專利名稱：金晃常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及金晃常綠大花萱草的組織培養(yǎng) 方法。
背景技術(shù)：
“金晃”常綠大花萱草為百合科萱草屬植物，原產(chǎn)于自歐洲南部經(jīng)亞洲北部直至日 本長(zhǎng)江流域，為多年生常綠草本，具有短根狀莖和粗壯的紡錘形肉質(zhì)根，葉基生、寬線形、嫩 綠色。初夏開花，花大，漏斗形，直徑IOcm左右，花被裂片長(zhǎng)圓形的多重瓣，呈金黃色?！敖?晃”常綠大花萱草的花期為6月上旬至7月中旬，花色鮮艷，栽培容易，且常綠，綠葉成叢， 極為美觀，多叢植于園林中或栽植于花境和路旁?！敖鸹巍背＞G大花萱草耐半蔭，又可做疏林 地被植物，是良好的花鏡與庭院材料。但是，作為國(guó)外引進(jìn)的品種，該花引種數(shù)量較少，分株 慢，種苗供應(yīng)受限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度，并保持原有母本性狀的金晃常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)金晃常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無(wú)菌材料的獲得在“金晃”常綠大花萱草開花時(shí)摘取花苞，用自來(lái)水沖洗l_3h后于超凈工班工 作臺(tái)上，依次利用質(zhì)量濃度為60-75%的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0. 5_2%。的汞浸泡 10-30min，再用無(wú)菌水沖洗4_6次，利用無(wú)菌濾紙吸干花苞表面的水分后，將花苞基部切成 0. 5-2cm長(zhǎng)的節(jié)段，接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1-3周后開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3-5周后可 見愈傷組織，再培養(yǎng)1-2個(gè)月，將愈傷組織進(jìn)行分割，切下接入到不定芽增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增 殖培養(yǎng)，分化的芽的基部雖有較多愈傷組織，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無(wú) 玻璃化等不良現(xiàn)象，生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2-4株能夠伸長(zhǎng)，其余的叢生 芽處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢或單芽后，轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不定芽迅速伸長(zhǎng)， 15-30天后可以長(zhǎng)至2-3cm ；(4)生根培養(yǎng)取2_3cm的不定芽的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，5-15天后幼苗 基部分化出白色的根原基，20-35天后可以長(zhǎng)至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 90-100% ；
(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)20-30天，根系長(zhǎng)至l-2cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室內(nèi) 開瓶煉苗1-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化30-45天，即可移 栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-95%。所述的花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS+KT0. 1-1. Omg/L+NAAl. 0-5. Omg/L。所述的不定芽增殖培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-4. Omg/L+NAAO. 1-0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。所述的生根培養(yǎng)基包括MS+NAA0. 1-0. 2mg/L。所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組織培養(yǎng)技術(shù)，極大提高了“金晃”常綠大花萱草的 繁殖速度和苗的整齊度，并更好地保持了原有的母本性狀，可以實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1(1)無(wú)菌材料的獲得在“金晃”常綠大花萱草開花時(shí)摘取花苞，用自來(lái)水沖洗Ih后于超凈工班工作臺(tái) 上，依次利用質(zhì)量濃度為60%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin，再用無(wú)菌 水沖洗4次，利用無(wú)菌濾紙吸干花苞表面的水分后，將花苞基部切成0. 5cm長(zhǎng)的節(jié)段，接種 于包括MS+KTO. lmg/L+NAAl. Omg/L的花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1周后開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3周后可見愈 傷組織，再培養(yǎng)1個(gè)月，將愈傷組織進(jìn)行分割，切下接入到包括MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. Img/ L的不定芽增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，分化的芽的基部雖有較多愈傷組織，但不影響不定芽 的增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速并無(wú)玻璃化等不良現(xiàn)象，生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2株能夠伸長(zhǎng)，其余的叢生芽 處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢或單芽后，轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的壯 苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不定芽迅速伸長(zhǎng)，15天后可以長(zhǎng)至2cm ；(4)生根培養(yǎng)取2cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. lmg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根， 5天后幼苗基部分化出白色的根原基，20天后可以長(zhǎng)至4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 90% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)20天，根系長(zhǎng)至Icm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室內(nèi)開瓶 煉苗1天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化30天，即可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L，培養(yǎng)基pH = 5. 5，培養(yǎng)溫 度 24°C，光照 15001x。實(shí)施例2(1)無(wú)菌材料的獲得在“金晃”常綠大花萱草開花時(shí)摘取花苞，用自來(lái)水沖洗2h后于超凈工班工作臺(tái) 上，依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡30s，體積濃度為1%。的汞浸泡15min，再用無(wú)菌水 沖洗5次，利用無(wú)菌濾紙吸干花苞表面的水分后，將花苞基部切成Icm長(zhǎng)的節(jié)段，接種于包 括MS+KTO. 5mg/L+NAA3. Omg/L的花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，2周后開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3周后可見愈 傷組織，再培養(yǎng)1個(gè)月，將愈傷組織進(jìn)行分割，切下接入到包括MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/ L的不定芽增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，分化的芽的基部雖有較多愈傷組織，但不影響不定芽 的增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速并無(wú)玻璃化等不良現(xiàn)象，生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有4株能夠伸長(zhǎng)，其余的叢生芽 處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢或單芽后，轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L的壯 苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不定芽迅速伸長(zhǎng)，20天后可以長(zhǎng)至3cm ；(4)生根培養(yǎng)取3cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAA0. 2mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，10 天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以長(zhǎng)至6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)25天，根系長(zhǎng)至2cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室內(nèi)開瓶 煉苗3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化40天，即可移栽室外，給 予肥水管理，最終的移栽成活率為100%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L，培養(yǎng)基pH = 5. 8，培養(yǎng)溫 度 25°C，光照 20001x。實(shí)施例3(1)無(wú)菌材料的獲得在“金晃”常綠大花萱草開花時(shí)摘取花苞，用自來(lái)水沖洗3h后于超凈工班工作臺(tái) 上，依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為2%。的汞浸泡30min，再用無(wú)菌水 沖洗6次，利用無(wú)菌濾紙吸干花苞表面的水分后，將花苞基部切成2cm長(zhǎng)的節(jié)段，接種于包 括MS+KT1. 0mg/L+NAA5. 0mg/L的花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，3周后開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，5周后可見愈 傷組織，再培養(yǎng)2個(gè)月，將愈傷組織進(jìn)行分割，切下接入到包括MS+6-BA4. Omg/L+NAAO. 2mg/ L的不定芽增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，分化的芽的基部雖有較多愈傷組織，但不影響不定芽 的增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速并無(wú)玻璃化等不良現(xiàn)象，生長(zhǎng)發(fā)育良好；
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(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長(zhǎng)，其余的叢生芽 處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢或單芽后，轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的壯 苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不定芽迅速伸長(zhǎng)，30天后可以長(zhǎng)至3cm ；(4)生根培養(yǎng)取3cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 2mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，15 天后幼苗基部分化出白色的根原基，35天后可以長(zhǎng)至5cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 94% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天，根系長(zhǎng)至2cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室內(nèi)開瓶 煉苗4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化45天，即可移栽室外，給 予肥水管理，最終的移栽成活率為96%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L，培養(yǎng)基pH = 6. 0，培養(yǎng)溫 度 26°C，光照 25001x。
權(quán)利要求
“金晃”常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無(wú)菌材料的獲得在“金晃”常綠大花萱草開花時(shí)摘取花苞，用自來(lái)水沖洗1-3h后于超凈工班工作臺(tái)上，依次利用質(zhì)量濃度為60-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無(wú)菌水沖洗4-6次，利用無(wú)菌濾紙吸干花苞表面的水分后，將花苞基部切成0.5-2cm長(zhǎng)的節(jié)段，接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖花苞接種于花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1-3周后開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3-5周后可見愈傷組織，再培養(yǎng)1-2個(gè)月，將愈傷組織進(jìn)行分割，切下接入到不定芽增殖培養(yǎng)基進(jìn)行增殖培養(yǎng)，分化的芽的基部雖有較多愈傷組織，但不影響不定芽的增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無(wú)玻璃化等不良現(xiàn)象，生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在不定芽增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2-4株能夠伸長(zhǎng)，其余的叢生芽處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成單芽或小叢后，轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不定芽迅速伸長(zhǎng)，15-30天后可以長(zhǎng)至2-3cm；(4)生根培養(yǎng)取2-3cm的不定芽的小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，5-15天后幼苗基部分化出白色的根原基，20-35天后可以長(zhǎng)至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100％；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)20-30天，根系長(zhǎng)至1-2cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無(wú)菌苗，于室內(nèi)開瓶煉苗1-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室的苗床中馴化30-45天，即可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-95％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的“金晃”常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的 花苞誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括 MS+KT0. 1-1. Omg/L+NAAl. 0-5. Omg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的“金晃”常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的 不定芽增殖培養(yǎng)基包括 MS+6-BA0. 5-4. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的“金晃”常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的 不定芽增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的“金晃”常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的 壯苗培養(yǎng)基包括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的“金晃”常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的 生根培養(yǎng)基包括MS+NAA0. 1-0. 2mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或3或5或6所述的“金晃”常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法，其特 征在于，所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0,培養(yǎng)溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。
全文摘要
本發(fā)明涉及金晃常綠大花萱草的組織培養(yǎng)方法，包括無(wú)菌材料的獲得，芽的分化和增殖，不定芽壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，煉苗與移栽等步驟。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明大大提高了“金晃”常綠大花萱草的繁殖速度和苗的整齊度，并更好地保持了原有的母本性狀，可實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101869062SQ200910049970
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請(qǐng)人:上海上房園林植物研究所