一種草莓組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種草莓組織培養(yǎng)方法，包括消毒滅菌、初代培養(yǎng)、擴大繁殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和馴化培養(yǎng)，以草莓匍匐莖尖為外植體，經(jīng)過無菌接種于初代培養(yǎng)基上，得到叢生苗，轉(zhuǎn)入擴大繁殖培養(yǎng)基中，再對擴大繁殖培養(yǎng)后的單株苗進行生根培養(yǎng)，得到生根苗，生根苗經(jīng)過煉苗馴化得到再生植株。本發(fā)明的草莓組織培養(yǎng)方法通過采用組織培養(yǎng)方法，可以在短時間內(nèi)獲得大量的無菌苗，使草莓的繁殖更為容易，大大縮短了草莓的繁殖周期，加快了草莓的繁殖速度，從而可以快速擴大種植面積，另外本發(fā)明的方法打破了氣候和土壤對草莓繁殖的限制，通過采用組織培養(yǎng)方法，有效的解決了播種繁殖慢和扦插成活率低的問題。
【專利說明】一種草莓組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，尤其涉及一種草莓組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]草莓為薔薇科草莓屬多年生常綠草本，具匍匐莖，株高一般不超過30厘米，其枝蔓翠綠，果實殷紅，白花簇簇，既可觀賞，果實又可食用，還可加工成草莓醬、草莓酒等。
[0003]草莓原產(chǎn)智利，現(xiàn)在世界各地廣泛栽培，品種達2000多個。草莓愛光，喜潮濕，怕水潰，不耐旱，較耐寒，喜肥沃透氣良好的砂壤土。春季氣溫上升到5度以上時，植株開始萌發(fā)，最適生長溫度為20-26度。江蘇地區(qū)，2月下旬萌發(fā)，4月上中旬開花，5月中下旬果實成熟。入秋，氣溫低于17度，且在10-12小時的短日照條件下花芽分化，冬季有短期休眠。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種草莓組織培養(yǎng)方法，該方法能夠縮短草莓的繁殖周期，提高其發(fā)芽率和成活率。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】
:為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0006]一種草莓組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0007]步驟I，消毒滅菌:
[0008]選取當(dāng)年新生的.草莓莖尖進行消毒滅菌處理；
[0009]步驟2，初代培養(yǎng):取消毒后的草莓莖尖0.3?0.4mm接種到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g / L瓊脂粉培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.5，將莖尖在溫度25±2°C、光照強度1500?20001ux，每日光照12-14小時下，培養(yǎng)40-45天；
[0010]步驟3，擴大繁殖培養(yǎng):將初代培養(yǎng)后的叢生苗每5—7株切成一塊，接種到MS培養(yǎng)基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.8，在溫度23?27°C，光照強度20001uX，每日光照12-14小時，培養(yǎng)30天后小苗分割形成單株苗，在轉(zhuǎn)苗過程中，去掉原生葉片有利于新苗分化，在擴大繁殖中隨時清除愈傷組織，有利于新苗增殖和生長；
[0011]步驟4，生根培養(yǎng):將擴大繁殖培養(yǎng)后的芽苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為 1/2MS + ΙΒΑ0.5mg/L + NAA0.lmg/L+0.3% 活性炭+ 蔗糖 20g/L，在溫度為 23 ?27°C，光照強度20001UX，每日光照12小時，培養(yǎng)20-25天后，將形成白色短根的芽苗進行馴化培養(yǎng)，從接種到生根苗長成，這期間的培養(yǎng)溫度一般應(yīng)穩(wěn)定在25±2°C,每日光照12小時左右，光照強度為2000Lx，培養(yǎng)室溫度為18?26°C ；
[0012]步驟5，馴化培養(yǎng):將生根培養(yǎng)后的芽苗移入珍珠巖、石英砂和蛭石按體積比1:1:2混合而成的馴化基質(zhì)中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為15?20°C，濕度為80%，遮光率為50%，培養(yǎng)5?7天，一周后，可逐漸增強日光照射，采用噴霧狀澆水，水量不宜過大，落干后再噴。
