專利名稱：銀蓮花的組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及銀蓮花的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
銀蓮花為毛茛科、銀蓮花屬植物，廣布于世界各地，最常見于北溫帶的林地和草 甸，是多年生草本。銀蓮花基生葉4-8片，葉柄長(zhǎng)6-30cm，疏生長(zhǎng)柔毛。葉片呈圓腎形，3全 裂，花2-5朵，直徑3. 5-5cm，粉紅色。銀蓮花的花期為秋季，瘦果上有長(zhǎng)綿毛。因花色鮮艷， 銀蓮花廣泛栽培在花園中，是受歡迎的秋季開花的沿邊花壇花卉，但是，作為國(guó)外引進(jìn)的新 品種，銀蓮花的引種數(shù)量較少，種苗供應(yīng)受到一定的限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種可提高繁殖速 度和苗的整齊度，并提高性狀穩(wěn)定性的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗l_3h后于超凈工作 臺(tái)上，依次利用質(zhì)量濃度為70-75%的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0. 5_2%。的汞浸泡 10-30min，再用無菌水沖洗4_6次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成0. 5-2cm長(zhǎng)的 帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上2-4周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3-5 周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個(gè)月，不定芽可以長(zhǎng)到2-3cm，將不定芽切下轉(zhuǎn)入芽的增 殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織較多，但不影響增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且 無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮 化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不定芽迅速伸長(zhǎng)；(4)生根培養(yǎng)取3_4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，5-15天后幼苗基部分 化出白色的根原基，25-40天后可以長(zhǎng)至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)15-30天，根系長(zhǎng)至0. 5-lcm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無菌苗，于室 內(nèi)開瓶煉苗2-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化20-40天，即 可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-95%。所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS+6-BA1. 0-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。
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所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。所述的芽的增殖培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-2. Omg/L+NAAO. 1-0. 2mg/L。所述的芽的增殖培養(yǎng)基優(yōu)選MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L。所述的壯苗培養(yǎng)基包括MS+6-BA0. 5-2. Omg/L+NAAO. 1-0. 2mg/L。
所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu)選 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L。所述的生根培養(yǎng)基包括MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的生根培養(yǎng)基優(yōu)選MS+NAAO. 05mg/L。所述的培養(yǎng)基還包括蔗糖20_40g/L、瓊脂粉4_8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0，培養(yǎng)溫度 24-26°C，光照 1500-25001x。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過組培技術(shù)，極大提高了銀蓮花的繁殖速度和苗的整 齊度，并提高了其性狀的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。實(shí)施例1(1)無菌材料的獲得取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗Ih后于超凈工作臺(tái) 上，依次利用質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸泡10s，體積濃度為0. 5%。的汞浸泡lOmin，再用無菌 水沖洗4次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成0. 5cm長(zhǎng)的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種 于包括MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上2周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 3周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1個(gè)月，不定芽可以長(zhǎng)到2cm，將不定芽切下轉(zhuǎn)入包括 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織 較多，但不影響增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮化 狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)， 不定芽迅速伸長(zhǎng)；(4)生根培養(yǎng)取3cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 05mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根， 5天后幼苗基部分化出白色的根原基，25天后可以長(zhǎng)至4cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 90% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)15天，根系長(zhǎng)至0. 5cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無菌苗，于室內(nèi)開 瓶煉苗2天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化20天，即可移栽室 外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖20g/L、瓊脂粉4g/L，pH= 5. 5，培養(yǎng)溫度24°C， 光照 15001x。
