甜茶組織培養(yǎng)培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)基，尤其涉及一種甜茶組織培養(yǎng)培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 廣西甜茶，學(xué)名Rubus Suavissmus S, Gee.英文名Sweet tea，是薔薇科懸鉤子 屬植物中的一種，為多年生有刺落葉灌木，高l_2m，單葉，矩圓狀卵形，長5-10m，葉柄長 1.5-4cm?；▎紊~腋，白色，直徑2-3cm，垂生；萼裂片長矩圓狀卵形，漸尖，無毛。聚合果 球形、黃色。它和普通懸鉤子不同之處是葉子味甜。甜茶全身是寶，根、莖、葉、果實(shí)均可入 茶入藥。甜茶葉常用來作為甜味劑加工食品，民間入藥用于補(bǔ)腎降壓，被譽(yù)為神茶，與羅漢 果、合浦珍珠、廣西香料等齊名為廣西十大名品。甜茶鮮果別名樹莓，營養(yǎng)豐富，紅里透亮， 果肉甜，清香味鮮，肉味獨(dú)特，特別是富含抗癌物質(zhì)一鞣花酸，被稱為第三代水果；其干果實(shí) 可作為中藥覆盤子（或覆盆子）使用。甜茶葉雖然在廣西民間應(yīng)用已久，但我國八十年代 初藥物調(diào)查時(shí)才發(fā)現(xiàn)這個(gè)新變種。廣西甜茶生長在海拔800-1000m左右的荒山上，主產(chǎn)區(qū) 在廣西大瑤山地區(qū)，主要分布在廣西其它地區(qū)及廣東、湖南、江西等省。懸鉤子在我國其它 地方都可見到，卻沒有這種甜味。因此，學(xué)者們認(rèn)為甜茶應(yīng)定為一個(gè)新變種。據(jù)《廣西中藥 標(biāo)準(zhǔn)》記載，廣西甜茶有"清熱降火、潤肺、祛痰、止咳的功效"。被譽(yù)為"神茶"，其藥用性和 食用性已為地方醫(yī)藥和民間所證實(shí)，廣西甜茶中還含有3. 2%以上的黃酮、8. 94%的甜茶茶 多酚和4-5%的甜茶素。甜茶茶多酚有明顯抗氧化、抗突變、防癌、降低膽固醇、降低血液中 低密度脂蛋白、抑制血壓上升、抑制血糖上升、抑制血小板凝集、抗菌、抗食物過敏、改善腸 胃微生物環(huán)境、消臭的作用，是目前發(fā)現(xiàn)最理想的純天然抗氧化劑，用途十分廣泛。
[0003] 目前甜茶繁殖育苗主要采用以下幾種方法：⑴分株繁殖：3-4月挖取母株支根上 萌發(fā)的幼株進(jìn)行移植，此時(shí)幼株葉片尚未展開，但長有須根，挖取時(shí)要保證幼株有約IOcm 長的支根和較完整的須根；（2)分根繁殖：春季氣溫回升時(shí)，在支根上出現(xiàn)許多突起的白色 不定芽，把這種支根挖出，按長l〇-15cm切成根段，斜插或平埋于沙床中，淋水保濕，半個(gè)月 后根段即可長成幼株；（3)無性繁殖：主要是用長穗一莖帶兩節(jié)間一葉長約8-lOcm，土壤選 用石灰消毒，再鋪心土、用生根劑浸泡的育苗方法。
[0004] 廣西甜茶多為野生，目前采用繁殖育苗方法有一定的效果，但是成活率等不穩(wěn)定， 這就大大制約了甜茶的繁殖，成為加快開發(fā)利用甜茶的瓶頸。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種甜茶組織培養(yǎng)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基 包括繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，其中：
[0006] 每升（L)繼代培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下：
[0007] (1)大量元素：硝酸鉀2550mg/L、硝酸銨2148mg/L、七水硫酸鎂475mg/L、磷酸二氫 鉀 325mg/L、氯化鈣 500mg/L ;
[0008] (2)微量元素：一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鉬 酸鈉 (λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 025mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸 亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀(λ 83mg/L ;
[0009] (3)有機(jī)物：甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10.0 mg/L、鹽酸吡哆醇0· 5mg/L、煙酸 0· 5mg/L、肌醇 100.0 mg/L ;
[0010] (4)植物生長調(diào)節(jié)劑：6-芐基腺嘌呤0· 35-0. 45mg/L、萘乙酸0· 15-0. 25mg/L、荔枝 汁 0· 3-0. 5mg/L ;
[0011] 余量為蒸餾水；
[0012] 每升（L)生根培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下：
[0013] (1)大量元素：硝酸鉀2100mg/L、硝酸按1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸二氫 鉀 222mg/L、氯化鈣 490mg/L ;
[0014] (2)微量元素：一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鉬 酸鈉 (λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 025mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸 亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀(λ 83mg/L ;
[0015] (3)有機(jī)物：甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10.0 mg/L、鹽酸R比B多醇0. 5mg/L、煙酸 0· 5mg/L、肌醇 100. 0mg/L ;
[0016] (4)植物生長調(diào)節(jié)劑：萘乙酸0· 1-0. 2mg/L、吲哚丁酸L 0-2. 0mg/L、荔枝汁 0. 3-〇. 5mg/L ；
[0017] (5)其他添加物：活性炭2. 0-3. 0mg/L ;
[0018] 余量為蒸餾水。
[0019] 本發(fā)明所述荔枝汁為新鮮荔枝去除枝葉、病蟲果、爛果、腐果、未成熟果，清洗、去 除果皮果核，果肉壓榨，得到的果汁，滅菌得到。
[0020] 本發(fā)明甜茶培養(yǎng)基中的繼代培養(yǎng)基的配制方法為：
[0021] (1)配制大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)物母液、植物生產(chǎn)調(diào)節(jié)劑母液；