[0013]其中，步驟I中，所述消毒滅菌處理是指先將草莓莖尖浸入質(zhì)量百分含量為75%的酒精，濕潤I?2min后，再將草莓莖尖浸入質(zhì)量百分含量為10%的次氯酸鈉水溶液，浸泡10 ?15min0[0014]其中，步驟2中，接種前，培養(yǎng)基采用I?1.1 kg/cm2大氣壓熱壓消毒滅菌15?20分鐘。
[0015]其中，步驟5中，馴化前，將裝有生根芽苗的培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室中移置自然條件下，打開瓶蓋透氣，24小時后，從瓶中取出幼苗，清除干凈根部及根頸處的培養(yǎng)基，再栽入苗圃或穴盤中進行馴化培養(yǎng)。
[0016]其中，步驟5中，馴化基質(zhì)為經(jīng)滅菌處理的腐熟鋸木屑和腐葉土按任意比例的混合物或園土和煤渣按體積比2:1混合而成的混合物，馴化基質(zhì)用清水沖洗干凈，或用多菌靈或甲基托布津摻拌滅菌，用煤渣作基質(zhì)時，再用0.2%冰乙酸中和使堿性降低。
[0017]有益效果:本發(fā)明的草莓組織培養(yǎng)方法通過采用組織培養(yǎng)方法，可以在短時間內(nèi)獲得大量的無菌苗，使草莓的繁殖更為容易，大大縮短了草莓的繁殖周期，加快了草莓的繁殖速度，從而可以快速擴大種植面積，另外本發(fā)明的方法打破了氣候和土壤對草莓繁殖的限制，通過采用組織培養(yǎng)方法，有效的解決了播種繁殖慢和扦插成活率低的問題。
【具體實施方式】
[0018]根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例所描述的內(nèi)容僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。
[0019]實施例1
[0020]一種草莓組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0021]步驟I，消毒滅菌:
[0022]選取當(dāng)年剛萌發(fā)出的匍匐莖尖，自來水沖洗后，在超凈工作臺上以質(zhì)量百分含量為75%的酒精，濕潤I? 2min后，再轉(zhuǎn)入質(zhì)量百分含量為10%的次氯酸鈉水溶液，浸泡10?15min后，再用預(yù)先準(zhǔn)備好的無菌水沖洗4遍，浙干水后，將消毒后的莖尖接種到初代培養(yǎng)
基上;
[0023]步驟2，初代培養(yǎng):接種前,將培養(yǎng)基采用I?1.1 kg/cm2大氣壓熱壓消毒滅菌15?20分鐘，培養(yǎng)基消毒后，取消毒后的草莓莖尖0.3?0.4mm接種到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g / L瓊脂粉培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.5，將莖尖在溫度25±2°C、光照強度1500?20001ux，每日光照12-14小時下，培養(yǎng)40-45天；
[0024]步驟3，擴大繁殖培養(yǎng):將初代培養(yǎng)后的叢生苗每5—7株切成一塊，接種到MS培養(yǎng)基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.8，在溫度23?27°C，光照強度20001uX，每日光照12-14小時，培養(yǎng)30天后小苗分割形成單株苗，在轉(zhuǎn)苗過程中，去掉原生葉片有利于新苗分化，在擴大繁殖中隨時清除愈傷組織，有利于新苗增殖和生長；
[0025]步驟4，生根培養(yǎng):將擴大繁殖培養(yǎng)后的芽苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為 1/2MS + ΙΒΑ0.5mg/L + NAA0.lmg/L+0.3% 活性炭+ 蔗糖 20g/L，在溫度為 23 ?27°C，光照強度20001UX，每日光照12小時，培養(yǎng)20-25天后，將形成白色短根的芽苗進行馴化培養(yǎng)，從接種到生根苗長成，這期間的培養(yǎng)溫度一般應(yīng)穩(wěn)定在25±2°C,每日光照12小時左右，光照強度為2000Lx，培養(yǎng)室溫度為18?26°C ；
[0026]步驟5，馴化培養(yǎng):馴化前，將裝有生根芽苗的培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室中移置自然條件下，打開瓶蓋透氣，24小時后，從瓶中取出幼苗，清除干凈根部及根頸處的培養(yǎng)基，再栽入苗圃或穴盤中進行馴化培養(yǎng)，馴化基質(zhì)為珍珠巖、石英砂和蛭石按體積比1:1:2混合而成，培養(yǎng)溫度為15?20°C，濕度為80%，遮光率為50%，培養(yǎng)5?7天，一周后，可逐漸增強日光照射，采用噴霧狀澆水，水量不宜過大，落干后再噴。馴化基質(zhì)用清水沖洗干凈，或用多菌靈或甲基托布津摻拌滅菌。
[0027]實施例2
[0028]一種草莓組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0029]步驟I，消毒滅菌:
