ；(5)煉苗與移栽在生根培養(yǎng)15-25天，根系長至0. 5-2cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌幼 苗，于室內(nèi)開瓶煉苗1-3天，然后將苗取出，洗凈其根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化25-40天，即可移栽室外，并給予肥水管理，移栽成活率為90-100%。所述的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 05-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。所述的生根培養(yǎng)基包括MS+NAA0. 1-0. 3mg/L。所述的生根培養(yǎng)基優(yōu)選MS+NAA0. lmg/L。所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4_8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組織培養(yǎng)技術(shù)，極大提高了沼濕草的繁殖速度和苗 的整齊度，可以實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1(1)無菌材料的獲得在春季取萌發(fā)的沼濕草的小芽，除去葉片，用自來水沖洗lh，再于超凈工作臺(tái)上， 依次利用質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin，再用無菌水 沖洗4次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將小球莖切成0. 5cm的帶腋芽的節(jié)段， 節(jié)段接種于包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 05mg/L的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上1周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，3周后 節(jié)段上可以看見芽分生組織，再培養(yǎng)1個(gè)月，芽可以長到3cm長，將不定芽切下移入包括 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 05mg/L的不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組 織較多，但不定芽仍增殖較快，生長發(fā)育良好，并無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的不定芽處于矮化狀態(tài)，將不定芽分成小叢，然后 將分成小叢的不定芽轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA0. 05mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅 速伸長，20天后可以長到3cm;(4)生根培養(yǎng)取3cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAA0. lmg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根， 8天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，25天后可以長至4cm，根系粗壯，須根眾多， 生根率為90% ；(5)煉苗與移栽在生根培養(yǎng)15天，根系長至0. 5cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌幼苗，于室 內(nèi)開瓶煉苗1天，然后將苗取出，洗凈其根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化25天，即可 移栽室外，并給予肥水管理，移栽成活率為90%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L，培養(yǎng)基pH5. 5，培養(yǎng)溫度24°C，光照 15001x。實(shí)施例2(1)無菌材料的獲得在春季取萌發(fā)的沼濕草的小芽，除去葉片，用自來水沖洗2h，再于超凈工作臺(tái)上， 依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡30s，體積濃度為1%。的汞浸泡15min，再用無菌水沖 洗5次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將小球莖切成1cm的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段 接種于包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. lmg/L的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，4周后 節(jié)段上可以看見芽分生組織，再培養(yǎng)1個(gè)半月，芽可以長到4cm長，將不定芽切下移入包括 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組 織較多，但不定芽仍增殖較快，生長發(fā)育良好，并無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的不定芽處于矮化狀態(tài)，將不定芽分成小叢，然后 將分成小叢的不定芽轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速 伸長，20天后可以長到4cm;(4)生根培養(yǎng)取4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAA0. lmg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10 天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，30天后可以長至6cm，根系粗壯，須根眾多， 生根率為100% ；(5)煉苗與移栽在生根培養(yǎng)20天，根系長至1cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌幼苗，于室內(nèi) 開瓶煉苗3天，然后將苗取出，洗凈其根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化30天，即可移 栽室外，并給予肥水管理，移栽成活率為100%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L，培養(yǎng)基pH5. 8，培養(yǎng)溫度 25°C，光照 20001x。實(shí)施例3(1)無菌材料的獲得在春季取萌發(fā)的沼濕草的小芽，除去葉片，用自來水沖洗3h，再于超凈工作臺(tái)上， 依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為2%。的汞浸泡30min，再用無菌水沖 洗6次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將小球莖切成2cm的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段 接種于包括MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，4周后 節(jié)段上可以看見芽分生組織，再培養(yǎng)2個(gè)月，芽可以長到4cm長，將不定芽切下移入包括 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組 織較多，但不定芽仍增殖較快，生長發(fā)育良好，并無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的不定芽處于矮化狀態(tài)，將不定芽分成小叢，然后將分成小叢的不定芽轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速 伸長，30天后可以長到4cm;(4)生根培養(yǎng)取4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 3mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，15 天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，35天后可以長至6cm，根系粗壯，須根眾多， 生根率為95% ；(5)煉苗與移栽在生根培養(yǎng)25天，根系長至2cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌幼苗，于室內(nèi) 開瓶煉苗3天，然后將苗取出，洗凈其根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化40天，即可移 栽室外，并給予肥水管理，移栽成活率為98%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L，培養(yǎng)基pH6. 0，培養(yǎng)溫度 26°C，光照 25001x。
權(quán)利要求
沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得在春季取萌發(fā)的沼濕草的小芽，除去葉片，用自來水沖洗1-3h，再于超凈工作臺(tái)上，依次利用質(zhì)量濃度為70-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干小球莖表面的水分后，將小球莖切成0.5-2cm的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上1-3周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)綠色突起，3-4周后節(jié)段上可以看見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個(gè)月，芽可以長到3-4cm長，將不定芽切下移入不定芽增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織較多，但不定芽仍增殖較快，生長發(fā)育良好，并無玻璃化等不良現(xiàn)象；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基里誘導(dǎo)出的不定芽處于矮化狀態(tài)，將不定芽分成小叢，然后將分成小叢的不定芽轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上，不定芽迅速伸長，20-30天后可以長到3-4cm；(4)生根培養(yǎng)取3-4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，8-15天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，25-35天后可以長至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100％；(5)煉苗與移栽在生根培養(yǎng)15-25天，根系長至0.5-2cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長健壯的無菌幼苗，于室內(nèi)開瓶煉苗1-3天，然后將苗取出，洗凈其根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化25-40天，即可移栽室外，并給予肥水管理，移栽成活率為90-100％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng) 基包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培 養(yǎng)基包括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培 養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基包 括 MS+6-BA0. 05-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基包 括 MS+NAA0. 1-0. 3mg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+NAA0. lmg/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求2或3或5或7所述的沼濕草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的 培養(yǎng)基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0，培養(yǎng)溫度24-26 °C，光照 1500-25001x。
全文摘要
本發(fā)明涉及沼濕草的組織培養(yǎng)方法，包括無菌材料的獲得，芽的分化和增殖，不定芽壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，煉苗與移栽等步驟。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明大大提高了沼濕草的繁殖速度和苗的整齊度，可實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101869071SQ200910049979
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請(qǐng)人:上海上房園林植物研究所