實(shí)施例2(1)無菌材料的獲得取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗2h后于超凈工作臺(tái) 上，依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡30s，體積濃度為1%。的汞浸泡15min，再用無菌水 沖洗5次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成Icm長(zhǎng)的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于包 括MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上3周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 4周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1個(gè)半月，不定芽可以長(zhǎng)到3cm，將不定芽切下轉(zhuǎn)入包括 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織 較多，但不影響增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮化 狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)， 不定芽迅速伸長(zhǎng)；(4)生根培養(yǎng)取4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAA0. 05mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根， 10天后幼苗基部分化出白色的根原基，30天后可以長(zhǎng)至6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率 為 100% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)20天，根系長(zhǎng)至Icm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無菌苗，于室內(nèi)開瓶 煉苗3天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化30天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為100%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂粉6g/L，pH = 5. 8，培養(yǎng)溫度25°C， 光照 20001x。實(shí)施例3(1)無菌材料的獲得取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗3h后于超凈工作臺(tái) 上，依次利用質(zhì)量濃度為75%的乙醇浸泡50s，體積濃度為2%。的汞浸泡30min，再用無菌水 沖洗6次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成2cm長(zhǎng)的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于包 括MS+6-BA5. 0mg/L+NAA0. 5mg/L的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上4周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起， 5周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)2個(gè)月，不定芽可以長(zhǎng)到2cm，將不定芽切下轉(zhuǎn)入包括 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織 較多，但不影響增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有3株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮化 狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，
5不定芽迅速伸長(zhǎng)；(4)生根培養(yǎng)取3cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入包括MS+NAAO. 2mg/L的生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，15 天后幼苗基部分化出白色的根原基，40天后可以長(zhǎng)至5cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為 96% ；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)30天，根系長(zhǎng)至Icm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無菌苗，于室內(nèi)開瓶 煉苗4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化40天，即可移栽室外， 給予肥水管理，最終的移栽成活率為96%。上述各種情況的培養(yǎng)基還包括蔗糖40g/L、瓊脂粉8g/L，pH = 6. 0，培養(yǎng)溫度26°C， 光照 25001x。
權(quán)利要求
銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟(1)無菌材料的獲得取萌發(fā)的幼嫩的芽，去除外面包裹的葉片后，用自來水沖洗1-3h后于超凈工作臺(tái)上，依次利用質(zhì)量濃度為70-75％的乙醇浸泡10-50s，體積濃度為0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用無菌水沖洗4-6次，利用無菌濾紙吸干表面的水分后，再切成0.5-2cm長(zhǎng)的帶腋芽的節(jié)段，節(jié)段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；(2)芽的分化和增殖節(jié)段接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上2-4周后，腋芽部位開始膨大，出現(xiàn)黃綠色突起，3-5周后可見芽分生組織，再培養(yǎng)1-2個(gè)月，不定芽可以長(zhǎng)到2-3cm，將不定芽切下轉(zhuǎn)入芽的增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，不定芽基部的愈傷組織較多，但不影響增殖，不定芽生長(zhǎng)迅速且無玻璃化等不良現(xiàn)象，在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)發(fā)育良好；(3)不定芽壯苗培養(yǎng)在芽的增殖培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出的叢生芽中每叢有2-3株能夠伸長(zhǎng)，其余的處于矮化狀態(tài)，將叢生芽分成小叢后，轉(zhuǎn)至壯苗培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，不定芽迅速伸長(zhǎng)；(4)生根培養(yǎng)取3-4cm的不定芽小植株，轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，5-15天后幼苗基部分化出白色的根原基，25-40天后可以長(zhǎng)至4-6cm，根系粗壯，須根眾多，生根率為90-100％；(5)煉苗與移栽生根培養(yǎng)15-30天，根系長(zhǎng)至0.5-1cm時(shí)，選擇根系發(fā)達(dá)、生長(zhǎng)健壯的無菌苗，于室內(nèi)開瓶煉苗2-4天，然后將苗取出，洗凈根部的瓊脂，栽于溫室內(nèi)的苗床中馴化20-40天，即可移栽室外，給予肥水管理，最終的移栽成活率為90-95％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基 包括 MS+6-BA1. 0-5. 0mg/L+NAA0. 1-0. 5mg/L。1
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基 優(yōu)選 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽的增殖培養(yǎng) 基包括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽的增殖培養(yǎng) 基優(yōu)選 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基包 括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基包 括 MS+NAA0. 05-0. 2mg/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基優(yōu) 選 MS+NAA0. 05mg/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求2或4或6或8所述的銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的培養(yǎng) 基還包括蔗糖20-40g/L、瓊脂粉4-8g/L，培養(yǎng)基pH5. 5-6. 0，培譜顯度24-26V，光照1500-25001x。
全文摘要
本發(fā)明涉及銀蓮花的組織培養(yǎng)方法，包括無菌材料的獲得，芽的分化和增殖，不定芽壯苗培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，煉苗與移栽等步驟。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明大大提高了銀蓮花的繁殖速度和苗的整齊度，并提高了其性狀的穩(wěn)定性，可實(shí)現(xiàn)育苗的工廠化大批量生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101869067SQ20091004997
公開日2010年10月27日 申請(qǐng)日期2009年4月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月24日
發(fā)明者沈勤, 陳建華, 黃建榮 申請(qǐng)人:上海上房園林植物研究所