[0030]選取當(dāng)年剛萌發(fā)出的匍匐莖尖，自來水沖洗后，在超凈工作臺上以質(zhì)量百分含量為75%的酒精，濕潤I?2min后，再轉(zhuǎn)入質(zhì)量百分含量為10%的次氯酸鈉水溶液，浸泡10?15min后，再用預(yù)先準(zhǔn)備好的無菌水沖洗4遍，浙干水后，將消毒后的莖尖接種到初代培養(yǎng)
基上;
[0031]步驟2，初代培養(yǎng):接種前,將培養(yǎng)基采用I?1.lkg/cm2大氣壓熱壓消毒滅菌15?20分鐘，培養(yǎng)基消毒后，取消毒后的草莓莖尖0.3?0.4mm接種到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g / L瓊脂粉培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.5，將莖尖在溫度25±2°C、光照強度1500?20001ux，每日光照12-14小時下，培養(yǎng)40-45天；
[0032]步驟3，擴大繁殖培養(yǎng):將初代培養(yǎng)后的叢生苗每5—7株切成一塊，接種到MS培養(yǎng)基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.8，在溫度23?27°C，光照強度20001uX，每日光照12-14小時，培養(yǎng)30天后小苗分割形成單株苗，在轉(zhuǎn)苗過程中，去掉原生葉片有利于新苗分化，在擴大繁殖中隨時清除愈傷組織，有利于新苗增殖和生長；
[0033]步驟4，生根培養(yǎng):將擴大繁殖培養(yǎng)后的芽苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為 1/2MS + ΙΒΑ0.5mg/L + NAA0.lmg/L+0.3% 活性炭+ 蔗糖 20g/L，在溫度為 23 ?27°C，光照強度20001UX，每日光照12小時，培養(yǎng)20-25天后，將形成白色短根的芽苗進行馴化培養(yǎng)，從接種到生根苗長成，這期間的培養(yǎng)溫度一般應(yīng)穩(wěn)定在25±2°C,每日光照12小時左右，光照強度為2000Lx，培養(yǎng)室溫度為18?26°C ；
[0034]步驟5，馴化培養(yǎng):馴化前，將裝有生根芽苗的培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室中移置自然條件下，打開瓶蓋透氣，24小時后，從瓶中取出幼苗，清除干凈根部及根頸處的培養(yǎng)基，再栽入苗圃或穴盤中進行馴化培養(yǎng)，馴化基質(zhì)為經(jīng)滅菌處理的腐熟鋸木屑和腐葉土按任意比例的混合物，培養(yǎng)溫度為15?20°C，濕度為80%，遮光率為50%，培養(yǎng)5?7天，一周后，可逐漸增強日光照射，采用噴霧狀澆水，水量不宜過大，落干后再噴。馴化基質(zhì)用清水沖洗干凈，或用多菌靈或甲基托布津摻拌滅菌。
[0035]實施例3
[0036]一種草莓組織培養(yǎng)方法，包括如下步驟:
[0037]步驟I，消毒滅菌:
[0038]選取當(dāng)年剛萌發(fā)出的匍匐莖尖，自來水沖洗后，在超凈工作臺上以質(zhì)量百分含量為75%的酒精，濕潤I?2min后，再轉(zhuǎn)入質(zhì)量百分含量為10%的次氯酸鈉水溶液，浸泡10?15min后，再用預(yù)先準(zhǔn)備好的無菌水沖洗4遍，浙干水后，將消毒后的莖尖接種到初代培養(yǎng)
基上;
[0039]步驟2，初代培養(yǎng):接種前,將培養(yǎng)基采用I?1.lkg/cm2大氣壓熱壓消毒滅菌15?20分鐘，培養(yǎng)基消毒后，取消毒后的草莓莖尖0.3?0.4mm接種到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g / L瓊脂粉培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.5，將莖尖在溫度25±2°C、光照強度1500?20001ux，每日光照12-14小時下，培養(yǎng)40-45天；
[0040]步驟3，擴大繁殖培養(yǎng):將初代培養(yǎng)后的叢生苗每5—7株切成一塊，接種到MS培養(yǎng)基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.8，在溫度23?27°C，光照強度20001uX，每日光照12-14小時，培養(yǎng)30天后小苗分割形成單株苗，在轉(zhuǎn)苗過程中，去掉原生葉片有利于新苗分化，在擴大繁殖中隨時清除愈傷組織，有利于新苗增殖和生長；