[0022] (2)根據(jù)培養(yǎng)基配制量依次量取各種母液，即混合母液；
[0023] (3)稱量白糖和瓊脂，其中白糖30g/L，瓊脂3. 0g/L ;
[0024] (4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解；
[0025] (5)然后加入量好的混合母液，用水定容，攪拌均勻；
[0026] (6)用NaOH和HCl調(diào)試培養(yǎng)基的PH值至5. 8 ;
[0027] (7)調(diào)好PH值的培養(yǎng)基趁熱分裝到培養(yǎng)瓶，蓋上瓶蓋，擰緊；
[0028] (8)把培養(yǎng)基放入高溫高壓滅菌鍋，在121. 6 °C，0· IMPa下滅菌20分鐘；
[0029] (9)滅菌后的培養(yǎng)基靜置冷卻至凝固，此時(shí)的培養(yǎng)基可以使用。
[0030] 本發(fā)明甜茶組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中的生根培養(yǎng)基的配制方法為：
[0031] (1)配制大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)物母液、植物生產(chǎn)調(diào)節(jié)劑母液、活性 炭；
[0032] (2)根據(jù)培養(yǎng)基配制量依次量取各種母液，即混合母液；
[0033] (3)稱量白糖和瓊脂，其中白糖15g/L，瓊脂3. 2g/L ;
[0034] (4)加熱白糖和瓊脂至完全溶解；
[0035] (5)然后加入量好的混合母液，用水定容，攪拌均勻；
[0036] (6)用NaOH和HCl調(diào)試培養(yǎng)基的PH值至5. 8 ;
[0037] (7)調(diào)好PH值的培養(yǎng)基趁熱分裝到培養(yǎng)瓶，蓋上瓶蓋，擰緊；
[0038] (8)把培養(yǎng)基放入高溫高壓滅菌鍋，在121. 6 °C，0.1 MPa下滅菌20分鐘；
[0039] (9)滅菌后的培養(yǎng)基靜置冷卻至凝固，此時(shí)的培養(yǎng)基可以使用。
[0040] 本發(fā)明甜茶組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)的方法為：
[0041] (1)先弱光培養(yǎng)7至8天，繼代苗切口愈合，頂芽上挺，分化出側(cè)芽，苗木恢復(fù)長 勢(shì)；
[0042] (2)然后強(qiáng)光培養(yǎng)8至12天，頂芽側(cè)芽高3厘米以上，葉片舒展，莖干半木質(zhì)化。 此時(shí)的芽即可用于生根培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度保持在25-30°C。
[0043] 本發(fā)明甜茶培養(yǎng)基生根培養(yǎng)的方法為：
[0044] (1)暗培養(yǎng)5至7天，生根苗基部膨脹，形成根原基。溫度要求比較粗放，不低于 15°C即可，最佳溫度25-30°C ;
[0045] (2)強(qiáng)光培養(yǎng)10至15天，室溫培養(yǎng)即可；
[0046] (3)此時(shí)生根苗高4-5厘米，根系5條以上，葉片舒展，苗莖木質(zhì)化，即可出圃移植。
[0047] 與目前現(xiàn)有技術(shù)的甜茶組織培養(yǎng)基相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：
[0048] 與目前現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：
[0049] 1、增殖和生根培養(yǎng)通過添加合適量的荔枝汁，能促進(jìn)甜茶不定芽的生長，繁殖系 數(shù)高，且在增殖的同時(shí)誘導(dǎo)生根，縮短培育周期。
[0050] 2、生根率和移栽成活率達(dá)到99. 5%以上，遺傳穩(wěn)定性好。
【具體實(shí)施方式】
[0051] 下面以實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實(shí)施例。
[0052] 實(shí)施例1 :
[0053] 甜茶組織培養(yǎng)培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基包括繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，其中：
[0054] 每升（L)繼代培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下：
[0055] (1)大量元素：硝酸鉀2550mg/L、硝酸銨2148mg/L、七水硫酸鎂475mg/L、磷酸二氫 鉀 325mg/L、氯化鈣 500mg/L ;
[0056] (2)微量元素：一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鉬 酸鈉 (λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 025mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸 亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀(λ 83mg/L ;
[0057] (3)有機(jī)物：甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10.0 mg/L、鹽酸吡卩多醇0· 5mg/L、煙酸 0· 5mg/L、肌醇 100.0 mg/L ;
[0058] (4)植物生長調(diào)節(jié)劑：6-芐基腺嘌呤0· 35mg/L、萘乙酸0· 25mg/L、荔枝汁0· 3mg/ L ；
[0059] 余量為蒸餾水；
[0060] 每升（L)生根培養(yǎng)基的組分及各組分的含量如下：
[0061] (1)大量元素：硝酸鉀2100mg/L、硝酸按1824mg/L、七水硫酸鎂352mg/L、磷酸二氫 鉀 222mg/L、氯化鈣 490mg/L ;
[0062] (2)微量元素：一水硫酸錳22. 3mg/L、七水硫酸鋅8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、二水鉬 酸鈉 (λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 025mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、鈉鹽37. 3mg/L、七水硫酸 亞鐵 27. 8mg/L、碘化鉀(λ 83mg/L ;
[0063] (3)有機(jī)物：甘氨酸2. Omg/L、鹽酸硫胺素10.0 mg/