[0041]步驟4，生根培養(yǎng):將擴大繁殖培養(yǎng)后的芽苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為 1/2MS + ΙΒΑ0.5mg/L + NAA0.lmg/L+0.3% 活性炭+ 蔗糖 20g/L，在溫度為 23 ?27°C，光照強度20001UX，每日光照12小時，培養(yǎng)20-25天后，將形成白色短根的芽苗進行馴化培養(yǎng)，從接種到生根苗長成，這期間的培養(yǎng)溫度一般應(yīng)穩(wěn)定在25±2°C,每日光照12小時左右，光照強度為2000Lx，培養(yǎng)室溫度為18?26°C ；
[0042]步驟5，馴化培養(yǎng):馴化前，將裝有生根芽苗的培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室中移置自然條件下，打開瓶蓋透氣，24小時后，從瓶中取出幼苗，清除干凈根部及根頸處的培養(yǎng)基，再栽入苗圃或穴盤中進行馴化培養(yǎng)，馴化基質(zhì)為園土和煤渣按體積比2:1混合而成的混合物，再加入質(zhì)量百分含量為0.2%冰乙酸，馴化培養(yǎng)的溫度為15?20°C，濕度為80%，遮光率為50%，培養(yǎng)5?7天，一周后，可逐漸增強日光照射，采用噴霧狀澆水，水量不宜過大，落干后再噴。馴化基質(zhì)用清水沖洗干凈.，或用多菌靈或甲基托布津摻拌滅菌。
【權(quán)利要求】
1.一種草莓組織培養(yǎng)方法，其特征在于:包括如下步驟: 步驟I，消毒滅菌: 選取當(dāng)年新生的草莓莖尖進行消毒滅菌處理； 步驟2，初代培養(yǎng):取消毒后的草莓莖尖0.3?0.4mm接種到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+6.5g/L瓊脂粉培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.5，溫度25±2°C、光照強度1500?20001ux，每日光照12-14小時，培養(yǎng)40-45天； 步驟3，擴大繁殖培養(yǎng):將初代培養(yǎng)后的叢生苗每5—7株切成一塊，接種到MS培養(yǎng)基+6-BA0.5mg/L+NAA0.01mg/L培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的PH值為5.8，在溫度23?27°C，光照強度20001uX，每日光照12-14小時，培養(yǎng)30天后小苗分割形成單株苗； 步驟4，生根培養(yǎng):將擴大繁殖培養(yǎng)后的芽苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為1/2MS + ΙΒΑ0.5mg/L + NAA0.lmg/L+0.3% 活性炭+蔗糖 20g/L，在溫度為 23 ?27°C，光照強度20001UX，每日光照12小時，培養(yǎng)20-25天后，將形成白色短根的芽苗進行馴化培養(yǎng)； 步驟5，馴化培養(yǎng):將生根培養(yǎng)后的芽苗移入珍珠巖、石英砂和蛭石按體積比1: 1:2混合而成的馴化基質(zhì)中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為15?20°C，濕度為80%，遮光率為50%，培養(yǎng)5?7天。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓組織培養(yǎng)方法，其特征在于:步驟I中，所述消毒滅菌處理是指先將草莓莖尖浸入質(zhì)量百分含量為75%的酒精，濕潤I?2min后，再將草莓莖尖浸入質(zhì)量百分含量為10%的次氯酸鈉水溶液，浸泡10?15min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓組織培養(yǎng)方法，其特征在于:步驟2中，接種前，培養(yǎng)基采用I?1.1 kg/cm2大氣 壓熱壓消毒滅菌15?20分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓組織培養(yǎng)方法，其特征在于:步驟5中，馴化前，將裝有生根芽苗的培養(yǎng)瓶從培養(yǎng)室中移置自然條件下，打開瓶蓋透氣，24小時后，從瓶中取出幼苗，清除干凈根部及根頸處的培養(yǎng)基，再栽入苗圃或穴盤中進行馴化培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的草莓組織培養(yǎng)方法，其特征在于:步驟5中，馴化基質(zhì)為經(jīng)滅菌處理的腐熟鋸木屑和腐葉土按任意比例的混合物或園土和煤渣按體積比2:1混合而成的混合物。
【文檔編號】A01H4/00GK103430845SQ201310351033
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月13日
【發(fā)明者】李金鳳, 糜林, 萬春雁, 霍恒志, 陳丙義, 陳雪平, 耿國民 申請人:鎮(zhèn)江市農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)實業(yè)公司